砷剂防治哮喘气道炎症的分子机制:砷剂对丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶基因表达作用的研究

目的:研究三氧化二砷对T细胞丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶(mitogen-activatedproteinkinasephosphatase,MKP-1)基因表达的影响,探讨砷剂治疗哮喘气道炎症的分子机制。方法:本研究采用定量PCR的技术研究Hut-78T细胞在不同浓度三氧化二砷(5μmol/L和1μmol/L)作用下,在不同时间段(3min,10min,20min,30min及1h),T细胞内MKP-1mRNA的表达水平。结果:Hut-78细胞在经过砷剂处理后,细胞内MKP-1mRNA水平在10min即呈现上升的趋势,5μmol/L砷剂20min组和1μmol/L砷剂20min组细胞内MKP-1mRNA水平均明显高于对照组(t=5.947,P=0.001;t=2.561,P=0.035),而在30min时,所诱导MKP-1mRNA水平均达到高峰,其后均呈下降的趋势。而在时间段20min和1h,5μmol/L砷剂组要高于1μmol/L组(t=3.056,P=0.0223;t=3.501,P=0.0128)。结论:三氧化二砷对MKP-1的基因表达具有上调作用;MKP-1为三氧化二砷作用的早期反应基因之一;砷剂对MKP-1的作用呈时间和剂量相关;小剂量的砷剂可能在哮喘的治疗和预防上具有重要的应用价值。     

血铅负荷对儿童T细胞亚群表达的影响

背景：虽然人们对铅毒性引起机体的损害有了较深入认识，但铅负荷对T细胞淋巴细胞亚群的影响还不十分明确。 目的：评估血铅对儿童T细胞亚群的影响，以及血铅临界值与T细胞亚群的关系。 设计：对比观察。 单位：山西省儿童医院妇幼保健院分子微生物研究所。 对象：选择2003—05／2003—10太原市南郊和北郊区儿童60人，男32人，女28人；年龄3-6岁，平均（4．5 &;#177;1．5）岁。监护人均对检测项目知情同意。根据血铅值将儿童分为3组：≥0．48μmol／L组（n=13），≥0．24μmol／L，〈0．48μmol／L组（n=20），〈0．24μmol／L组（n=27）。 方法：①采用石墨炉原子吸收光谱法测定血铅水平。T细胞亚群检测用免疫荧光法。②计量资料差异性比较采用t检验。血铅与T细胞亚群关系采用直线相关分析。 主要观察指标：①不同血铅水平儿童T细胞亚群表达比较。②血铅水平与T细胞亚群的关系。 结果：儿童60人均进入结果分析。①≥0．48μmol／L组儿童CD3表达及CD4／CD8比值明显低于〈0．24μmol／L组（t=3．27,3．07,P〈0．01）。②血铅值≥0．48μmol／L时血铅水平与CD3表达及CD4与CD8比值呈显著负相关（r=-0．689，-0．674,P〈0．01），与CD8表达呈显著正相关（r=0．748,P〈0．01）。 结论：血铅值水平≥0．48μmol／L，可使外周血CD3表达及CD4与CD8比值下降．对小儿免癌功能产毕不良影响。     

肝核受体激动剂T0901317对大鼠骨骼肌细胞脂肪酸转运酶基因表达影响的实验研究

目的探讨肝核受体（LXRs）激动剂T0901317对正常SD大鼠骨骼肌细胞中脂肪酸较运酶（FAT／CD36）基因mRNA表达的影响。方法将原代培养的5只SD大鼠骨骼肌细胞分为T09013171μmol／L作用组、0．5μmol／L作用组和未作用（阴性对照）组,采用SYBR Green I实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测各组SD大鼠骨骼肌细胞FAT／CD36基因mRNA表达水平,并进行比较分析。结果1μmol／L、0．5μmol／L作用组与阴性对照组比较,差异无显著性意义（P=0．116）。结论LXRs激动剂T0901317对SD大鼠骨骼肌细胞中FAT／CD36基因mRNA的表达水平没有明显作用,提示T0901317在促进SD大鼠骨骼肌细胞内脂肪酸的堆积作用尚无确切的证据。     

基质金属蛋白酶在肥厚心肌中的表达与过氧化物酶体增殖物活化受体γ激活剂的调控效应

目的：观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ激活剂吡格列酮对体外肥厚心肌细胞基质金属蛋白酶表达水平的影响。 方法：实验于2005-04／12在军事医学科学院放射医学研究所药理毒理室完成。体外培养新生Wistar大鼠心肌细胞，以血管紧张素Ⅱ刺激建立心肌肥厚模型。将心肌细胞分为5组，即正常对照组、心肌细胞肥大模型组及吡格列酮5，10，20μmol／L组，其中肥大模型组仅诱导心肌细胞肥大，不加吡格列酮处理；吡格列酮5，10，20μmol／L组分别在加入血管紧张素Ⅱ前30min，培养液中加入不同浓度的吡格列酮（5，10，20μmol／L）处理；正常对照组不加血管紧张素Ⅱ。采用半定量反转录-聚合酶链反应法检测心肌肥厚特征性基因心钠肽、脑钠肽、基质金属蛋白酶2，9以及过氧化物酶体增殖物活化受体γ mRNA的表达水平，通过测定^3H-亮氨酸掺入量检测心肌细胞蛋白合成速率，并用软件分析心肌细胞表面积。 结果：①与正常对照组相比，心肌细胞肥大模型组心肌细胞表面积增加了49％（P〈0．01）、蛋白合成速率显著增加（P〈0．01），心钠肽、脑钠肽、基质金属蛋白酶2，9的mRNA表达也显著增加（P〈0．01），过氧化物酶体增殖物活化受体γ的mRNA表达显著下降（P〈0．01）。②与心肌细胞肥大模型组相比，吡格列酮10μmol／L组心肌细胞的表面积减小了19％；吡格列酮5，10，20μmol／L组的蛋白合成速率及心钠肽、脑钠肽的mRNA表达均显著降低（P〈0．05-0．01），并呈一定的剂量依赖性：吡格列酮5，20μmol／L组的基质金属蛋白酶2，9mRNA的表达均显著降低（P〈0．05-0．01），过氧化物酶体增殖物活化受体γ mRNA的表达显著增加（P〈0．05-0．01），并呈一定的剂量依赖性。 结论：吡格列酮能够抑制大鼠的心肌肥厚，这一作用可能与其增加过氧化物酶体增殖物活化量体γmRNA表达．下调基质金属蛋白酶表达有关。     

姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响

目的：脂肪细胞分化障碍是肥胖引发胰岛素抵抗的途径之一，观察中药姜黄提取物姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化的影响，在细胞水平分析姜黄素防治糖尿病可能的机制。方法：实验于2005—12／2006—03在哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室完成。以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞，在常规培养时，分别加入0，5，10，15，20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L浓度的姜黄素（购自美国Signm公司），每个剂量设12个平行孔，培养3d，在此期间，分别在24，48，72h时，于姜黄素各剂量组中分别选取4个平行孔，以MTF法测定其增殖情况。在诱导分化时，设一组空白对照，实验组与诱导液同步加入0，2．5，5，10，15和20μmol／L的姜黄素，于诱导分化的第6天，采用油红0染色方法测定3T3-L1前脂肪细胞分化程度。结果：①姜黄素作用3T3-L1前脂肪细胞48h，5，10μmol／L剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．67&;#177;0．01，0．69&;#177;0．02，0．57&;#177;0．01，P〈0．01），15μmol／L剂量组细胞吸光度值与空白对照相比差异无显著性意义（0.54&;#177;0．01，P〉0．05），其余剂量组（20，25，30，35，40，50，80和100μmol／L）细胞吸光度值显著降低（0.53&;#177;0．01，0．47&;#177;0.01，0．42&;#177;0.03，0.45&;#177;0.03，0.18&;#177;0.01，0.2&;#177;0.01，0.16&;#177;0.04，0.44&;#177;0．05，P〈0．01）。②姜黄素作用细胞48h时，促进或抑制细胞增殖的作用最强，40μmol／L以上浓度的姜黄素出现细胞毒性作用，大部分细胞成片脱落死亡。72h时，15-35μmol／L姜黄素组细胞的生长率有所增加，而40μmol／L以下姜黄素处理组细胞生长率仍维持在较低水平。⑧脂肪细胞油红0染色分光光度法结果显示2．5。5，10，15和20μmol／L姜黄素剂量组的细胞吸光度值与空白对照相比显著增加（0．38&;#177;0.05，0．49&;#177;0.04，0．56&;#177;0.06，0．75&;#177;0.06，0．77&;#177;0.1，0．83&;#177;0.06。0．38&;#177;0．05。P〈0．05-0．01）。结论：不同浓度姜黄素对3T3-L1前脂肪细胞具有促进增殖和抑制增殖双重作用，低浓度姜黄素促进细胞增殖，高浓度姜黄素抑制细胞增殖。姜黄素通过促进3T3-L1前脂肪细胞的分化，从而增加脂肪细胞对胰岛素的敏感性，这可能是其防治糖尿病的机制之一。     

大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因的表达

目的：观察大鼠海马内去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17基因表达的改变。方法：实验于2004-09／2005-06在中南大学湘雅医院神经病学实验室（实验室B级）完成。选择青龄（2月龄）健康雌性SD大鼠10只，老龄（20月龄）健康雌性SD大鼠10只。①反转录反应：反应体系20μL，取5μg（2μL）总RNA，加1g／L Oligo（dT）18 0．5μL，焦碳酸二乙酯处理过的水8．5μL，70℃保持5min，然后冰上骤冷30s，短暂离心3～5s，再加5&;#215;反转录buffer 4μL，10mmol／L dNTPMix 2μL，4U／μl Rnasin 0．5μL，焦碳酸二乙酯处理过的水1．5μL，轻轻混匀、离心3～5s，37℃保持5min，最后加200U／μL M-ulv反转录酶1μL，42℃保持1h，70℃保持10min变性，冰上冷却10min，反转录产物（cDNA）于-20℃保存备用。②聚合酶链反应：总反应体系25μL，包括10x聚合酶链反应buffer 2．5μL，25mmol／L氯化镁1．5μL，10mmol／L dNTP 1μL,2U／μL Taq酶0．5μL，上述反转录产物cDNA 2μL，50μmol／L上游目的引物0．5μL，50μmol／L下游目的引物0．5μL,ddH2O 16．5μL。各程序均采用95℃5min预变性，94℃，45s、退火温度30s，72℃ 1 min进行32个循环，最后72℃延伸10min。退火温度，去整合蛋白和金属蛋白水解酶10：62．3℃；去整合蛋白和金属蛋白水解酶17：50．2℃；肌动蛋白：46℃。取聚合酶链反应产物5μL于15g／L琼脂糖凝胶电泳，然后在凝胶图像处理系统上扫描，测定各目的基因和肌动蛋白扩增产物的吸光度值，分别计算其比值，即目的基因值：目的基因吸光度值／肌动蛋白吸光度值。结果：纳入动物20只，均进入结果分析。①老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶10的表达水平（1．2170&;#177;0．4308）低于青龄大鼠（1．5050&;#177;0.4958），但两组比较差异无显著性（t=1．239，P〉0．05）。②老龄大鼠去整合蛋白和金属蛋白水解酶17的表达水平（1．5720&;#177;0．5670）高于青龄大鼠（0．9740&;#177;0．3281），但两组比较差异无显著性（t=-1．476，P〉0．05）。结论：去整合蛋白和金属蛋白水解酶10和17的基因表达水平可能不是老龄人易发阿尔茨海默病的生物学基础。     

三氧化二砷联合丁硫氨酸亚砜胺对K562/ADM细胞的作用及其机制研究

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂丁硫氨酸亚砜胺（BSO）对肿瘤多药耐药细胞株K562／ADM细胞的诱导凋亡效应，及对P糖蛋白（P—gp）和mdr1mRNA表达的抑制作用，探讨谷胱甘肽（GSH）的含量变化与As2O3作用效果的关系。方法As2O3（0．5、2．0、5．0μmol／L）单独及联合100μmol／LBSO作用于K562／ADM细胞，应用MTT比色法检测K562／ADM细胞的增殖活性；膜联蛋白V／碘化丙锭（AnnexinV／PI）标记法观察K562／ADM细胞的凋亡效应；分光光度法检测K562／ADM细胞内GSH含量变化；流式细胞术（FCM）检测P—gp水平变化；RT—PCR方法检测mdr1mRNA的表达变化。结果 K562／ADM细胞内的GSH含量为（81．13±3．91）mg／g蛋白，在BSO降低GSH含量后，临床剂量（0．5、2．0μmol／L）As2O3联合BSO（100μmol／L）24h内即可抑制K562／ADM细胞的增殖活性，诱导K562／ADM细胞发生凋亡，处理48h凋亡率分别为（59．29±6．01）％，（65．06±8．29）％；72h凋亡率分别为（82．15±9．28）％，（92．72±9．41）％；其诱导凋亡效果均明显强于单用As2O3，临床剂量和高剂量（5．0μmol／L）组。K562／ADM细胞P—gp表达阳性率为98．1％，mdr1mRNA的相对表达水平为1．85±0．13，临床剂量As2O3联合BSO处理48h，其抑制mdr1mRNA表达的作用效果以及处理72h对P—gP的抑制作用均明显强于单用高剂量As2O3组。结论 GSH的含量变化与As2O3的作用效果密切相关，As2O3联合BSO可有效诱导K562／ADM细胞发生凋亡，有效抑制P—gP及mdr1mRNA的表达。     

丙泊酚对大鼠海马长时程增强诱发的影响

目的：长时程增强与学习记忆密切相关，分析丙泊酚对长时程增强的作用有助于了解丙泊酚是如何对认知功能产生影响的。方法：实验于2004-11／2005—03在徐州医学院江苏省麻醉学重点实验室完成。选取SD雄性大白鼠38只，随机分为6组：对照组8只、丙泊酚低浓度组6只、丙泊酚中浓度组6只、丙泊酚高浓度组6只、印防己毒素组6只、印防己毒素加丙泊酚组6只。①给药：对照组不给予任何药物，丙泊酚低、中、高浓度组分别给予丙泊酚10，20，50μmol／L，印防己毒素组给予印防己毒素25μmol／L，印防己毒素加丙泊酚组给予印防己毒素25μmol／L＋丙泊酚20μmol／L。各药物加入人工脑脊液配成终浓度，用含有药物的人工脑脊液灌流脑片，给药10min时给予强直刺激，20min后去除药物，恢复正常人工脑脊液灌流。②海马脑片制备：动物麻醉后断头取脑，垂直于海马长轴切取三四片海马脑片，厚度400μm。将海马脑片置于人工脑脊液中孵育2．0～3．0h，然后再全部浸于（32．0&;#177;0．5）。C恒温灌流槽内，液面高出脑片表面2mm，不断通人经体积分数为0．95的O2和0．05的CO2混合气体饱和的人工脑脊液，气体流量为200mL／min，人工脑脊液的灌流速度为1．5-2．0mL／min。③群峰电位的记录和长时程增强的诱发：双极电刺激大鼠海马脑片CA3区锥体细胞的谢弗侧支，玻璃微电极置于CA1区锥体细胞层，记录CA1区群峰电位，然后施以100Hz,400串的强直刺激，诱发长时程增强产生。给予强直刺激后群峰电位幅度增加20％、并持续30min以上，即判定为长时程增强发生。整个实验过程中每5min观察记录一次，至少观察60min以上。结果：实验共纳人大鼠38只，全部进入结果分析。①对照组海马脑片长时程增强情况：以强直刺激前脑片的群峰电位幅度为100％计算，对照组脑片强直刺激后其群峰电位幅度显著增高，在60min时为刺激前的（135．35&;#177;3．9）％，形成了长时程增强。②丙泊酚各浓度组海马脑片长时程增强情况：预试验显示作为溶剂的脂肪乳剂对长时程增强产生无影响。在强直刺激后60min时，丙泊酚低、中、高浓度组群峰电位幅度分别为刺激前的（124．72&;#177;3．9）％，（116．77&;#177;2．2）％，（109．39&;#177;0．9）％，与对照组相比均有显著性差异（t=2．25，P〈0．05；t=4．54，P〈0．01；t=6．88，P〈0．01）。③印防己毒素组、印防己毒素加丙泊酚组海马脑片长时程增强情况：印防己毒素组在强直刺激后60min时群峰电位幅度为刺激前的（137．57&;#177;3.4）％，对长时程增强产生无影响。而印防己毒素加丙泊酚组在强直刺激后60min时，群峰电位幅度为刺激前的（129．32&;#177;3．5）％，与丙泊酚中浓度组比较具有明显差异（t=3．02，P〈0．05）。④丙泊酚对大鼠海马脑片突触基础传递的影响：丙泊酚低、中浓度组在测试刺激条件下加药20min后，脑片的群峰电位幅度分别为用药前的（98．86&;#177;1．5）％和（98．65&;#177;1．8）％，与用药前基本相近（t=0．75，P〉0．05；t=0．73，P〉0．05）。丙泊酚高浓度组脑片的群峰电位幅度明显减小，加药20min时为用药前的（82．37&;#177;2．9）％，与用药前相比具有明显差异（t=6．08，P〈0．01），撤药后脑片的群峰电位幅度可恢复正常。⑤印防己毒素对大鼠海马脑片突触基础传递的影响：印防己毒素组在测试刺激条件下加入25μmol／L的印防己毒素20min后，脑片的突触基础传递兴奋性有所增高，表现为出现多个群峰电位波，但第一个群峰电位幅度为用药前的（102．35&;#177;2.4）％，与用药前相比基本相近（t=0．97,P〉0．05）。结论：丙泊酚低、中、高浓度组在给药过程中给予强直刺激后，群峰电位幅度均明显降低，长时程增强的形成受到抑制，且呈明显的剂量相关性，而印防己毒素对长时程增强产生无影响。提示丙泊酚对长时程增强的诱发有阻断作用，可能与激活γ-氨基丁酸（GABA）受体有关。     

辛伐他汀对人脐静脉内细胞CD40／CD40L表达的影响

目的：探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激下的人脐静脉内皮细胞CD40／CD40L表达的影响。方法：实验于2004—03／06在中南大学湘雅二医院实验室完成。实验所用脐带于无菌条件下取自本院产房健康新生儿，产妇知情同意，实验符合赫尔辛基宣言中的伦理学标准。辛伐他汀原粉由杭州默沙东制药公司提供。原代培养人脐静脉内皮细胞，实验在第4代有70％细胞汇合的情况下进行。低密度脂蛋白快速分离后加入含10μmol／L硫酸铜的磷酸盐缓冲液氧化修饰24h，在准备后15d内用于实验。采用流式细胞技术检测CD40／CD40L在细胞上的表达，采用逆转录多聚酶链式反应检测NF-κBP65 mRNA，同时行细胞免疫化学染色检测细胞NF-κBP65的表达。观察辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40／CD40L分子和NF-κB P65 mRNA的影响实验中，共分5组：①空白对照组，给予磷酸盐缓冲液。②氧化低密度脂蛋白刺激组，80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。③低浓度辛伐他汀组，先予1μmol／L辛伐他汀干预1h，再予80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。④高浓度辛伐他汀组，先予10μmol／L辛伐他汀干预1h，再予80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。⑤单纯辛伐他汀组，10μmol／L辛伐他汀干预25h。免疫化学检测人脐静脉内皮细胞NF-κBP65分子表达的实验中，共分3组：①空白对照组，给予磷酸盐缓冲液。②氧化低密度脂蛋白刺激组，80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。③辛伐他汀组，10μmol／L辛伐他汀干预1h，再予80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h。结果：①氧化低密度脂蛋白刺激人脐静脉内皮细胞后CD40／CD40L的表达情况：20-80mg／L氧化低密度脂蛋白与人脐静脉内皮细胞共同培养24h后，CD40／CD40L的表达以浓度依赖和时间依赖的方式增加。②辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白刺激的人脐静脉内皮细胞CD40／CD40L表达的影响：预先给予辛伐他汀（1μmol／L和10μmol／L）干预1h明显降低氧化低密度脂蛋白所致的CD40／CD40L表达，与单纯氧化低密度脂蛋白刺激组比较，差异显著（P均〈0．05）；10μmol／L的高浓度辛伐他汀较1μmol／L的低浓度辛伐他汀作用更明显（P〈0．05）；而单纯给予10μLmol／L的辛伐他汀干预不影响人脐静脉内皮细胞CD40／CD40L的表达。③辛伐他汀对NF-v：BP65 mRNA在人脐静脉内皮细胞表达的影响：人脐静脉内皮细胞中加入80mg／L氧化低密度脂蛋白培养24h后NF-κB mRNA的表达明显高于空白对照组（0．53&;#177;0．06，0．08&;#177;0．01，P〈0．01）。而预先给予1μmol／L辛伐他汀孵育lh显著降低氧化低密度脂蛋白刺激升高的NF-κB P65 mRNA，明显低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组（0．31&;#177;0．04，0．53&;#177;0．06，P〈0．01）。高浓度组（10μmol／L）作用更显著，显著低于单纯氧化低密度脂蛋白刺激组（0．14&;#177;0．04，0．53&;#177;0．06，P〈0．01），而单纯给予辛伐他汀（10μmol／L）不影响人脐静脉内皮细胞NF-κB P65 mRNA的表达。结论：氧化低密度脂蛋白以浓度和时间依赖的方式刺激人脐静脉内皮细胞表达CD40/CD40L，而辛伐他汀以剂量依赖的方式减轻氧化低密度脂蛋白刺激下人脐静脉内皮细胞CD40/CD40L的表达，可能与其抑制人脐静脉内皮细胞的NF—κBP65的表达有关。提示辛伐他汀可通过抑制高脂血症患者炎症信号通路而到达抗动脉硬化的作用。     

叶酸、维生素B12及血浆同型半胱氨酸水平与血管性痴呆的关系

目的：探讨叶酸、维生素B12及血浆同型半胱氨酸（Hcy)水平与血管性痴呆（vascular dementia,VD)的关系。方法：应用高效液相色谱仪和电化学检测法测定37例VD患者的血浆总Hcy水平，并与40例正常同龄对照组及40例非痴呆脑梗死组比较，运用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性技术检测NS，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase．MTHFR)基因多态性，同时测定血浆叶酸及维生素B12水平。结果：VD患者血浆总Hcy水平[(28．79&;#177;6．48)μmol／L]显著高于非痴呆脑梗死组[(25．34&;#177;5．36)μmol／L](t=2．553，P=0．005)；非痴呆脑梗死组患者血浆总Hcy水平显著高于正常同龄对照组[(19．71&;#177;2．82)μmol／L](t=16．322，P=0．0001)。MTHFR基因型有3种，即纯合子(T／T)型，杂合子(T／C)型，纯合子(C／C)型。3组基因型和等位基因频率相比差异均无显著性意义。VD组患者血浆叶酸及维生素B12水平明显低于非痴呆脑梗死组(t=2．329，3．275；P=0．026，0．001)；非痴呆脑梗死组患者血浆叶酸及维生素B12水平明显低于正常同龄对照组(t=3．302，2．328；P=0．001，0．027)结论：高同型半胱氨酸血症可能是VD发病的一个新的危险因素。     

大鼠侧脑室内注射五肽胃泌素对肺动脉压的影响

目的：探讨五肽胃泌素对大鼠肺动脉压的影响及其所产生的中枢性作用。方法：实验于2003—10／2004—06在郧阳医学院机能实验中心完成。实验选用SD雄性大鼠56只，将大鼠随机分为6组。①生理盐水组（n=6）：于侧脑室内注射生理盐水40μL连续观察30min。②侧脑室注射五肽胃泌素组（n=8）：于大鼠侧脑室内注射五肽胃泌素O．2g／L。③生理盐水＋五肽胃泌素组（n=5）：于大鼠侧脑室预先注射生理盐水40μL，5min后从原导管注射五肽胃泌素0．2g/L，连续观察30min。④酚妥拉明＋五肽胃泌素组（n=12）：于大鼠侧脑室注射酚妥拉明（（受体阻断剂）0．25g／L，连续观察30min肺动脉压。5min后从原导管注射五肽胃泌素0.2g／L。⑤普萘洛尔（β受体阻断剂）＋五肽胃泌素组（n=12）：于大鼠侧脑室预先注射普萘洛尔0．1g／L，5min后从原导管注射五肽胃泌素0．2s／L，连续观察30min。⑥阿托品（M受体阻断剂）＋五肽胃泌素组（n=12）：于大鼠侧脑室预先注射阿托品0．1s／L，5min后从原导管注射五肽胃泌素0．2s／L，连续观察30min。以肺动脉压为指标，在氨基甲酸乙酯麻醉、三碘季铵酚制动、呼吸机控制呼吸的SD大鼠上，观察给药前，给药后1，5，10，15，20，25，30min大鼠肺动脉压的变化。结果：56只大鼠均进入结果分析。①侧脑室注射五肽胃泌素组给药后5，10，15min大鼠肺动脉压明显高于给药前[（20．6&;#177;1．0），（21．2&;#177;1．2），（20．4&;#177;1．0），（18．8&;#177;1．0），（18．7&;#177;0．8），（18．9&;#177;1．0）mmHg.P〈0．01]。②酚妥拉明＋五肽胃泌素组大鼠在给药5，10，15min后肺动脉压明显低于生理盐水＋五肽胃泌素组[（18．6&;#177;1．1），（18．8&;#177;1．0），（18．6&;#177;1．1）mmHg；（20．1&;#177;1．0），（20．9&;#177;0．9），（21．1&;#177;1．0）mmHg，P〈0．01]。③普萘洛尔＋32肽胃泌素组、阿托品＋五肽胃泌素组大鼠在给药5，10，15min后肺动脉压与生理盐水十五肽胃泌素组比较，无明显差异[（19．6&;#177;1.0）,（20．4&;#177;1．1）,（21.0&;#177;1.2）mmHg；（19．5&;#177;1．1），（20．6&;#177;1．2）,（21．4&;#177;1．0）mmHg，P〉0．05]。结论：五肽胃泌素具有中枢性升高肺动脉压的作用，此作用可能部分由脑内β受体介导。     

螺旋藻抗运动性疲劳作用的实验

目的：观察螺旋藻对夫鼠力竭运动时间及血清中乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶、谷草转氨酶活性和丙二醛浓度的影响。方法：实验于2003-09／2004-01在广西医科大学生理实验室完成。30只SD雄性大鼠随机分为安静组、力竭运动组、螺旋藻力竭运动组，每组10只。安静组、力竭运动组喂普通饲料，螺旋藻力竭运动组在饲料中加入15％螺旋藻于粉喂养，共喂养1个月。力竭运动组、螺旋藻力竭运动组大鼠在跑台上进行下坡运动至力竭，跑台速度16m／min，坡度为-16&;#176;．力竭标准为动物已跟不上预定速度，经电刺激尾巴仍不能继续往前跑。力竭运动组、螺旋藻力竭运动组大鼠力竭后即刻腹腔麻醉断头处死，同时亦将安静组麻醉后处死，颈动脉采血，分离血清，检测各组大鼠血清乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶、谷草转氨酶活性、丙二醛的水平，评估机体运动损伤的情况。结果：30只大鼠均进入结果分析。①螺旋藻力竭运动组力竭运动时间明显少于力竭运动组[（81．4&;#177;13.7），（72．8&;#177;15．3）min，（t=2．12,P=0．048）]。②力竭运动组血清乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶、谷草转氨酶活性、丙二醛浓度明显高于安静组[（86．6&;#177;4．0），（42．6&;#177;4．6）μkat／L：（6．62&;#177;0．38），（4．82&;#177;0．31）μkat／L：（7.90&;#177;0．48），（5．84&;#177;0．72）μkat／L：（6．16&;#177;0．36），（4．47&;#177;0．15）μmol／L，（q=29．70，16．09，11．50，17．49，P=0．000）]，螺旋藻力竭运动组上述指标明显低于力竭运动组[（53．6&;#177;5．3）μkat／L，（5．85&;#177;0．35）μkat/L，（6．90&;#177;0．45）μkat/L,（4．64&;#177;0．29）μmol/L，（q=19．22，6．89，5．56，15．73，P〈0．01）]。结论：螺旋藻可减轻力竭运动后代谢引起的氧自由基损伤，保护细胞膜结构的稳定，调节渗透压平衡，防止过氧化损伤，从而起到抗运动性疲劳的作用。     

砷剂治疗血液肿瘤研究进展

砷剂及其化合物早在 1865年已被用于治疗慢性粒细胞性白血病 ,1971年哈尔滨医科大学附属一院应用混合液癌灵1号 (含三氧化二砷 1mg/mL)治疗白血病和肿瘤。其后应用三氧化二砷注射液治疗急性早幼粒细胞性白血病 (APL) ,并取得较好疗效。本文就砷剂治疗APL及以外的血液肿瘤作一简要综述。1　砷剂治疗APL机制　　AS2 O3 对于APL细胞株NB4以及具有典型t(15 ,17)和PML RARa融合基因的新鲜APL细胞具有剂量—依赖的双重效应。低剂量AS2 O3 诱导细胞分化 ,高剂量AS2 O3 诱导细胞凋亡。低浓度AS2 O3(0 1～ 0 5 μmol/L ,相当于体内…     

血管性痴呆患者甲状腺功能及血浆同型半胱氨酸水平

目的：观察血管性痴呆患者甲状腺功能及其血浆同型半胱氨酸水平。 方法：所有病例均为2004—02／2005-12期间郧阳医学院附属人民医院神经内科住院患者，其中血管性痴呆组患者38例（简易精神状态检查量表按文化程度，文盲≤17分，小学文化（教育年限≤6年）≤20分，中学及以上文化（教育年限〉6年）≤24分）；对照组为同期收治非痴呆脑梗死患者40例（均经脑CT证实）。两组性别、年龄构成差异无统计学意义：采用放射免疫检测法测定所有患者的甲状腺激素水平。应用高效液相色谱电化学检测法测定血浆同型半胱氨酸含量。由接受培训的专职人员对血管性痴呆组患者进行简易精神状态检查量表、Hachinski缺血量表和老年抑郁量表量表评分，评分在入院后24h内完成，根据简易精神状态检查量表评分划分血管性痴呆患者严重程度，分为轻度（20～24分）、中度（10-19分）、重度（10分以下）。结果：血管性痴呆患者38例和非痴呆脑梗死对照组患者40例均测得各项指标，并完成量表评定，全部进入结果分析。①血管性痴呆组T1（三碘甲状腺原氨酸）、L（甲状腺素）、FT，（游离三碘甲状腺原氨酸）水平明显低于对照组[T3：（0．9&;#177;0．4），（1．3&;#177;0．3）μg／L，t=5．0129，P=0．0000]；[T4：（92．9&;#177;26．4），（110．2&;#177;28．7）μg／L，t=2．7666，P=0．0071]；[FT3：（3．9&;#177;1．8），（7．2&;#177;2．1）μmol／L，t=7．4336，P=0．0000]，血浆同型半胱氨酸水平高于对照组[（29．57&;#177;7．12），（24．53&;#177;4．98）μmol／L，t=3．6377，P=0．0005]；两组间FT4（游离甲状腺素）、TSH（促甲状腺激素）水平差异无显著性意义（P〉0．05）。②轻、中、重不同程度血管性痴呆患者之间的FT3，（游离三碘甲状腺原氨酸）、T3（三碘甲状腺原氨酸）和血浆同型半胱氨酸差异有显著性意义[FT3：（4．7&;#177;0．4），（3．5&;#177;0．5），（3．1&;#177;0．3）μmol/L，F=32．4,P=0．0000]；[T3：（1．0&;#177;0．2），（0．9&;#177;0．1），（0．8&;#177;0．1）μg／L，F=5．91，P=0．0061]；[血浆同型半胱氨酸：（26．52&;#177;4．84），（29．59&;#177;5．56），（32．71&;#177;6．17）μmol／L，F=3．59，P=0．03801；T4（甲状腺素）、凡（游离甲状腺素）、TSH（促甲状腺激素）水平差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：血管性痴呆患者的甲状腺激素水平降低、血浆同型半胱氨酸水平升高，甲状腺激素和血浆同型半胱氨酸水平可作为血管性痴呆严重程度的间接指标。     

Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱尿路上皮癌T24细胞钙黏附蛋白E表达的影响

【目的】探讨Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对膀胱移行细胞癌T24细胞Src蛋白下游信号钙黏附蛋白E（E-Cadherin）的作用。【方法】应用半定量RT—PCR法检测0μmol／L、0．2μmol／L、1．0μmol／L、5．0μmol／L Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后的人膀胱癌T24细胞各浓度组的E—Cadherin表达情况。【结果】Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ处理后,E-Cadherin表达呈上调趋势;人膀胱癌T24细胞E-Cadherin mRNA表达水平随加入Src Kinase Inhibitor Ⅱ浓度增加呈上调趋势,0．2μmol／L、1．0μmol／L、5．0μmol／L浓度组OD比值显著高于0μmol／L浓度组,组间比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。【结论】Src酪氨酸激酶抑制剂Ⅱ对C-Src蛋白下游信号E-Cadberin具有上调作用,进一步证实了c-Src蛋白及其下游信号E-Cadherin作为膀胱移行细胞癌分子靶向治疗的可能性。     

锌对Caco2细胞锌转运体mRNA表达的影响

背景：小肠锌吸收降低会导致皮炎、脱发、生长发育障碍等。低锌状态下如何保持小肠锌内稳态的作用途径至今尚不清楚，锌转运体的发现及相关研究为其提供了新的研究方向。 目的：观察低锌浓度对二价金属离子转运体1和锌铁调控蛋白4mRNA表达的影响，分析低锌状态下小肠锌吸收的可能途径。 设计：空白对照观察。 单位：解放军第二军医大学海医系军队卫生学教研室。 材料：实验于2004-10／2005-05在解放军第二军医大学军队卫生学教研室完成，人结肠腺癌细胞系Caco2购自上海中科院细胞所。 方法：将Caco2细胞培养至一定浓度。①时间效应：应用反转录聚合酶链反应分别检测10μmol／L TPEN暴露时，0，2，4，6，8和10h时相点Caco2细胞二价金属离子转运体1和锌铁调控蛋白4mRNA的表达情况。②剂量效应：应用反转录聚合酶链反应分别检测0，2．5，5，7．5，10μmol／L TPEN暴露时。各组Caco2细胞二价金属离子转运体1和锌铁调控蛋白4mRNA的表达情况。 主要观察指标：锌对Caco2细胞二价金属离子转运体1和锌铁调控蛋白4mRNA表达影响的时间和剂量效应。 结果：①时间效应：与0h比较，2h和4h时二价金属离子转运体ImRNA表达水平没有明显变化。6h，8h和10h，二价金属离子转运体ImRNA均有显著升高（P〈0．05）。锌铁调控蛋白4mRNA表达水平随着时间的延长而升高，6h达到峰值，为0h的2．1倍。②剂量效应：二价金属离子转运体ImRNA的表达量在TPEN浓度为2．5和5μmol／L时没有明显改变，7．5和10μmol／L时二价金属离子转运体ImRNA的表达量较对照组有显著升高（P〈0．05）。锌铁调控蛋白4mRNA的表达量随着TPEN浓度的升高而升高。10μmol／L时锌铁调控蛋白4mRNA表达量为0μmol／L时的2．7倍。 结论：Caco2细胞二价金属离子转运体1和锌铁调控蛋白4mRNA表达受锌的调控，并且有时间和剂量效应，但是锌铁调控蛋白4mRNA变化较二价金属离子转运体ImRNA变化敏感且迅速。低锌状态下，细胞可能通过上调二价金属离子转运体1和锌铁调控蛋白4mRNA表达水平而调节细胞锌内稳态。     

三氧化二砷及其不同浓度对角膜基质细胞增殖和移行的影响

目的：观察不同浓度三氧化二砷对体外培养的兔角膜基质细胞增殖和移行的影响。方法：实验于2004-11／2005-04在哈尔滨医科大学肿瘤研究所完成。实验动物为健康日本大耳白兔2只，取其角膜用组织块培养法培养原代及传代得兔角膜基质细胞，将传至2～3代的兔角膜基质细胞用于实验。向实验细胞中分别加入含不同浓度（100，50，25，12．5，10，6．25，5，2．5，1．25，0．625μmol／L）的三氧化二砷培养液，同时以加入不含三氧化二砷的培养液作为阴性对照，以加入含0．0025％丝裂霉素的培养液作为阳性对照。用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐法检测三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响，用缺损闭合法观察三氧化二砷对角膜基质细胞移行的影响。结果：实验纳入大耳白兔2只，取其4只角膜培养传至二三代的角膜基质细胞均无污染，细胞数量足够实验所需。①细胞计数法观察不同浓度的三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响：低浓度的三氧化二砷（〈12．5μmol／L）对角膜基质细胞增殖无明显抑制作用，而高浓度的三氧化二砷（≥12．5μmol／L）对角膜基质细胞的增殖具有明显的抑制作用，抑制率均在50％以上，且抑制作用随浓度的增加而增强。台盼兰染色显示各组细胞存活率均在90％以上，未见细胞毒性。②四甲基偶氮唑盐法观察不同浓度的三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的影响：四甲基偶氮唑盐法检测结果与细胞计数法基本一致，三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的抑制率随浓度的增加逐渐增强。与阳性对照比较，给予25，50，100μmol／L三氧化二砷的角膜基质细胞在加药后6d其增殖抑制率明显降低（50.4A％，45．4％，50．2％，55．4％，P〈0．05）。③三氧化二砷对角膜基质细胞移行的影响：给予低浓度的三氧化二砷（〈25μmol／L）及阴性对照药的角膜基质细胞在用药后48h已有较多的细胞长入．4d后完全闭合，而给予高浓度三氧化二砷的角膜基质细胞在用药后48h只有极少数细胞长入缺损区，8d后仍未见缺损闭合，缺损闭合的时间明显延长。结论：三氧化二砷对角膜基质细胞增殖的抑制率随浓度的增加逐渐增强，高浓度的三氧化二砷具有抑制兔角膜基质细胞增殖和移行的作用，而低浓度的三氧化二砷此种作用不明显。三氧化二砷的浓度在100μmol/L以下时，对角膜基质细胞无明显的毒性反应。     

辛伐他汀对大鼠肺成纤维细胞功能及其抑制通路的影响

背景：他汀类药物可以通过阻断甲羟戊酸的合成，抑制某些膜联结蛋白的翻译后修饰，从而阻断某些细胞内信号传导通路，抑制多种细胞的增殖。目的：探讨辛伐他汀对肺成纤维细胞的增殖、胶原合成及基质金属蛋白酶2分泌的影响。设计：完全随机设计，对照实验。单位：中国协和医科大学阜外心血管病医院器官移植研究室。材料：实验于2004—06／2004—10在中国协和医科大学北京协和医院心内科实验室完成。培养的新生SD大鼠的肺成纤维细胞，根据培养液中加入的干预药物浓度不同而分为辛伐他汀0，1，5，10，50μmol／L及辛伐他汀50μmol／L+甲羟戊酸200μmol／L组。方法：用消化法培养新生SD大鼠的肺成纤维细胞，给予不同浓度的辛伐他汀干预。四氮唑蓝比色法检测细胞增殖，细胞免疫组化法测定细胞胶原的合成，酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液基质金属蛋白酶2的含量。主要观察指标：不同浓度辛伐他汀及辛伐他汀加甲羟戊酸干预后肺成纤维细胞增殖和胶原合成能力，以及基质金属蛋白酶2分泌量。结果：①辛伐他汀5，10，50μmol／L组四氮唑蓝比色A490值，肺成纤维细胞表达Ⅰ，Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显低于辛伐他汀0μmol／L组(0．520&;#177;0．010，0．334&;#177;0．011，0．260&;#177;0．012，0．111&;#177;0．011；0．508&;#177;0．011，0．324&;#177;0．014，0．232&;#177;0.015，0．083&;#177;0．015；0.445&;#177;0、017，0．305&;#177;0．015，0.216&;#177;0.015，0．068&;#177;0．012；0．561&;#177;0．013，0．361&;#177;0．012，0．289&;#177;0．012，0．140&;#177;0.013，t=3．359～8．111，P&;lt;0．05～0．01)。②辛伐他汀50μmol／L+甲羟戊酸200μmol／L组四氮唑蓝比色A490值，肺成纤维细胞表达Ⅰ，Ⅲ型胶原的平均吸光度值(A值)及培养上清液中的基质金属蛋白酶2含量明显高于辛伐他汀50μmol／L组(0．567&;#177;0．015，0．354&;#177;0．014．0．283&;#177;0．012，0．138&;#177;0．011，t=4．715—10．950，P&;lt;0．01)。结论：辛伐他汀能抑制肺成纤维细胞增殖和胶原合成，并可减少基质金属蛋白酶2的分泌，抑制肺成纤维细胞黏附迁移功能，并可通过影响甲羟戊酸通路而具有抗细胞增殖作用。     

几种中药对高原脱适应者自由基代谢的影响

目的：探讨银杏叶片、复方红景天、复方党参和刺五加片对高原脱适应者自由基代谢的影响。方法：①选择2005—06在海拔5170m地区守防1年的57名健康男性青年，年龄17—24岁．上高原前体检确认健康，且均对干预方案及检测指标知情同意。将受试者随机分为5组：银杏叶片组（12名）、复方红景天组（12名）、刺五加组（11名）、复方党参组（11名）及对照组（11名）。②受试者换防下至海拔3700m前5d开始服用，返回平原第7d停药。银杏叶片组：口服银杏叶片（主要成分：银杏总黄酮甙，银杏苦内酯；江苏晨牌药业集团生产；生产批号：280604，40mg／片）2片／次：复方红景天组：复方红景天胶囊（主要成分：红景天，黄芪；青海三普药业公司生产；生产批号：020703，0．5g／粒）2粒／次；刺五加组：刺五加片（成分：刺五加；安徽仁济药业有限公司生产；生产批号：040112，80mg／片）3片／次；复方党参组：复方党参胶囊（主要成分：党参，沙参；天津洪福制药厂生产；生产批号：910709，0．4g／片）2粒／次；对照组：安慰剂（炒面胶囊）2粒／次，每日早晚各服1次。③停药后清晨采静脉血，采用化学比色法检测血中丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮合酶的水平，用硝酸还原酶法检测一氧化氨含量。④两组间比较采用独立样本的t检验；多组间比较根据方差齐性检验结果，方差齐时采用LSD单因素方差分析，方差不齐时采用Tamhane方差分析。结果：驻守高原青年57名均进入结果分析。①银杏叶片组、复方红景天组和复方党参组一氧化氮、一氧化氮合酶水平明显高于对照组（P〈0．05～0．01），丙二醛水平明显低于对照组[（4．00&;#177;0．24），（4．07&;#177;0．22）；（4．04&;#177;0．18），（4．41&;#177;0．35）μmol／LP〈0．05]。②复方党参组血清超氧化物歧化酶水平明显高于对照组[（1．980&;#177;0．167），（1．809&;#177;0．122）μkat／L，P〈0．051。③银杏叶片组、复方红景天组和复方党参组血清丙二醛水平明显低于刺五加组[（4．28&;#177;0．23）μmol／L P〈0．05]。④复方红景天组血清一氧化氮、一氧化氮合酶水平明显高于刺五加组[复方红景天组：[（97．4&;#177;14．7）μmol／L（1．165&;#177;0．178）μlat／L]；刺五加组：[（81．2&;#177;12．6）μmol／L,（0．988&;#177;0．173）μkat／L，P〈0．05]。⑤复方党参组血清一氧化氨水平明显高于刺五加组[（96．5&;#177;15．4）μmol／L，（79．9&;#177;13．5）μmol／L P〈0．05]。结论：银杏叶片、复方红景天和复方党参均具有明显减轻高原脱适应者机体脂质过氧化反应，降低再供氧损伤的功效，而刺．五加此方面的功效不明显。     

五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的：观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢（H2O2）PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005—08／2006—07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成。①PC12细胞培养在RPMI1640培养液中，加入2．5，5，10，20μmoL／L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲，与细胞培养24h，然后加入0．1，0．2，0．3，0．5mmol/L不同浓度过氧化氢（H2O2）溶液，37℃作用30min。模型组细胞只加入H2O2；正常对照组只加入等量的培养基。②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化，四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率，用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性，按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤。结果：①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响：倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后，细胞形态学发生变化，表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等。经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞，状态明显改善，细胞数目较多，而且细胞形态较完整。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响：PC12细胞经0．1，0．2，0．3，0．5mmol／L不同浓度H2O2处理30min后，与正常对照组相比，四甲基偶氮唑盐法测定其生存率，分别降低了4％，13％，40％，57％，（P〈0．05或P〈0．01）。不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲（25～20mnoL／L）均能提高细胞的生存率，并呈浓度依赖关系．浓度为5，10，20μmol／L时，与模型组比较，具有明显的差异（P〈0．05或P〈0．01），特别是10μmol／L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响：用0．3mmol／LH2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组（P〈0．01）。大量的DNA被损伤，与正常对照组比较，差异有显著性（P〈0．01）。细胞与10．0μmol／L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组（P均〈0．01）。DNA损伤明显抑制，与模型组比较，差异有显著性（P均〈0．01）。结论：五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用。推测保护作用机制是通过清除氧自由基．减轻其对DNA的损伤等方面实现的。