抗-CD3mAb加IL-2激活小鼠杀伤细胞

外周血单个核细胞(PBMC)或脾细胞加IL-2培养能刺激诱生杀伤许多肿瘤细胞系的淋巴因子活化杀伤(LAK)细胞。联合应用LAK细胞和IL-2能显著减少带瘤动物和肿瘤在体内转移,但用IL-2刺激的短期(3～5日)培养法只能扩增少量细胞,这就限制了在     

可溶性结肠癌抗原与CD3mAb,IL-2联合诱导杀伤细胞的实验研究

IL-2诱导体外杀伤细胞扩增慢,高依赖IL-2,特异性差,影响了其疗效的发挥.根据报道CD3mAb与IL-2在杀伤细胞的诱导过程中有增强作用.为了获得具有高效,特异细胞毒活性的抗肿瘤效应细胞,我们采用CD3mAb、IL-2与可溶性肿瘤抗原(结肠癌抗原)联合诱导正常人外周血单个核细胞获得相对特异的杀伤细胞(TAK),并对TAK与LAK在增殖活性、杀伤活性及表型上进行了对比.     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅳ抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱导的PBL增殖与凋亡共存现象

抗CD3单抗TCR/CD3复合物中的CD3分子相互作用,通过信号传导系统引起T细胞功能的不同变化,如诱导T细胞活化增殖,诱导无反应性(unresponsiveness)和细胞凋亡。但抗CD3单抗这几种性质不同,看似矛盾的作用之间有何内在联系及规律是值得深入探讨的。我们在研究抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK过程中,观察到抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱导的细胞增殖与凋亡共存的现象。(1)抗CD3单抗和rIL-2共刺激法可诱导人外周血淋巴细胞活化增殖,如细胞数扩增,~3H-TdR掺入和介导细胞毒活性等;(2)形态学检查表明同一培养体系中不仅可检测到活化增殖的细胞、有丝分裂的细胞,也可检测到凋亡的细胞(这些细胞体积小,核缩小甚至断裂,染色质边集,细胞膜及细胞浆向表面突出及崩解形成凋亡小体等),它们都具有淋巴细胞的特征。(3)在抗CD3单抗和rIL-2共刺激后10小时检测不到凋亡的特征性DNA片段,第4     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅳ抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱导的PBL增殖与凋亡共存现象

抗CD3单抗TCR／CD3复合物中的CD3分子相互作用，通过信号传导系统引起T细胞功能的不同变化，如诱导T细胞活化增殖，诱导无反应性(unresponsiveness)和细胞凋亡。但抗CD3单抗这几种性质不同，看似矛盾的作用之间有何内在联系及规律是值得深入探讨的。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅰ 抗CD3单抗和rIL-2共刺激对PBMC的激活作用

本实验结果表明采用抗CD3单抗和rIL-2共刺激外周血单个核细胞(Peripheral blood mononueleacells，PBMC)可诱导其增殖、活化、分化为具有杀瘤活性的抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞 (Anti CD3 monoclcnal anybody activated killer cells．CD3AK)。(1)抗CD3单抗和rIL-2共刺激可诱导PBMC增殖，     

抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体的生物学活性研究

背景与目的目前,常规疗法已难以提高卵巢癌患者的生存率,已有实验数据及临床前试验结果表明,双特异性抗体能有效介导效应细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。本研究旨在通过检测抗人卵巢癌/抗人CD3单链双特异性抗体(BHL-I)的生物学活性,为其临床前试验及应用提供实验依据。方法观察BHL-I介导的外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)与靶细胞SKOV3结合、MTT法检测外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)增殖及PBL对靶细胞SKOV3杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBL分泌hIFN-γ、hTNF-α变化。结果BHL-I介导的花环形成率(15.7%)显著高于对照组(11.1%)(P<0.01);在抗原存在下,BHL-I显著促进PBMC增殖和PBL对靶细胞的杀伤(P<0.01),且杀伤率与花环形成率呈正相关(r=0.946);杀伤过程中上清液中hIFN-γ、hTNF-α显著增高(P<0.01)。结论BHL-I能介导PBL和SKOV3结合并活化PBL特异杀伤效应,杀伤可能与其hIFN-γ、hTNF-α表达增高有关。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅲ CD3AK与常规LAK细胞的比较

抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells.CD3AK)是用抗CD3单抗(Anti-monoclonal antibody,Anti-CD3 mAb)激活的一类杀伤细胞,具有较强的增殖能力和细胞毒活性。在CD3AK诱生扩增过程中除抗CD3单抗外也需要rIL-2作为生长因子,这就提出一个问题:用抗CD3单抗和rIL-2诱生扩增的CD3AK与单用rIL-2诱生扩增的LAK有什么区别。本文比较了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的CD3AK与常规LAK细胞在增殖动力学,细胞毒活性及表型特征上的差别,探讨了这些差别的发生机制及可能的理论意义。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅲ CD3AK与常规LAK细胞的比较

抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cells．CD3AK)是用抗CD3单抗(Anti-monoclonal antibody，Anti-CD3 mAb)激活的一类杀伤细胞，具有较强的增殖能力和细胞毒活性。在CD3AK诱生扩增过程中除抗CD3单抗外也需要rIL-2作为生长因子，这就提出一个问题。     

单价抗CD20抗体诱导人B细胞淋巴瘤Raji细胞的凋亡

背景与目的:抗CD20抗体和片段已应用于非霍奇金淋巴瘤的临床治疗,但仍需要开发新的抗CD20抗体和片段(未修饰的或放射性标记的),以治疗对美罗华(利妥昔单抗)无反应的患者。鼠源性抗CD20抗体HI47的嵌合抗体片段Fab和F(ab)'2已被构建。本研究目的是观察HI47(鼠抗-CD20抗体)和其嵌合抗CD20抗体片段抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法:用免疫荧光法测定抗CD20抗体与CD20+人B细胞淋巴瘤Raji细胞的结合能力;MTT法测定抗CD20抗体片段对Raji细胞生长的影响;用膜联蛋白Ⅴ染色和DNA琼脂糖凝胶电泳检测和验证抗CD20抗体片段诱导Raji细胞凋亡。结果:HI47和其嵌合的抗CD20抗体片段均可与CD20+Raji细胞结合,结合率可达90%以上;HI47不能与美罗华竞争结合Raji细胞;HI47和其嵌合的抗CD20抗体片段浓度为100μg/ml对Raji细胞的抑制率分别为:(57.0±1.5)%、(65.2±2.5)%、(77.2±3.2)%;单价的抗CD20抗体片段Fab(20μg/ml)能够诱导Raji细胞的凋亡,早期凋亡率为17%。结论:HI47的嵌合抗体片段对Raji细胞有抑制作用,能诱导Raji细胞的凋亡。     

α-CD4单抗对α-CD3单抗刺激和IL-2诱导的肿瘤特异性T细胞的扩增和杀瘤活性的影响

在用a-CD3单抗和20U/ml rIL-2扩增FBL-3红白血病肿瘤细胞免疫的小鼠脾细胞,获取了具有高度杀瘤活性的、FBL-3特异性的T细胞的基础上,观察了a-CD4单抗对FBL-3特异性的T细胞的增殖、杀瘤活性及表型的影响.本研究采用四种不同的培养方案:(1)单独使用a-CD3单抗(CD3组);(2)单独使用20U/ml rIL-2(IL-2组);(3)使用a-CD3单抗48小时后,加入a-CD3单抗和20U/ml rIL-2(CD3 IL-2组);(4)a-CD3单抗和a-CD4单抗同时使用48小时后,加入a-CD3单抗、a-CD4单抗和20U/ml rIL-2(CD3 CD4 IL-2组).实验结果显示,CD3 IL-2组在20天培养过程中细胞扩增为590倍,在培养12天时对FBL-3的最大杀伤活性为83.6%;CD3 CD4 IL-2组在20天培养过程中细胞扩增为950倍,在培养12天时对FBL-3的最大杀伤活性     

抗CD3或B7.1与CD28共刺激PBLs膜表面分子表达与肝癌细胞凋亡的相关性

为探讨腺病毒载体介导的外源性Rb基因导入对膀胱癌细胞生长的抑制作用,为膀胱癌的基因治疗提供实验依据,构建了Rb基因的复制缺陷型重组腺病毒载体.体外转染人膀胱癌细胞株EJ.应用免疫组化法、免疫印迹及聚合酶链反应技术检测外源性Rb基因腺病毒载体的转染效率及Rb基因表达效果;用流式细胞仪分析细胞周期;以细胞计数及同位素掺入技术观察外源性Rb基因对EJ细胞生长的抑制效果.结果显示腺病毒载体可有效地将外源基因导入EJ细胞.Rb基因重组腺病毒载体转染细胞后,胞内DNA合成减少,细胞生长受到抑制.流式细胞仪分析显示68%的EJ细胞生长停滞在GO/GI期.结果提示,外源性Rb基因重组腺病毒载体转染膀胱癌细胞可有效抑制细胞生长     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅱ CD3AK的免疫生物学特征

本实验采用倒置显微镜、光学显微镜、电子显微镜和荧光激活的细胞分类器(FACS)分析了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征。经抗CD3单抗和rIL-2共刺激后细胞形态学发生明显的变化,细胞异型性明显,有些体积增大,呈圆形或不规则形,往往形成集落;有些细胞体积变小,有些死亡崩解成颗粒状。超微结构观察显示CD3AK表面无微绒毛,仅有少数突起,细胞器发达,含有电子致密颗粒。CD3AK°细胞为正常二倍体细胞,染色体数目为46,核型46XX或46YY取培养11天的CD3AK细胞,用相应的第一抗体和第二抗体染色后进行FACS分析,结果表明CD3AK是一个异质性细胞群,同时个体差异也较明显,其中CD3T淋巴细胞含量最多,其次是CD_(56)~ (NKH_1~ )的NK表型细胞或CD_(57)~ (HNK_1~ )细胞。在随机选取的两个供血者标本的代表性检测中,CD_3~ 细胞分别为59.5％和82.4％,NKH_1~ 细胞或HNK_1~ 细胞分别为24.1％和19.0％,而CD_4~ 和CD_8~ 比例不固定,IL-2受体阳性细胞(72.1％或18.3％)和Ia~ (HB55-Ia)细胞(78.0％或33.9％)的百分数也高低不一。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅱ CD3AK的免疫生物学特征

本实验采用倒置显微镜、光学显微镜、电子显微镜和荧光激活的细胞分类器(FACS)分析了抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增的人CD3AK的免疫生物学特征。经抗CD3单抗和rIL-2共刺激后细胞形态学发生明显的变化，细胞异型性明显，有些体积增大，呈圆形或不规则形，往往形成集落：有些细胞体积变小。     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅴ CD3AK介导的MHC非限制性溶瘤作用的机制分析

MHC(Maior histocompatibility complex, MHC)Ⅰ类抗原缺失是一些肿瘤细胞逃逸抗原特异性CTL攻击的重要机制。CTL能否通过MHC非限制性、MHC Ⅰ类非依赖性机制杀伤肿瘤细胞是值得深入探讨的。我们用抗CD3单抗和rIL-2共刺激法诱导的CD3AK作为效应细胞,研究了CD3AK对两株MHCⅠ类阴性肿瘤细胞株K562和Daudi杀伤作用,初步分析了其机制:(1)CD3AK对K562和Daudi都有细胞毒作用,分别为49.4±5.8和33.5±2.5％;同血源NK细胞对K562细胞的细胞毒活性为8.2±3.2％,Daudi对NK的杀伤作用不敏感。(2)CD3AK可与K562细胞结合,EDTA抑制这一过程。(3)CD3AK通过诱导靶细胞K562坏死     

抗CD3单抗和rIL-2共刺激诱生扩增人CD3AK的实验研究Ⅴ CD3AK介导的MHC非限制性溶瘤作用的机制分析

MHC(Major histocompatibility complex，MHC)Ⅰ类抗原缺失是一些肿瘤细胞逃逸抗原特异性CTL攻击的重要机制。CTL能否通过MHC非限制性，MHC Ⅰ类非依赖性机制杀伤肿瘤细胞是值得深入探讨的。我们用抗CD3单抗和rIL-2共刺激法诱导的CD3AK作为效应细胞，研究了CD3AK对两株MHC Ⅰ类阴性肿瘤细胞株K562和Daudi杀伤作用，     

可溶性胃癌抗原和抗CD3单抗共同诱导杀瘤细胞的实验

用盐析法提取胃癌可溶性抗原（ＴＳＡ），并用抗ＣＤ３单抗和ＩＬ－２共同刺激正常人的外周血单核细胞，培养１０天后，经流式细胞仪表型分析，表明其免疫效应细胞以ＣＤ８Ｔ细胞为主，其细胞增殖速度、增殖水平与ＣＤ３ＡＫ和ＬＡＫ相比明显升高，且对其抗原来源的胃癌细胞具有极强的杀伤活性（９８．５％），高于ＣＤ３ＡＫ（８２．１％）和ＬＡＫ（６２．０％）。     

树突状细胞诱导抗裸鼠人肝癌移植瘤免疫

[目的]讨究树突状细胞（DC）体外诱导的抗肝癌细胞免疫能否预防裸鼠人肝癌移植癌发生及抑制课鼠人肝癌移植瘤生长。[方法]联合应用粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白介素－4（IL－4）直接从肝癌患者外周血中培养DC：以人肝癌细胞系HepG2肿瘤细胞的肿瘤抗原粗提物刺激DC；DC激活同源的T淋巴细胞产生细胞毒性T淋巴细胞（CYL）；以DC激活的CIL预防性接种于探鼠皮下观察其后接种的人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生率；并观察该CTL对已接种裸鼠的人肝癌细胞系HepG2移植瘤生长的影响。[结果]DC诱导的工体外对HepG2肿瘤细胞具有高效而特异杀伤作用，在裸鼠体内不能预防探鼠人肝癌细胞系HepG2移植瘤发生，而且能抑制该移植瘤生长。[结论]经肝癌肿瘤相关抗原激活的肝癌患者外用血DC体外诱导的抗肿瘤细胞免疫在体内外均具有良好的抗肿瘤作用。提示DC作为一新概念上的抗肿瘤疫苗有可能在人肝癌的预防及治疗中发挥重要作用。     

IL-12、IL-7、IL-2协同诱导人PBMC增殖分化和细胞毒活性的实验研究

已知IL-12、IL-7可对T细胞、NK细胞产生多种生物学效应,但有关IL-12、IL-7和IL-2间的相互作用至今尚未明确.本文应用同位素3~H-TdR掺入法和3~H-TdR释放法比较了重组IL-12、IL-7、IL-2单独或协同对健康人外周血单个核细胞(PBMC)的体外增殖和细胞毒活性的影响,结果表明,IL-7单独即可促进PBMC增殖分化和诱导产生细胞毒活性,与IL-2协同可使二种作用均增强,并高于单独用IL-2时的效应.IL-12单独不能引起PBMC增殖,但可诱导PBMC产生细胞毒活性,与IL-2协同可使这种效应明显增强.IL-12与IL-7协同作用于PBMC引起的增殖反应呈现一种剂量依赖方式.