下调lncRNA-ATB抑制骨肉瘤发生发展分子机制研究

目的 旨在分析lncRNA-ATB对骨肉瘤Saos-2细胞增殖、周期S期聚集、迁移及凋亡的调控作用，并探究其对皮下骨肉瘤生长及细胞增殖影响。方法 实时定量-聚合酶链式反应(real time quantity polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测lncRNA-ATB在骨肉瘤组织HOS,Saos-2和U2OS细胞株及正常人成骨细胞株NHOst中的表达；CCK8、流式细胞法、Tunel及Transwell检测lncRNA-ATB对Saos-2细胞生物学功能调控能力；Ki67检测细胞增殖情况；利用Saos-2细胞构建骨肉瘤裸鼠移植瘤模型，检测裸鼠模型中皮下瘤体重量变化。结果 28例患者组织中，骨肉瘤组织中的lncRNA-ATB表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05)。与NHOst组相比，lncRNA-ATB在HOS,Saos-2和U2OS中均升高，其中Saos-2中表达最高(P<0.05)。ATB组Saos-2细胞的OD值高于NC组，ATB组Saos-2周期S期长于NC组(P<0.05)。siATB组Saos-2细胞OD值低于siNC组...     

微小核糖核酸-218在人骨肉瘤组织及Saos-2细胞中的表达及其意义

目的:检测微小核糖核酸-218(miRNA-218, miR-218)在人类骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞Saos-2中的表达水平并探讨miR-218对骨肉瘤发生发展的影响。方法:收集12例(对)人类骨肉瘤及其癌旁组织(正常对照)样本,培养人骨肉瘤细胞系Saos-2,并建立高表达miR-218的细胞系Saos-2miR-218+,运用实时定量PCR方法检测上述组织及细胞中miR-218的表达水平,通过ATPlite化学发光法检测细胞增殖水平,趋化小室实验观察高表达miR-218的Saos-2细胞的侵袭能力变化。结果:与正常对照组相比较,miR-218在骨肉瘤组织中的表达显著下降(0. 61±0. 02vs 0. 37±0. 03),Saos-2细胞中miR-218的表达亦显著下调(0. 59±0. 15 vs 0. 17±0. 04);Saos-2miR-218+细胞增殖水平较对照细胞及空载体转染细胞显著降低[培养72 h的活细胞数分别为(1 200±85)、(1 960±41)、(1 950±52)个/μL],以上差异均有统计学意义(P<0. 05);趋化小室实验显示,Saos-2miR-218+细胞的侵袭能力下降。结论:miRNA-218在人骨肉瘤组织及Saos-2细胞中的表达水平下降,提高miRNA-218的表达水平可抑制Saos-2细胞增殖和侵袭。     

miR-99a抑制物对骨肉瘤细胞生物行为学的影响

目的:探索miR-99a在骨肉瘤中的表达情况及其对骨肉瘤细胞生物学行为特性的影响。方法:收集7例骨肉瘤组织及瘤旁骨组织,RT-PCR检测并比较miR-99a表达情况;RT-PCR技术检测miR-99a在骨肉瘤细胞系143B、MG-63和U2OS中的相对表达量,以人成骨细胞系hFOB1.19作为对照比较;RT-PCR检测hepG2、lovo、A549和MCF-7中的miR-99a相对表达量,以143B作对照比较。培养人骨肉瘤细胞系143B,瞬时转染miR-99ainhibitor后,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕试验检测细胞迁移,Transwell小室法检测细胞侵袭,Western Blot检测RECK、MMP-2、MMP-9蛋白的表达情况。结果:miR-99a在7例骨肉瘤组织中的相对表达量(0.81±0.06)要明显高于瘤旁骨组织(0.48±0.06)(P<0.01)。3组骨肉瘤细胞系miR-99a表达量均高于人成骨细胞hFOB1.19,差异有统计学意义(P<0.01);骨肉瘤细胞系中miR-99a相对表达明显高于四种非骨肉瘤细胞系(P<0.05)。miR-99ainhibitor转染组细胞增殖速率显著减慢,低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组早期凋亡和晚期凋亡均未明显增加(P>0.05);转染组细胞迁移能力明显受到抑制;转染组143B细胞穿过小室底膜的数目明显低于inhibitor-NC组和空白组(P<0.05);转染组RECK蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9蛋白表达下调。结论:miR-99a在骨肉瘤组织和细胞系中呈现高表达,下调miR-99a能抑制骨肉瘤细胞系143B增殖、侵袭和转移能力,其机制可能是通过调控RECK/MMP-2蛋白表达而实现的。     

MiR-181a靶向RASSF1A促进骨肉瘤细胞的生长和转移

目的：探讨miR-181a是否靶向调控抑癌基因RAS相关区域家族1A(Ras-association domain family 1,isoform A,RASSF1A),从而促进骨肉瘤细胞的生长和转移。方法：采用real-time PCR检测30例人骨肉瘤组织及其癌旁正常骨组织中miR-181a的表达,并分析miR-181a表达水平与骨肉瘤患者临床病理特征的相关性。在骨肉瘤细胞MG-63中瞬时转染miR-181a模拟物和miR-181a抑制剂,分别采用MTT和transwell检测miR-181a对骨肉瘤细胞生长和转移的作用。随后,预测并通过双荧光素酶报告基因验证miR-181a与RASSF1A基因3'-非编码区(3'-untranslated region,3'-UTR)的特异性结合作用。结果：与癌旁正常骨组织比较,miR-181a在骨肉瘤组织中高表达(P<0.001),但其表达水平与骨肉瘤患者的性别、年龄、肿瘤大小及肿瘤病理分期等无明显相关性(P>0.05)。MTT及transwell结果显示过表达miR-181a促进了MG-63细胞生长、迁移和侵袭,显著高于阴性对照组(P<0.05);而抑制miR-181a的表达降低了MG-63细胞生长、迁移和侵袭,显著低于阴性对照组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因检测结果显示miR-181a可靶向结合RASSF1A基因3'-UTR,从而调控RASSF1A的表达。结论：miR-181a可特异性结合RASSF1A基因3'-UTR,下调RASSF1A基因的表达,从而促进人骨肉瘤细胞MG-63的生长和转移。     

微小RNA-144上调Rb抑制骨肉瘤细胞增殖及诱导凋亡

目的探讨微小RNA-144(miR-144)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及相关蛋白影响。方法运用脂质体转染的方法,在骨肉瘤细胞株MG-63中转染不同浓度miR-144类似物(miR-144组),随机miR-144片段作为阴性对照组。实时定量PCR检测miR-144表达水平。DAPI染色观察miR-144对细胞形态的影响,用MTT检测细胞增殖,Annexin/PI双染确定细胞凋亡比例。免疫印迹检测PTEN以及Rb等抑癌基因编码蛋白和凋亡相关蛋白表达情况。结果实时定量PCR结果显示,miR-144组miR-144的表达(1128.54±738.52)明显高于空白对照组(1.00±0.00)和阴性对照组(2.06±0.73)(P<0.01)。与阴性对照组和空白对照组比较,miR-144组细胞数量明显减少,增殖受抑制,流式细胞检测显示,细胞凋亡率明显增加。免疫印迹检测显示,Rb和PTEN表达水平有所增加,而凋亡相关的Caspase-3活化,线粒体膜上Cyto C释放。而阴性对照组与空白对照组以上数值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论合成的miR-144片段(miR-144 mimic)能顺利进入细胞并上调miR-144的表达,对骨肉瘤细胞都有一定程度的抑制作用,并有浓度依赖性,对MG-63的抑制效果最强,并通过活化Caspase-3促进凋亡,上调PTEN和Rb的表达实现对细胞的抑制作用。未来可以基于miR-144进行骨肉瘤治疗的短核苷酸类药物开发。     

lncRNA LINC00173通过调节miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的机制研究

目的探讨长链非编码RNA（lncRNA）LINC00173通过调控miR-130a-5p抑制骨肉瘤发生发展的分子机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞系MG-63,分别将LINC00173过表达载体质粒或空载质粒转染至MG-63细胞,实时荧光定量PCR（qPCR）检测转染效率,采用细胞计数法（CCK-8）和Transwell实验分析MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力,双荧光素酶报告基因实验和qPCR检测LINC00173和miR-130a-5p的靶向调控关系。同时过表达LINC00173和miR-130a-5p,并检测MG-63细胞增殖、侵袭和迁移能力。结果qPCR检测结果显示,与Mock组比较,pc-LINC00173组LINC00173在MG-63细胞中的表达量明显升高（P < 0.01）。转染48 h和72 h后,pc-LINC00173组细胞增殖活力均低于Mock组和pcDNA组（P < 0.01）。Transwell检测结果显示,pc-LINC00173组与Mock组比较侵袭和迁移细胞数明显减少（P < 0.05）。LINC00173与miR-130a-5p之间存在特异性结合位点,与miR-NC组比较,转染miR-130a-5p mimics能够抑制LINC00173-Wt细胞的相对荧光素酶活性（P < 0.01）,与Mock组和pcDNA组比较,pc-LINC00173组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达量均降低（P < 0.01）。与pc-LINC00173组和pc-LINC00173+miR-NC组比较,pc-LINC00173+miR-130a-5p组MG-63细胞中miR-130a-5p的表达明显升高,吸光度值明显升高,侵袭和迁移细胞数明显增多（P < 0.01）。结论LINC00173能够抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭和迁移,其作用机制可能与靶向抑制miR-130a-5p的表达有关。     

miR-508-5p介导mTOR对骨肉瘤细胞自噬的影响

目的:探讨miR-508-5p对骨肉瘤细胞自噬及雷帕霉素靶向基因(mTOR)信号通路的影响。方法:收集近五年收治的59例骨肉瘤患者的癌组织与癌旁正常组织,另购买人骨肉瘤细胞株MG-63与人成骨细胞hFOB,采用RT-PCR法检测各组织与细胞中miR-508-5p与mTOR mRNA的相对表达量;将MG-63细胞分成三组:空白组不进行转染,NC组转染空载质粒,过表达组转染miR-508-5p重组质粒,采用CCK-8法检测转染培养后的三组细胞增殖情况,流式细胞仪检测三组细胞凋亡率,采用RT-PCR法检测各组miR-508-5p与mTOR mRNA的相对表达量;采用Western blot法检测细胞中mTOR、Bax、Bcl-2、LC3-Ⅰ与LC3-Ⅱ蛋白的相对表达量。结果:相比癌旁正常组织与hFOB细胞,癌组织与MG-63细胞中miR-508-5p相对表达量均明显降低,而mTOR mRNA的相对表达量均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);相比空白组与NC组,过表达组miR-508-5p相对表达量明显上升,mTOR mRNA的相对表达量明显降低,细胞OD值明显降低,凋亡率明显增加,Bax与LC3-Ⅱ蛋白表达量均升高,而mTOR、Bcl-2与LC3-Ⅰ蛋白相对表达量均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:miR-508-5p在骨肉瘤细胞中呈现低表达趋势,过表达miR-508-5p后可通过抑制mTOR通路,引发细胞自噬,从而抑制细胞增殖与促进细胞凋亡。     

阻断Notch信号通路抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖的实验研究

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响及其机制.方法 体外培养骨肉瘤MG-63细胞株;MTT法检测不同浓度DAPT(1.0、5.0、10.0 μmol/L)对骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用;透射电镜下观察不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞形态的影响;流式细胞术结合AnnexinV-FITC/PI双染分析不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测骨肉瘤MG-63细胞Notch1、HES1基因表达.结果 不同浓度的DAPT作用于骨肉瘤MG-63细胞后,细胞增殖水平明显下降(P＜0.05),1.0μmol/L DAPT即抑制细胞生长,随着DAPT浓度增加抑制效果明显增强,呈显著的浓度依赖关系,且随着DAPT作用时间延长,抑制效果也明显增强.细胞凋亡结果分析表明,DAPT能浓度依赖性地诱导骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡.RT-PCR显示随着DAPT量的增加,Notch 1、HES 1 mRNA的表达逐渐下降(均P＜0.05).结论 DAPT对骨肉瘤MG-63细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用可能与下调MG-63细胞中Notch 1、HES 1 mRNA的表达有关.     

lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的研究

目的 探讨lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及其在调控骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法 收集骨肉瘤标本及配对癌旁正常组织标本6例，qRT-PCR检测骨肉瘤组织中DIO3OS表达。MG-63细胞转染si-DIO3OS或pcDNA3.1-DIO3OS,敲降或过表达DIO3OS后，通过CCK-8实验评估细胞增殖能力，划痕实验和Transwell实验检测骨肉瘤细胞MG-63迁移与侵袭能力。基于TARGET数据库，根据患者骨肉瘤组织中DIO3OS表达水平分为高表达组与低表达组，Kaplan Meier生存分析评估DIO3OS表达水平与患者预后的关系。结果 qRT-PCR结果显示，骨肉瘤组织及细胞中DIO3OS表达下调。敲降DIO3OS表达时，CCK-8实验结果表明骨肉瘤细胞MG-63增殖能力增加，划痕实验和Transwell实验结果显示MG-63细胞迁移与侵袭能力增加(P<0.05)。过表达DIO3OS后，CCK-8、划痕实验和Transwell实验结果显示，MG-63细胞的增殖、迁移与侵袭能力减弱(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示，DIO3OS高表...     

miR-22-3p靶向负调控eIF4E对儿童骨肉瘤细胞增殖影响的研究

目的:观察微小RNA-22-3p(miR-22-3p)与真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)的靶向关系,分析其对骨肉瘤细胞增殖的影响。方法:选择骨肉瘤细胞系SAOS-2和成骨细胞系OB-3进行研究,采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-22-3p与eIF4E的结合情况。建立空白对照组、空载体转染组、miR-22-3p转染组、miR-22-3p和eIF4E共转染组,采用CCK-8法检测细胞活性,采用Western Blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。应用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-22-3p在27例儿童骨肉瘤组织中的表达,应用免疫组化法检测组织中eIF4E和Ki67的表达。结果:骨肉瘤细胞系中miR-22-3p的表达明显低于正常成骨细胞系。双荧光素酶报告基因实验显示miR-22-3p能引起转染pGL3-eIF4E-WT细胞系中荧光素酶活性降低。与空白对照组及空载体转染组相比,miR-22-3p转染组细胞活性下降,PCNA表达下降,miR-22-3p和eIF4E共转染组能逆转上述表达水平。MiR-22-3p在骨肉瘤的不同肿物最大径和病理分级分组的表达中差异有统计学意义(P<0.05)。MiR-22-3p与eIF4E、miR-22-3p与Ki67均具有负相关性,eIF4E与Ki67具有正相关性。结论:miR-22-3p靶向负调控eIF4E调节骨肉瘤细胞的增殖。儿童骨肉瘤中miR-22-3p低表达是肿瘤进展的重要危险因素。     

帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响

目的：研究帕金森病相关蛋白DJ-1对人骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法： Western 印迹检测骨肉瘤细胞株(MG-63,Saos-2和U2OS)及正常人成骨细胞株hFOB1.19中DJ-1和第10号染色体上缺失的 磷酸酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,PTEN)基因的表达。DJ-1 siRNA处 理人骨肉瘤细胞后,采用Western印迹检测DJ-1的蛋白表达水平;细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细 胞存活率;膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(fl uorescein isothiocyanate,FITC)/碘化吡啶(propidium iodide,PI)双染 检测细胞凋亡;Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭和迁移水平。结果：与hFOB1.19细胞比较,骨肉瘤细胞DJ-1蛋 白表达水平显著升高(均P<0.05),其中U2OS细胞升高最为显著(P<0.01)。DJ-1 siRNA可显著降低U2OS细胞中DJ-1蛋白 表达水平、降低细胞存活率、促进细胞凋亡、抑制细胞侵袭和迁移水平,以及增加PTEN蛋白表达水平(均P<0.05)。 另外,与hFOB1.19细胞比较,PTEN在骨肉瘤细胞中的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论：DJ-1可抑制人骨肉瘤 细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移水平,其机制可能与增加PTEN蛋白的表达水平有关。     

MicroRNA-203抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的机制研究

摘要：目的  探讨microRNA-203（miR-203）对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响及机制。方法  通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）测定miR-203在正常成骨细胞hFOB及骨肉瘤细胞系中的表达,将MG-63细胞系分成miR-203组、Scramble组、RAB22A组、NC组,Lipofectamine 2000分别转染miR-203 mimics、Scrambles、pcDNA3.1-RAB22A、空白对照质粒;通过噻唑蓝（MTT）实验测定增殖能力,细胞划痕实验测定迁移能力;通过Target Scan和双荧光素酶实验预测及验证miR-203与RAB22A基因的靶向调节关系;RT-PCR测定RAB22A mRNA表达水平;Western blot测定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果  miR-203在骨肉瘤细胞系SAOS-2、SOSP-9607、U2OS及MG-63中较hFOB细胞系表达降低。MTT显示,在培养48和72 h后,miR-203组相对细胞数少于Scramble组（P <0.05）;培养24 h后,Scramble组细胞相对划痕面积小于miR-203组（P <0.05）;双荧光素酶实验示,miR-203与RAB22A基因存在靶向调节关系。RAB22A组相对划痕面积小于NC组（P <0.05）;MTT显示,在培养24、48和72 h后,RAB22A组相对细胞数多于NC组（P <0.05）;RAB22A组与NC组比较,E-cadherin下调表达,N-cadherin上调表达,Vimentin上调表达。结论  miR-203通过下调RAB22A基因表达,抑制上皮间质转化,进而抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移。

     

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉 瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用 荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的 表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高 表达。抑制miR-181b 的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc 下游调节基因2（NDRG2）是 miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而 抑制miR-181b 能够显著提高NDRG2 的表达。抑制miR-181b 的表达的同时抑制靶基因NDRG2 的表达,能够逆转抑制 miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论miR-181b在骨肉瘤中过 表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。     

MiR-650通过靶向ING4促进骨肉瘤细胞增殖的研究

目的 探讨骨肉瘤组织和细胞系中miR-650的表达及其在肿瘤形成中的作用机制.方法 用实时荧光定量 PCR的方法,检测并比较肿瘤组织及癌旁正常组织、骨肉瘤细胞系(M G63)及健康人成骨细胞(hFOB1.19)之间的miR-650表达情况;用M T T实验检测不同组细胞的增殖情况;用Western blot的方法检测调节生长抑制因子4(ING4)蛋白的表达情况.结果miR-650在骨肉瘤组织及细胞系中的表达显著高于癌旁正常组织及健康人成骨细胞;抑制miR-650的表达后,M G63细胞的增殖能力显著减弱.此外,miR-650表达减低后,ING4的表达显著升高,其中阴性对照组、乱序组、miR-650抑制剂组的ING4 mRNA分别为1.00 ± 0.16、1.08 ± 0.14、5.35 ± 0.32;蛋白表达分别为:0.62 ± 0.06、0.59 ± 0.12、2.45 ± 0.20;miR-650抑制组与阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);而抑制ING4升高后,M G63细胞的增殖能力有一定的恢复.结论 miR-650可以通过降低ING4的表达促进M G63细胞的增殖,提示miR-650可能成为骨肉瘤治疗的新靶点.     

MicroRNA-638在骨肉瘤中表达下调及对其细胞增殖的影响

目的 探讨miR-638在人骨肉瘤(OS)细胞增殖行为中的影响。方法通过实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-638在人OS组织及癌旁组织、人OS细胞株(MG63、U2OS、HOS、SaOS2)和正常人成骨NHOst细胞株中的表达;用LipofectamineTM 2000转染miR-638模拟物或抑制物,细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测转染后的吸光光度值,平板克隆形成实验检测菌落数量。结果miR-638在各组细胞中均有表达;OS细胞株中miR-638的表达明显下调(P＜0.05);高表达miR-638能抑制OS MG63和U2OS细胞的增殖(P＜0.05)。 结论miR-638高表达能抑制OS细胞的增殖。     

miR-4306通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移与侵袭

目的: 研究miR-4306在骨肉瘤细胞中的表达及其对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。方法: 选取人成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞Saos-2、MNNG/HOS CI #5,采用qRT-PCR检测miR-4306表达水平。将miR-4306 mimics和阴性对照分别转染至骨肉瘤细胞Saos-2和MNNG/HOS CI #5,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移及侵袭,蛋白质免疫印迹检测细胞内上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition, EMT）标志蛋白表达水平。通过在线靶基因预测网站Targetscan、Starbase预测miR-4306靶基因可能为富含AT序列特异性结合蛋白2（special AT rich sequence binding protein 2, SATB2）,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。将miR 4306 mimics、LV SATB2共转染至骨肉瘤细胞中,检测细胞增殖、迁移、侵袭以及EMT标志蛋白表达水平变化。结果: 与人成骨细胞hFOB 1.19比较,骨肉瘤细胞Saos 2、MNNG/HOS CI #5中miR-4306表达明显降低（P均＜0.01）。转染miR-4306 mimics后,骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力下降,N-钙黏蛋白、血管内皮生长因子表达水平显著降低,E 钙黏蛋白表达水平显著升高（P＜0.05或＜0.01）。SATB2是miR-4306下游的直接靶标;与miR-4306 mimics+LV-NC组比较,miR-4306 mimics+LV-SATB2组部分逆转miR-4306对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移和EMT的影响。结论: miR-4306在骨肉瘤细胞中呈低表达,其可通过下调SATB2表达抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。     

Effect of NS398 on inducing apoptosis and down-regulating Bcl-2 protein in human osteosarcoma cell MG-63 line

Objective： This study investigated the effect of NS398 on anti-proliferation and the mechanism of inducing apoptosis of human osteosarcoma cell MG-63 line in vitro. Methods： Growth suppression was detected by MTT method. Special morphological changes of apoptosis were observed by transmission electron microscopy （TEM） and DNA fragments electrophoresis. The apoptotic rates were quantified by flow cytometry （FCM）. And Bcl-2 protein level were detected by Western Blotting assay. Results： Different concentration NS398 inhibited the cell growth. Through TEM and DNA electrophoresis, the special morphological changes were observed after 24, 48 and 72 h treatment with NS398. The apoptotic rates of MG-63 cells treated with NS398 were respectively, significantly higher than that of the control group（ P 〈0.01 ）. Western blot assay showed that NS398 reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion： NS398 suppressed the proliferation of human osteosarcoma cell MG-63 line and induced apoptosis. The mechanism may be associated with down-regulation expression level of bcl-2 protein.     

miR—34a对人成骨肉瘤MG—63细胞生长增殖的影响

目的探讨miR-34a对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖的影响。方法运用miR-34a的mimics或inhibitors分别转染人成骨肉瘤MG-63细胞,分别为实验组,脂质体2000为对照组,采用甲基噻唑基四唑（MTT）法检测细胞增殖情况。结果对照组吸光度值在24h、48h和72h分别为（0．33±0．02）、（0．55±0．03）、（0．75±0．06）;miR-34amimics可抑制MG-63细胞增殖,其吸光度值分别降至（0．21±0．02）、（0．26±0．03）、（0．31±0．04）,经统计学分析,差异有统计学意义（P〈0．01）;miR-34ainhibitors可使人成骨肉瘤MG-63细胞的增殖活性增强,其吸光度值分别增加到（0．41±0．05）、（0．71±0．08）、（0．94±0．08）,经统计学分析差异有统计学意义（P〈0．01）。结论miR-34a可使人成骨肉瘤细胞的增殖活性下调,其在骨肉瘤的发生发展中可能发挥一个抑瘤基因的作用。