去甲斑蝥素白蛋白微球在大鼠体内的药动学及组织分布研究

目的：研究去甲斑蝥素（NCTD）白蛋白微球在大鼠体内的药动学及组织分布情况。方法：以市售去甲斑蝥素注射液为参比,测定NCTD白蛋白微球在大鼠体内血浆中的药动学模型及药动学参数,用靶向效率来评价其在大鼠体内的组织分布及靶向性。结果：NCTD白蛋白微球在大鼠体内的药动学模型符合二室模型,主要药动学参数为：t_（1/2α）=（0.57±0.11）h,t1/2β=（20.69±1.06）h,CL=（0.016±0.002 4）ml·h·kg^-1,AUC0～∞=（63.41±9.08）mg·h·L^-1,其在肝脏,脾脏,心脏及肾脏的靶向效率分别为为2.36,1.78,0.43和0.35。结论：与去甲斑蝥素注射液相比,NCTD白蛋白微球能提高对肝脏,脾脏的趋向性,减少对肾脏及心脏的分布,有利于提高其治疗作用,减少不良反应。     

肝靶向去甲斑蝥素微乳的研究

目的考察去甲斑蝥素(NCTD)微乳的形态、粒径分布及生物安全性，研究去甲斑蝥素微乳及其注射液在小鼠体内的组织分布、药代动力学和体外药效学。方法用气相法测定小鼠体内去甲斑蝥素含量。数据用3P87处理，得到各主要药代动力学参数。采用体外细胞毒性和体内全身急性毒性试验方法，评价去甲斑蝥素微乳的抗肿瘤活性及其生物安全性。结果微乳平均粒径为(44±9) nm。血浆中成分及制剂中辅料不干扰去甲斑蝥素测定。小鼠静脉注射去甲斑蝥素微乳及其去甲斑蝥素注射液后的药-时曲线均符合二室模型。去甲斑蝥素微乳的药代动力学研究表明，在同剂量条件下，NCTD微乳可在体内较长时间保持较高浓度，即可在一定程度上延长体内循环时间；微乳及注射液的AUC，MRT，T_1/2分别为(29.7±0.9)，(9.25±0.09) mg·h·L^-1，(110±11)，(86.7±0.8)，(103±12)，(42±4) h，NCTD微乳改变NCTD注射剂在小鼠体内的药时曲线和血药浓度的高低，其消除T_1/2和MRT比其注射剂分别增加了2.48和1.27倍，AUC增加了3.21倍；NCTD微乳在肝、肾中的靶向指数分别为0.43和0.12。去甲斑蝥素微乳的生物安全性与其市售注射液比较无显著性差异。结论去甲斑蝥素微乳较去甲斑蝥素注射液增强了药物的肝靶向性，降低了肾脏分布，在一定程度上延长药物在小鼠体内的循环时间。     

去甲斑蝥酸钠脂质微球在大鼠体内的组织分布

目的比较去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液与溶液型注射液在大鼠体内组织中的分布特征。方法大鼠股静脉注射去甲斑蝥酸钠脂质微球注射液,采用HPLC-MS法测定不同时间点大鼠组织脏器中的药物浓度。结果与去甲斑蝥素注射液相比,脂质微球注射液在肝脏组织中具有较高的浓度,肝脏相对分布率由16.3%增加至32%,AUC值为218.72 mg.L-1.h-1。而在心脏、肾脏、血液中的药物分布均无明显的变化。结论将去甲斑蝥酸钠制备成以脂质微球载药,使其在体内分布具有肝脏靶向性,从而在一定程度上提高了药物对肝癌及肝硬化的治疗效果。     

幽门螺杆菌微球疫苗非临床实验初步研究*

目的：通过考察幽门螺杆菌（Helicobacter pyliori，np）微球生物学行为，探讨其作为口服蛋白疫苗的可行性。方法：用可降解天然高分子材料一壳聚糖和海藻酸钠制备Hp全菌蛋白微球（HpWCP—CAMS），通过BCA方法测定微球中蛋白质的包裹效率及包裹量，测定微球在体外的药物释放度。并进行小鼠体内微球的靶向试验，微球的体内外毒性试验和淋巴细胞致敏试验。结果：HpWCP—CAMS中蛋白包裹量为31．5％，蛋白包裹效率为61．O％。微球中药物缓释周期可长达20d，靶向试验结果显示微球能在肠黏膜、PP结及脾脏富集并能有效诱导淋巴细胞致敏。体外毒性显示125μL微球（5mg-mL^-1）对Hela细胞生长无明显影响，体内实验结果显示其对小鼠生长也没有影响。结论：HpWCP—CAMS具有良好的靶向性和缓释特征，无细胞毒性，有望作为疫苗进一步研究。     

紫杉醇肺靶向微球的制备及体内外评价

目的用生物可降解材料聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物(PLGA)制备肺靶向紫杉醇缓释微球。方法在单因素考察的基础上进行正交试验设计,筛选出肺靶向紫杉醇PLGA微球的最佳制备工艺条件;利用桨板法研究了微球的体外释药规律;用小鼠为实验对象,研究了紫杉醇聚乳酸微球的体内组织药物分布。结果制得的微球形态圆整,粒径在5~15μm范围内的占总体积的87.18%,微球平均粒径为9.65μm;包封率为83.8%;载药量为19.7%;体外释药符合Higuchi方程Q=-2.193 7 22.009t0.5,r=0.990 4;体内实验表明紫杉醇微球混悬剂较普通注射剂更趋于聚集在肺组织。结论微球制备工艺稳定,具有明显的缓释作用和肺靶向性。     

栓塞制剂—顺铂微球的研究

本文用非生物降解材料乙基纤维素制备了顺铂微球,用于肿瘤的栓塞治疗。进行的体外制剂学研究、动物体内外毒性考察、栓塞实验及人体临床应用结果显示:顺铂微球具有显著的栓塞肿瘤血管之效果,且可缓解,降低全身毒性,实现靶向给药之目的。     

米托蒽醌白蛋白微球和联糖米托蒽醌白蛋白微球肝靶向性比较研究

目的：比较米托蒽醌白蛋白微球和联糖米托蒽醌白蛋白微球肝靶向性的优劣。方法：以小鼠为实验动物,以静脉注射给药后小鼠血浆及各器官中的米托蒽醌含量为指标。结果：联糖米托蒽醌白蛋白微球在肝中的分布高于米托蒽醌白蛋白微球,而且肝中米托蒽醌较高浓度的维持时间也更长。结论：联糖米托蒽醌白蛋白微球肝靶向性比米托蒽醌白蛋白微球好,但无统计学上的显著性差异。     

羟基喜树碱微球的制备及其小鼠体内分布研究

目的:制备肺靶向性羟基喜树碱(HCPT)微球,评价其体外释药特性及其在小鼠体内的肺靶向性。方法:以聚乳酸为主要辅料,采用溶剂挥发法制备微球,考察其粒径、包封率、载药量,比较微球及原料药的体外释药性;取12只小鼠分别尾静脉注射HCPT微球及原料药,30min后分别测定血浆及各组织的药物浓度并计算相对分布率。结果:所制微球粒径在7～30μm者达81.6%,平均粒径为(14.2±3.1)μm,包封率为72.36%,载药量为(40.6±3.6)%,微球及原料药体外释药参数T50分别为85、18min。微球给药组在肺中的药物浓度最高(32.2±2.48)μg.mL-1,相对分布率58.1%;原料药给药组在血浆中的药物浓度最高(13.52±2.58)μg.mL-1,相对分布率25.24%。结论:所制HCPT微球具有明显的缓释性及肺靶向性。     

抗癌药物白蛋白微球的研究进展

为提高抗癌药物对癌细胞或组织的靶向性,增强疗效,降低其全身毒副作用,以不同材料作载体的抗癌药物微球相继研制成功:不可生物降解的乙基纤维素微球,可生物降解的白蛋白微球、淀粉微球、明胶微球、聚乳酸微球,以及近年来问世的磁性微球、毫微球等。白蛋白微球以其良好的生物相容性和可降解性被广泛用于抗癌药靶向给药系统。 白蛋白微球最初用于动物及人的肺部扫描和循环系统研究,自1974年首次作为抗癌药物载体以来,相继用作诊断试剂及靶向给药、化学栓塞治疗的载体。1 抗癌药物动脉栓塞白蛋白微球 肿瘤动脉栓塞疗法是将抗癌药物制剂选择性注入支配     

5-氟尿嘧啶磁性白蛋白亚微球在正常及荷瘤小鼠体内的药代动力学与组织分布

5-氟尿嘧啶磁性白蛋白亚微球(5-flourouracil magnetic albumin deuto-microsphere，5-Fu-MAD)是新型靶向给药系统，考察正常及荷瘤小鼠体内的代谢和分布为其临床应用提供参考。采用HPLC方法测定生物样品中5-Fu浓度。采用原子吸收光谱法测定组织铁浓度。结果显示，小鼠尾静脉注射5-Fu原料药及5-Fu-MAD后，于不加或加磁性支架条件下，药代动力学过程均呈一级二室动力学模型。小鼠静脉注射5-Fu各制剂组后5-Fu和Fe的分布以肝脏、肿瘤组织、脾脏、肺脏为高，肾脏、心脏次之，脑组织和肌肉组织最低。正常小鼠的肌肉组织和荷瘤小鼠肿瘤组织给予磁性支架后，分布显著增加(P<0.01)。可见，5-Fu-MAD在小鼠体内的分布具有缓释特征，且对加入了磁性支架的组织具有靶向性。     

去甲斑蝥素白蛋白微球的制备

目的:对去甲斑蝥素白蛋白微球的制备工艺及质量进行研究。方法:以白蛋白为载体,采用乳化交联法制备去甲斑蝥素白蛋白微球。在单因素考察的基础上,利用正交设计优化去甲斑蝥素白蛋白微球制备工艺,并对微球的粒径、形态、体外释放特性及稳定性进行研究。结果:制得的微球形态圆整,平均粒径为(0.54±0.13)μm,平均载药量为(51.36±2.45)%,平均包封率为(62.28±3.27)%,体外释放符合Higuchi方程,Q=10.1854t1/2-1.0858(r=0.998 1)。结论:本实验获得了较理想的去甲斑蝥素白蛋白微球,其体外释放特性符合长效制剂特征。     

A less irritant norcantharidin lipid microspheres: formulation and drug distribution

Lipid microspheres (LM) have recently been used as intravenous (i.v.) carriers for drugs, which are sufficiently soluble in oil. However, in the case of norcantharidin (NCTD), which is poorly soluble in both the water and oil phases, this approach is not feasible. In this study, NCTD-loaded LM was prepared by transferring the drug to the interfacial surface of the oil and aqueous phases to produce a less irritating i.v. formulation of NCTD. A probe type sonicator was used to disperse NCTD into the oil phase together with lecithin and Tween 80. A high-pressure homogenization process was used to prepare the lipid microspheres and localize the drug at the surfactant layer. The LM loaded with NCTD consisted of 0.02% drug. Characterization of LMs and short-term stability was performed by photon correlation spectroscopy (PCS) and a centrifugation test was also carried out. The results showed that NCTD-loaded LM (2 mg/ml) with over 80% NCTD loaded in the interfacial surface were stable for a period of 2 months, and were suitable for i.v. injection in terms of size and stability, whether be diluted or not. Such formulations produced less pain and irritation in animal studies.     

去甲斑蝥素壳聚糖-丝素蛋白栓塞微球的制备以及体外释放研究

目的:研究利用壳聚糖(chitosan,CS)和良好生物相容性的丝素蛋白(silk fibroin,SF)为载体,去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)为模型药物,制备去甲斑蝥素壳聚糖-丝素蛋白微球(norcantharidin-chitosan-silk fibroin-microspheres,NCTD-CS-SF-MS)。并考察微球的载药量、包封率及微球表面形态以及微球的体外释放特性。方法:以液体石蜡为油相,壳聚糖与丝素蛋白的物理混合溶液为水相,Span-80为乳化剂,戊二醛为交联剂;采用乳化-交联固化法制备NCTD-CS-SF-MS。星点设计优化制备工艺,扫描电镜,观察微球表面形态及X-射线粉末衍射法(X-ray power diffraction,X-RD)和差示扫描量热法(differential scanning calorimetry,DSC)表征微球特性;采用体外动态透析法测定微球在不同介质条件下的释药性能。结果:制备的NCTD-CS-SF-MS形态圆整,粒径分布较为均匀,平均粒径约(184.0±5.0)μm,载药量(15.08±2.85)%,包封率(27.46±1.25)%。NCTD-CS-SF-MS在0.1mol/L HCl,PBS(pH=7.4)和9.0mg/mL氯化钠溶液的3种介质中的释放均遵循Weibull方程。结论:优化的NCTD-CS-SF-MS制备工艺简单易行,载药量高,缓释作用良好。     

去甲斑蝥素抑制人脑胶质瘤细胞增殖的体内外研究

目的研究去甲斑蝥素(Norcantharidin,NCTD)体内外对人脑胶质瘤细胞的抑制作用。方法常规培养细胞,24 h后随机分为阳性对照组、空白对照组和去甲斑蝥素6个剂量组,MTT法检测NCTD对人脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;建立SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组、顺铂阳性对照组以及NCTD 3个剂量组,腹腔注射给药12 d后,取血检测血常规及肝肾功能;处死裸鼠,剥瘤称重并计算抑瘤率。结果 NCTD 6个剂量组显著抑制SHG-44细胞的增殖,且呈时间和剂量依耐性;并提高SHG-44细胞的凋亡率;NCTD 3个剂量组可抑制SHG-44细胞裸鼠异种移植瘤的生长,对移植瘤裸鼠血常规及肝肾功能无明显影响。结论 NCTD体内外均可抑制SHG-44细胞生长,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

去甲斑蝥素-半乳糖衍生物的合成与抗癌活性

设计并合成了肝靶向抗癌前药去甲斑蝥素-半乳糖(NCTD-Gal)偶联物。以去甲斑蝥素为原料，经氨基酸修饰后，再通过酰化、氢解、糖苷化和脱乙酰基反应合成去甲斑蝥素-半乳糖衍生物。合成了7个新β-O-糖苷化合物，结构通过IR、 MS、 ¹H NMR和元素分析确证。对产物4a进行了初步小鼠体内抗肿瘤实验，结果显示，4a中、高剂量组抑瘤率明显高于NCTD组，表明半乳糖苷化对NCTD抗癌作用有一定提高。     

Norcantharidin induces apoptosis in HeLa cells through caspase, MAPK, and mitochondrial pathways

AIM: To investigate the mechanism of norcantharidin (NCTD)-induced HeLa cell apoptosis. METHODS: HeLa cell growth inhibition was measured by MTT method. Apoptosis was detected by Hoechst 33258 staining and agarose gel electrophoresis. Caspase activities were assayed using caspase apoptosis detection kit. Western blot analysis was used to evaluate the level of ICAD, ERK/p-ERK, JNK/p-JNK, and Bcl-XL/Bax expression. RESULTS: Norcantharidin inhibited HeLa cell growth in a time- and dose-dependent manner. HeLa cells treated with norcantharidin showed typical characteristics of apoptosis including the morphological changes and DNA fragmentation. Caspase family inhibitor (z-VAD-fmk), caspase-8, -9 inhibitor (z-IETD-fmk, Ac-LEHD-CHO, respectively) and caspase-3 inhibitor (z-DEVD-fmk) partially prevent norcantharidin-induced apoptosis, but initiator caspase-1 inhibitor (Ac-YVAD-fmk) did not. The activities of caspase-3, -8, and -9 were up-regulated after norcantharidin treatment. Furthermore, NCTD-induced activat     

Preclinical evaluations of norcantharidin-loaded intravenous lipid microspheres with low toxicity

Objectives: The aim of this study was to perform a systematic preclinical evaluation of norcantharidin (NCTD)-loaded intravenous lipid microspheres (NLM).

Research design and methods: Pharmacokinetics, biodistribution, antitumor efficacy and drug safety assessment (including acute toxicity, subchronic toxicity, hemolysis testing, intravenous stimulation and injection anaphylaxis) of NLM were carried out in comparison with the commercial product disodium norcantharidate injection (NI).

Results: The pharmacokinetics of NLM in rats was similar to that of NI, and a non-linear correlation was observed between AUC and dose. A comparable antitumor efficacy of NLM and NI was observed in mice inoculated with A549, BEL7402 and BCAP-37 cell lines. It was worth noting that the NLM produced a lower drug concentration in heart compared with NI, and significantly reduced the cardiac and renal toxicity. The LD₅₀ of NLM was twice higher than that of NI. In NLM, over 80% of NCTD was loaded in the lipid phase or bound with phospholipids. Thus, NCTD was sequestered by direct contacting with body fluids and largely avoided distribution into tissues, consequently leading to significantly reduced cardiac and renal toxicity.

Conclusions: These preclinical results suggested that NLM could be a useful potential carrier for parenteral administration of NCTD, while providing a superior safety profile.     

去甲斑蝥素诱导人鼻咽癌细胞CNE1凋亡的实验研究

目的检测去甲斑蝥素对人鼻咽癌细胞CNE1增殖、凋亡的影响,为临床应用NCTD治疗鼻咽癌细胞提供实验基础。方法体外常规培养CNE1细胞用于实验,经NCTD作用后,采用MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞仪观察鼻咽癌细胞凋亡、细胞周期。结果 NCTD对鼻咽癌细胞的生长有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);NCTD可剂量和时间依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡;NCTD可剂量依赖性地诱导肿瘤细胞周期发生改变,将鼻咽癌细胞阻滞在G2期。结论 NCTD对体外培养的CNE1细胞的生长有明显抑制作用和诱导凋亡的作用。     

去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物基质中的释药行为比较

目的：比较去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物基质中的释放行为。方法：采用混合和压膜方法制备载药的聚己内酯片,然后剪切成小片后考察其在不同释放介质中的释药行为,并探讨其释药机制。结果：去甲斑蝥酸钠的释药行为受磷酸缓冲盐浓度以及缓冲盐中氯化钠浓度的影响,而去甲斑蝥素的释药行为则基本不受其影响。结论：去甲斑蝥素和去甲斑蝥酸钠从聚合物中释药行为差异主要由药物渗透压引起。