基因芯片技术检测乙、丙型肝炎病毒临床研究

探讨基因芯片技术在乙、丙型病毒检测的作用。方法 用迈科锐HBV、HCV联合基因芯片检测血清HBV—DNA和HCV—RNA。结果 基因芯片检测42例HBV—DNA的检出率为86％(26／30)，符合率为88％(37／42)，假阳性为8％(1／12)。检测HCV—RNA检出率为71％(5／7)。符合率为92％(39／42)，假阳性为2％(1／35)。结论 HBV、HCV联合基因芯片检测HBV—DNA和HCV—RNA有较好的敏感性和特异性。     

基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA

目的 :研究病毒性肝炎基因芯片的制备 ,用肝炎基因诊断芯片 ,免疫组织化学法和原位分子杂交法 ,检测 99例乙型肝炎后肝硬化肝组织中 HBV DNA,比较各种方法优缺点。方法 :将 PCR扩增的 HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上 ,并经过点样处理后制备成基因芯片 ;收集肝炎后肝硬化肝组织标本 99份 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测 HBVDNA和 HBc Ag。结果 :5 3例 HBc Ag、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性 40例 ;HBc Ag阳性 2 2例中基因芯片检测阳性 6例 ;32例 HBc Ag HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论 :肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中 HBVDNA,准确率可达 75 % ,假阳性率低。     

乳糜血清对聚合酶链反应DNA模板制备的影响

目的探讨乳糜血清对聚合酶链反应DNA模板制各的影响。方法对29例具有乳糜血清的慢性乙型肝炎患血清，分别进行两种方法处理。A法按照常规试剂集盒方法裂解提取DNA，B法在提取DNA前用异丙醇抽提甘油三酯，弃去抽提液加裂解液100pl，沉淀用70％的乙醇100μl漂洗两次。结果A法裂解提取DNA后发现10例HBVDNA阳性。B法提取DNA后发现26例HBVDNA阳性。结论乳糜血清可能会影响HBVDNA模板的制备。在模板制备前抽提甘油三酯，并用乙醇多次洗涤模板DNA可避免从乳糜血清中检测HBVDNA造成的假阴性．     

时间分辨荧光免疫测定技术（TRFIA）定量检测HBV—M及临床应用分析

目的 研究时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用价值。方法 分别用TRFIA和ELISA法以及荧光定量PCR测定598例随机血清标本HBV—M结果及DNA含量。结果 HBsAg（ELISA）阳性60例，TRFIA法65例，符合率为92．3％；抗-HBs（ELISA）阳性329例，TRFIA法406例，符合率81．0％；HBeAg（ELISA）阳性30例，TRFIA法33例，符合率90．9％；抗-HBe（ELISA）阳性139例，TRFIA法128例，符合率92．1％；抗-HBc（ELISA）阳性135例，TRFIA法205例，符合率65．9％。HBVDNA阳性（HBVDNA≥5×10^2copy／μl）共67例。结论 TRFIA法特异性强、敏感性高，用于HBV—M含量检测可为临床间接反映病毒的感染状况，同时也为接种乙肝疫苗提供依据。HBV抗原在数量上与HBVDNA拷贝数有良好相关性，HBsAg和HBeAg可作为监测HBV感染和复制的量化指标，动态监测HBV—M的量能够反映机体对病毒感染的免疫反应情况，可作为观察临床病程、疗效的依据。     

基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBVDNA

目的研究病毒性肝炎基因芯片的制备，用肝炎基因诊断芯片，免疫组织化学法和原位分子杂交法，检测99例乙型肝炎后肝硬化肝组织，比较各种方法的优缺点。方法将PCR扩增的HBVDNA探针用点样仪点于玻片介质上，并经过点样处理后制备成基因芯片；收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份，分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBVDNA和HBcAg。结果53例HBcAg、HBVDNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例：22例HBcAg阳性组织中基因芯片检测阳性6例；32例HBcAg、HBVDNA阴性组织中基因芯片检测均阴性。结论肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBVDNA，准确率可达75％，假阳性率低。     

分子杂交技术监测孕期乙型肝炎病毒的母婴传播

对40例孕中期检测乙型肝炎表面抗原阳性孕产妇临产前血、新生儿脐血、胎盘绒毛和其中17例3～6个月婴儿血,用Bio-HBV DNA探针进行斑点杂交检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA,其阳性率:母血35.0％,脐血47.5％、胎盘绒毛75.0％、婴儿血29.4％;用~(32)P-HBV DNA探针复测母血和胎盘绒毛HBV DNA,其阳性率分别为30.0％、70.0％。     

原发型肝癌的肝内HBVDNA整合状况

应用~(32)P标记的克隆HBVDNA片段探针对30例原发型肝癌病人的肝内组织进行了DNA电泳转移Southern杂交。结果检出HBVDNA整合者21例(70％),其中癌组织整合者18例(60％),癌外组织整合者16例(53％),双份组织均整合者13例(43％)。杂交带分析发现,不同例和同例肝内不同组织的HBVDNA整合模式都不相同,提示整合具随机性并可能发生整合和/或侧翼序列的基因重排。由于探针含HBV基因组中1.4～2.8kb的DNA顺序,故结果实际反映S基因及其下游增强子的整合状况。基因重排和增强子插入整合并活化细胞原癌基因的致癌机理在本文也进行了初步探讨。     

基因芯片法检测乙肝相关性肝硬化患者HBV感染血清标志物

目的: 探讨乙型肝炎相关性肝硬化患者乙肝五项(HBV-M)不同模式及乙肝病毒DNA(HBV DNA)阳性的临床意义。方法: 64例肝硬化患者用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBV-M,基因芯片法检测HBV DNA,全自动生化分析仪检测肝功能。结果: 64例肝硬化患者中,HBV-M模式有4种,HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性者15例,HBV DNA阳性率100.00%;HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性者22例,HBVDNA阳性率68.18%;HBsAg、HBcAb阳性者24例,HBV DNA阳性率70.83%;单纯HBsAb阳性者3例,HBVDNA均阴性。肝硬化患者各种HBV-M中HBVDNA总阳性率为73.44%。HBVDNA阳性组与阴性组间ALT、总胆红素差异无统计学意义(P>0.05)。结论: 半数以上HBV相关肝硬化患者有活动性复制,有必要对HBVDNA阳性的肝硬化患者进行抗病毒治疗,改善预后。     

核素肝扫描误(漏)诊15例分析

肝扫描对肝内占位性病变特别是肝癌的诊断有一定的价值,文献报导对肝癌诊断的阳性符合率在85～95％之间,但仍可出现假阳性和假阴性结果,而致误诊或漏诊。本文拟就对肝扫描误诊和漏诊的病例进行分析讨论,藉以提高诊断符合率。资料我院1975～1980年经手术、病理检查确诊的肝脏扫描93例中符合临床者78例,不符合者15例、不符合率16.1％。在15例中10例假阳性(肝外肿块压迫5例、病变性质混淆4例、肝肾混淆1例),5例假阴性(形态特殊2例、病灶过小2例、稀疏区范围不大1例)。其扫描与手术、病理结果如表。讨论所谓假阳性就是在扫描图上表现为肝区某一部位有放射性稀疏缺损区,但手术或病理检     

宫颈癌组织基因组中C-MYC癌基因同源序列的检测及其临床意义

以α-~(32)p-dCTP标记的C-MYC癌基因为探针,采用斑点杂交法检测38例慢性宫颈炎,49例宫颈癌组织DNA中C—MYC癌基因的同源序列。结果慢性宫颈炎、宫颈癌杂交阳性率分别为26.32％(10/38)、83.67％(41/49)。而以α-~(32)p-dCTP标记的C-MYC重组体作探针进行杂交,结果49例宫颈癌杂交阳性率分别为100％(49/49)。结果提示:(1)分子杂交法检测以C—MYC DNA的同源序列有助于宫颈癌的早期诊断;(2)人体组织基因组中存在有PBR_(322)的同源序列,因此以克隆化重组体作探针进行条交必须注意到载体所产生的假阳性。     

乙肝患者血清中HBV C基因启动子变异与病毒含量及前S1抗原的关系

目的研究HBVc基因启动子(Basic Core Promoter，BCP)基因变异与前S1(Pre—S1)抗原的关系，以及BCP基因变异与HBV DNA含量的关系。方法94例HBeAg阳性乙肝患者，用PCR-微板核酸杂交ELISA技术检测BCP中nt1762A—T和nt 1764G—A的基因突变，酶联免疫吸附分析(ELISA)检测Pre—S1抗原，PCR荧光定量技术检测HBVDNA。结果在94例HBeAg阳性乙肝患者血清检测中，Pre—S1抗原阳性者65例，其中BCP阳性51例，BCP变异率为78．5％；Pre—S1抗原阴性者29例，其中BCP阳性23例，BCP变异率为79．3％。BCP基因突变血清中HBV DNA拷贝数明显高于非BCP基因突变血清中HBV含量。结论在e抗原阳性乙肝患者中，Pre—S1抗原的存在与BCP的变异无相关性，但BCP基因变异与HBV DNA拷贝数明显相关，可反映乙肝病情的严重程度及其愈后、转归。     

109例儿童弓形虫感染者血清学标志模式与Toxo-DNA的对比分析

目的 探讨弓形虫IgG、IgM、CAg及Toxo—DNA对弓形虫感染的诊断意义。方法 采用ELISA法检测弓形虫IgG、IgM和CAg,PCR法检测Toxo—DNA。结果 109例弓形虫感染儿童中,弓形虫IgG、IgM、CAg及Toxo—DNA阳性率分别为63．3％、43．1％、38．5％和41．3％,后三项阳性率相互比较无统计学差异。71例弓形虫IgM( )和／或CAg( )(模式2、3、4、6、7、8)患中,Toxo—DNA阳性38例,IgM和CAg同时阳性18例,IgM单项阳性29例,CAg单项阳性24例。6例弓形虫IgG(-)、IgM(-)和CAg(-)(模式1)患Toxo—DNA均阳性。32例IgG( )、IgM(-)、CAg(-)(模式5)患中有1例Toxo—DNA呈阳性。结论 弓形虫急性感染指标的弓形虫IgM、CAg及Toxo—DNA阳性检出率接近,但仅在部分病例可见2项或3项同时阳性,即三符合率不是很高,提示联合检测弓形虫血清学标志及Toxo—DNA．有助于减少假阴性结果．     

液基细胞学检查与杂交捕获 Ⅱ代法检测人乳头状瘤病毒DNA的临床意义

目的：探讨液基细胞学检查与杂交捕获Ⅱ代法检测HPV－DNA在宫颈癌筛查中的临床意义。方法：2007年8月－2008年6月在我院接受宫颈癌筛查的960例随机分成3组：TCT组、HCⅡ组和TCT＋HCⅡ组，每组320例，分别进行TCT、高危型HPV杂交捕获Ⅱ代法（HCⅡ）及两者同时检查。将各组阳性病例进行病理检查，比较各组与病理检查结果的阳性符合率。结果：TCT组320例中检出阳性病例38例，占12．00％；病理检查结果阳性30例，阳性符合率为79．00％；HCⅡ组320例中检出阳性病例74例，占23．00％；病理检查结果阳性42例，阳性符合率为57．00％；TCT＋HCⅡ组320例中检出阳性病例22例，占7．00％；病理检查结果阳性20例，阳性符合率为91．00％；HCⅡ与TCT阳性检出率比较，有非常显著性差异（P〈0．01），高危型HPVHCⅡ与病理检查的阳性符合率与TCT病理检查的阳性符合率比较，有非常显著性差异（P〈0．01）；高危型HPV HCⅡ与病理检查的阳性符合率和两项（即TCT与高危型HPVHCⅡ）同时阳性者与病理检查阳性符合率比较，有显著性差异（P〈0．05）。结论：TCT与杂交捕获Ⅱ代法检测高危型HPV-DNA联合检查的阳性符合率明显高于其中单项检查与病理检查的阳性符合率，故联合检查用于宫颈癌筛查中准确性高，漏诊率低。     

母体血浆中游离胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用研究

目的 建立一种从孕妇血浆中检测胎儿DNA的无创性产前诊断新方法。方法 对30例孕7～41周妇女血浆游离DNA进行聚合酶链反应,特异性扩增的胎儿基因为Y染色体上的DYZ1位点,扩增片段的大小为149bp。30例孕妇血浆均经过酚氯仿法提取DNA作为模板,进行聚合酶链反应。结果 20例妊娠男性胎儿孕妇中有17例出现DYZ1基因扩增条带,检出率为85.0％。10例妊娠女性胎儿孕妇中未出现阳性扩增条带,无假阳性结果。本研究中早、中、晚孕期性别符合率分别为80％,80％,90％,总符合率为85.0％。结论 用酚氯仿法提取血浆中的DNA,可以提高模板的浓度和纯度,可改善PCR条件,提高结果的准确性。     

应用引物延伸预扩增反应技术检测孕妇血浆中的胎儿DNA

目的：建立一种检测孕妇血浆中胎儿DNA的新方法。方法;对65例5－41孕周的孕妇血浆中胎儿DNA采用引物延伸预扩增（PEP）后行特异性位点聚合酶链反应（PCR）扩增,并用探针微孔板杂交法检测PCR产物。扩增的基因为Y染色体短臂SRY基因,扩增片段的大小分别为351bp和254bp。结果：46例妊娠男性胎儿的孕妇中41例血浆中出现SRY基因扩增带,检出率89．13％;19例妊娠女性胎儿的孕妇中3例（15．79％）为假阳性。本研究孕早、中、晚期的性别符合率分别为100％、90．91％、75％,总符合率86．15％。结论：利用PEP法能解决孕妇外周血中胎儿细胞数量太少达不到常规扩增条件所要求的最低模板量的问题,同时配合探针微孔板杂交法能使诊断结果更准确。     

聚合酶链反应结合生物素探针杂交检测HBV DNA的应用

本研究将聚合酶链反应和生物素探针点杂交相结合,可直接从5μl 血清中检测到10fgHBV DNA。应用此方法检测20例 HBsAg 和 HBeAg 阳性病例,HBVDNA 均阳性;20例 HBsAg 阳性、HBeAg 阴性病例中,有8例阳性;20例健康献血员中,亦有1例检出 HBV DNA。结果表明这是一种灵敏可靠,适合于基础及临床广泛使用的 HBV DNA 非同位素检测法。     

分子斑点杂交法检测血清HBVDNA1200例结果分析

采用先进的分子杂交技术检测1200例肝病患者的HBVDNA及用酶免法检测HBV—M,并对各组HBV—M阳性肝病患者中HBVDNA的结果进行分析,结果显示HBeAg阳性组HBVDNA检出率为72.48％,明显高于抗—HBe阳性组HBVDNA的检出率0.82％。从而证实了HBeAg阳性与HBVDNA的检出率有密切关系。还显示抗—HBe阳性有48.97％的患者血清中可检出HBVNDA,即近1/2患者血清中病毒复制,有传染性。同时也说明抗—HBe的出现并不是HBV复制的终止,而只是复制水平明显降低。此检测方法安全,无放射性危险,不需添置特殊仪器和设备,可广泛地应用于乙肝病毒携带者的普查,急性乙肝预后的判断及抗病毒药物疗效的考核。     

急性乙型肝炎患者PreS1抗原和HBVDNA与ALT的动态观察

目的 了解前S1蛋白(PreS1)、乙型肝炎病毒(HBVDNA)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)与急性乙型肝炎(AHB)病程的关系.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、核酸扩增(PCR)荧光定量检测技术和双试剂法分别检测PreS1抗原、HBVDNA和ALT.结果 不同病程AHB患者血清PreS1抗原与ALT阳性符合率较高(P＞0.05),HBVDNA与ALT相比阳性符合率较低(P＜0.01).结论 AHB患者治疗过程中,PreS1抗原与ALT阴转基本一致,先于HBVDNA阴转,提示疾病的转归及预后较好.     

急性乙型肝炎患者PreS1抗原和HBVDNA与ALT的动态观察

目的 了解前S1蛋白(PreS1)、乙型肝炎病毒(HBVDNA)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)与急性乙型肝炎(AHB)病程的关系.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、核酸扩增(PCR)荧光定量检测技术和双试剂法分别检测PreS1抗原、HBVDNA和ALT.结果 不同病程AHB患者血清PreS1抗原与ALT阳性符合率较高(P＞0.05),HBVDNA与ALT相比阳性符合率较低(P＜0.01).结论 AHB患者治疗过程中,PreS1抗原与ALT阴转基本一致,先于HBVDNA阴转,提示疾病的转归及预后较好.     

母体血浆中游离胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用研究

目的：建立一种从孕妇血浆中检测胎儿DNA的无创性产前诊断新方法。方法：对30例孕7－41周妇女血浆游离DNA进行聚合酶链反应，特异性扩增的胎儿基因为Y染色体上的DYZ1位点，扩增片段的大小为149bp.30例孕妇血浆均经过酚氯仿法提取DNA作为模板，进行聚合酶链反应。结果：20例妊娠男性胎儿孕妇中有17例出现DYZ1基因扩增条带，检出率为85．0％，10例妊娠女性胎儿孕妇中未出现阳性扩增条带，无假阳性结果，本研究中早，中，晚孕期性别符合率分别为80％，80％，90％，总符合率为85．0％，结论：用酚氯仿法提取血浆中的DNA，可以提高模板的浓度和纯度，可改善PCR条件，提高结果的准确性。