特发性肺间质纤维化中TGF-β1诱导上皮-间充质细胞转化的研究

目的探讨转化生长因子-β1(tansforming growth factor-β1,TGF-β1)在特发性肺间质纤维化(idiopathicpulmonary fibrosis,IPF)中上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EM T)的作用和机制。方法选择临床-影像-病理诊断的IPF患者25例肺石蜡组织制作组织芯片,应用免疫组化方法检测病灶组织中TGF-β1和β连环蛋白(β-catenin),间质标记物α-SMA、Desmin、Vim和上皮标记物E-cadherin及CK7的分布及表达情况。结果 TGF-β1主要分布于肌纤维母细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞和巨噬细胞,且其在成纤维细胞灶(fibroblast foci,FF)区域内各种细胞中的表达明显高于无FF区域(P<0.01);与无FF区域相比,β-catenin和E-cadherin在有FF区域增生的Ⅱ型肺泡上皮细胞膜表达明显减弱(P<0.01),而胞浆的表达明显增加(P<0.01);同时发现有FF区域Ⅱ型肺泡上皮细胞表达间质标记物Vim,但未发现α-SMA的表达,而无FF区域两者均无表达。结论 TGF-β1和β-catenin有可能通过相互交叉作用诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞发生EMT,从而参与肺间质纤维化的发生。     

TGF-β诱导肿瘤细胞上皮-间充质转化的调节及信号转导机制研究进展

上皮-间充质转化( EMT)是源于上皮细胞的恶性肿瘤细胞获得迁徙和侵袭能力的重要生物学过程。恶性上皮性肿瘤细胞和基质细胞分泌的转化生长因子β( TGF-β)诱导和促进了肿瘤细胞的EMT过程。有研究表明TGF-β借助于Smad依赖性或非Smad依赖性信号转导通路,诱导或抑制EMT过程关键基因的表达;细胞外及细胞膜的多种因子则对上述信号转导过程产生调节作用。结果提示,在TGF-β诱导的肿瘤细胞的EMT过程,涉及一个复杂而精细的信号转导调控网络。     

转化生长因子β1诱导A549细胞上皮-间充质转化的时间相关性

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导A549细胞发生上皮-间充质转化(EMT)的时间相关性。方法:将体外培养的A549细胞分为空白组(加入F-12培养基)、模型组(加入10ng/ml TGF-β1)后继续培养。采用MTT实验检测细胞的增殖能力,光学显微镜下观察细胞形态学改变,实时荧光定量PCR和Western blot法检测E-Cad、Vim、FN mRNA的蛋白表达水平。结果:模型组在48h、72h时与空白组比较,A549细胞显著增殖(均P<0.01)、细胞形态明显改变,72h时几乎所有细胞呈纺锤形;48h、72h时与空白组比较,模型组FN mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。48h时与空白组比较,模型组FN蛋白表达上调(P<0.05),E-Cad蛋白表达显著下调(P<0.01)。在72h时与空白组比较,模型组FN、Vim蛋白表达明显上调(P<0.01),E-Cad mRNA表达显著下调(P<0.01)。结论:A549细胞发生EMT与TGF-β1刺激的时间长短有关。72h和48h为体外实验EMT发生的时间,72h为EMT的最佳时间点。     

TGF-β1和ERK1/ERK2的相互作用及对人胰腺癌细胞生长的影响

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞外信号调节激酶K1/细胞外信号调节激酶K2(ERK1/ERK2)对胰腺癌生长的影响及其相互关系,并探讨它们对胰腺癌作用的可能机制.方法:应用免疫组织化学技术检测临床胰腺癌患者病理组织中TGF-β1和ERK1/ERK2蛋白表达情况;MTT法观察不同剂量TGF-β1对人胰腺癌Panc-1细胞生长的影响;Western印迹法观察不同剂量TGF-β1对ERK1/ERK2蛋白表达的影响.结果:胰腺癌患者组织TGF β1、ERK1和ERK2蛋白均呈显著性高表达,其阳性表达率分别为66.67%(30/45)、86.70%(39/45)和84.44%(38/45),而在对照组织的阳性表达率分别为30%(6/20)、30%(6/20)和20%(4/20),两者间存在显著差异(P＜0.05);TGF-β1抑制Panc-1细胞生长,随着剂量的增加和作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强,到第4天抑制作用达高峰,随后抑制作用不同程度的减弱,细胞生长速度加快;外源TGF-β1不能改变ERK1/ERK2蛋白的高表达状态.结论:胰腺癌患者病理组织强表达TGF-β1和ERK1/ERK2蛋白;外源TGF-β1在一定阶段抑制胰腺癌细胞系生长,但不改变ERK1/ERK2的表达;胰腺癌细胞逃避TGF-β1抑制作用的机制之一可能是高水平ERK1/ERK2的表达.     

硫化氢对TGF-β1诱导的HK-2细胞上皮间充质转化的抑制作用

目的:观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人近端肾小管上皮细胞转分化的影响,并初步探讨其作用的可能机制。方法:以体外培养的HK-2细胞为研究对象,分别用10μg/LTGF-β1、100μmol/LNaHS(H2S的供体)及2者联合作用进行干预,以正常培养的细胞作正常对照。孵育0、15、30及60min后,Westernblot检测4组细胞磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad2蛋白的表达;孵育48h后,观察细胞形态变化,Westernblot检测4组细胞E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,TGF-β1组细胞发生梭形变,E-cadherin蛋白表达下降(F=1262.535,P<0.001),α-SMA蛋白表达上调(F=1456.030,P<0.001);NaHS+TGF-β1组细胞发生梭形变的程度较TGF-β1组明显减轻,E-cadherin蛋白表达增加(F=65.330,P<0.001),α-SMA蛋白表达下降(F=288.300,P<0.001)。TGF-β1组细胞在15、30及60min时p-Smad2/3表达均较正常对照组增加,而NaHS+TGF-β1组细胞p-Smad2/3的表达较TGF-β1组降低(P<0.05)。结论:H2S可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞转分化,该作用可能部分通过影响Smad2/3磷酸化程度来完成。     

MCP-1诱导的肾小管上皮-间充质细胞转化与整合素连接激酶表达变化的关系

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养的肾小管上皮细胞转分化的作用及其与细胞整合素连接激酶（ILK）表达变化的关系。方法体外培养的HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng／mlTGF-81处理的HKC为阳性对照,以不同浓度的MCP-1（0．1、1．0、10、100ng／m1）处理细胞,或以同一浓度的MCP-1（1ng／ml）在不同时间点（0h、12h、24h、36h、48h、72h）处理细胞。用半定量RT-PCR方法测定各组HKC细胞α—SMA mRNA的表达,Western blot方法测定各组HKC细胞α-SMA及ILK表达。在上述实验基础上进一步观察MEK抑制剂（PD98059,10μmol／L）,p38MAPK抑制剂（SB203580,5／μmol／L）和ROCK抑制剂（Y27632,500μmol／L）对HKC细胞ILK表达的影响。结果MCP-1（0．1、1．0ng／m1）作用后HKC细胞α-SMA mRNA和α—SMA、ILK蛋白表达显著高于阴性对照组（P＜0．01）,但低于阳性对照组（P＜0．01）;其中以1．0ng／ml MCP-1组作用后α—SMAmRNA和α—SMA、ILK蛋白表达水平增高更为显著（P＜1．001）。1．0ng／ml MCP-1作用后细胞α-SMA mRNA和α-SMA、ILK蛋白表达在0-48h内逐渐增加,48h达最高峰（P＜0．01）,72h时呈下降趋势。分别加入阻断剂PD98059、SB203580和Y27632后,HKC细胞ILK蛋白表达水平与MCP-1单独作用无显著性差异（P＞0．05）。结论MCP-1可诱导肾小管上皮细胞转分化并呈时间浓度依赖性,该作用可能与MCP-1上调ILK的表达有关;本研究未发现MCP-1上调ILK的信号传导途径与MEK1、p38MAPK、ROCK途径有关。     

骨化三醇对哮喘中TGF-β1所诱导上皮间充质转化的调控作用

目的 探究骨化三醇对TGFβ1所诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)上皮-间充质转化(EMT)的影响,为哮喘气道重塑的防治提供理论依据.方法 筛选TGF-β1作用于BEAS-2B,诱导EMT的最佳时间,将细胞分为空白组与24、48、72 h TGF-β1组;筛选TGF-β1作用于BEAS-2B,诱导EMT的最佳浓度...     

VEGF对上皮间充质转化的抑制与Smad信号途径及SnoN表达的变化

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞发生肾小管上皮-间充质细胞转化(EMT)的过程中对Smad2/3,Smad7信号途径以及SnoN表达的影响。方法体外培养的HK-2细胞分为:①正常对照组;②TGF-β1(5μg/L)阳性对照组;③VEGF165(100μg/L)作用组;④TGF-β1(5μg/L)+VEGF165(100μg/L)共同作用组。采用WesternBlot法和RT-PCR分别检测各组细胞p-Smad2/3和Smad2/3(共同作用30和60min),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad7、SnoN的表达水平(共同作用48h)。结果 TGF-β1组α-SMA蛋白和mRNA表达与正常对照组比较明显增强,TGF-β1与VEGF165共同作用组α-SMA蛋白和mRNA表达与TGF-β1单独作用组比较明显减弱(P0.05)。体外HK-2细胞,TGF-β1组刺激30、60min,与正常对照组比较,(p-Smad2/3)/(Smad2/3)比值明显升高,TGF-β1+VEGF165组与TGF-β1单独作用组相比明显下降,且以30min时下降明显。TGF-β1组作用48h与正常对照组比较,Smad7蛋白和mRNA表达明显下降,VEGF165+TGF-β1组较TGF-β1单独作用组Smad7表达明显升高(P0.05)。VEGF165组与正常对照组相比,α-SMA、(p-Smad2/3)/(Smad2/3)、Smad7蛋白和mRNA表达的差异无统计学意义(P﹥0.05)。TGF-β1组SnoN蛋白表达与正常对照组比较明显增强(P0.05),TGF-β1与VEGF165共同作用组SnoN蛋白表达与TGF-β1单独作用组相比差异无统计学意义(P﹥0.05),各组SnoNmRNA表达差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论 VEGF165抑制TGF-β1诱导HK-2细胞EMT的机制可能与直接抑制Smad2/3磷酸化、上调Smad7信号表达有关,而与调节SnoN表达无关。     

转化生长因子β诱导肿瘤微环境改变促进胃癌NCI-N87细胞上皮间充质转化

目的探讨微环境因子在转化生长因子β（TGF-β）诱导胃癌上皮-间充质转化（EMT）中的作用。方法建立了TGF-β诱导胃癌细胞发生EMT模型,利用实时定量PCR、免疫荧光染色技术检测了EMT相关指标的表达情况,采用Transwell迁移实验、侵袭实验、划痕修复实验检测了胃癌细胞的转移能力;同时,利用实时定量PCR（RT-qPCR）和ELISA检测了TGF-β诱导刺激后胃癌微环境因子的改变,并通过免疫印迹检测了其下游信号分子的活性。结果 TGF-β能诱导胃癌细胞NCI-N87发生EMT改变,促进癌细胞迁移和侵袭。进一步研究发现,TGF-β能诱导表皮生长因子（ EGF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达上调,Dickkopf-1（DKK1）和分泌型卷曲受体蛋白1（SFRP1）表达降低,进而分别诱导PI3K/AKT和Wnt/β-连环蛋白（catenin）通路的激活。结论 TGF-β通过诱导胃癌微环境因子的改变促进胃癌NCI-N87细胞发生EMT。     

白介素-1β诱导肾小管上皮细胞向间充质细胞转化的实验研究

目的通过白介素-1β(IL-1β)诱导肾小管上皮细胞转化为肾间充质细胞的研究,探讨炎症因子促进肾间质纤维化的作用机制。方法用IL-1β分别刺激小鼠肾小管上皮细胞3天、4天、5天,提取细胞中的蛋白质,采用Western-blotting测定细胞α-SMA、Vimentin蛋白水平;用IL-1β分别刺激肾小管上皮细胞12h、36h和60h,提取细胞中的总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定α-SMA、Vimentin基因表达水平。结果IL-1β能够诱导肾小管上皮细胞α-SMA、Vimentin蛋白质合成增加,并随着刺激的时间的延长,两种骨架蛋白的蛋白上皮亦增高;同时IL-1β可上调肾小管上皮细胞α-SMA、Vim-entin的基因表达,也有时间依赖性。10ng/mlIL-1β可显著抑制肾小管上皮细胞增生。结论炎症因子IL-1β可通过上调肾小管上皮细胞两种骨架蛋白的蛋白合成和基因表达,诱导肾小管上皮细胞向肾间充质细胞表型发生转化,从而在肾小管间质纤维化发生发展过程中发挥作用。     

硫化氢对博来霉素致肺纤维化大鼠TGF-β1介导上皮间充质转化过程影响

目的 观察硫化氢(H2S)对转化生长因子-β1(TGF-β1)及上皮间充质转化(EMT)过程中E-钙黏素(E-cad)、波形蛋白(VIM)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)表达影响,探讨H2S抗纤维化机制.方法 健康雄性SD大鼠60只,随机分为对照组、博来霉素组、NaHS+博来霉素组、泼尼松+博来霉素组,15只/组.于造模...     

转化生长因子-β1诱导的上皮向间叶转化对胰腺癌侵袭和转移的意义

目的研究转化生长因子-β1（TGF-β1）所诱导的上皮向间叶转化对胰腺癌侵袭的意义。方法采用免疫组织化学的方法检测29例胰腺癌组织中TGF-β1的表达，并与临床病理资料作对照分析，同时体外通过TGF-β1诱导胰腺癌细胞株Panc-1，观察上皮向间叶转化（EMT）的发生情况以及对细胞侵袭能力的影响。结果在29例胰腺癌组织中有12例TGF-β1呈阳性表达（41．4％），TGF-β1的阳性表达和肿瘤的侵袭范围（P=0．035）以及淋巴结转移（P=0．047）都存在着相关性。TGF-β1在体外可以诱导Panc-1发生明显的EMT以及侵袭能力的增加。结论TGF-β1可以通过诱导胰腺癌细胞发生上皮向间叶转化和肿瘤细胞侵袭能力的增加，进而导致了胰腺癌高度侵袭性的生物学行为。     

激活Wnt/β-catenin通路促进肝癌细胞上皮间充质转化

探讨丝氨酸精氨酸蛋白激酶1（SRPK1）对肝癌细胞株HepG2上皮间充质转化（EMT）的作用。方法 通过Ualcan及TIMER 2.0数据库分析SRPK1 mRNA在肝细胞癌（LIHC）与正常样本、配对癌旁样本之间的表达差异,与生存时间、临床分期、病理分期、TP53变异、人种、性别、年龄、体重等临床资料的关系。用HPA数据库的免疫组化数据验证SRPK1蛋白在LIHC组织及正常对照间的表达差异。构建SRPK1过表达及抑表达的HepG2细胞,并根据SRPK1表达差异分为SRPK1组及对照的Vector组,shRNA组及对照的Scramble组。Western blot检测4组细胞株SRPK1的蛋白水平。Western Blot、免疫荧光检测EMT分子标记物E-cadherin、Vimentin蛋白表达差异。核浆蛋白分离比较细胞β-catenin入核程度的变化。GEPIA2数据库分析在LIHC组织中SRPK1与Wnt/β-catenin通路下游基因Twist、MYC、MMP9的相关性,Real-time PCR验证SRPK1对Twist、MYC、MMP 9表达的影响。结果 SRPK1表达在LIHC组织中表达显著高于正常对照及配对癌旁样本（P＜0.05）,随疾病分期及病理分级增加而增加（P＜0.05）,高表达SRPK1组总生存期低于低表达组（P=0.035）,LIHC患者TP53突变组SRPK1表达高于非突变组（P＜0.05）,在不同种族、性别、年龄、体重间无差别（P＞0.05）。SRPK1过表达HepG2细胞E-cadherin表达下降,Vimentin表达增加（P＜0.05）;抑表达细胞E-cadherin增加,Vimentin下降（P＜0.05）。SRPK1在LIHC组织中分别与Twist、MYC、MMP9表达呈正相关性（P＜0.05）;SRPK1过表达细胞β-catenin蛋白在细胞核中表达增加（P＜0.05）,Twist、MYC、MMP9表达增加（P＜0.05）;反之,抑表达细胞β-catenin在细胞核中表达下降（P＜0.05）,Twist、MYC、MMP9表达减少（P＜0.05）。结论 SRPK1可能通过Wnt/β-catenin通路促进HepG2细胞EMT活化     

ILK 介导 TGF-β／Smad 通路诱导肾小球内皮细胞-间充质细胞转分化的研究

目的：观察 TGF‐β1在肾小球内皮细胞‐间充质细胞转分化（EndM T ）中的作用,探讨 ILK 介导 TGF‐β／Smad 信号通路在 EndM T 过程中的作用。方法以体外培养人肾小球内皮细胞为研究对象,分为空白对照组、TGF‐β112．5、25．0、50．0 ng／mL 组、TGF‐β150．0 ng／mL ＋Ⅰ型受体抑制剂（LY364749）5．0μmol／L 组和 ILK 抑制剂（QLT‐0267）5．0μmol／L 组,各组细胞在上述处理因素下培养48、72 h ,以 RT‐PCR 测定 P‐Smad2／3和 ILK mRNA 的表达水平,以 Western blot 测定 P‐Smad2／3、ILK 及E‐cadherin 、CD31、α‐SMA 和 FSP‐1蛋白的表达水平。结果（1）TGF‐β1可剂量依赖性诱导 HGEnCP‐Smad2／3和 ILK mRNA 水平显著升高（P＜0．01）以及 P‐Smad2／3、ILK 、α‐SMA 和 FSP‐1蛋白水平显著升高（P＜0．01）,但是剂量依赖性诱导 E‐cadherin 和CD31蛋白水平显著降低（P＜0．01）;（2）TGF‐β1Ⅰ型受体抑制剂和 ILK 抑制剂可显著抑制 TGF‐β1诱导 ILK mRNA 水平的升高（P＜0．01）以及 ILK 、α‐SMA 和 FSP‐1蛋白水平的升高（P ＜0．01）,抑制 E‐cadherin 和 CD31蛋白水平的降低（P＜0．01）;（3） TGF‐β1Ⅰ型受体抑制剂可显著抑制 TGF‐β1诱导 P‐Smad2／3 mRNA 和蛋白水平的升高（P ＜0．01）,但是 ILK 抑制剂对 P‐Smad2／3 mRNA 和蛋白无显著影响（P＞0．05）。结论 TGF‐β1可促进肾小球内皮‐间充质细胞转分化,ILK 作为下游效应因子介导 TGF‐β／Smad 信号通路参与了该过程,可能在肾脏纤维化过程中发挥重要作用。     

地塞米松对马兜铃酸诱导的人肾小管上皮-间充质转化的作用及可能机制

目的探讨地塞米松(Dex)对马兜铃酸诱导的肾小管上皮-间充质转化(EMT)的影响及可能机制。方法体外培养的人肾小管上皮细胞(HKC)分为阴性对照组、马兜铃酸(AA,10μg/ml)作用组、Dex(100μmol/L)作用组、AA(10μg/ml)+无水乙醇(100μmol/L)组、AA(10μg/ml)+Dex(100、10、1、0.1、0.01μmol/L)共同作用组,培养细胞48h,应用激光共聚焦显微镜(CFMS)观察α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)的表达,采用Real-timePCR和WesternBlot方法检测α-SMA、E-cadherin、p-Smad3、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7mRNA和蛋白的表达。结果 AA作用48h后,CFMS观察发现HKC细胞E-cadherin表达减弱而α-SMA表达增强;地塞米松干预后,E-cadherin表达逐渐增强而α-SMA表达减弱,且呈剂量依赖性。Real-timePCR、WesternBlot结果均显示,与阴性对照组相比,AA组α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白表达水平均显著增强,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达均减弱(P0.05)。同AA作用组比较,AA+Dex共同作用组随Dex剂量增加,α-SMA、p-Smad3、TGF-β1mRNA和蛋白的表达逐渐减弱,E-cadherin、Smad7mRNA和蛋白的表达逐渐增强(P0.05),而无水乙醇却无此作用。结论 Dex可抑制AA诱导HKC细胞发生EMT,并同时下调EMT过程中TGF-β1和p-Smad3的表达、上调Smad7分子的表达,提示TGF-β1/Smad下调可能是Dex抑制EMT发生的机制之一。     

TGF-β1对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化的诱导作用

目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）诱导胶质瘤U87细胞发生上皮-间质转化（EMT）的作用,为阐明胶质瘤侵袭性生长的机制提供依据。方法：以不同浓度TGF-β1体外处理胶质瘤U87细胞,分为2.5×10^-6、5.0×10^-6、10.0×10^-6和20.0 ×10^-6g·L^-1 TGF-β1组,以0×10^-6g·L^-1TGF-β1组作为空白对照组。Western blotting法检测各组U87细胞中上皮标志物（上皮钙黏蛋白）和间质标志物（神经钙黏蛋白和波形蛋白）以及转录因子（Snail、Slug和Zeb1蛋白）的相对表达水平;倒置显微镜下观察U87细胞形态表现;划痕愈合实验检测U87细胞相对迁移距离。结果：随着TGF-β1浓度的升高,胶质瘤U87细胞中上皮钙黏蛋白相对表达水平逐渐降低,2.5×10^-6、5.0×10^-6、10.0×10^-6和20.0 ×10^-6g·L^-1 TGF-β1组U87细胞中上皮钙黏蛋白相对表达水平低于空白对照组（P < 0.05或P < 0.01）;神经钙黏蛋白和波形蛋白相对表达水平则随着TGF-β1浓度的升高逐渐升高,神经钙黏蛋白相对表达水平分别比空白对照组升高11.5%（P>0.05）、39.4%（P>0.05）、51.0%（P<0.05）和76.9%（P<0.05）;10.0×10^-6和20.0×10^-6g·L^-1TGF-β1组U87细胞中波形蛋白相对表达水平均高于空白对照组（P<0.01）。5.0×10^-6、10.0×10^-6和20.0×10^-6g·L^-1TGF-β1组U87细胞中Snail、Slug和Zeb1蛋白的相对表达水平高于空白对照组（P < 0.05或P < 0.01）。与空白对照组比较,10.0×10^-6 g·L^-1TGF-β1组U87细胞呈拉伸状和更为狭长,细胞迁移能力明显增强。结论：一定浓度范围内,TGF-β1能以浓度依赖方式诱导胶质瘤U87细胞发生EMT。     

TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化

目的:探讨白细胞介素(IL)-17对A549细胞上皮-间质转化的影响及TGF-β1/Smad2信号通路在其中的作用。方法:用不同浓度(0,10,25,50,100ng/ml)IL-17刺激A549细胞48h,RT-PCR检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、TGF-β1的表达。将体外培养的细胞分为3组:对照组、IL-17(100ng/ml)组、IL-17+SB431542组。48h后收集各组细胞,RT-PCR和Western Blot检测E-cad、α-SMA、TGF-β1、Smad2、和p-Smad2的表达。结果:不同浓度的IL-17作用后,E-cad在50ng/ml IL-17组时表达下调,与浓度呈负相关;α-SMA在100ng/ml IL-17组时表达上调;TGF-β1在25ng/ml IL-17组时表达上调,与浓度呈正相关。与对照组相比,IL-17组E-cad表达下调,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2表达均增加,Smad2蛋白表达水平无明显变化;与IL-17组比较,IL-17+SB431542组Smad2蛋白表达水平无明显变化,TGF-β1、p-Smad2、α-SMA蛋白表达均降低,E-cad的表达明显增加。结论:TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化。     

红细胞生成素对肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF表达变化的关系

目的探讨红细胞生成素（rHuEPO）对人肾小管上皮细胞（HKC）上皮-间充质细胞转化（EMT）的作用及其与该细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达变化的关系。方法体外培养HKC,以未处理的HKC为阴性对照,以8ng/ml的转化生长因子-β1（TGF-β1）处理的HKC为阳性对照,以不同浓度（0.1、1.0、10、50、100IU/ml）的rHuEPO与8ng/ml的TGF-β1共同处理HKC,或在不同时间（-24、0、12、24、36h）用同一浓度rHuEPO（100IU/ml）对8ng/ml的TGF-β1处理的HKC进行干预。应用RT-PCR方法检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和VEGFmRNA转录水平,应用免疫印迹方法检测α-SMA、E钙黏蛋白以及VEGF的蛋白表达水平。结果rHuEPO以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的HKCα-SMAmRNA和蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）,保护性上调TGF-β1抑制的HKC细胞E钙黏蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）;同时上调TGF-β1抑制的HKC细胞VEGFmRNA和蛋白的表达（P〈0.05或P〈0.01）。结论rHuEPO对TGF-β1诱导的EMT具有一定的抑制作用,并具剂量-时间依赖性;该作用可能与rHuEPO上调肾小管上皮细胞VEGF的表达有关。     

TGF-β_1诱导肺泡上皮细胞间质转化

目的:通过观察TGF-β1诱导下A549细胞出现的细胞形态学和E-cad表达的变化,探讨上皮细胞-间质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程在肺纤维化发病机制中的作用。方法:体外培养A549细胞,以TGF-β1进行干预,收集不同时段的细胞,应用荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测TGF-β1干预前后E-cad的mRNA表达变化;倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;间接免疫荧光观察E-cad蛋白表达的变化。结果:倒置相差显微镜观察到TGF-β1干预后A549细胞由鹅卵石状变为梭形,形态如同肌纤维母细胞。间接免疫荧光显示A549细胞的E-cad表达(红色荧光染色)随时间延长逐渐减少。RT-PCR显示E-cad的mRNA表达下调(P<0.05)。结论:TGF-β1在体外诱导肺泡上皮细胞向间质细胞转化,肺泡上皮细胞间质转化是肺纤维化的重要发病机制之一。