β3GnT2、β3GnT8真核表达载体的构建及胃癌AGS、胶质瘤U251细胞株中β3GnT8cDNASNP的分布

目的 β3GnT2和β3GnT8的克隆及真核表达载体的构建.方法 RT-PCR法检测β3GnT2、β3GnT8在胃癌、胶质瘤、乳腺癌三类癌细胞株中的表达;PCR扩增带酶切位点β3GnT2、β3GnT8全长编码片段并构建真核表达载体pEGFP-C1-β3GnT2、pEGFP-C1-β3GnT8.结果 β3GnT2、β3G...     

c-jun siRNA的构建及其对胃癌细胞株SGC7901中β3GnT8基因表达的影响

目的 构建c-jun干扰载体,有效沉默胃癌SGC7901细胞株中的c-jun基因表达,研究其对胃癌SGC7901细胞株中β3GnT8基因表达的影响.方法 ①利用互联网资源针对c-jun基因的靶序列设计合成四条siRNA,将四条siRNA插入到RNA干扰载体pGPU6/GFP/Neo中构建成四条干扰载体.②将构建好的c-jun siRNA载体质粒pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1949、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1050、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1111、pGPU6/GFP/Neo-sic-jun-1276通过阳离子脂质体将表达质粒分别转染SGC7901细胞,48h后荧光显微镜下观察不同浓度质粒的转染效率,通过RT-PCR法检测c-jun和β3GnT8基因mRNA的表达.结果 ①成功构建了四条正确的c-jun siRNA表达质粒;②成功筛选出一条对c-jun有明显抑制作用的siRNA干扰质粒,阻断c-jun表达后,糖基转移酶β3GnT8的表达受到明显抑制.结论 构建的c-jun siRNA表达质粒可以有效抑制胃癌SGC7901细胞株的c-jun基因表达,同时抑制糖基转移酶β3GnT8的表达,为研究胃癌的分子机制提供了一定的理论基础.     

姜黄素对肿瘤细胞中β3Gn-T8及其相关基因表达的影响

目的 以不同浓度的姜黄素处理U253,SMMC-7721细胞,从mRNA水平观察GnT8、GnT2、MMP2表达的变化.方法 以不同浓度的姜黄素处理细胞,24h、48h后RT-PCR检测GnT8、GnT2、MMP2的表达.结果 随着药物浓度、时间的增加,MMP2、GnT8表达明显降低,同时GnT2表达降低,但降低的程度较轻.结论 姜黄素可能通过下调肿瘤细胞中GnT8、GnT2的表达改变了细胞表面的糖链结构,而该改变可能参与了姜黄素诱导的肿瘤细胞凋亡.     

60Coγ射线照射人胶质瘤细胞U251对糖基转移酶β3GnT8及多聚乳糖胺糖链的影响

目的 研究60Coγ射线照射胶质瘤细胞U251对β3GnT8及多聚乳糖胺糖链的影响,为治疗恶性肿瘤和研究高效、低毒的辐射防护剂奠定实验基础.方法 采用0Gy、1Gy、5Gy和8Gy剂量的60Coγ射线辐照胶质瘤细胞U251,Western blotting检测60Coγ射线对β3GnT8蛋白水平表达的影响;流式细胞术分析60Coγ射线对多聚乳糖胺糖链表达水平的影响.结果 随着60Coγ射线辐照剂量的增加,β3GnT8蛋白和细胞表面多聚乳糖胺糖链表达水平逐渐降低.结论 60Coγ射线照射胶质瘤细胞U251对β3GnT8和多聚乳糖胺糖链表达均有影响,为研究高效、低毒的辐射防护剂奠定一些实验基础.     

ACTL8表达与子宫内膜癌的发生及细胞侵袭、迁移能力的关系

目的 探讨子宫内膜癌组织中肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)表达与肿瘤发生及癌细胞侵袭、迁移能力的关系。方法 回顾性选取2020年3月至2021年3月恩施土家族苗族自治州中心医院妇儿医院病理科收集的68例子宫内膜癌组织（病例组）,并选取45例正常子宫内膜作为对照组。采用蛋白质印迹法检测两组标本中的ACTL8蛋白。选取人子宫内膜癌KLE细胞系,以携带shRNA特异序列的载体及空载质粒分别KLE细胞系,形成敲出ACTL8基因的sh ACTL8-1组、sh ACTL8-2组及以空载质粒转染KLE细胞系的对照组。采用荧光定量PCR检测3组细胞中ACTL8RNA表达,采用蛋白质印迹法检测3组细胞ACTL8蛋白表达,采用Transwell迁移和侵袭实验分析KLE细胞系培养后的侵袭和迁移能力差异。结果 病例组标本中的ACTL8蛋白的相对表达强度为0.983±0.211,对照组标本中的ACTL8蛋白的相对表达强度为0.377±0.089,子宫内膜癌组织中的ACTL8蛋白相对表达强度显著高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。在年龄≥55岁、子宫内膜癌分级G3级、FIGO分期（Ⅲ期+Ⅳ期）的子宫...     

LncRNA SNHG8在胎盘植入的表达及其对滋养细胞侵袭及迁移的影响

目的 探讨lncRNA SNHG8在胎盘植入（placenta accreta,PA）中的表达及对滋养细胞侵袭迁移的影响。方法 采用q RT-PCR检测PA组及对照组各30例胎盘组织中lncRNA SNHG8的表达,同时与30例PA患者产前超声评分做相关性分析。采用Transwell和划痕实验检测干扰lncRNA SNHG8后对人绒毛膜滋养层细胞（HTR8/SVneo cells）侵袭和迁移的影响,同时,Western blot检测MMP-2和MMP-9的表达情况;StarBase软件预测lncRNA SNHG8下游靶点,并在两组胎盘组织中检测其表达;双荧光素酶报告实验检测lncRNA SNHG8与miR-542-3p的靶向关系。结果 与对照组比较,lncRNA SNHG8在胎盘植入组胎盘组织中表达上调（P <0.05）,并与产前超声评分呈正相关。干扰lncRNA SNHG8后抑制了滋养细胞的侵袭迁移（P <0.05）,MMP-2及MMP-9蛋白表达也明显下降（P <0.05）。生物学预测miR-542-3p存在与lncRNA SNHG8的结合位点,miR-542-3...     

雌激素受体β过表达对大肠癌细胞侵袭的影响

目的:观察雌激素受体β(ERβ)过表达对侵袭转移相关基因E-钙黏蛋白和CXCR4表达的影响,研究其对大肠癌细胞侵袭能力的影响.方法:以脂质体介导的ERβ基因转染SW480细胞,G418筛选阳性克隆(SW480-C1-ERβ).以正常SW480细胞和转染了空质粒的SW480细胞(SW480-pEGFP-C1)作为对照,在有或无雌激素作用的条件下.利用Transwell小室法测定SW480、SW480-pEGFP-C1和SW480-C1-ERβ细胞的侵袭能力:采用Western blot法检测各组细胞中E-钙黏蛋白和CXCR4蛋白的表达.结果:在无雌激素作用时,SW480-C1-ERβ细胞的侵袭能力和CXCR4的表达显著低于另两株细胞(P<0.05).有雌激素作用时,SW480-C1-ERβ细胞在三者中的侵袭能力最低,E-钙黏蛋白的表达最高(P<0.05),而CXCR4表达无明显变化.在SW480-C1-ERβ组细胞中,雌激素作用时肿瘤细胞的侵袭能力和E-钙黏蛋白的表达分别明显低于和高于无雌激素作用时的细胞(P<0.05),而CXCR4的表达无明显差异.结论:ERβ可以以配体非依赖性的方式和配体依赖性的方式抑制大肠癌细胞的侵袭转移,这种效应可能与调控E-钙黏蛋白和CXCR4的表达有关.     

骨形态发生蛋白7通过调节GSK-3β活性对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨外源性骨形态发生蛋白7(Bone morphogenetic protein 7,BMP7)对心肌梗死大鼠心肌纤维化的作用及其对磷酸化的糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)和转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达的影响.方法:结扎大鼠左冠脉前降支制备心肌梗死模型,随机分为心肌梗死+BMP7组(MI+B...     

热化疗对膀胱癌BIU-87细胞侵袭能力的影响及机制

目的观察不同温度下吉西他滨(GEM)热化疗对膀胱癌BIU-87细胞株侵袭能力的影响,并探讨其可能的机制。方法将处于对数生长期的BIU-87细胞分为4组,A组为对照组,B组为热化疗1组[(38±0.2)℃],C组为热化疗2组[(40±0.2)℃],D组为热化疗3组[(43±0.2)℃],GEM的工作浓度为1μg/ml。用Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力;用RT-PCR检测MMP-9m RNA的表达情况;用ELISA法检测各组细胞的MMP-9蛋白的表达情况;用EMSA检测各组细胞NF-κB的活性。结果 Transwell小室实验显示相对于A组,B、C、D组对BIU-87细胞的穿透能力均可产生抑制作用,热化疗组与对照组之间的差异均有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制作用最为明显。ELISA检测结果显示与对照组相比,实验组各组均能抑制MMP-9蛋白的表达,热化疗组与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05),其中D组的抑制最为明显。EMSA实验结果显示实验组NF-κB的活性明显降低,与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论热化疗能够抑制BIU-87细胞的侵袭,并且随着温度的升高抑制作用越明显,其机制可能是通过抑制NF-κB的活性,降低MMP-9蛋白的表达来发挥作用的。     

RNAi沉默STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的调控

目的:观察RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法:应用STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3 mRNA表达,软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭性,琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡。结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,STAT3 siRNA转染可诱导结肠癌细胞失巢凋亡,且与浓度相关。结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的恶性侵袭,其机制与诱导失巢凋亡有关。     

人卵巢癌细胞SKOV3中壳多糖酶3样蛋白1的表达和对细胞增殖及侵袭的影响实验研究

目的　探讨壳多糖酶3 样蛋白1（chitinase-3-like-protein-1, CHI3L1）在卵巢癌细胞SKOV3 中的表达和对SKOV3 细胞增殖和侵袭的影响。方法　构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3,使得卵巢癌细胞中的CHI3L1 基因沉默;pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒转染卵巢癌细胞SKOV3,同时转染空载质粒作为阴性对照,通过Western Blot 检测SKOV3 细胞中CHI3L1 蛋白表达水平;平板细胞克隆形成试验观察对卵巢癌细胞SKOV3 增殖的影响;采用Transwell 实验检测卵巢癌细胞SKOV3 侵袭能力的变化。结果　成功构建pll3.7-CHI3L1 shRNA 重组质粒,转染卵巢癌细胞SKOV3 后,观察到大量的绿色荧光细胞,且和对照组相比,pll3.7-CHI3L1 shRNA 转染组卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 蛋白表达水平下降,卵巢癌SKOV3 细胞的克隆数目减少,侵袭能力下降。结论　卵巢癌细胞SKOV3 中CHI3L1 的表达下调,抑制了SKOV3 细胞的增殖和侵袭能力。     

视黄醇结合蛋白2基因沉默对卵巢癌SKOV3/PTX细胞迁移侵袭的影响

目的 探讨沉默视黄醇结合蛋白2(RBP2)基因表达对卵巢癌细胞SKOV3/PTX迁移及侵袭的影响及机制.方法 建立稳定干扰RBP2表达的细胞株SKOV3/PTX-RBP2i,将实验分为3组,即RBP2沉默组(SKOV3/PTX-RBP2i)、阴性对照组(SKOV3/PTX-NC)和空白对照组(SKOV3/PTX),We...     

全反式维甲酸通过调控sFlt-1表达对滋养层细胞侵袭及促血管形成能力的影响

目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)的调控作用及其对人胎盘滋养层细胞侵袭及促血管形成能力的影响.方法 采用0.15μmol/L ATRA处理HTR-8/SVneo细胞12、24、48、72 h,RT-PCR和ELISA分别检测细胞中sFlt-1 mRNA以及上清液中sFlt-...     

AKTl基因沉默抑制Hep-2细胞体外侵袭能力的研究

目的研究AKTl基因沉默对人喉癌细胞系Hep-2体外侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体将AKTlsiRNA转染Hep-2细胞,RT-PCR和Westernblot分析各组细胞AKTl,MMP-2mRNA和蛋白表达,划痕实验观察细胞迁移能力,Transwell小室细胞测定细胞侵袭能力。结果AKTlsiRNA可抑制AKTlmRNA转录和蛋白表达水平;AKTl基因沉默后细胞迁移运动能力明显减弱,穿模细胞数明显减少（P〈0．01）;MMP-2mRNA和蛋白表达下调。结论AKTlsiRNA可通过下调MMP-2表达抑制Hep-2细胞体外侵袭能力。     

干扰素-γ对小鼠白血病细胞株FBL-3体外侵袭能力影响

目的:探讨干扰素-γ不同剂量、不同作用时间对小鼠白血病细胞FBL-3体外侵袭能力的影响.方法:小鼠白血病细胞株FBL-3分为6组,其中A组为空白对照组;B～E组分别用干扰素-γ5,50,200,500 ng/mL处理48 h;F组为干扰素-γ50 ng/mL 处理2周.应用 Transwell侵袭模型检测各组FBL-3细胞的体外侵袭力,采用单因素方差分析进行比较.结果:与A组比较,C、D和E组穿过 Matrigel 胶的FBL-3细胞数目明显减少,且存在剂量依赖性效应(P<0.05).F组细胞侵袭能力增强,明显高于对照组(P＜0.05).结论:干扰素-γ短期作用(48 h)可以剂量依赖性方式明显抑制FBL-3细胞的体外侵袭能力;小剂量干扰素-γ长期作用可促进FBL-3细胞的侵袭能力.     

长链非编码RNA MCM3AP-AS1对NSCLC细胞增殖、侵袭及迁移的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)微小染色体维持蛋白3相关蛋白反义链1(MCM3AP-AS1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭、迁移的影响及作用机制.方法 体外培养A549肺癌细胞株,并将其分为空白对照(Control)组、阴性对照(NC)组、过表达MCM3AP-AS1组和敲低sh-MCM3AP-AS...     

沉默GPC3对肝癌Huh-7细胞增生、迁移和侵袭能力的影响

目的探讨Hippo通路靶向GPC3后对肝癌Huh-7细胞增生、迁移、侵袭能力的影响。方法采用Western blot检测法及RT-PCR分别测量肝癌Huh-7不同对数生长期的肝癌细胞株GPC3蛋白表达水平及GPC3 mRNA水平,并筛选出可有效沉默GPC3基因的siRNA。将肝癌Huh-7细胞株分为实验组、未转染组及对照组,实验组导入GPC3-siRNA-1633转染Huh-7,其余两组不作处理。EdU实验检查三组细胞增殖率,划痕实验测定各组细胞迁移率,Transwell实验测定各组细胞侵袭能力。结果实验组GPC3 mRNA表达量及GPC3蛋白水平显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组Hippo通路中YAP mRNA表达量显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,实验组细胞增生率、迁移率及侵袭率显著低于未转染组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GPC3可促进肝癌Huh-7细胞增殖、侵袭及转移,从而促进肝癌细胞生长。CPG3可通过上调Hippo通路中YAP表达水平从而促进肝癌细胞增生。通过沉默GPC3 mRNA后可有效抑制肝癌Huh-7细胞生长。     

沉默SETD8基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用

目的探究siRNA下调含SET结构域(赖氨酸甲基转移酶) 8(SETD8)基因表达对骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的机制。方法采用脂质体法将特异性针对SETD8基因的siRNA转入骨肉瘤MG-63细胞中,得到关于SETD8基因沉默表达的MG-63稳定的细胞系即实验组,将杂序siRNA用脂质体法同时转染骨肉瘤MG-63细胞,得到关于Control siRNA的MG-63细胞系即对照组,未经转染的骨肉瘤MG-63的稳定的细胞系即空白组。以上三组细胞系通过应用细胞毒性活性检测法(CCK-8法)、平板克隆法同时检测被SETD8基因沉默后骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力,侵袭迁移小室即(Transwell小室)法检测骨肉瘤MG-63细胞的侵袭和迁移能力,实时荧光定量法即(PCR法)以及蛋白质印迹法即(Western Blot法)检测SETD8基因沉默表达效果及细胞内SETD8,β-catenin,cyclin D1,vimentin、MMP3的mRNA和相应蛋白的表达水平。结果 SETD8 siRNA转染后,骨肉瘤MG-63细胞的增殖能力显著低于对照组(control siRNA转染MG-63细胞)和空白组(未经转染的MG-63细胞)(P 0. 05); Transwell小室结果显示,沉默SETD8基因组的侵袭和迁移能力明显下降;实验组(SETD8 siRNA转染MG-63细胞)中SETD8、β-catenin、cyclin D1、vimentin、MMP3的mRNA及蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(P 0. 05)。结论 siRNA下调SETD8基因表达可以抑制骨肉瘤MG-63细胞的增殖、侵袭和迁移能力,Wnt/β-catenin信号通路可能参与并调控这一过程。     

CHO细胞模型中整合素β3胞浆段尾部NITY基序对αⅡbβ3介导的细胞功能的影响

目的:探讨整合素β3胞浆段尾部NITY基序对αⅡbβ3介导的细胞功能的影响。方法:利用中国仓鼠卵巢(CHO)细胞模型建立共表达人类野生型整合素αⅡb和野生型β3或突变型β3ΔNITY(β3胞浆段缺失NITY基序)稳转的细胞株,通过细胞在固相化纤维蛋白原上的黏附及伸展试验检测各稳转细胞株的黏附及伸展功能,通过免疫共沉淀方法检测蛋白相互作用。结果:成功建立了CHO-αⅡbβ3和CHO-αⅡbβ3ΔNITY细胞株,稳定表达野生型整合素αⅡbβ3的CHO细胞具有在固相化纤维蛋白原上的黏附和伸展能力,与CHO-αⅡbβ3细胞株相比,CHO-αⅡbβ3ΔNITY细胞株的黏附能力减弱,但是黏附后的伸展能力无明显改变。免疫共沉淀结果显示,kindlin-2能够结合野生型整合素β3,但与突变型整合素β3结合的量显著减少。结论:整合素β3胞浆段缺失NITY基序引起细胞黏附功能受损,这种缺失突变导致整合素β3与kindlin-2蛋白的结合受到抑制,从而部分抑制了整合素β3的信号转导。