中药骨痛仙胶囊对骨折家兔Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白及BMP-2mRNA表达影响的实验研究

目的:观察骨痛仙胶囊对骨折愈合过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原及BMP-2mRNA的转录水平的影响,分析其促进骨折愈合的分子机理。方法:健康成年家兔45只,做双侧桡骨骨折模型,随机分成治疗组、阳性对照组、模型组分别给予骨痛仙胶囊、骨折创伤散和生理盐水灌胃给药,术后1周、2周、4周后处死家兔取材,用原位杂交法测定骨Ⅰ、Ⅱ型胶原及BMP-2表达,并与模型组、阳性对照组比较进行病理学观察。结果:各时间段治疗组Ⅰ型胶原表达mRNA的转录水平均增强,明显高于阳性对照组和模型组(P<0.05)。与对照组和模型组相比,给药组Ⅱ型胶原表达mRNA的转录水平第1周明显提高,第2、4周Ⅱ型胶原明显衰落,与模型组、阳性对照组相比有统计学意义(P<0.05)。给药组骨折部位骨形态发生蛋白-2(BMP-2)mRNA的转录水平比其它二组明显提高(P<0.05),同样在一周时提前达到高峰。结论:本课题从Ⅰ、Ⅱ型胶原及BMP-2mRNA转录三个层次讨论骨痛仙对骨折愈合的影响,从实验结果中我们看到,本实验采用家兔骨折模型,从组织学看,骨折2周达软骨修复高峰,之后进入骨基质骨化及塑性期,直至4周达到塑性的高峰。本实验发现Ⅰ型胶原mR-NA表达在骨折后两周明显小于4周,而Ⅱ型胶原mRNA表达在骨折后2周明显大于4周,这提示Ⅰ型胶原mRNA表达在骨化及塑性期最明显,Ⅱ型胶原mRNA表达在软骨修复期最明显,与Hiltrunen和Sandberg等报道结果一致。若骨痛仙组与阳性对照组、模型组进行比较观察,则发现Ⅰ型胶原mRNA表达,无论在骨折后2周还是4周,前者均大于后两者;而Ⅱ型胶原mRNA表达,前者均小于后两者,提示骨痛仙组的骨形成加快,已提前进入骨化及塑性期。另外,在骨折愈合的不同时期,BMP-2的表达及其mRNA的转录水平呈动态变化,即骨折后开始升高,2周左右达到高峰,以后逐渐下降。1骨痛仙胶囊可明显地促进实验性骨折家兔的骨折愈合,缩短骨折愈合的时间。2骨痛仙胶囊能够调节实验性骨折家兔Ⅰ、Ⅱ型胶原及BMP-2mRNA的转录水平。促进骨痂由纤维骨痂到骨性骨痂的转变。3Ⅰ、Ⅱ型胶原及BMP-2是观察骨折愈合的一项重要指标,在骨折愈合过程中,由软骨组织向骨组织变化过程对应着Ⅱ型胶原向Ⅰ型胶原转变的过程。     

补肾活血方含药血清对小鼠肢芽细胞增殖和分化的影响

目的探讨补肾活血方对小鼠肢芽细胞向软骨细胞分化增殖的影响。方法分离12.5天小鼠胚胎肢芽细胞进行微团培养,同时用补肾活血方含药血清进行干预。采用MTT法检测肢芽细胞的增殖活性,阿尔新蓝染色检测肢芽细胞分化为软骨细胞能力,RT-PCR法检测肢芽细胞中Col2a1、Col10a1、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平。结果与空白对照组比较,补肾活血方含药血清组在24 h、48 h和72 h 3个时间点均能显著促进小鼠肢芽细胞增殖。微团培养6 d后,阿尔新蓝染色结果显示补肾活血方含药血清组软骨细胞集落形成增加。RT-PCR结果显示补肾活血方含药血清组肢芽细胞Col2a1 mRNA表达水平增加,而Col10a1、Mmp9、β-catenin、Runx2 mRNA表达下调。结论补肾活血方含药血清可能通过β-catenin信号通路促进小鼠胚胎肢芽细胞的增殖与分化。     

接骨丹介导成骨细胞增殖促进骨折愈合的观察

目的：观察接骨丹对新西兰乳兔成骨细胞增殖的影响,探讨接骨丹促进骨折愈合的机制。方法：普通级新西兰大白乳兔,耳缘静脉空气栓塞处死,无菌条件下取颅盖骨,Ⅰ型胶原酶消化法获取成骨细胞并进行体外培养、鉴定及传代。将鉴定后的第二代成骨细胞随机分为正常对照组及实验组,正常对照组应用正常兔血清培养,实验组应用接骨丹含药血清培养,MTT法观测2组细胞的生长曲线;不同血清干预48 h后,倒置显微镜观测接骨丹对成骨细胞碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原表达的影响,Elisa法观测接骨丹对成骨细胞培养上清液中骨钙素表达的影响。结果：Ⅰ型胶原酶消化法成功获取并建立成骨细胞体外培养体系,MTT观测显示实验组能够显著促进成骨细胞的增值,倒置显微镜观测实验组中碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原的表达要优于正常对照组,并能够促进成骨细胞分泌骨钙素。结论：接骨丹能够促进骨折的愈合,其机制可能与促进成骨细胞中碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原及骨钙素的表达进而促进成骨细胞增殖和分化有关。     

补肾活血方含药血清通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞增殖分化研究

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞增殖分化以及PI3K/Akt信号通路的影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：通过新西兰大白兔制备补肾活血方含药血清,将人成骨细胞株分为空白组（Control组）、补肾活血方组（Z组）、补肾活血方含药血清＋10%μmol/L的抑制剂LY294002组（Z＋LY组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,生化方法检测成骨细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性,Western blot法检测AKT的活化情况。结果：补肾活血方含药血清能促进成骨细胞的增殖,并使之分化增强,且较Control组差异有统计学意义（P〈0.01）;阻断PI3K/AKT信号通路后,Z＋LY组对成骨细胞增殖分化的抑制较Z组差异有统计学意义（P〈0.05）,且对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能促进磷酸化AKT（p-AKT）的表达,用LY294002阻断PI3K/Akt信号通路后,p-AKT表达含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过PI3K/Akt信号通路促进成骨细胞的增殖,并促进成骨细胞分化功能,这可能是补肾活血方防治骨质疏松症的机制之一。     

健肾方含药血清培养成骨细胞移植对骨质疏松性骨折愈合过程中VEGF动态变化的影响

目的:研究健肾方含药血清培养成骨细胞移植对骨折愈合过程中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响。方法:制备4种含药血清,包括健肾方高、低剂量含药血清、福善美含药血清及空白大鼠血清,分别运用4种血清培养乳鼠成骨细胞,并建立骨折模型,将建模后大鼠分5组,分别是模型组、生理盐水组、福善美含药血清合并成骨细胞治疗组、健肾方低剂量含药血清合并成骨细胞治疗组、健肾方高剂量含药血清合并成骨细胞治疗组,治疗采用移植含药血清培养的成骨细胞到骨折部位,用荧光定量PCR方法检测骨折愈合部位VEGFmRNA表达情况。结果:福善美含药血清合并成骨细胞治疗组、健肾方低剂量含药血清合并成骨细胞治疗组、健肾方高剂量含药血清合并成骨细胞治疗组的血管内皮生长因子VEGFmRNA的表达明显增加,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05);健肾方低剂量含药血清合并成骨细胞治疗组与健肾方高剂量含药血清合并成骨细胞治疗组比较差异无统计学意义,但它们与福善美含药血清合并成骨细胞治疗组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:健肾方含药血清合并成骨细胞移植到骨折部位能显著增加VEGFm-RNA的表达,初步认为其促进骨折愈合的作用与促进VEGFmRNA的表达有关。     

益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物作用下成骨细胞分化及BMP-2和OPG的影响

目的研究益骨胶囊含药血清对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)作用下成骨细胞分化活性及对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein2,BMP-2)和骨保护蛋白(osteopro-tegerin,OPG)的影响,探讨益骨胶囊防治骨质疏松(osteoporosis,OP)的作用机制。方法选取10月龄SD雌性大鼠40只,随机分为益骨胶囊高、中、低剂量组及空白组,每组10只。运用大鼠灌胃的方法制备含药血清和对照血清。二次酶消化法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,传代后分为空白对照组、模型组、中药低、中、高剂量组。模型组用AGEs(400mg/L)处理,中药低、中、高剂量组分别用AGEs(400mg/L)和低、中、高剂量含药血清共同处理,分别用pNPP、ELISA、茜素红染色法检测成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、Ⅰ型胶原(typeⅠcollagen,ColⅠ)、骨钙素(bone gla protein,BGP)以及矿化结节,RT-PCR测定成骨细胞中BMP-2、OPG mRNA的表达,ELISA法检测BMP-2、OPG蛋白的表达量。结果原代分离培养的新生大鼠成骨细胞具有典型的成骨细胞特征;与空白对照组比较,模型组成骨细胞(OB)ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达降低,矿化结节减少,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药各剂量组ALP、ColⅠ、BGP、BMP-2、OPG蛋白及BMP-2、OPG mRNA表达升高,矿化结节增加,且随剂量增加而明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论益骨胶囊含药血清提高AGEs作用下成骨细胞分化和矿化能力,提高BMP-2、OPG的表达,这可能是益骨胶囊防治OP的机制之一。     

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和Ⅰ型前胶原αmRNA表达影响.根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR-106/01,采用3H-Tdr法检测细胞增殖,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ型胶原αmRNA的表达,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响;FCM法检测细胞周期.结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异无显著性.续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异也无显著性.细胞凋亡率和G0-G1期细胞比率显著低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05).表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖,防止成骨细胞凋亡,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一.     

菟丝子含药血清对成骨细胞代谢调控的影响

目的探讨菟丝子含药血清对体外培养大鼠成骨细胞代谢调控的影响。方法采用血清药理学方法制备菟丝子含药血清;采用改良的组织块法体外培养大鼠成骨细胞;分别用5%、10%、15%、20%菟丝子含药血清诱导培养成骨细胞24h、48h、72h后,MTT法检测大鼠成骨细胞的增殖情况;用对硝基苯二钠基质动力学法(PNPP)测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性;培养48h后用RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)mRNA的表达。结果 5%和10%菟丝子含药血清在48h和72h能显著促进成骨细胞增殖并提高ALP活性;在48h时10%菟丝子含药血清可促进COL-ⅠmRNA的表达。结论 10%菟丝子含药血清能够明显促进大鼠成骨细胞的增殖与分化,表明其具有促进成骨作用。     

二仙汤含药血清对过氧化氢诱导成骨细胞骨形成的影响

目的探讨二仙汤治疗骨质疏松症的可能作用机制。方法成骨细胞以5×103/孔接种于96孔板,分为正常组、模型组、戊酸雌二醇组和二仙汤高、中、低剂量组,每组6孔。除正常组外其余各组用含600μmol/L过氧化氢(H2O2)的完全培养基培养3h诱导成骨细胞骨形成模型。正常组用空白对照血清培养,戊酸雌二醇组给予8%戊酸雌二醇含药血清培养,二仙汤高、中、低剂量组分别给予8%、4%、2%二仙汤含药血清培养48h,检测成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活力、钙结节生成以及骨形成蛋白2(BMP-2)和骨保护素(OPG)蛋白表达。另外以钙离子通道阻断剂Nifdipine(10μmol/L)进行干预,观察Nifdipine对H2O2刺激成骨细胞后细胞增殖、ALP活性及BMP-2、OPG蛋白表达以及Nifdipine干预下二仙汤含药血清对H2O2刺激成骨细胞后细胞增殖、ALP活性及BMP-2、OPG蛋白表达的影响。结果与正常组比较,模型组细胞增殖、ALP活性、钙结节及BMP-2表达降低(P0.05或P0.01)。二仙汤各剂量组能不同程度促进成骨细胞增殖,提高ALP活力和钙结节生成,促进BMP-2、OPG蛋白表达(P0.05或P0.01)。Nifdipine能提高H2O2刺激下成骨细胞BMP-2、OPG蛋白表达(P0.05或P0.01)。与Nifdipine组比较,二仙汤含药血清和Nifdipine合用则显著提高H2O2刺激下的成骨细胞增殖,降低BMP-2、OPG蛋白表达(P0.01)。结论二仙汤含药血清能明显改善氧化刺激对成骨细胞骨形成的影响,其机制可能与调节钙离子通道有关。     

海螵蛸对骨愈合相关基因表达的影响

为揭示中药海螵蛸在骨折愈合过程中的干预作用,了解海螵蛸的调节靶点,探索建构中药基因组学的途径.通过在大鼠胫骨打孔的方法建立单因素干扰模型,在不同时间点采用原位杂交方法对各类mRNA的变化进行动态观察骨愈合过程中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA、转化生长因子(TGG)-β1 mRNA、骨形态发生蛋白(BMP)-2mRNA、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达情况.结果显示,海螵蛸在骨折早期对Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA、VEGFmRNA、BMP-2mRNA的表达升高,而对Ⅱ型前胶原mRNA、TGF-β1 mRNA的表达量无明显影响;但达到峰值后,Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平下降,VEGFmRNA、TGF-β1mRNA表达量中后期维持于较高水平.表明海螵蛸与血管形成有关,对骨折软骨形成早期具有促进骨诱导的作用,并对成骨细胞的增殖及合成活性有较大影响.     

补肾活血方通过p38 MAPK信号通路影响人成骨细胞功能的机制

目的：观察补肾活血方含药血清对人成骨细胞功能及其对p38 MAPK信号转导通路的活性影响,探讨补肾活血方防治骨质疏松症的作用机制。方法：将人成骨细胞株分为Control组、补肾活血方含药血清组（Z组）、含药血清＋p38抑制剂SB203580组（Z＋SB组）,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测各组成骨细胞的增殖情况,通过PNPP法分析检测成骨细胞碱性磷酸酶（ALP）的活性,采用免疫印迹（Western blot）法检测和磷酸化p38（p-p38）的表达水平。结果：补肾活血方含药血清能刺激成骨细胞的增殖,使分化增强,与Control组比较有显著性差异（P〈0.01）;阻断p38 MAPK信号转导通路后,与Z组比较,对成骨细胞的增殖无明显抑制（P〉0.05）,而对成骨细胞的分化功能有显著抑制作用（P〈0.01）;Western blot结果显示,补肾活血方含药血清能刺激p-p38表达,阻断p38 MAPK信号转导通路后,p-p38含量明显减少（P〈0.01）。结论：补肾活血方可能通过p38 MAPK通路调控促进成骨细胞分化的功能,起到防治骨质疏松症的作用。     

生龙接骨胶囊对骨折大鼠BMP-Smad信号通路的影响

目的 探讨生龙接骨胶囊对骨折大鼠BMP-Smad信号通路的影响。方法 将大鼠随机分为假手术组、模型组和生龙接骨胶囊组(600 mg/kg),建立胫骨骨折大鼠模型，给药4周后，苏木精和伊红(HE)染色评估骨折区域形态，免疫组化染色检测骨折区域Col-Ⅰ表达，Western blot法检测骨折区域组织BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF蛋白表达。制备生龙接骨胶囊含药血清，以此处理成骨细胞，CCK-8实验检测成骨细胞活力，试剂盒检测ALP活性，RT-qPCR法检测细胞BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF mRNA表达。结果 X线片、HE染色和Col-Ⅰ免疫组化染色均显示生龙接骨胶囊促进了胫骨骨折愈合。与模型组比较，生龙接骨胶囊组大鼠骨折区域组织BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF蛋白表达均升高(P<0.05)。与对照组比较，生龙接骨胶囊含药血清组成骨细胞活力、ALP活性和BMP-2、Smad1、Smad4、RUNX-2、OSX、VEGF mRNA表达均升高(P<0.05)。结论 生龙接骨胶囊...     

补肾调冲方含药血清对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌和mRNA表达的影响

目的 运用血清药理学方法观察补肾调冲方对大鼠卵巢颗粒细胞增殖、激素分泌功能以及抑制素B (INHB)、胰岛素样生长因子-1 (1GF-1) mRNA表达的影响.方法向培养的SD大鼠卵巢颗粒细胞中分别加入10％空白血清(对照组)、人转基因重组促卵泡激素(hFSH)含药血清(阳性对照组)、补肾调冲方含药血清(补肾调冲方组),培养48 h,以闪烁计数器测定3H-TdR掺入DNA的量,流式细胞仪测定细胞周期分布,放射免疫法测定培养液中雌二醇(E2)和孕激素(P)水平,并采用RT-PCR法测定1NHB、IGF-1 mRNA的表达量.结果补肾调冲方含药血清可剂量相关地促进3H-TdR掺入颗粒细胞DNA的量.与对照组相比,补肾调冲方各含药血清组G0/G1期细胞均明显减少,而S期细胞则明显增多;E2、P的量明显升高;颗粒细胞INHB、IGF-1 mRNA表达量均明显增多,且呈剂量相关性.结论补肾调冲方含药血清能明显促进卵巢颗粒细胞的增殖、增强甾体激素的分泌功能,该作用可能通过增强INHB、IGF-1基因的表达,从内分泌和自分泌两条途径调节卵巢功能而实现的.     

肾系膜细胞在补肾药物基础上进一步上调成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达

目的:观察系膜细胞是否影响补肾药物对成骨细胞的作用。方法:空白组大鼠灌服蒸馏水,药物组大鼠以熟地鳖甲1:1配比制成浸膏,3.3g浸膏/kg体质量/d灌服,3d后取血离心,获得无药血清和熟地鳖甲含药血清。无药血清、熟地黄鳖甲含药血清及肾系膜细胞处理的熟地鳖甲含药血清作用于成骨细胞3d,MTT法观察成骨细胞增殖率,实时荧光定量PCR检测成骨细胞Ⅰ型胶原(collagenⅠ)和核心结合因子α1(cbfα1)基因表达。结果:熟地黄、鳖甲含药血清可促进成骨细胞增殖,经肾系膜细胞处理后的含药血清进一步促进细胞增殖(P0.05),荧光定量PCR显示含药血清组成骨细胞collagenⅠ和cbfα1基因表达量明显上调(P0.05),经肾系膜细胞处理后的含药血清2种基因表达量进一步增加(P0.05)。结论:肾脏固有细胞——肾系膜细胞可在补肾药物基础上进一步促进成骨细胞的增殖和成骨相关基因的表达。     

补肾健脾活血方对成骨细胞增殖分化及BMP-2、Smad5影响的研究

目的:研究中药复方补肾健脾活血方对大鼠成骨细胞增殖分化及骨形成蛋白-2 (BMP-2)、Smad5表达的影响。方法:将60只3月龄雌性SD大鼠随机分为空白组、补肾健脾活血方组、阿仑膦酸钠组,每组20只。制备对应的含药血清后分别干预成骨细胞,采用细胞计数法(CCK-8)检测成骨细胞增殖活性,碱性磷酸酶染色(ALP)检测成骨细胞分化能力,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测BMP-2、Smad5 m RNA表达,蛋白免疫印迹法检测BMP-2、Smad5蛋白表达。结果:干预12 h、24 h、48 h时,各组细胞活性逐渐增强,干预48 h后各组细胞活性均降低。干预48 h时,与空白组、阿伦磷酸钠组比较,补肾健脾活血方组细胞活性最强(P<0.05)。补肾健脾活血方组成骨细胞ALP染色最深,明显深于空白组和阿仑膦酸钠组。与空白组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);阿仑膦酸钠组BMP-2 mRNA表达降低(P<0.05)。与阿仑膦酸钠组比较,补肾健脾活血方组BMP-2、Smad5蛋白及mRNA表达升高(P<0.05)。结...     

龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制研究

目的:研究龟鹿二仙胶对成骨细胞I型胶原及TGF-β表达的影响,探索龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症的机制。方法:SD大鼠随机分为对照组、龟鹿二仙胶低剂量组、中剂量组、高剂量组、骨化三醇组,每天灌胃1次,持续7 d,末次给药2 h后腹主动脉采血,制成含药血清作用于大鼠成骨样细胞ROS17_2.8株。用MTT法及活细胞形态观察含药血清对成骨细胞增殖及凋亡的影响。用各组含药血清条件培养基培养成骨细胞,应用Western Blot法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-β蛋白表达水平,采用RT-PCR法检测各组成骨细胞I型胶原及TGF-βmRNA的表达。结果:(1)MTT结果显示:龟鹿二仙胶各组的成骨细胞无明显增殖。骨化三醇组的成骨细胞有明显增值(P<0.05)。细胞染色提示:骨化三醇组及龟鹿二仙胶组的成骨细胞无显著的凋亡。(2)RTPCR法结果显示:骨化三醇组与龟鹿二仙胶各组COL1A1及COL1A2mRNA的水平均有增加(P<0.01);龟鹿二仙胶中、高剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加较明显(P<0.05),龟鹿二仙胶高剂量组较中剂量组COL1A1及COL1A2mRNA水平增加不明显(P>0.05);骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平无明显变化(P>0.05);龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2mRNA水平均有增加(P<0.01);且龟鹿二仙胶中、高剂量组TGF-β1、TGF-β2mRNA水平增加差异无统计学意义(P>0.05)。(3)Western blot结果提示:第24 h,龟鹿二仙胶高剂量组能使成骨细胞COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.05)。第48 h,骨化三醇组、龟鹿二仙胶各组均能使成骨细COL1A1及COL1A2蛋白合成增加(P<0.01);龟鹿二仙胶高、中剂量组之间比较差异没有统计学意义(P>0.05);第24、48 h,骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);在24 h,龟鹿二仙胶高剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成有显著增强(P<0.01),龟鹿二仙胶低剂量和中剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P>0.05);48 h,龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成增加(P<0.01)。龟鹿二仙胶高中剂量组之间无显著差异(P>0.05)。结论:龟鹿二仙胶治疗骨质疏松症机制可能通过调节细胞因子TGF-β,促进I型胶原的表达,为探讨中药促胶原形成治疗骨质疏松提供细胞及分子生物学依据。     

骨痛仙胶囊对兔I、Ⅱ型胶原蛋白mRNA影响的研究

观察骨痛仙胶囊对骨折愈合过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA的转录水平的影响,分析其促进骨折愈合的分子机理。方法健康成年家兔45只,做双侧桡骨骨折模型,随机分成治疗组、阳性对照组、模型组,分别给予骨痛仙胶囊、骨折挫伤散和生理盐水灌胃给药,术后1周、2周、4周后处死家兔取材,用原位杂交法测定骨Ⅰ、Ⅱ型胶原表达,与模型组、阳性对照组比较进行病理学观察。结果各时间段治疗组Ⅰ型胶原mRNA的转录水平均增强,明显高于阳性对照组和模型组(P<0.05)。与对照组和模型组相比,给药组Ⅱ型胶原mRNA的转录水平第1周明显提高,第2、4周Ⅱ型胶原明显衰落,与模型组、阳性对照组相比有统计学意义(P<0.05)。结论骨痛仙胶囊与阳性对照组骨折挫伤散均能调节骨折愈合中的相关胶原基因的表达,促进骨折愈合;两组之间相比,骨痛仙胶囊调节骨折愈合中的Ⅰ、Ⅱ型胶原基因表达明显优于阳性对照组。     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

骨痛仙胶囊对兔Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白mRNA影响的研究

观察骨痛仙胶囊对骨折愈合过程中Ⅰ、Ⅱ型胶原mRNA的转录水平的影响,分析其促进骨折愈合的分子机理.方法:健康成年家兔45只,做双侧桡骨骨折模型,随机分成治疗组、阳性对照组、模型组,分别给予骨痛仙胶囊、骨折挫伤散和生理盐水灌胃给药,术后1周、2周、4周后处死家兔取材,用原位杂交法测定骨Ⅰ、Ⅱ型胶原表达,与模型组、阳性对照组比较进行病理学观察.结果:各时间段治疗组Ⅰ型胶原mRNA的转录水平均增强,明显高于阳性对照组和模型组(P＜0.05).与对照组和模型组相比,给药组Ⅱ型胶原mRNA的转录水平第1周明显提高,第2、4周Ⅱ型胶原明显衰落,与模型组、阳性对照组相比有统计学意义(P＜0.05).结论:骨痛仙胶囊与阳性对照组骨折挫伤散均能调节骨折愈合中的相关胶原基因的表达,促进骨折愈合;两组之间相比,骨痛仙胶囊调节骨折愈合中的Ⅰ、Ⅱ型胶原基因表达明显优于阳性对照组.     

菟丝子含药血清促进骨髓间充质干细胞增殖的效应及机制

目的:探讨菟丝子含药血清体外对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响及机制研究。方法:分离、培养大鼠MSCs,菟丝子含药血清诱导培养MSCs 72h后,MTT法检测大鼠MSCs增殖情况;RT-PCR检测增殖过程中MSCs不同细胞因子mRNA的表达;Real-time PCR检测骨形态蛋白-2(BMP-2)mRNA表达;Western-blot检测BMP-2蛋白表达。结果:10%菟丝子含药血清具有显著促进MSCs增殖的作用(P<0.05),并显著促进BMP-2 mRNA的表达(P<0.05)。结论:10%菟丝子含药血清促进MSCs增殖的作用,可能与其促进BMP-2 mRNA表达有关。