异基因造血干细胞移植患者外周血CD4+ T细胞中STAT3启动子区 DNA甲基化水平与急性移植物抗宿主病的关系

目的：探讨异基因造血干细胞移植患者外周血CD4+ T细胞中STAT3启动子区DNA甲基化水平与急性移植 物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的关系。方法：收集行同胞全相合异基因造血干细胞移植的40例患 者的血液样本,ELISA检测各组患者血清IL-10,TGF-β1,IL-17A,IL-17F等细胞因子水平;实时定量PCR检测各组患 者外周血CD4+ T细胞中Treg(Foxp3,CTLA4,IL-10,TGF-β1)和Th 17(RORγt,IL-17A,IL-17F)相关基因的转录水平; 实时定量PCR和Western印迹检测各组患者STAT3的表达水平;亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP) 法检测各组患者STAT3基因启动子区DNA甲基化水平。结果：与未发生aGVHD患者比较,aGVHD患者血清中IL-10 及TGF-β1水平明显降低,IL-17A及IL-17F水平明显升高;aGVHD患者外周血CD4+ T 细胞中Foxp3,CTLA4,IL-10, TGF-β1转录水平明显降低,RORγt,IL-17A,IL-17F转录水平明显升高;aGVHD患者外周血CD4+ T细胞中STAT3的表 达水平明显升高,STAT3启动子区DNA甲基化水平明显降低,且STAT3表达水平与其启动子区DNA甲基化水平呈明显 负相关。结论：Treg/Th17的比例失衡是异基因造血干细胞移植后患者发生aGVHD的重要因素,STAT3启动子区DNA 低甲基化可能介导STAT3的过度表达,参与Treg/Th 17的比例失衡。     

异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病的诊治

目的：探讨异基因造血干细胞移植后并急性移植物抗宿主病(aGVHD)的特点及有效防治。方法：2例(急性粒细胞白血病、急性粒单细胞白血病各1例)采用改良的马利兰、环磷酰胺方案进行预处理后，输注供者骨髓血或外周血干细胞。1例(慢性粒细胞白血病)予马法兰 阿糖胞苷 环磷酰胺 足叶乙甙方案预处理，回输外周血干细胞。aGVHD的预防均用环胞菌素A、甲氨蝶呤，出现GVHD后加用甲基强的松龙治疗。结果：移植后均获造血重建，发生较为严重的aGVHD2例。结论：联合各种免疫抑制剂，能有效防治GVHD，使患者获得长期造血重建。     

异基因造血干细胞移植后肠道移植物抗宿主病

目的 观察异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)的临床特征、治疗及转归. 方法 15例(6例急性髓系白血病,5例急性淋巴细胞白血病,3例慢性髓系白血病和1例多发性骨髓瘤)患者行allo-HSCT.预处理方案包括:4例氟达拉滨(Flu)+阿糖胞苷(Ara-c)+全身放疗(TBI)+环磷酰胺(CY)、5例TBI+ CY+依托泊苷(VP-16)、2例TBI+ CY、4例白消安(Bu)+CY.以环孢素A、霉酚酸酯、抗淋巴细胞球蛋白加短程甲氨蝶呤预防aGVHD. 结果 15例患者发生肠道aGVHD的中位时间为移植后39(19-143)d,Ⅲ度aGVHD 8例,Ⅳ度aGVHD7例.经治疗,7例患者获得完全缓解,3例部分缓解,5例疗效欠佳,治疗总有效率为66.7％. 结论 肠道aGVHD是allo-HSCT后常见的最严重并发症之一,有效治疗直接关系到疾病的预后.     

异基因造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病与肺损伤的关系

目的 分析研究异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后急性移植物抗宿主病(Agvhd)患者CT影像学特征和Agvhd诱导肺损伤的发病机制.方法 对47例Ⅱ～Ⅳ度Agvhd患者进行胸部CT检查及Agvhd发生时血清干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)测定,4例抗Agvhd治疗后肺损伤疗效不佳患者进行肺组织活检,生存期＞6个月的患者定期肺功能和CT检查.结果 47例患者在Agvhd后3 d内CT显示20例异常,其中17例疑诊为Agvhd诱导肺损伤(5例弥漫性间质渗出、7例弥漫性间质和肺泡渗出、5例弥漫性间质和部分小叶肺泡渗出);此外,9例患者有双侧胸腔和心包积液,4例伴心肌肥厚.血清IFN-γ和TNF-a水平在有肺损伤和无肺损伤患者分别为:(6.9±1.8)μg/L、(400±102)μg/L和(6.3±1.2)μg/L、(428±83)μg/,L,两者比较差异无统计学意义(均P＞0.05).肺组织病理显示组织结构破坏、上皮细胞损伤、间质纤维化和以T细胞或巨噬细胞为主的浸润.Agvhd治疗与肺损伤治疗有效率呈正相关(r=0.771,P=0.01).结论 肺是Agvhd作用的靶器官之一,T细胞、巨噬细胞和IFN-Γtnf-α与Agvhd造成肺损伤有关,Agvhd肺损伤可迁延为晚期非感染性肺损伤.     

造血干细胞移植后的移植物抗宿主病

本院14例异基因骨髓移植中发生急性移植物抗宿主病7例(50％),其中Ⅳ级2例(14.3％)。Ⅰ～Ⅱ级5例;慢性移植物抗宿主病2例(14.3％)。9例胎肝移植中1例发生移植物抗宿主病Ⅰ级。1例自体骨髓移植后因输未经照射的异体血引起急性移植物抗宿主病。收集1988年至1991年12月国内文献报告异基因骨髓移植57例,发生急性移植物抗宿主病44例(77.19％),Ⅲ级以上12例(20.05％),慢性移植物抗宿主病14例(24.56％)。初步分析我国移植物抗宿主病的发病率与欧美早期报告近似。本文结合国内外文献报告介绍了移植物抗宿主病的防治措施。     

异基因造血干细胞移植后肠道急性移植物抗宿主病24例临床分析

目的 观察异基因造血干细胞移植术后肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)的临床特征、治疗及转归.方法 24例患者中7例接受同胞间白细胞抗原(HLA)全相合造血干细胞移植、17例接受HLA半相合造血干细胞移植,预处理方案依据具体情况选择FBA(氟达拉滨、白消安、阿糖胞苷)、Bu/Cy(白消安/环磷酰胺)、CCNU+Bu+C...     

异基因造血干细胞移植后发生胃肠道急性移植物抗宿主病的危险因素分析

目的 探讨异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation, allo-HSCT)后发生胃肠道急性移植物抗宿主病(gastrointestinal acute graft-versus-host disease, GI-GVHD)的临床特征、相关危险因素和预后情况。方法回顾性分析2017年1月~2020年7月在徐州医科大学附属医院行allo-HSCT的201例患者的临床资料,根据GI-GVHD发生情况进行分组。单因素Logistic回归分析评价GI-GVHD发生的相关因素,多因素Logistic回归分析评价其发生的独立危险因素,进一步分析GI-GVHD对生存及预后的影响。结果 接受allo-HSCT的201例患者中,36例(17.9%)发生GI-GVHD,发生中位时间为34(9～88)天,中位生存时间为228(21～1759)天,总体生存率为36.1%。随访中发生GI-GVHD患者的总生存期(overall survival, OS)较未发生者明显降低(36.1% vs 75.0%),差异有统计学意义(P=0.004)。GI-GVHD患者以持续性恶心、呕吐、腹痛、腹泻和消化系统出血等症状为主,常伴有皮肤、肝脏等靶器官的损害。单因素Logistic回归分析结果显示,供受者性别关系(P=0.012)、移植类型(P=0.054)、人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)位点不合程度(P=0.015)、预处理期间使用碳青霉烯类抗生素(P=0.029)、预处理期间使用碳青霉烯类超过7天(P=0.007)、早期血流感染(bloodstream infection, BSI,P=0.023)是GI-GVHD发生的影响因素。多因素Logistic回归分析结果显示,女性供男性(P=0.009,OR=8.866)、非亲缘不全相合移植(P=0.043,OR=16.532)、预处理期间使用碳青霉烯类超过7天(P=0.023,OR=0.079)、早期BSI(P=0.008,OR=0.165)是影响GI-GVHD发生的独立危险因素。受者年龄、疾病类型、有否基础疾病、移植物类型、移植时长、预处理方案中是否加用抗胸腺细胞球蛋白(antithymocyte globulin, ATG)、GVHD预防方案、回输单个核细胞(mononuclear cell, MNC)及CD34⁺细胞数量、粒系和巨核系重建时间、发生其他类型的GVHD等均不是GI-GVHD发生的危险因素。生存分析结果显示,GI-GVHD组患者较非GI-GVHD组患者OS明显降低(36.1% vs 75.0%),差异有统计学意义(P=0.004)。结论 女性供男性、非亲缘不全相合移植、预处理期间碳青霉烯类治疗超过7天和早期发生BSI可能是导致GI-GVHD发生的主要危险因素,移植后发生GI-GVHD的患者生存率会降低。     

异基因造血干细胞移植后中枢神经系统病变的移植物抗宿主病一例

异基因造血干细胞移植后神经系统并发症的原因很多,包括中枢神经系统感染、代谢异常、药物毒性、脑血管事件、EB病毒相关的淋巴增殖性疾病、血液病中枢神经系统复发等。移植物抗宿主病（graftversushostdisease,GVHD）是异基因造血干细胞移植的主要并发症之一。以中枢神经系统受累为主要表现的GVHD国内很少报道。     

异基因造血干细胞移植后以眼部疾患为首发表现急性移植物抗宿主病

目的分析总结慢性粒细胞白血病患者异基因外周血干细胞移植过程。方法预处理采用BuCy方案(马利兰4mg.kg-1.d-1×4d,环磷酰胺60mg.kg-1.d-1×2d)。移植物抗宿主病(GVHD)预防采用环胞素A(CsA)联合氨甲碟呤(MTX)、骁悉(MMF)。结果 16d造血重建。 24d开始出现GVHD,首先表现为眼部疾患,其后累及皮肤、胃肠道、肝脏、膀胱及骨髓等器官。 34d外周血DNA基因型转变为供者型; 74d血型完全转变为供者型。结论GVHD临床表现多样,以眼部疾患为首发表现较少见。早期识别和正确处理GVHD是提高移植成功率的关键。     

异基因造血干细胞移植后超急性移植物抗宿主病的临床分析

目的：探讨异基因造血干细胞移植（allo-SCT）后超急性移植物抗宿主病（hGVHD)发生的危险因素、临床表现、治疗方法及其与预后的关系。方法;总结了118例120次的异基因造血干细胞移植的临床资料。结果：有17例发生了hGVHD(14.17%),临床表现为皮疹（13／17）、发热（8／17）、肝功能损害（6／17）和消化道症状（13／17）,另有12例仅有单一器官受损,归为非典型hGVHD。经免疫抑制剂治疗后有25例病情获得控制,但总的生存率仍较差,典型hGVHD、非典型hGVHD和无hGVHD组2年的生存率分别为30．50％,40．00％和61．67％（P＜0．01）。HLA配型不合,移植前疾病处于进展期,女性患者,供受者性别不一致为发生hGVHD的危险因素。结论：hGVHD为allo-SCT后较常见的一种并发症,严重影响生存率。     

Ex vivo expansion of regulatory T cells for clinical applications against graft-versus-host disease in allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Objective To review the characteristics of regulatory T cells （Tregs） and ex vivo expansion of Tregs for treatment of graftversus-host disease （GVHD）.Data sources The data used in this review were retrieved from PubMed （1970-2013）.The terms ＂ex vivo expansion＂,＂regulatory T cell＂,and ＂graft-versus-host disease＂ were used for literature search.Study selection The publications about the characteristics of Tregs,ex vivo expansion of Tregs and clinical applications of Tregs against GVHD were identified,retrieved and reviewed.Results Tregs can be classified as natural Tregs （nTregs） and induced Tregs （iTregs）.Both subsets share most Treg features.Given their immunosuppressive property,Tregs have been tested for their capability of preventing GVHD.The bottleneck of Treg therapy is the limited numbers of naturally existing Tregs.To solve this problem,ex vivo expansion of nTregs or iTregs has been executed.The initial data indicate Treg therapy is effective in reducing GVHD without compromising graft-versus-leukemia （GVL）.Conclusion Ex vivo expansion of Tregs is a reliable way to prepare sufficient number of Tregs for management of GVHD.     

异基因造血干细胞移植后重度肠道急性移植物抗宿主病的临床分析

目的 探讨异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后重症肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生情况及预后.方法 2例慢性粒细胞白血病(慢性期)患者接受异基因造血干细胞移植,预处理方案为BU/CY、GIAC方案,以CsA、MMF、ATG加短程MTX预防aGVHD.结果 2例分别于移植后21、40d并发重度肠炎,诊断为肠道aGVHD,予以糖皮质激素为主的综合治疗包括FK506、抗CD25单克隆抗体后缓解.结论 重度肠道aGVHD是异基因造血干细胞移植后常见的最严重并发症之一,有效治疗直接关系到疾病的预后.     

供者调控T细胞对异基因造血干细胞移植后造血与免疫重建、移植物抗宿主病发生及生存的影响

目的 研接受不同数量供者CD4 CD25 调控T细胞(TReg)移植对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者移植物抗宿主病(GVHD)的发生和造血与免疫重建的影响.方法 对30例接受allo-HSCT患者采用流式细胞仪测定移植物中的TReg值和移植后患者不同时间点外周血T淋巴细胞亚群及TReg.按移植供者TReg绝对数是否大于或等于10.0×10/kg为标准分为高TReg移植组和低TReg移植组,比较两组患者移植后造血与免疫重建、TReg重建、GVHD发生及无病生存率有无差异.结果 高TReg组的白细胞(WBC)和血小板(PLT)重建时间分别为 (8.62±2.29)d和 (12.69±5.74)d,低TReg组分别为 (8.88±2.71)d和 (15.18±6.71)d(P值分别为0.778和0.613),两组间WBC和PLT重建时间无显著性差异.高TReg组患者移植后 15 dCD4 CD3 ,CD45RO CD4 T细胞重建, 30dCD3 、CD4 CD3 T细胞重建明显快于低TReg组患者(P值分别为0.039、0.024、0.014、0.020).高TReg组患者移植后 15 dCD4 CD25 TReg重建, 180 d与低TReg组相比明显加快(P值分别为0.013、0.005).高TReg组和低TReg组患者急性GVHD发生率分别为61.54%(8/13)和94.12%(16/17),两组统计有显著性差异(P=0.027),移植的供者TReg数与急性GVHD的发生程度呈负相关(rs=0.393,P=0.032).高与低TReg组无病生存率分别为(60.40±16.10)%和(72.00±2.00)%,无显著性差异(P=0.818).结论 供者TReg能促进allo-HSCT后免疫重建及CD4 CD25 TReg重建,降低移植后急性GVHD的发生率.     

Expressions of tissue factor and tissue factor pathway inhibitor in patients with acute graft-versus-host disease after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

This study examined the expressions of human serum tissue factor （TF） and tissue factor pathway inhibitor （TFPI） in patients with acute graft-versus-host disease （aGVHD） after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation （allo-HSCT） and their clinical significance. The serum TF and TFPI levels were detected by ELISA in 28 allo-HSCT recipients before and after the transplanta-tion and the changes of TF and TFPI levels were dynamically monitored at different phases of the disease. No significant differences in the serum TF and TFPI levels were found in allo-HSCT recipi-ents in the absence of aGVHD or with gradeⅠaGVHD before and after the transplantation. The lev-els of serum TF and TFPI were substantially increased in the patients with gradeⅡ aGVHD at the peak of aGVHD （P〈0.05） and they were even higher in the patients with grade Ⅲ–Ⅳ aGVHD （P〈0.01）. When the conditions became stable after treatment with immunosuppressive agents, the serum TFPI level was decreased to the baseline level （P〉0.05） and the TF level was lowered but still higher than the baseline level （P〈0.05）. It was concluded that the levels of serum TF and TFPI were increased significantly in the patients with grade Ⅱ–Ⅳ aGVHD after allo-HSCT and decreased markedly after the treatment. Monitoring the levels of serum TF and TFPI in the patients with allo-HSCT is important to predict the occurrence, outcome and prognosis of aGVHD.     

Allo-HSCT患者术后环孢素A血药浓度与急性移植物抗宿主病的关系

目的研究异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)患者环孢素A(CsA)血药浓度水平与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系。方法回顾性分析2007年1月至2011年12月期间广州医学院第一附属医院46例allo-HSCT患者术后的临床资料,分别比较术后aGVHD与无aGVHD患者的性别、年龄、体重、身高以及术后不同时段CsA血药浓度水平的差异,并且比较Ⅰ~Ⅱ级与Ⅲ~Ⅳ级aGVHD患者的CsA血药浓度水平差异。结果 39.13%(18/46)的患者发生aGVHD。aGVHD组与无aGVHD组间患者的性别、年龄、体重、身高以及术后第三个月CsA血药浓度的差异均无统计学意义(P>0.05);但两组患者术后第一、二、三、四周和第一、二个月CsA血药浓度的差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ~Ⅱ级与Ⅲ~Ⅳ级aGVHD患者的CsA血药浓度差异有统计学意义(P<0.05)。结论 allo-HSCT患者aGVHD的发生与术后前两个月CsA血药浓度水平具有明显相关性。术后发生Ⅲ~Ⅳ级aGVHD患者的CsA血药浓度明显低于Ⅰ~Ⅱ级aGVHD的患者,说明低CsA血药浓度更易导致Ⅲ~Ⅳ级aGVHD的发生。     

异基因造血干细胞移植后IL-2与急性移植物抗宿主病关系的研究

目的：研究异基因造血干细胞移植（allo-HSCT)后细胞因子IL－2的变化与急性移植物抗宿主病（aGVHD)的关系，探讨IL－2在临床aGVHD发病中的作用。方法：30例恶性血液病患者行allo-HSCT，采用双夹心ELISA法检测aGVHD发生时15例患者外周血单个核细胞分泌的IL－2浓度，采用逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）法检测IL－2的基因表达，并与未发生aGVHD患者进行比较。结果：所有患者均获得造血重建，15例发生aGVHD（10例Ⅰ度aGVHD，5例Ⅲ-Ⅳ度aGVHD），发生aGVHD患者的IL－2浓度以及基因表达阳性率均显著高于未发生aGVHD者，并且IL－2浓度随着aGVHD严重程度的增高而增高。结论：IL－2在临床aGVHD发生中起重要的正向调节作用。     

小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立

目的：建立一个德定可靠的异基因骨髓移植（allogeneic bone marrow transplantation,Allo-BMT）急性移植物抗宿主病（acute graft-vetsus-host disease,aGVHD）动物模型,为Allo-BMT中aGVHD研究提供理想的实验平台。方法：以雄性C57BL／6（H-2b）为供鼠,雌性BALB／C（H-2d）为受鼠,受鼠致死性全身照射（total body irradiation,TBI）（8.0Gy）预处理后,在移植物中混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞以引起不同程度的aGVHD。根据存活期、外周血白细胞计数、临床表现及病理检查等判断aGVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现aGVHD,75％的小鼠长期存活（〉30d）。混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞的Allo-BMT小鼠出现aGVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合组小鼠,均可在相对集中的时间内（8-15d）观察到典型的aGVHD临床和病理改变。结论：建立Allo-BMT aGVHD模型需要加入一定比例的脾细胞,供鼠骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合进行的Allo-BMT,可作为理想的aGVHD动物模型。