应用蛋白芯片技术从烧伤大鼠早期血清中快速筛选低分子量差异蛋白

目的筛选正常大鼠血清与烧伤大鼠早期血清中差异表达的低分子量蛋白,为进一步解释烧伤血清生物效应奠定基础.方法利用SELDI(surfaced enhanced laser desorption/ionization)蛋白质芯片技术对烧伤大鼠早期血清差异蛋白进行筛选,通过相应软件结合生物信息学方法进行初步分析.结果与正常血清比较,烧伤后12 h与24 h血清与之分别存在11个和31个差异蛋白峰,烧伤后12 h与24 h血清之间存在15个差异蛋白峰,并发现一些呈现一定的正常与烧伤、烧伤后不同时相点规律性变化的蛋白质.结论正常与烧伤、烧伤后不同时相点血清中低分子量蛋白存在明显差异,这种差异蛋白可能与烧伤病理生理和烧伤后血清生物效应密切相关.     

体液脱氧核糖核酸结合蛋白的研究——Ⅲ.非癌疾患小鼠血清脱氧核糖核酸结合蛋白

本实验以DNA亲和层析柱为手段分离提取Ehrlich腹水癌及各种非癌疾患小鼠的血清DNA结合蛋白(DBP),并采用了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对之进行了比较分析。发现患癌小鼠血清DBP中含有一种表观分子量为30,000的蛋白质。核DBP在正常小鼠血清DBP中则难以见到,在实验性再生肝、无菌性炎症、四氯化碳中毒的血清DBP中也难以见到此一表观分子量为30,000的蛋白质。因此,这种DBP有可能成为恶性肿瘤的标记物。     

皮肤桥蛋白研究进展

皮肤桥蛋白（dermatopontin,DPT）是1989年Neame等人在提纯牛皮肤的硫酸皮肤素蛋白多糖时和硫酸皮肤素蛋白多糖共同提取出来的,并被称作“22kDa蛋白质”。1993年在猪的皮肤中发现了“22kDa蛋白质”的同族体,因其富含酪氨酸残基故将其称为“富含酪氨酸的酸性基质蛋白”。     

皮肤桥蛋白研究进展

皮肤桥蛋白（dermatopontin,DPT）是1989年Neame等人在提纯牛皮肤的硫酸皮肤素蛋白多糖时和硫酸皮肤素蛋白多糖共同提取出来的,并被称作“22kDa蛋白质”。1993年在猪的皮肤中发现了“22kDa蛋白质”的同族体,因其富含酪氨酸残基故将其称为“富含酪氨酸的酸性基质蛋白”。     

瘦蛋白的分子生物学特性研究进展

瘦蛋白 (leptin)是由肥胖基因编码、脂肪细胞分泌的一种分子量为 16kDa的蛋白质 ,是一种重要的代谢调节信号 ,对人和动物的采食量、能量代谢、繁殖性能等具有重要调节功能 ,对人肥胖病的治疗和改善动物的生产性能、胴体组成等有良好的潜在应用前景 .主要概述了瘦蛋白基因的克隆、转录、表达调控以及瘦蛋白受体与信号转导等分子生物学特性     

恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白成熟肽的克隆与表达

目的 :克隆表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot)Karp株 4 7kDa表面蛋白的成熟肽 ,探索其作为疫苗及诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从 OtKarp株菌种基因组DNA中扩增出 4 7kDa成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建成重组质粒pQE30 4 7,转化大肠杆菌 (E coli) ,经IPTG诱导表达 ,SDS_PAGE和Western_blotting检测目的蛋白的表达。结果 :①获得长约 12 72bp的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因 ;②SDS_PAGE和免疫印迹显示该重组质粒转化的E coli有一相对分子量约为 4 3× 10 4 的独特蛋白带 ;③重组表达质粒序列分析结果显示pQE30 4 7中插入的基因片段的序列与已报告的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因序列基本一致 ,并与已知序列相同。结论 :获得了OtKarp 4 7kDa蛋白基因 ,并在E coli中实现了表达 ,表达的重组蛋白具有免疫反应性     

H_(22)腹水型肝癌患鼠血清中一种高分子量DNA结合蛋白的分离

本实验室曾从艾氏腹水癌患鼠血清和腹水DNA结合蛋白(DBP)中分离纯化出一种高分子量DNA结合蛋白(简称HDBP)。经2-巯基乙醇还原后,用SDS-PAGE测得其分子量为41000,为了研究这种HDBP在患其与类型肿瘤的小鼠血清中是否也存在,我们采用同样的方法从H_(22)腹水型肝癌患鼠血清中,分离纯化出一种分子量较高的DBP,并对其进行了初步鉴定。     

大鼠肝脏溶酶体中新的铜结合蛋白的分离和纯化

目的:分离大鼠肝脏溶酶体中铜结合蛋白质,并分析其氨基酸序列.方法:G25液相层析,铜结合层析,高效液相色谱,氨基酸序列测定.结果:G25和铜结合液相层析得到溶酶体中蛋白质成分.SDS-PAGE电泳分析铜结合蛋白质,得到两条主要蚕白带,这些蛋白质的分子量分别为58 kDa,40 kDa.两种主要蛋白质的氨基酸序列测定Band1(分子量58 kDa):A F Q I L Y L T H N L.同源性分析表明蛋白质与哺乳动物蛋白质无同源性.结论:从大鼠肝脏溶酶体中分离纯化得到的蛋白质是一种新的蛋白质.     

艾氏腹水癌患鼠血清高分子量DNA结合蛋白的分离与鉴定

肿瘤相关的血清DNA结合蛋白的分离,具有潜在的诊断价值。我实验室最近在动物实验研究中,首先分离、提纯得到了此种血清DNA结合蛋白。 我们利用免疫吸收法及免疫亲和层析法,从艾氏腹水癌小鼠血清脱氧核糖核酸结合蛋白(DBP)中分离得到了一种高分子量蛋白质(HDBP)。它在免疫双扩散反应中可与抗艾氏腹水癌小鼠血清DBP的兔抗血清产生一条沉淀线。但与正常小鼠血清DBP的兔抗血清不产生可见的沉淀线。用免疫电泳法分析,艾氏腹水癌小鼠血清DBP可与抗DBP的兔血清产生9～10条沉淀线,但与HDBP只产生一条沉淀线。经十二烷基硫酸钠、聚丙烯酰胺-凝胶电泳法测定其分子量,以2巯     

纯化一种新的人维生素K依赖性蛋白质——蛋白S

蛋白S是一种依赖性维生素K的蛋白质,以游离型和结合型二种形式存在于人血浆中。本文报道一种纯化人蛋白S的方法,提纯过程包括钡盐的吸附,DEAE-Sephacel层析和Blue-Sepharos层析,同时也可获得蛋白C。纯化的人蛋白S在进行SDS-PAGE时,裂解与末裂解均显示一条带,分子量68000,等电点5.2,氨基酸分析与DiScipio和Davie的结果趋势一致,兔抗人蛋白S抗血清与蛋白S抗原呈单一沉淀线,与人I因子、X因子和蛋白C无交叉反应。     

日本血吸虫表皮膜蛋白的研究 Ⅱ.生化及免疫活性分析

日本血吸虫表皮膜蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后至少显示19个蛋白带,其中3条蛋白带含醣,分子量分别为24KD、17.5KD和15KD。用免疫印班技术能检出与日本血吸虫病人血清反应的表皮膜抗原组分,其分子量分别为125KD、100KD和57KD     

悬铃木属花粉的纯化及免疫活性分析

目的对悬铃木属花粉变应原进行初步纯化并对其主要成分进行免疫学活性分析。方法悬铃木属花粉变应原粗制浸液经过凝胶过滤层析，收集主要蛋白质，SDS-PAGE检测各段蛋白质分子量，并用免疫印记法分析7例悬铃木属花粉过敏的支气管哮喘患者血清。结果悬铃木属花粉变应原粗制液经层析柱洗脱得两个洗脱峰，第一峰及第二峰升段富含蛋白，而第二峰降段蛋白含量甚微，收集各段进行SDS—PAGE。出现6条蛋白区带，分子量分别为7、50、35、39、22和16kd。第一峰主要含22-71kd蛋白质，峰2升段以14-16kd之蛋白质为主。对7例花粉过敏的支气管哮喘患者血清免疫印记分析可见4条sIgG反应带，蛋白分子量为50、39、22和16kd，病人血清结合百分比分别为100％、28．57％、57．14％和14．29％。结论悬铃木属花粉变应原含有6种主要蛋白成分，第一峰的50、39和22kd的蛋白质为主要致敏组分，第二峰升段的16kd蛋白质为次要致原。     

从分子极性表面积预测头孢菌素类药物的血浆蛋白结合率

目的:采用分子结构参数预测头孢菌素类药物的血浆蛋白结合率。方法:用半经验自洽场分子轨道AM1法得到药物分子的优化几何构型,用Monte Carlo法计算分子极性表面积,相关分析采用逐步多元回归分析法。结果:头孢菌素类药物的血浆蛋白结合率(fb)与分子量(MW)和氢键给体表面积(SH)具有良好的相关性,回归方程式为:fb=0.5057 2.861×10-3MW-0.1572SH 4.714×10-3SH2(n=22,r=0.9042)。结论:头孢菌素类药物的血浆蛋白结合率不仅与药物的脂溶性,而且还与形成氢键的能力密切相关。从药物的分子量和极性表面积可以预测头孢菌素类药物的血浆蛋白结合率。     

与Graves眼病有关的眼肌自身抗原抗体的分子免疫学研究

为探讨Ｇｒａｖｅｓ眼病（ＧＯ）的发病机理，我们对新近发现的眼肌自身抗原及存在于ＧＯ患者血清的眼肌抗体进行了研究。血清取自１８例正常人、１８例活动性ＧＯ、１０例无限征的Ｇｒａｖｅｓ甲亢（ＧＨ）和３例桥本甲状腺炎（ＨＴ）患者。人眼肌膜蛋白经ＧＯ患者混合ＩｇＧ亲和层析后进行ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳，显示分子量为４５、２８、５５和６４ｋＤ等蛋白条带。经正常人混合ＩｇＧ亲和层析未能显示上述结果。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹杂交虽然未能证实仅与患者血清作用的独特的眼肌抗原的存在，但６４ｋＤ印迹存在于６１％的ＧＯ、３０％的ＧＨ、０％的ＨＴ患者，正常人仅２２％阳性。抗６４ｋＤ阳性率ＧＯ组明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。眼肌抗体（ＥＭＡｂ）特别是抗６４ｋＤ抗体对于ＧＯ发病机理的作用值得进一步研究。     

Antigenic proteins associated with calcareous corpuscules of taenia solium: partial characterization of a calcium-binding protein

BACKGROUND: A protein fraction was isolated from calcareous corpuscles of Taenia solium cysticerci. The antigens in this fraction were recognized in ELISA and Western blot assays by all sera from a group of patients with active neurocysticercosis (NC) and were not recognized by the sera from patients with other neurological disorders. Western blot analysis also showed that several high molecular weight proteins were strongly recognized by antibodies in all the neurocysticercotic patient sera, suggesting a potential for serological diagnosis of neurocysticercosis. METHODS: In order to characterize these antigenic proteins, we used a monoclonal antibody raised against a high MW calcium-binding protein associated with calcareous corpuscles of Echinococcus granulosus (EgCaBP1). RESULTS: Western blot assays revealed the recognition of a protein band of about 260 kDa, appearing within the range of the high MW antigens recognized by the NC sera. Several cDNA clones were isolated through screening of a T. solium metacestode library with a DNA probe for EgCaBP1, containing partial coding sequences showing about 88% identity with the protein of E. granulosus. Moreover, a recombinant product expressed in bacteria from the partial coding sequence of T. solium showed the ability to bind Ca2+ and was recognized by the monoclonal antibody. This recombinant calcium-binding protein of T. solium was not recognized by the NC patient sera by ELISA and Western blot. CONCLUSIONS: Antigenic proteins in the calcareous corpuscles of T. solium metacestodes deserve further analysis as candidates in the development of diagnostic tools for neurocysticercosis.     

重组华支睾吸虫26kDaGST蛋白用于检测特异抗体的研究

目的 评价重组华支睾吸虫26kDaGST蛋白(rCs26GST)在华支睾吸虫病血清学诊断上的价值。方法使用rCs26GST抗原,以酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫增强化学发光法(immuno-enhanced chemilmninescence,immuno-ECL)检测华支睾吸虫病者、其它寄生虫感染者及健康人血清特异性IgG和IgE抗体,分析rCs26GST抗原用于检测的敏感性和特异性。结果使用rCs26GST抗原,ELISA法检测了30份华支睾吸虫感染者血清、肺吸虫病人血清15份、日本血吸虫病人血清20份、无寄生虫感染的健康人血清40份,华支睾吸虫感染者血清IgG的阳性检出率为73．3％(22／30),健康人、肺吸虫病和日本血吸虫病人的阴性率分别为92．5％(37／40)、80．0％(12／15)、85．0％(17／20)。hnmuno-ECL法检测华支睾吸虫感染者血清rCs26GST-特异性IgE的阳性检出率为867％(26／30),肺吸虫病为26．7％(4／15),日本血吸虫病人和阴性对照组的血清未测出,此法的特异度是95．5%。结论 rCs26GST蛋白用于血清特异性IgG和IgE抗体的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于华支睾吸虫病的血清学诊断,组合成“鸡尾酒”式的复合诊断抗原之一。     

大鼠骨骼肌肌质网序列非依赖性的DNA结合蛋白

目的：观察大鼠骨骼肌肌质网上是否存在非核ＤＮＡ结合蛋白。方法：应用差速离心及蔗糖密度梯度离心法分离大鼠骨骼肌肌质网膜蛋白,用３２Ｐ标记的ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔｅｒｎ印记杂交。结果：在大鼠骨骼肌肌质网膜中存在两种ＤＮＡ结合蛋白,相对分子质量分别是８３０００、５８０００,这２种蛋白质可与不同的线状双链ＤＮＡ,环状ＤＮＡ及单链ＤＮＡ结合。结论：大鼠骨骼肌肌质网膜中存在两种序列非依赖性ＤＮＡ结合蛋白     

Breakthrough of immune self-tolerance to calreticulin induced by CpG-oligodeoxynucleotides as adjuvant

Reportedly, bacterial DNA containing unmethylated cytosine-guanosine dinucleotide motif-containing oligodeoxynucleotides (CpG-ODNs) can induce Th1-type adjuvant effects. We produced autoantibodies and induced hepatitis in mice using extracted proteins from human hepatocytes with CpG-ODNs as adjuvant. Western blot analysis was performed of sera from immunized mice and two patients with autoimmune hepatitis (AIH). When a common band was detected, N-terminal amino acid sequencing was performed to determine its site. For detection of antibodies against the identified protein (calreticulin), ELISA was performed of sera of 50 patients with AIH: 45 with primary biliary cirrhosis (PBC), 24 with chronic hepatitis C (CH), and 24 healthy controls. Mice were immunized with calreticulin protein with CpG-ODNs as adjuvant. Several reacted bands were detected in their sera; in addition, a common band to the sera of patients with AIH was detected at 60 kDa. Subsequent N-terminal amino acid sequencing revealed that the protein was human calreticulin. ELISA showed that, of patients with AIH, PBC, and CH, 30.0% (15/50), 17.8% (8/45), and 12.5% (3/24), respectively, were positive for anti calreticulin antibodies. Splenocytes from immunized mice produced IFN-gamma after they were pulsed with calreticulin protein. Histological analyses of liver specimens taken from mice immunized with calreticulin protein together with CpG-ODNs showed spotty and focal necrosis. Immunofluorescence analysis showed increased expression of calreticulin in the liver treated with CpG-ODNs. These results suggest that a breakthrough of immune self tolerance to calreticulin is induced with CpG-ODNs as adjuvant and that calreticulin protein might be a target antigen in this model.     

人血管内皮生长因子受体2胞外段在毕赤氏巴斯德酵母中的表达

目的探讨在毕赤氏巴斯德酵母（Pichia pastoris）中高效表达有真核蛋白结构的人血管内皮生长因子受体2胞外段（heVEGFR-2）的可行性。方法从重组质粒pORF-heVEGFR-2经PCR获全长heVEGFR-2 DNA,构建重组毕赤氏巴斯德酵母分泌性表达载体,电转化Pichia pastoris X-33。用抗药性表型和甲醇诱导筛选出重组heVEGFR-2蛋白表达阳性的转化子（X-33-heVEGFR-2）。结果SDS-PAGE显示,获分子量约108kDa的重组heVEGFR-2蛋白,约占X-33-heVEGFR-2分泌性表达蛋白总量的45％。该重组蛋白在表达上清中的质量浓度达80mg／L。其heVEGFR-2部分分子量约106kDa。Western blot证实,该蛋白能特异地与大鼠抗小鼠VEGFR-2单克隆抗体结合。结论毕赤氏巴斯德酵母能高效表达有真核蛋白结构的人血管内皮生长因子受体2胞外段蛋白全段。     

吸血前后按蚊唾液腺蛋白组分的变化

目的：班须按蚊在吸血过程中消耗了许多唾液腺蛋白质，本文目的是探讨吸血前后按蚊唾液腺蛋白质的变化。方法：分组剖取吸血前后的班须按蚊唾液腺并应用SDS－PAGE及Western blot方法进行按蚊唾液腺蛋白质变化的分析。结果：（1）吸血前按蚊唾液腺内有22条蛋白带和7条抗原带，分子量为10－170kDa。（2）按蚊叮咬期间，分子量分别为16，23，28及33kDa的蛋白质减少。（3）吸血期间，分子量分别为40，50及65kDa的蛋白质减弱。（4）吸血后，分子量为14，35及90kDa的蛋白质减少。（5）吸血后3d，唾液腺蛋白质恢复到或超过吸血前的水平。（6）应用Western blot方法，从吸血后的蚊中肠内容物中检测出90kDa的唾液腺蛋白质。结论：吸血过程中，按蚊唾液腺内不同蛋白质参与吸血的不同阶段，而且将部分分泌出的唾液蛋白吸入中肠。