人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响

目的: 探究人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡对巨噬细胞极化的影响。方法: Dil标记神经干细胞微囊泡,流式细胞仪和共聚焦显微镜观察THP-1巨噬细胞对微囊泡的内化;实时荧光定量PCR筛选微囊泡最适浓度;100 ng/mL 脂多糖刺激THP-1细胞6 h后,微囊泡处理12 h,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞炎性因子IL-1β,肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)以及IL-6的mRNA表达水平;微囊泡处理24 h, 蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶 (inducible nitric oxide synthase, iNOS)和精氨酸酶1 (Arginase-1, Arg-1)蛋白表达水平;流式细胞术检测THP-1巨噬细胞M1极化表面标志CD86表达。结果： THP-1巨噬细胞在12 h和24 h均能明显内化神经干细胞微囊泡;0.12 μg/mL微囊泡具有最适调控作用;与未处理细胞相比,脂多糖处理后明显增加THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白,Arg-1蛋白表达差异无统计学意义(P<0.05);经神经干细胞微囊泡处理后THP-1细胞IL-1β,TNF-α,IL-6等mRNA和iNOS蛋白表达明显降低(P<0.05);与未处理细胞相比,脂多糖和微囊泡处理后THP-1巨噬细胞CD86表达差异无统计学意义。结论： 人胚胎干细胞源神经干细胞微囊泡能够减少THP-1细胞炎性细胞因子和iNOS表达,抑制巨噬细胞M1极化。     

血管内皮细胞生长因子在抗结核免疫中的作用及机制

【目的】 探讨血管内皮细胞生长因子(VEGF)对巨噬细胞抗结核免疫作用的影响。【方法】 为了研究VEGF与结核病(TB)之间的相关性,分离健康人和肺结核病人的外周血单核细胞(PBMC),Real-time PCR检测VEGF的表达水平;体外实验中,用卡介苗(BCG)感染佛波酯(PMA)诱导分化的THP-1细胞,PCR检测VEGF的表达水平?进一步探讨VEGF在抗结核免疫中的作用,分别用BCG单独处理或BCG与VEGF共同处理THP-1诱导分化的细胞,Real-time PCR检测促炎因子TNF-α,IL-6,IFN-γ,MIP-2的表达水平;Griess法检测培养上清中一氧化氮(NO)的产生。【结果】 肺结核病人的PBMC中VEGF表达水平相对于健康人明显升高,BCG感染THP-1诱导分化的巨噬细胞后,VEGF 表达水平上调;VEGF显著增强BCG感染的巨噬细胞中TNF-α,IL-6,IFN-γ,MIP-2的表达和NO的产生。【结论】 肺结核病人的PBMC和BCG感染的巨噬细胞中VEGF表达均显著上调,并可能通过影响促炎因子和NO的产生调节巨噬细胞的抗菌活性,提示VEGF可能是治疗结核病的一个靶点。     

低氧微环境下siRNA靶向沉默HIF 2α基因对前列腺癌PC 3细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察体外低氧条件下缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)在人前列腺癌细胞PC-3中的表达情况,并研究siRNA沉默HIF-2α基因对前列腺癌PC-3细胞生长及凋亡的影响.方法 在体外培养的PC-3细胞中加入化学诱导剂CoCl2建立低氧模型,采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western印迹法检测CoCl2诱导HIF-2αmRNA和蛋白表达的时-效和量-效关系.合成HIF-2αsiRNA片段并转染前列腺癌PC-3细胞,采用RT-PCR及Western印迹法检测HIF-2αsiRNA对HIF-2α基因表达的影响,采用MTT法检测转染HIF-2αsiRNA后对PC-3细胞生长的抑制情况,采用流式细胞仪检测RNA干扰对PC-3细胞凋亡的影响.结果 (1)低氧可诱导PC-3细胞的HIF-2αmRNA表达,与常氧组比较,低氧12,24及48 h组的HIF-2αmRNA和蛋白表达量逐渐升高(P<0.05).100μmol/L的CoCl2作用48 h可作为最佳前列腺癌细胞PC-3低氧模型.(2)低氧+HIF-2αsiRNA干扰组的HIF-2αmRNA和蛋白表达水平明显低于低氧+阴性对照组和低氧组(P<0.05),而低氧+阴性对照组与低氧组的HIF-2αmRNA和蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05).低氧+HIF-2αsiRNA干扰组细胞增殖受抑制、细胞凋亡增加(P<0.05),而常氧组、低氧组、低氧+阴性对照组细胞增殖活力和凋亡差别均无统计学意义(P>0.05).     

rL-hIFN-λ1对THP-1源巨噬细胞极化作用的影响

［摘要］目的: 探讨表达IFN-λ1的重组新城疫病毒rL-hIFN-λ1对巨噬细胞极化的影响。方法: 分别用佛波酯、IFN-γ、脂多糖、IL-4和rL hIFN-λ1刺激人外周血THP-1单核细胞系,构建THP-1 M0、THP-1 M1、THP-1 M2、THP-1 rL-hIFN-λ1型巨噬细胞模型。显微镜下观察M0、M1、M2型巨噬细胞形态特点;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组巨噬细胞 M1/M2相关基因表达;免疫荧光检测细胞表面分子CD86、CD163;ELISA检测分泌因子IL-2、IL-13、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;并采用免疫组织化学法检测不同临床分期肺癌组织中巨噬细胞浸润表型。结果： 诱导得到的M0、M1、M2型巨噬细胞形态差异显著。rL-hIFN-λ1诱导的巨噬细胞中,M1型巨噬细胞标志物表达明显升高,M2型巨噬细胞标志物表达显著降低,同时其可促进M1型巨噬细胞因子释放,抑制M2型巨噬细胞因子释放。随着肺癌临床分期进展,M1型巨噬细胞浸润逐渐减少。 结论： rL-hIFN-λ1可诱导巨噬细胞向M1型巨噬细胞极化。     

低氧/低氧诱导因子-1α通过TGF-β1诱导人肝内胆管上皮细胞上皮间质转化

目的：探讨低氧/低氧诱导因子-1α（HIF-1α）对人肝内胆管上皮细胞（HIBEC）上皮-间质转化（EMT）的诱导作用及其分子机制。方法：HIBEC在1%氧浓度的低氧环境中培养,分析细胞迁移、侵袭能力的变化,以及EMT相关标志E-钙黏蛋白和S100A4的表达水平。以HIF-1α的siRNA和转化生长因子-β1（TGF-β1）抑制剂LY364947分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1,再重复上述实验。结果：与常氧培养相比较,低氧条件下,HIBEC的细胞迁移和侵袭能力明显增强,上皮细胞标志物E-钙黏蛋白表达明显下降,间质细胞标志物S100A4表达明显升高（P＜0.05）。以HIF-1α的siRNA和TGF-β1分别沉默或抑制HIF-1α和TGF-β1后,上述低氧引起的HIBEC生物学变化均受到明显抑制（P＜0.05）。结论：低氧可以通过活化HIF-1α诱导HIBEC发生EMT,这种诱导作用主要是通过TGF-β1完成的。     

α-胞衬蛋白siRNA对干燥综合征模型NOD小鼠IFN-γ和IL-4表达水平及基因沉默效果的影响

目的： 观察α-胞衬蛋白（α-Fodrin）特异性小干扰RNA（siRNA）对干燥综合征（SS）动物模型非肥胖糖尿病(NOD）小鼠细胞因子IFN-γ和IL-4表达水平的影响,探讨α-Fodrin siRNA治疗NOD的可能性。方法： 12只NOD雌性小鼠随机分为对照组、空载体组、α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组,每组3只。将成功构建的α-Fodrin siRNA1和α-Fodrin siRNA2表达载体分别经尾静脉注射α-Fodrin siRNA1组和α-Fodrin siRNA2组NOD小鼠,对照组和空载体组小鼠分别注射同等剂量的PBS和pGFP-V-RS空载体,测定每周每只小鼠的饮水量。注射后1、3、5和7 d,各组小鼠尾部采血,ELISA法检测4组小鼠血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的表达水平, RT-PCR法检测NOD小鼠肺脏组织中α-Fodrin mRNA的表达水平,免疫组织化学法检测NOD小鼠肺脏组织中α-Fodrin的表达水平。结果：4组小鼠饮水量比较差异无统计学意义(P>0.05)。注射后1和3 d,siRNA1组和siRNA2组NOD小鼠血清中IL-4水平明显升高、IFN-γ/IL-4比值减低,与对照组和空载体组比较差异有统计学意义（P<0.05）,对照组与空载体组比较差异无统计学意义,siRNA1组与siRNA2组比较差异亦无统计学意义;注射后5和7 d,4组小鼠血清中IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值比较差异无统计学意义。注射后7 d,siRNA1组和siRNA2组 NOD小鼠肺脏组织中α-Fodrin及其 mRNA的表达水平明显低于对照组和空载体组（P<0.05）,对照组和空载体组比较差异无统计学意义,siRNA1组和siRNA2组比较差异无统计学意义。结论： NOD小鼠注射α-Fodrin siRNA载体后,血清中IL-4的水平升高、IFN-γ/IL-4的比值降低,同时α-Fodrin mRNA表达水平和α-Fodrin表达水平下降,提示α-Fodrin siRNA可以通过减轻NOD小鼠炎症反应延缓SS病情进程。     

肿瘤坏死因子α基因沉默对无菌性炎症的抑制作用

目的 研究局部应用靶向肿瘤坏死因子α（TNF-α）的小干扰RNA（siRNA）对磨损颗粒诱导的无菌性炎症的抑制作用。方法 构建重组慢病毒载体,设计靶向TNF-α的siRNA序列和错配序列各1条。建立小鼠气囊模型,气囊内注射聚甲基丙烯酸甲酯颗粒诱导无菌性炎症反应。将建模后的小鼠随机分为3组,每组12只,分别在小鼠气囊内注入TNF-α siRNA（TNF-α组）、错配siRNA（MS组）和PBS（对照组）;慢病毒转染后第14和28天每组各处死6只小鼠,取出气囊组织。采用Real-Time PCR法检测气囊中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达;ELISA法检测TNF-α蛋白的含量;组织学检测气囊壁厚度和炎症细胞计数;活体荧光成像定量分析绿色荧光蛋白（GFP）荧光的强度和分布。结果 慢病毒介导TNF-α siRNA的局部应用显著降低了TNF-α组中TNF-α、IL-1和IL-6 mRNA的表达（P<0.01）,也降低了TNF-α蛋白的含量（P<0.01）;TNF-α组炎症反应（囊壁厚度和细胞浸润）显著减弱（P<0.05或P<0.01）。活体荧光成像显示,GFP的表达局限于气囊局部,TNF-α组和MS组荧光量比对照组升高5倍左右。结论 局部应用TNF-α siRNA可有效抑制磨损颗粒诱导的无菌性炎症,且无全身性不良作用。     

不同临床表型COPD频繁和非频繁发作患者气道巨噬细胞的异质性

目的：比较频繁发作(frequent exacerbator,FE)和非频繁发作(infrequent exacerbator,iFE)的不同临床表型的 慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者的临床特征及诱导痰中巨噬细胞的异质性。方法： 分析80例慢性支气管炎(chronic bronchitis,CB)、肺气肿(emphysema,EM)、哮喘-COPD重叠(asthma-COPD overlap, ACO)表型的COPD急性发作住院患者的临床特征;采用流式细胞术检测诱导痰巨噬细胞CCL3和CD163的表达,定 量聚合酶链反应(quantitative PCR,qPCR)检测HIF-1α和Cav-1的表达。结果：FE和iFE患者在年龄,第1 s用力呼气容积 (forced expiratory volume in one second,FEV1)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC),痰细菌阳性率,COPD评估测试 (COPD Assessment Test,CAT)评分,改良医学研究委员会(Modifi ed Medical Research Council,mMRC)评分方面的差异 有统计学意义(P<0.05);相对于iFE患者,FE患者诱导痰巨噬细胞上CCL3荧光强度明显降低(P<0.01),而CD163显著增 高(P<0.01),同时HIF-1α和Cav-1 mRNA水平也显著升高(P<0.01)。CB表型的FE患者与iFE患者之间在年龄,痰细菌阳 性率,CAT评分,mMRC评分方面的差异有统计学意义(P<0.05);相对于iFE患者,FE患者诱导痰巨噬细胞上CCL3荧 光强度轻度降低(P>0.05),而CD163显著增高(P<0.01),同时HIF-1α和Cav-1 mRNA水平也显著升高(P<0.01)。EM表型 的FE患者与iFE患者之间在年龄,病程,FEV1/FVC,痰细菌阳性率,CAT评分,mMRC评分方面的差异有统计学意义 (P<0.05);相对于iFE患者,FE患者诱导痰巨噬细胞CCL3荧光强度轻度减低(P>0.05),而CD163轻度升高(P>0.05),同 时HIF-1α水平轻度升高(P>0.05),Cav-1水平则显著增加(P<0.01)。ACO表型的FE与iFE患者所有临床特征差异均无统计 学意义,FE患者诱导痰巨噬细胞CCL3荧光强度明显低于iFE患者(P<0.01),而CD163差异无统计学意义(P>0.05),同 时HIF-1α(P<0.01)和Cav-1(P<0.05)表达也显著增加。全部FE及CB表型FE患者CCL3与HIF-1α和Cav-1均呈显著负相关, CD163仅与HIF-1α呈显著正相关;EM表型FE患者CD163与HIF-1α呈显著正相关;ACO表型FE患者CCL3与HIF-1α呈显 著负相关,而CD163与HIF-1α呈显著正相关。结论：CB,EM,ACO表型FE和iFE患者临床特征差异不一,诱导痰中替 代活化巨噬细胞(M2)在FE患者中占优势,HIF-1α可能在其极化过程中起关键作用。     

dn HIF-1对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用。方法将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较。结果重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05)。转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达。提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用。     

siRNA沉默PCSK6基因对胶原诱导性关节炎的影响

目的 探讨siRNA沉默PCSK6基因对胶原诱导性关节炎(CIA)成纤维样滑膜细胞(FLS)生物学行为的影响。方法 采用牛Ⅱ型胶原诱导大鼠CIA模型,取膝关节滑膜组织原代培养FLS;采用人工合成的siRNA oligo-433干扰剂、siRNA oligo-688干扰剂、siRNA oligo-2506干扰剂特异性抑制PCSK6在CIA FLS中的表达,阴性siRNA为阴性对照组,瞬时转染24、36 h后,采用RT-qPCR法检测抑制效率,同时检测PCSK6基因沉默后各相关基因的表达;采用MTT、Transwell、细胞划痕、流式细胞术、ELISA等方法检测干扰PCSK6表达后对细胞增殖、侵袭、迁移、细胞周期和相关炎性因子分泌的影响。结果 转染特异性siRNA-PCSK6后,各干扰组与阴性对照组相比,siRNA oligo-2506干扰剂转染24 h时,PCSK6 mRNA水平抑制效果显著(P<0.001),CIA FLS的增殖受到抑制(P<0.001),细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.001),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)分泌降低(P<0.001),G₀/G₁期的细胞数目增多(P<0.05),PCSK6下游基因CXCL9、MMP2、MMP9、NOSTRIN、HIF-1α、MPZL2、IGF2、PADI4表达均明显下降(P<0.05)。结论 PCSK6基因沉默对CIA FLS的生物学行为具有一定作用,为进一步研究CIA发病机制奠定基础。     

IL-1β 或TNF-α 干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2 及Th17/Treg 平衡的影响

目的：探讨IL-1β或TNF-α干预的子宫蜕膜细胞对母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。方法：子宫蜕 膜细胞经体外分离后,加入10–8 mol/L雌二醇(E2)+10–7 mol/L孕激素(P)培养7 d后,分别给予IL-1β或TNF-α干预24 h,收 集上清液,制备条件培养液。应用条件培养液刺激子宫蜕膜T细胞72 h后,收集上清液,ELISA 法检测上清液IFN-γ, IL-2,IL-17,IL-5,IL-10及TGF-1β的表达。收集子宫蜕膜T细胞,提取RNA,用实时定量PCR检测细胞因子mRNA的 表达。通过T细胞分泌的细胞因子水平来评估子宫蜕膜细胞对Th1/Th2及Th17/Treg平衡的影响。结果：IL-1β或TNF-α 干预子宫蜕膜细胞24 h后,其条件培养液能够促使子宫蜕膜T细胞Th1细胞因子IFN-γ分泌增加7~8倍,IL-2分泌增加 6~7倍,Th17细胞因子IL-17分泌增加15~19倍,Th2细胞因子IL-10和IL-5的分泌无差异,Treg细胞因子TGF-1β的分泌无 差异;其条件培养液促使IFN-γ和IL-17 mRNA表达增加,而IL-10及TGF-1β mRNA的表达无差异。结论：IL-1β或TNF-α 刺激的子宫蜕膜细胞改变母胎界面Th1/Th2及Th17/Treg细胞的平衡,向Th1及Th17偏移。     

低氧诱导因子-1αsiRNA对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的:观察低氧诱导因子-1α( hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)RNA干扰对低氧条件下永生化角质形成细胞株HaCaT细胞HIF-1α和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响.方法:将HaCaT细胞分为4组:常氧对照组...     

低氧状态下红景天通过上调缺氧诱导因子1α促进人脐静脉内皮细胞肾上腺髓质素及其受体的表达

 目的  探讨低氧状态下红景天对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)、降钙素受体样受体(calcitonin receptor-like receptor,CRLR) 、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1α)表达的影响以及这一过程中HIF-1α的调控作用。方法HUVECs常规培养并设立正常氧、低氧对照组和低氧红景天组。CCK8法观察低氧状态不同浓度红景天干预不同时间的促细胞增殖作用;实时定量PCR和Western blot法测定ADM、CRLR、HIF-1α基因表达的情况;通过小干扰RNA方法敲低HIF-1α基因,实时定量PCR和Western blot法检测ADM、CRLR基因表达的变化。结果 红景天促进低氧状态下HUVECs增殖,促进低氧状态下内皮细胞ADM、CRLR以及HIF-1α的表达,HIF-1α siRNA可以显著抑制红景天对ADM及CRLR表达的促进作用。结论 低氧状态下红景天通过上调HIF-1α促进HUVECs ADM及其受体CRLR的表达。     

α5-烟碱型乙酰胆碱受体表达下调对肺癌细胞HIF-1α表达的影响

目的 通过下调α5-烟碱型乙酰胆碱受体（α5-nAChR）的表达,体外研究尼古丁促肺癌细胞增殖过程中α5-nAChR对缺氧诱导因子（HIF-1α）表达的影响。方法 以不同浓度尼古丁作用人肺腺癌细胞株A549,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测A549细胞中α5-nAChR、HIF-1α mRNA和蛋白的表达。MTT法、实时荧光定量PCR、Western blotting检测CHRNA5-siRNA转染后,尼古丁促A549细胞增殖的作用和HIF-1α表达的变化。结果 尼古丁浓度为1μmol/L时,α5-nAChR和HIF-1α表达明显升高（P<0.05）,二者表达呈尼古丁浓度依赖性。CHRNA5-siRNA转染显著抑制α5-nAChR、HIF-1α表达（P<0.05）,尼古丁促A549细胞增殖的作用明显受到抑制（P<0.05）。结论 α5-nAchR通过调节HIF-1α的表达,在尼古丁促肺癌细胞增殖中起作用,提示α5-nAChR/HIF-1α信号轴可能是吸烟相关性肺癌发生的重要分子机制之一。     

RNA干扰沉默乏氧诱导因子1α对乏氧条件下食管鳞癌细胞化疗敏感性的影响

目的探讨RNA干扰技术沉默乏氧诱导因子（HIF）-1α对食管鳞癌EC9706细胞乏氧条件下化疗敏感性的影响及其机制。方法应用化学乏氧法[氯化钴（CoCl2）加入培养液的终浓度为75μmol／L]体外模拟肿瘤乏氧微环境。采用MTS比色法检测常氧培养组和乏氧培养组EC9706细胞在顺铂／紫杉醇作用下细胞的抑制率,以及RNA干扰后乏氧培养细胞在顺铂／紫杉醇作用下细胞的抑制率。应用Western印迹方法检测HIF-1α基因沉默后乏氧诱导HIF-1α蛋白表达变化。用流式细胞仪检测RNA干扰前后乏氧条件下EC9706细胞的细胞周期。结果针对HIF-1α基因的siRNA干扰技术,有效抑制乏氧诱导的HIF-1α蛋白表达。同一药物浓度常氧培养组细胞抑制率均明显高于乏氧培养组（均P〈0．05）。相同药物浓度及相同的乏氧条件下RNA干扰组抑制率均明显高于未转染组及转染control siRNA组（均P〈0.05）。相同的乏氧条件下转染HIF-1α siRNA与未转染组／转染无关对照siRNA组相比,S期显著增加（P〈0．05）、G1期细胞减少（P〈0．05）。结论乏氧条件下HIF-1α诱导EC9706细胞周期停止,可能是乏氧条件下细胞耐药的机制之一。RNA干扰可逆转食管癌细胞EC9706乏氧环境中化疗耐药。     

Wnt／β-catenin信号通路参与高渗条件下气道上皮细胞黏液高分泌

目的研究高渗刺激对人气道上皮细胞（16HBE）黏蛋白（MUC）5AC分泌的影响,以及Wnt／β-catenin信号通路可能的介导作用。方法使用浓氯化钠配置高渗培养液,用高渗培养液刺激16HBE细胞,细胞分为常规培养（阴性对照组）以及高渗培养液刺激3、6、9、12h组。ELISA法检测MUC5AC分泌量,Westernblotting法检测人气道Wnt家族蛋白Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt7a、Wnt10a、Wnt10b的表达情况。将Wnt4小片段siRNA转染16HBE细胞,再给予高渗培养液刺激。采用ELISA法检测培养上清的MUC5AC分泌量,采用Westernblotting法检测细胞内经典Wnt／β-catenin通路相关信号分子的表达量,细胞免疫荧光法检测核因子（NF）-κBp65核转位情况。结果高渗培养的16HBE细胞上清及胞质中检测到的MUC5AC分泌量显著高于阴性对照组,且MUC5AC分泌量在一定范围内呈时间依赖性（均P〈0．05）。高渗刺激组Wnt1、Wnt2、Wnt3a、Wnt5a、wnt7a、Wnt10a和Wnt10b表达量较阴性对照组无明显变化（均P〉0．05）,而Wnt4表达量显著升高（P〈0．05）。高渗刺激组细胞内β-catenin和CyelinD1的相对表达量显著高于阴性对照组,细胞免疫荧光法提示NF-κBp65核转位（均P〈0．05）;而经转染Wnt4siRNA后,高渗培养组上清及胞质内MUC5AC分泌量显著低于未转染的高渗培养组（P〈0．05）,细胞内β-catenin、CyclinD1水平及NF-κBp65的核转位现象也受到显著抑制（均P〈0．05）。结论高渗盐水可诱导16HBE细胞MUC5AC高分泌,Wnt／β-catenin信号通路在该效应中有重要的参与作用。