基于NLRP3炎性体轴探讨土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的:研究土茯苓总黄酮(TFSG)对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.65 mg·kg-1),土茯苓总黄酮低、中、高剂量组(100,300,500 mg·kg-1),每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法(ELISA)检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β(IL-1β),IL-6,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3),凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加(P0.01),模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高(P0.01),NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高(P0.01);与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度(P0.01),滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低(P0.01)。结论:土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

痛风宁对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-1β,TNF-α及NALP3炎性体的影响

目的:从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NALP3)炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只。造模大鼠采用踝关节局部注射0.2 mL尿酸钠(monosodium urate,MSU)混悬液建立急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)模型,正常大鼠予相同部位注射生理盐水。造模成功后,随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组,分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃,每天2次,共3 d。正常大鼠为正常组,同时予等量生理盐水灌胃。造模成功后72 h,行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著升高,滑膜组织NALP3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白及mRNA表达均显著增加(P0.01);与模型组比较,痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著下降,且滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均显著降低(P0.01);与秋水仙碱组比较,痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量仍较高(P0.05),但滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均较低(P0.05,P0.01)。结论:痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,从而减少IL-1β,TNF-α的生成,减轻关节炎症反应。     

基于NLRP3炎性体轴土茯苓总黄酮对痛风性关节炎的作用和机制

目的：研究土茯苓总黄酮（TFSG）对急性痛风性关节炎小鼠的抗炎作用,并初步探讨其作用机制。方法：将90只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组（0.65 mg·kg^-1）,土茯苓总黄酮低、中、高剂量组（100,300,500 mg·kg^-1）,每组15只。除正常组外,其余各组采用尿酸钠结晶复制小鼠痛风性关节炎模型,测定小鼠踝关节肿胀度;酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同组别滑膜组织中白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）,凋亡相关斑点样蛋白（ASC）,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）的蛋白表达,实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测NLRP3,ASC,Caspase-1 mRNA水平的表达。结果：与正常组比较,模型组小鼠踝关节肿胀度明显增加（P<0.01）,模型组小鼠滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平显著升高（P<0.01）,NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白表达和mRNA水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,土茯苓总黄酮组能够显著降低小鼠踝关节肿胀度（P<0.01）,滑膜组织中IL-1β,IL-6,TNF-α水平以及NLRP3,ASC,Caspase-1蛋白水平和mRNA水平显著降低（P<0.01）。结论：土茯苓总黄酮具有一定的抗痛风性关节炎作用,其作用机制与NLRP3炎性体轴有关。     

基于caspase 1/IL-1β 信号转导通路探讨清热除痹方治疗痛风性关节炎的作用机制

目的:基于caspase 1/IL-1β信号转导通路探讨清热除痹方治疗痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法:将57例患者随机分为对照组29例和观察组28例,对照组口服布洛芬缓释片0.6 g/次,1次/d,观察组在此基础上给予外敷及内服清热除痹方。采用ELISA双抗夹心法测定治疗前后2组外周血炎性因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素8(IL-8)水平。采用实时荧光定量法PCR检测2组患者外周血单核细胞(PBMC)中Nod样受体蛋白3(NLRP3)炎性体、半胱氨酸天冬氨酸酶1(Caspase-1)、相关斑点样蛋白(ASC)mRNA表达,Western blot检测ASC,Caspase-1信号蛋白表达。结果:2组PBMC中ASCmRNA表达量、外周血炎性因子IL-1β、IL-8水平均明显低于治疗前,而caspase-1、NLRP3mRNA表达量则明显高于治疗前(P0.05);且观察组治疗后ASCmRNA表达量明显低于对照组(P0.05);治疗后NLRP3mRNA及caspase-1mRNA表达量均明显高于对照组;观察组治疗后外周血IL-1β及IL-8水平均明显低于对照组;治疗后观察组ASC蛋白水平明显低于对照组(P0.05)。结论:清热除痹方对GA的抗炎效果更佳,可能与较好地调控caspase-1/IL-1β信号转导通路,抑制IL-1β等炎性因子的释放,缓解炎症症状有关。     

基于NALP3炎性体信号通路研究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎的作用机制

目的:探究栀黄止痛颗粒治疗大鼠痛风性关节炎以及对NALP3炎性体(NACHT-LRR-PYD-containing proteins-3,NALP3)信号通路的影响。方法:将SD大鼠分为6组,分别为正常组,模型组(踝关节腔注射尿酸钠制备),栀黄止痛颗粒低、中、高剂量(1.0,2.5,5.0 g·kg-1)和阳性药组(秋水仙碱,3.0 g·kg-1),酶联免疫吸附法(ELISA)法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β)含量,造模后24 h评定大鼠步态以及关节炎症指数,造模前、造模后6,12,24,48 h测定大鼠裸关节肿胀度。苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠踝关节组织病理学变化,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot),免疫组化法检测关节组织中NLRP3,IL-1β,凋亡相关斑点样蛋白(ASC),半胱天冬酶-1(Caspase-1)表达。结果:与正常组比较,模型组血清中TNF-α,IL-6,IL-1β含量显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组显著降低TNF-α,IL-6,IL-1β含量(P0.01)。与正常组比较,模型组大鼠步态较差、关节肿胀显著(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、药物处理组步态、关节肿胀得到所改善,随着药物剂量浓度的增加,步态、关节肿胀分级逐渐降低(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组踝关节组织中NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒低、中、高剂量组均显著降低NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1 mRNA及蛋白的表达(P0.01)。免疫组化显示,与正常组比较,模型组NLRP3,IL-1β,ASC,Caspase-1表达阳性表达量显著升高,而与模型组比较,秋水仙碱组、栀黄止痛颗粒中、高剂量组显著降低阳性表达率(P0.01),具有剂量依赖性。结论:栀黄止痛颗粒能够缓解痛风性关节炎大鼠关节肿胀,其机制可能与抑制NALP3炎性体信号通路有关。     

脑心通调控NLRP3/Caspase-1通路抑制脂多糖诱导的BV2细胞焦亡

目的:探索脑心通醇提物对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞BV2焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)体外诱导BV2细胞的同时,加入不同质量浓度脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,分别采用MTS法检测细胞活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NLRP3的mRNA水平;免疫荧光法检测NLRP3蛋白表达的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3/Caspase-1通路关键蛋白表达。结果:与空白组比较,LPS(1 mg·L^-1)能明显降低BV2细胞活性,显著升高IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.01),且可提升NLRP3蛋白表达水平以及Caspase-1剪切体和前体蛋白的比值(Caspase-1 p20/Caspase-1)。与LPS组比较,脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,逆转了LPS导致的细胞活性降低(P<0.01),50 mg·L^-1脑心通醇提物可显著降低IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),显著降低LPS诱导的NLRP3的高表达以及Caspase-1 p20/Caspase-1(P<0.01)。结论:脑心通能明显抑制LPS诱导的小胶质细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/Caspase-1通路密切相关。     

基于NLRP3/ASC/Caspase-1信号通路探讨独活醇提物对MSU诱导的痛风性关节炎的治疗作用

目的：通过体内和体外实验探讨独活醇提物(DH50)对尿酸钠(MSU)晶体诱导的痛风性关节炎的治疗作用及作用机制。方法：体内实验：将50只雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、地塞米松组(DXMS,0.07 mg·kg^-1)、DH50低剂量组(DH50-D,9 mg·kg^-1)、高剂量组(DH50-G,18 mg·kg^-1)5组(n=10)。连续灌胃给药7 d,正常组和模型组给予等体积纯水,第5天向大鼠右侧踝关节注射MSU建立痛风性关节炎模型。测量造模后4、8、24、48 h的大鼠足跖容积并对关节炎症评分,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠滑膜组织病理形态的改变,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠滑膜组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)的含量变化,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测滑膜组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、IL-1β、环氧化酶-2(COX-2)的蛋白表达情况。...     

祛瘀清热方对尿酸钠诱导的痛风性关节炎大鼠NLRP6/Caspase-1/IL-1β 信号通路的影响

目的：观察祛瘀清热方对尿酸钠诱导的痛风性关节炎（GA） 大鼠NLRP6/Caspase-1/IL-1β 信号通 路的影响。方法：检测受试大鼠踝关节肿胀度。用酶联免疫吸附法（ELISA） 测定大鼠血清白细胞介素- 1β （IL-1β）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α） 的含量，用Western Blot 检测滑膜组织NLRP6 和Caspase-1 含量。 结果：与正常组比较，其余各组造模之后，在不同时间点上，受试大鼠踝关节肿胀度增加（P＜0.05）。与模型 组比较，祛瘀清热方低、中、高剂量组及秋水仙碱组大鼠，在造模后各时间节点，大鼠踝关节肿胀度降 低（P＜0.05）。与秋水仙碱组比较，祛瘀清热方低、中、高剂量组受试大鼠，在造模后各时间节点，大鼠踝关 节肿胀度增加（P＜0.05）。模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α 水平较正常组上升（P＜0.05）。与模型组比较，祛 瘀清热方低、中、高3 个剂量组及秋水仙碱组大鼠血清IL-1β、TNF-α 的水平降低（P＜0.05）。与秋水仙碱组 比较，祛瘀清热方低、中、高剂量组IL-1β、TNF-α 水平增加（P＜0.05）。与正常组比较，模型组及祛瘀清热 方中、高剂量组滑膜组织NLRP6 蛋白表达下调（P＜0.05），模型组Caspase-1 蛋白表达上调（P＜0.05）。与模 型组比较，祛瘀清热方高剂量组滑膜组织NLRP6 蛋白表达上调（P＜0.05），Caspase-1 蛋白表达下调（P＜ 0.05）。结论：祛瘀清热方可抑制GA 炎性反应，降低血清中IL-1β、TNF-α 含量，上调滑膜组织NLRP6 蛋白 和下调滑膜组织Caspase-1 蛋白的表达。     

银翘散对呼吸道合胞病毒感染小鼠呼吸系统的作用研究

目的:探讨银翘散对呼吸道合胞病毒感染小鼠呼吸系统的治疗效果以及作用机制。方法:小鼠随机分为6组,每组9只,分别是正常组、模型组、银翘散高剂量组、银翘散中剂量组、银翘散低剂量组、利巴韦林组。除正常组外,其他各组小鼠用乙醚浅麻后,以浓度TCID50呼吸道合胞病毒(RSV)液50μL滴鼻感染小鼠。银翘散高、中、低剂量组分别给予600、300、150mg/(kg·d)银翘散灌胃,利巴韦林组给予150 mg/(kg·d)利巴韦林灌胃。银翘散高、中、低剂量组、利巴韦林组于感染前1天开始灌胃给药,连续5天,正常组、模型组给予等容积蒸馏水灌胃。通过称量小鼠体质量和肺重量计算肺指数。HE染色检测小鼠鼻黏膜和肺组织炎性细胞浸润等病理形态学的改变。酶联免疫吸附法测定检测小鼠肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。实时荧光定量PCR和Western blot检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NALP3)炎性体、凋亡相关微粒蛋白(ASC)和半胱天冬酶-1(caspase-1)的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠肺指数显著升高,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和IL-6表达显著升高,肺组织NALP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,银翘散高、中、低剂量组、利巴韦林组小鼠肺指数显著降低,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6表达显著降低,肺组织NALP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与利巴韦林组比较,银翘散中剂量组小鼠肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β表达较高,肺组织NALP3和caspase-1 mRNA表达较高;银翘散低剂量组小鼠肺指数较高,肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6表达较高,肺组织NALP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白表达较高;差异均有统计学意义(P0.05)。结论:银翘散能够改善呼吸道合胞病毒感染所致的呼吸道系统炎症,其作用机制与抑制NALP3炎性体的激活和炎症因子的分泌相关。     

“易层”贴敷抑制NLRP3炎症小体激活改善膝骨关节炎的实验研究

目的基于NLRP3/Capase-1轴研究易层贴敷膏药改善KOA滑膜炎症的治疗机制。方法将SD大鼠分为正常组,KOA组,"易层"组,抑制剂组,各组大鼠、滑膜HE染色,Western Blot检测大鼠滑膜NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白和软骨MMP-1、MMP-13蛋白表达水平,PCR检测滑膜NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达。结果 "易层"贴敷显著改善KOA大鼠滑膜炎症Krenn评分,IL-1β、TNF-α蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P0.05);在应用"易层"贴敷膏药后,KOA大鼠滑膜组织中NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白及mRNA表达水平均较KOA组下调,差异具有统计学意义(P0.05);而应用Caspase-1抑制剂后,具有同样的下调作用,两组间无统计学意义(P0.05);应用"易层"贴敷膏药干预后,KOA大鼠软骨中MMP-1及MMP-13水平下调,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 "易层"贴敷膏药可能通过下调NLRP3及Caspase-1的表达抑制KOA滑膜炎症,减少软骨组织MMPs水平,发挥保护软骨的作用。     

加味四妙散对急性痛风性关节炎大鼠miR-223-3p与NLRP3/IL-1β信号通路的影响

目的 通过研究加味四妙散对急性痛风性关节炎（AGA）大鼠模型miR-223-3p与NOD样受体蛋白3（NLRP3）/白细胞介素-1β（IL-1β）信号通路的影响,探讨加味四妙散对AGA的抗炎机制。方法 选取8周龄雄性SD大鼠72只,按随机数字表法分空白组、模型组、秋水仙碱组（0.3 mg·kg^-1）、加味四妙散高剂量组（31.75 g·kg^-1）、加味四妙散中剂量组（15.75 g·kg^-1）、加味四妙散低剂量组（7.875 g·kg^-1）,每组12只,除空白组外,其余各组采用Coderre法于大鼠右侧踝关节注射单钠尿酸盐（MSU）晶体混悬液,复制急性痛风性关节炎大鼠模型,给药组分别给予相应药液灌胃,模型组和空白组给予等体积的无菌生理盐水溶液灌胃,连续1周。测量大鼠踝关节周径并计算踝关节肿胀度,苏木素-伊红（HE）染色法检测大鼠踝关节滑膜组织病理形态的变化,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠血清中IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组大鼠滑膜组织中NLRP3、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）的蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠滑膜组织中NLRP3、Caspase-1、ASC mRNA的表达和miR-223-3p的表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠踝关节肿胀度显著升高（P<0.01）,滑膜组织结构紊乱,滑膜细胞增生明显,有大量炎症细胞浸润,大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著上升（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、ASC的蛋白与mRNA表达增加,miR-223-3p的表达下降;与模型组比较,秋水仙碱组、加味四妙散高、中剂量组关节肿胀度明显降低（P<0.05）,秋水仙碱组、加味四妙散高、中、低剂量组滑膜细胞增生及炎性细胞浸润较模型组均有不同程度减轻,其中秋水仙碱组和加味四妙散高剂量组改善最为明显,加味四妙散各剂量组和秋水仙碱组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著下降（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白与mRNA表达增加（P<0.01）,加味四妙散中、高剂量组和秋水仙碱组大鼠滑膜组织中miR-223-3p的表达显著升高（P<0.01）;与秋水仙碱组比较,加味四妙散低剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α显著升高（P<0.01）,加味四妙散中剂量组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达升高、miR-223-3p表达下降（P<0.05）,低剂量组IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达与mRNA表达升高、miR-223-3p表达下降（P<0.01）。结论 加味四妙散方可能通过调控miR-223-3p干预NLRP3/IL-1β信号通路发挥抑制炎症的作用。     

火针点刺放血对急性痛风性关节炎湿热蕴结证大鼠模型滑膜IL-1β、IL-6、TNF-α含量的影响

目的:观察火针点刺放血对湿热蕴结型急性痛风性关节炎模型大鼠滑膜组织中白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的影响,探讨火针治疗急性痛风性关节炎的作用机制。方法:将32只SD大鼠(雌雄各半)随机分为空白组、模型组、火针组、西药组,于大鼠右踝关节注射0.1m L尿酸钠混悬液建立急性痛风性关节炎模型。火针点刺右踝关节肿胀最高处"阿是穴",共治疗3次。足容积法测量大鼠右踝关节肿胀度;ELISA法测定大鼠踝关节滑膜组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量。结果:模型组大鼠踝关节肿胀度,滑膜中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量较空白组显著升高(P0.01);火针组、西药组造模后96h踝关节肿胀度较模型组降低(P0.01),治疗后火针组和西药组大鼠滑膜中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量较模型组均明显降低(P0.05,P0.01),火针组、西药组大鼠滑膜中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量无明显区别(P0.05)。结论:火针可降低急性痛风性关节炎大鼠滑膜组织中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,其机制可能与抑制关节滑膜中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平有关。     

基于NLRP3炎性小体探讨金铁锁提取物对类风湿性关节炎治疗机制的研究

该研究在中医药理论指导下,探究云南临床长期使用治疗风湿痹证的金铁锁的科学依据。考虑到现代医学类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)与风湿痹证在症状方面有较高相似度,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3),考察金铁锁提取物(crude extract of Psammosilene tunicoides,CEPT)治疗RA的作用机制。采用胶原诱导类风湿性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)小鼠模型,于首次免疫第32天,按关节炎评分,随机将小鼠分组,每组10只,给药;按各组给药剂量,连续给药21 d。给药过程中每间隔4 d,评价小鼠关节肿胀度、关节炎评分;测定小鼠脾脏指数,并对小鼠踝关节进行组织病理学检查;测定小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)及白细胞介素18(IL-18)的含量;蛋白印迹(Western blot)法测定小鼠踝关节中NLRP3蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1蛋白(cystein asparate protease1,caspase-1)、CARD结构域凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)的表达;实时荧光定量核酸扩增(real-time quantitative PCR,q-PCR)检测NLRP3、caspase-1 mRNA的表达。结果显示,与模型组小鼠相比,阳性药物(甲氨蝶呤)组,金铁锁提取物低、高剂量组小鼠血清中IL-1β、IL-18炎性因子的含量及脾脏指数均显著降低(P0.01);关节炎评分、发病关节肿胀程度均显著下降(P0.01);膝关节炎性浸润有所改善;踝关节中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P0.01)。实验结果提示金铁锁可能通过抑制NLRP3炎性小体的表达,从而降低CIA小鼠足肿胀度及关节炎评分,降低炎症反应,为金铁锁在RA疾病中免疫调节的研究提供一定的实验基础及理论依据。     

加味四妙方对高尿酸血症合并急性痛风性关节炎模型大鼠踝关节组织NLRP3 mRNA及IL-1β、TNF-α表达的影响

目的探讨加味四妙方治疗高尿酸血症(HUA)合并急性痛风性关节炎(GA)的可能作用机制。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,加味四妙方低、中、高剂量组,西药组,每组8只。各组造模与灌胃同时进行。加味四妙方低、中、高剂量组分别给予加味四妙方16.8、33.6、67.2g/(kg·d)灌胃,西药组给予别嘌醇0.09g/kg+秋水仙碱0.05mg/100g灌胃,空白组及模型组给予10ml/kg蒸馏水灌胃。各组连续给药7d。除空白组外,其余各组腹腔注射3%氧嗪酸钾溶液建立HUA模型,再于大鼠右踝关节腔内注射尿酸钠溶液诱导GA模型。观察大鼠踝关节周径变化,检测大鼠血尿酸(SUA)、C反应蛋白(CRP)水平,大鼠踝关节组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)mRNA、白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达。结果与空白组相比,模型组大鼠踝关节周径明显增加,血清SUA、CRP水平升高,踝关节组织NLRP3 mRNA及IL-1β、TNF-α表达显著升高(P0.01)。与模型组相比,加味四妙方组中、高剂量组和西药组大鼠踝关节周径缩小,血清SUA、CRP水平降低,踝关节组织NLRP3 mRNA、IL-1β、TNF-α表达均降低(P0.05)。与加味四妙方高剂量组比较,西药组血清CRP水平、踝关节组织NLRP3 mRNA表达显著降低(P0.05)。结论加味四妙方可缓解HUA合并GA关节肿胀,降低血清SUA水平,其作用机制可能与调控NLRP3炎性体及下游炎症因子IL-1β和TNF-α的分泌有关。     

黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

芦丁对溃疡性结肠炎小鼠的干预作用及NLRP3炎症小体的影响

目的观察芦丁对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的干预作用。探讨其对NLRP3炎症小体信号分子活化的影响。方法将60只SPF级C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只。除空白组外,其余组均采用葡聚糖硫酸钠诱导建立溃疡性结肠炎模型,美沙拉嗪组同时给予美沙拉嗪缓释颗粒灌胃,芦丁高、中、低剂量组分别给予100 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)、25 mg/(kg·d)芦丁溶液灌胃,空白组、模型组以等体积l%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,均连续5 d。灌胃结束后,比较各组疾病活动度(DAI)评分、组织学评分,采用酶联免疫吸附法测定小鼠血清和结肠组织中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平,采用qRT-PCR法检测结肠组织中NLRP3、IL-1βmRNA表达量,采用Western blot法检测结肠组织中NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组小鼠DAI评分、组织学评分,血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05);与模型组比较,芦丁高、中剂量组和美沙拉嗪组上述指标均明显降低(P均<0.05),且芦丁高剂量组血清及结肠组织中IL-1β和IL-18水平,结肠组织中NLRP3 mRNA表达量、IL-1βmRNA表达量和NLRP3、Cleaved caspase-1、Cleaved IL-1β蛋白表达水平均明显低于美沙拉嗪组(P均<0.05)。结论芦丁可明显改善溃疡性结肠炎小鼠临床症状,抑制黏膜炎症损伤,其作用机制可能与抑制NLRP3炎症小体的活化有关。     

红藤虎杖复方免煎剂对急性痛风性关节炎模型小鼠细胞因子表达的影响

目的观察红藤虎杖复方免煎剂对急性痛风性关节炎模型小鼠细胞因子的表达,并探讨其可能作用机制。方法将KM雌雄性小鼠各36只,称重后随机分成空白组、模型组、阳性组和中药高、中、低剂量组,正常饲养1周后,连续灌胃5 d,第6天在小鼠踝关节注射尿酸钠诱导急性痛风性关节炎模型。测定足趾容积、HE染色观察滑膜组织病理形态,以及ELISA法检测IL-1β、TGF-β1、TNF-α、IL-1、IL-8、IL-1Ra在踝关节滑膜组织中的表达。结果与空白组比较,模型组右足趾容积明显增加;IL-1、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均显著增高(P<0.01);IL-1Ra、TGF-β1较空白组增高(P<0.05)。与模型组比较,阳性组、中药高、中剂量组右足趾容积明显降低;IL-1、IL-1β、IL-8、TNF-α水平均显著性降低(P<0.01);TGF-β1、IL-1Ra水平均显著性增高(P<0.01)。与阳性组比较,中药高剂量组IL-1显著降低((P<0.01);中药高、中剂量组IL-1β、TNF-α较阳性组降低(P<0.05);中药高、中剂量组IL-8、IL-1Ra、TGF-β1与阳性组比较无显著性差异(P>0.05);HE染色观察显示高剂量组滑膜组织炎症浸润改善明显。结论红藤虎杖复方免煎剂能治疗小鼠急性痛风性关节炎,其作用机制可能与MSU诱导的促炎细胞因子及抗炎细胞因子的产生有关,且高剂量效佳。     

加味四妙散汤对急性痛风性关节炎大鼠炎性细胞因子及多靶点调节信号通路影响

目的:探讨加味四妙散汤对急性痛风性关节炎大鼠炎性细胞因子及多靶点调节信号通路影响。方法:选取由本院实验动物中心提供雄性Wistar健康大鼠40只,依据随机数字表法分为四组,对照组、模型组、秋水仙碱组与加味四妙散汤组,每组10只;制备急性痛风性关节炎大鼠模型,使用ELISA法检测各组大鼠关节液内炎症因子含量,免疫印迹法检测关节周边组织内Caspase-1、TLR4、ASC及NF-κB蛋白表达情况,RT-PCR检测关节周边组织内Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达情况。结果:模型组IL-6、TNF-α及IL-1β含量较对照组上升,加味四妙散汤组和秋水仙碱组较模型组下降,差异均有统计学意义(P0.05),加味四妙散汤组TNF-α含量较秋水仙碱组升高,差异有统计学意义(P0.05);模型组Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达量较对照组上升,加味四妙散汤组Caspase-1、ASC mRNA表达量较模型组下降,秋水仙碱组Caspase-1、TLR4、ASC及NLRP3mRNA表达量较模型组和加味四妙散汤组下降,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:加味四妙散汤可抑制急性痛风性关节炎大鼠关节液内炎性因子含量,同时调节信号通路内蛋白及mRNA表达水平起到治疗作用。     

清热除痹方对大鼠痛风性关节炎NALP3炎性体信号通路的影响

目的探讨清热除痹方治疗大鼠痛风性关节炎(GA)以及对NALP3炎性体信号通路的影响。方法将162只大鼠随机分为6组,每组27只,分别为正常组,模型组,清热除痹方高、中、低剂量组(22,11,5.5g·kg~(-1)·d~(-1)),秋水仙碱阳性药物组(0.2 mg·kg~(-1)·d~(-1))。实验组分别用药物灌胃,模型组和正常组均给予等体积蒸馏水灌胃,连续灌胃11 d,于第8 d除正常组外所有大鼠均采用尿酸钠膝关节腔注射法进行模型复制,观察模型复制后24 h大鼠步态分级。并于模型复制后24,48,72 h各时间点每组取9只大鼠心脏采血3 m L并处死大鼠,ELISA法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量。并于相应时间点取大鼠膝关节滑膜组织。Western Blot检测滑膜Nod样受体蛋白3(NALP3)、炎性体凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸天冬氨酸酶-1(caspase-1)的蛋白表达,ELISA测定滑膜IL-1β含量。模型复制后72 h,采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织病理学改变。结果与正常组比较,模型组大鼠步态显著变差(P0.01),滑膜组织炎症反应明显,各时间点模型组血清中炎性因子TNF-α,IL-1β含量显著升高(P0.01),滑膜组织中NALP3、ASC、caspase-1、IL-1β表达明显升高(P0.01);与模型组比较,清热除痹方高、中、低剂量组和秋水仙碱组步态均得到明显改善(P0.01),滑膜组织炎症反应不同程度减轻,各时间点血清中TNF-α、IL-1β含量显著降低(P0.05,P0.01);各时间点滑膜NALP3、ASC、caspase-1、L-1β表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论清热除痹方能够通过抑制NALP3炎性体信号通路有效治疗GA大鼠。     

秦艽醇提物对痛风性关节炎大鼠氧化应激损伤及miR-34a/sirt1轴的影响研究

目的:研究秦艽醇提物对痛风性关节炎大鼠的保护作用,并初步探究其可能的作用机制。方法:将大鼠分为6组,假手术组、模型组(踝关节腔注射尿酸钠)、秦艽醇提物0.5 g/kg、1 g/kg、2 g/kg组、秋水仙碱0.001 g/kg组,每组12只,连续给药4周,末次给药后测定大鼠踝关节肿胀度,计算肿胀率;对大鼠步态、关节炎症指数评定;检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;观察大鼠踝关节组织损伤情况;测定踝关节组织中微小RNA-34a(miR-34a)、细胞沉默信息调节因子1(sirt1)、p53及p53蛋白乙酰化(Ac-p53)表达情况。结果:与假手术组相比,模型组大鼠关节肿胀度、关节肿胀率、步态分级、关节炎症指数、血清TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、MDA水平均明显升高,SOD水平明显降低,关节组织出现水肿,关节腔中出现大量炎性浸出物;踝关节组织中miR-34a、p53蛋白表达明显上调,Sirt1、Ac-p53蛋白表达水平明显下调。与模型组相比,秦艽醇提物各剂量组、秋水仙碱组关节肿胀度、关节肿胀率、步态分级、关节炎症指数、血清TNF-ɑ、IL-1β、IL-6、MDA水平均明显降低,SOD水平明显升高;关节水肿程度明显降低,炎性细胞数量明显减少;踝关节组织中miR-34a、p53蛋白表达明显下调,Sirt1、Ac-p53蛋白表达水平明显上调。结论:秦艽醇提物可抑制痛风性关节炎大鼠炎症反应、氧化应激反应,可能是通过下调miR-34a、上调sirt1表达,进而使Ac-p53蛋白表达上调,p53蛋白下调。