肿节风黑斑病拮抗真菌zjts7的抑菌作用测定与鉴定

目的:为明确拮抗真菌zjts7分类地位和对肿节风黑斑病菌Colletotrichum dematiu的抑菌率以及对病原菌的菌丝形态的影响。方法:本研究采用平板稀释法和平板对峙法,从健康肿节风的根系土壤里分离筛选到一株对肿节风黑斑病菌具有抑菌作用的真菌zjts7。结果:结果表明,真菌zjts7对肿节风黑斑病菌的抑菌率达到81. 82%～100%。经显微镜观察,真菌zjts7可造成肿节风黑斑病菌的菌丝断裂、膨大和畸形。结论:结合形态特征和ITS r DNA序列分析,将该拮抗真菌zjts7鉴定为棘孢木霉Trichoderma asperellum。     

人参病害生防细菌分离鉴定及其抑菌活性测定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参菌核菌、人参立枯丝核菌等有抑菌活性的微生物菌剂产品,有效解决人参生产过程中的农残超标问题,为人参病害绿色防控提供参考依据。方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株,室内对峙培养验证菌株的抑菌活性;根据菌落形态特征、显微结构及gyr A、gyr B基因序列鉴定菌株的归属。结果:从"KDL"复合微生物菌剂中分离出12株细菌(编号:Y1～Y12),除Y12外,其余菌株对七种人参致病菌均有抑菌活性。其中,Y4对人参菌核菌的抑菌率最高(68. 42%),Y9对人参立枯丝核菌的抑菌率最高(54. 07%),Y2对人参疫病菌、人参黑斑菌、人参灰霉菌和人参锈腐菌的抑菌率最高(分别为68. 25%、52. 58%、49. 46%和40. 65%),Y3对人参根腐菌的抑菌率最高(47. 37%)。经鉴定,Y1、Y2和Y8为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis,Y3～Y7、Y9～Y11为解淀粉芽孢杆菌B. amyloliquefaciens。结论:分离自"KDL"复合微生物菌剂的绝大部分菌株对七种人参致病菌均有较好的抑菌活性,推测该菌剂可能对人参病害具有生防潜力,可尝试用于人参病害防控。!     

西红花球茎腐烂病拮抗真菌的筛选、鉴定及抑菌机制

目的 筛选西红花Crocus sativus球茎腐烂病拮抗真菌,探讨其抑菌机制。方法 以前期分离得到的24株西红花内生真菌为材料,采用平板对峙法筛选球茎腐烂病拮抗真菌;应用ITS分子技术进行菌种鉴定,用扫描电镜观察拮抗后病原菌尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum菌丝形态;检测拮抗菌株CS05菌丝产生β-1,3-葡聚糖酶与几丁质酶的含量及病原菌产碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AKP)的含量。结果 筛选得到对尖孢镰刀菌有显著拮抗作用的内生真菌8株,其中CS05抑制效果最好,相对抑制率为(76.53±3.82)%;将CS05鉴定为担子菌门多孔菌目栓菌属真菌变色栓菌Trametes versicolor;CS05能产生β-1,3-葡聚糖酶与几丁质酶,促使尖孢镰刀菌胞外AKP含量增加,菌丝出现稀疏紊乱、缠绕皱缩等现象。结论西红花内生真菌CS05能较好地拮抗球茎腐烂病菌尖孢镰刀菌,为西红花球茎腐烂病的生物防治提供了参考依据。     

人参内生细菌的分离及拮抗菌株的筛选

本研究用平板培养法从人参Panax ginseng根中分离内生细菌,共分离到40种内生细菌,Bacillus spp.和Pseud-omonas spp.为优势内生菌。通过对峙培养,筛选出对人参菌核菌、人参锈腐菌和人参黑斑菌均有明显抑制作用的内生细菌ge15 Stenotrophomonas maltophilia和ge25 Bacillus sp.,其中ge15对人参菌核菌、人参锈腐菌和人参黑斑菌的抑菌带宽度分别达5.5,22.0,14.8 mm;ge25对3种致病菌的抑菌带宽度分别达12.7,16.5,9.0 mm。研究结果表明,内生细菌具有防控人参致病菌的生防潜力,可作为生防因子用于人参土传病害的防治。     

无花果内生真菌分离鉴定及其活性研究

目的:分离和鉴定无花果Ficus carica植物内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白菜黑斑病菌、苹果腐烂病菌、小麦赤霉病菌、草莓枯萎病菌、青霉菌为测试菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从健康的无花果植物的根、茎、叶中分离共获得61株内生真菌。属于5纲,7目,12科,20属。抗菌活性试验表明有40株内生真菌具有抗菌活性,占总内生真菌的65.57%。结论:无花果植物内生真菌多样性丰富,具有很好的研究和应用价值。     

人参致病菌拮抗菌株的筛选及鉴定

目的:筛选对人参黑斑菌、人参锈腐菌等人参致病菌有较好抑菌活性的微生物菌株,为人参病害生防防治提供参考依据。方法:采用平板稀释法从人参栽培土壤和菌剂产品中分离菌株;以人参致病菌为靶标,采用对峙培养法筛选拮抗菌;分别采用16S r DNA和28S r DNA序列分析方法鉴定细菌和真菌菌株的分类学地位。结果:共计从人参栽培土壤中分离到66株菌,其中菌株X对人参致病菌表现较好抑菌活性;从商品化菌剂中分离出17株菌,其中菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对人参致病菌表现较好抑菌活性。经鉴定,菌株X为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),QM、BM2和HZ3为甲基营养型芽孢杆菌(B.methylotrophicus),GG为枯草芽孢杆菌(B.subtilis),HC为棘孢木霉(Trichoderma asperellum),DD为平展木霉(T.effusum)。结论:筛选出的7株拮抗菌对多种人参致病菌有较好抑菌活性,菌株X可用于生防菌剂开发,与菌株QM、BM2、HZ3、GG、HC和DD对应的商品化菌剂可用于人参病害防治。     

人参可利用内生菌株的筛选和鉴定

目的研究吉林产人参Panax ginseng内生菌资源状况,筛选出对人参病原菌具有拮抗作用的内生菌。方法采用混菌法初筛和发酵液拮抗法复筛来筛选具有拮抗活性的菌株,并用16 S r DNA和ITS方法鉴定筛选得到的内生菌株。结果在人参中共分离获得133株内生菌,通过初筛和复筛后,从中选出了4株对人参病原菌具有较好拮抗作用的菌株,分别为B16、B25、B69和F32,其中B16、B25和B69对6种以上病原菌均表现出了抑菌作用,F32对菌核病菌、疫病菌和根腐病菌的抑菌效果最好,其抑菌圈直径均大于35 mm,经鉴定它们分别为甲基营养型芽孢杆菌、解淀粉芽胞杆菌、死谷芽孢杆菌和齿孢青霉。结论人参内生菌具有多样性,并有拮抗病原菌活性高的菌株存在,可以成为人参病害生防菌的新来源。     

五味子中内生拮抗活性细菌的分离与筛选

目的 从不同地区采集五味子植株,分离内生细菌,并进行菌群密度、拮抗菌筛选和抑菌活性研究。方法 采用平板分离法分离内生细菌并纯化典型菌株;平板对峙法测定体外拮抗活性;生长速率法测定抑菌活性。结果 不同种植地、五味子不同器官中内生细菌的菌群密度差异较大,野生的较栽培的大;五味子各器官中,根中的内生细菌最多,其次为茎,叶片中最少。从分得的大量内生细菌中共纯化出302株内生细菌,拮抗菌比率平均为24.19%。从中选出了12株对五味子茎基腐病菌、人参根腐病菌、棉花枯萎病菌、番茄灰霉病菌、人参黑斑病菌具有较好拮抗作用的菌株。12株菌株的发酵产物对供试病原菌菌丝生长均有一定的抑制作用,其中JYg-2对人参根腐病的抑制率最高,达80.02%。结论 五味子植株体内存在大量内生细菌,并且含有一定比率的拮抗菌,拮抗活性稳定。因此五味子内生细菌可以成为开发拮抗菌资源的重要途径,并具有较大潜能。     

人参病害生防微生物菌剂的抑菌活性评价

目的:明确12种市售微生物菌剂产品中分离菌株对人参黑斑病菌和人参灰霉菌的抑菌效果,为人参病害绿色防控提供参考依据。方法:采用稀释平板法从微生物菌剂中分离活体菌株;对峙培养法评价分离菌株的抑菌活性;十字交叉法测量菌落直径。结果:5种木霉菌剂产品中仅有1种分离到活体菌株,尽管该菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性较高(抑菌率分别为65. 18%和76. 82%),但菌剂中活菌的分离数偏低。7种芽孢杆菌菌剂中均能分离到活体菌株,除微囊粒剂和水剂外,其他菌剂产品中活体菌株分离数均较高;上述分离菌株对人参黑斑菌和人参灰霉菌的抑菌活性低于木霉菌,抑菌率分别为27. 21%～33. 04%和10. 74%～29. 40%。结论:芽孢杆菌和木霉杀菌剂均具有防治人参病害的生防潜力,考虑菌剂产品的稳定性和环境耐受力,芽孢杆菌类微生物菌剂更适合人参病害的田间防控。     

荒漠植物牛心朴子内生真菌的分离与鉴定

目的:研究荒漠植物牛心朴子内生真菌类群在不同器官中分布的多样性及其与生态环境的关系,并初步筛选牛心朴子具有潜在生物活性的内生真菌.方法:采用PDA培养基,分别对陕西、宁夏野生牛心朴子内生真菌进行分离、纯化;根据菌落的形态特征并结合真菌的ITS序列进行菌株鉴定;采用稻瘟酶模型,初步筛选活性菌株..结果:从牛心朴子中共分离得到内生真菌94株,鉴定为6目9科13属9种,其中宁夏产地47株,根5株,茎14株,叶28株,鉴定为4目5科9属8种;陕西产地47株,其中根16株,茎18株,叶13株,鉴定为4目6科8属5种;18株真菌代谢产物能完全抑制稻瘟霉孢子萌发,其中N4和S17菌株的发酵液病原菌菌丝生长的抑制作用均比较强.结论:荒漠植物生心朴子内生真菌具有多样性,不同地理环境和组织类型对内生真菌的数量和种群组成存在显著差异;宁夏牛心朴子菌株分布于叶中较多,陕西牛心朴子菌株分布于茎、叶中较多;牛心朴子内生真菌具有显著的抗稻瘟菌活性.     

西洋参内生菌株的分离及拮抗活性菌株的筛选和鉴定

目的研究吉林产西洋参内生菌资源状况,筛选出对西洋参病原菌具有拮抗作用的内生菌。方法采用混菌法初筛和发酵液拮抗法复筛来筛选具有拮抗活性的菌株,并用16 S r DNA和ITS方法鉴定筛选得到的内生菌株。结果在西洋参中共分离获得34株内生菌,通过初筛和复筛后,从中选出了6株对西洋参病原菌具有较好拮抗作用的菌株,分别为B3、B11、B17、B23、B24、F10,其中B3对7种病原菌均表现出了抑菌作用,F10对锈腐病菌Cylindrocarpon destructan和黑斑病菌Alternaria panax的抑菌效果最好,其抑菌圈直径均大于35 mm,经鉴定B3和F10分别为芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus和暗黄青霉Penicillium citreonigrum。结论西洋参内生菌具有多样性,并有拮抗活性高的菌株存在,可以成为西洋参病害生防菌的新来源。     

平贝母内生菌抑菌活性菌株筛选和鉴定

目的对分离出的平贝母内生菌,筛选对人体病原菌具有拮抗作用的菌株。方法采用平板对峙法,从分离出的平贝母内生菌中筛选具有抑菌活性的菌株;扩增有活性菌株的ITS序列并进行测序。同时结合菌落形态观察,鉴定出相应菌种。结果从分离到的23株内生菌中,筛选得到3株对金黄色葡萄球菌有拮抗作用的菌株(内生真菌A1、A5和A6),抑菌活性较强,其抑菌带宽度均达到5 mm以上。经鉴定,A1为粉红粘帚霉Gliocladium roseum,A5为腐皮镰刀菌Fusarium solani,A6为淡色生赤壳菌Bionectria ochroleuca。结论平贝母内生菌资源丰富,其中有对金黄色葡萄球菌有较好的拮抗作用的菌株,显示平贝母内生菌在医药领域有重要的开发潜力。     

抗人参根腐病生防菌剂的研发与评价

目的:研发安全有效的抗人参根腐病微生物菌剂.方法:平板对峙试验筛选三七内生菌,形态学及分子生物鉴定拮抗菌株,单因素试验优选菌株发酵条件,响应面法优化微生物菌剂的载体及助剂配比制定生产工艺,通过对峙及盆栽试验验证菌剂验证防治效果.结果:平板对峙试验筛选出一株具有显著抗根腐病的菌株Fusarium pseudoanthop...     

白术内生细菌AM14的分离鉴定及其对宿主根腐病的防效研究

目的筛选得到能够防治白术Atractylodesmacrocephala根腐病的内生细菌。方法采用传统分离法从白术健康组织中分离内生细菌,以白术根腐病菌尖孢镰刀菌Fusariumoxysporum,茄病镰刀菌F.solani和半裸镰刀菌F.incarnatum为指示菌,采用平板划线法和滤纸片法筛选拮抗细菌;制备拮抗菌菌悬液,采用灌根法进行盆栽白术根腐病防效试验;通过细菌形态特征、生理生化检测及16SrRNA技术对拮抗细菌进行菌种鉴定。结果从白术组织中共分离得到246株内生细菌,平板对峙筛选得到抗根腐内生细菌18株,其中AM14对3种病原菌生长均具有显著抑制作用(P<0.05),平均抑菌率达80.68%;盆栽试验进一步表明AM14对白术根腐病具有较好的防治效果,防治效果达70.49%;经鉴定AM14为芽孢杆菌属细菌Bacillus sp.。结论内生细菌AM14具有良好的白术根腐病生防潜力。     

人参根际拮抗细菌RS-3的鉴定及其对人参常见病原菌的抑制作用

从吉林健康人参根中筛选到一株广谱根际菌RS-3。经形态学特征及16Sr DNA序列同源性分析,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。平板对峙实验及带毒平板法鉴定,该菌株对常见的5种人参病原菌有一定的拮抗作用,对灰霉病菌的抑菌率达54.4%。说明根际细菌RS-3可作为人参常见病害的潜在广谱生防菌进一步开发利用。     

两株内生细菌在人参体内和根区土壤的消长动态研究

目的：研究内生生防细菌在人参根、茎、叶和根区土壤中的消长动态。方法：采用浓度梯度筛选法获得抗利福平标记菌株,灌根法接种标记菌株,稀释平板法计数标记菌株在人参根、茎、叶和根区土壤的分布情况。结果：通过抗生素诱导培养,最终获得了能够耐受120 μg·mL-1 利福平的标记菌株,其对人参黑斑病菌和人参疫病菌的抑制作用与诱导前未见明显改变。内生菌株ge15 和ge25 在人参根、茎中的初始菌落数最高,随后ge15 和ge25 在人参根、茎中的菌落数逐渐平稳并维持特定浓度;在人参叶中,两株菌在接种3 天后菌落数达到最高,后逐渐降低直至趋于平稳;在人参根区土壤,ge15 的菌落数往复变化,ge25 的菌落数先上升后下降,最后菌落数趋于平稳。结论：两株内生菌均能够在人参根茎叶和根区土壤中维持特定菌群浓度,基于上述菌株的生防制剂将有助于人参病害的田间防治。     

野生大豆内生真菌及发酵液中高质量分数次生代谢产物菌株筛选

目的以分离纯化的42株野生大豆内生真菌为材料,分析内生真菌菌丝及发酵液中次生代谢产物的积累,筛选高产次生代谢产物内生菌株。方法采用液体发酵摇瓶培养法及紫外分光光度法对不同内生真菌菌丝及发酵液中的总三萜、黄酮、多糖、多酚与总酚的量进行检测。结果 42株野生大豆内生真菌菌丝中,筛选获得高质量分数多糖菌株为Y2S9、WDL3和WDL2,质量分数最高可达85.51 mg/g;高质量分数黄酮菌株为Y1S9和Y6S8,质量分数分别为2.99和2.24 mg/g;高质量分数三萜菌株为Y6S8、Y2R1、Y6R2,质量分数分别为25.55、17.89、15.96 mg/g;而WDS7总酚量最高,为22.65 mg/g。内生真菌发酵液中,黄酮量较高菌株为Y1S8和SYS4,其质量浓度分别为3.11和4.81 mg/L;总三萜质量浓度较高的菌株为YSYL2、Y1S8、WDL3,质量浓度分别为17.46、35.00、42.98 mg/L。结论不同生境可能是导致次生代谢产物量差异的主要原因,本研究筛选出高产次生代谢产物野生大豆内生真菌菌株11株,为野生大豆内生真菌功能挖掘及新药筛选奠定了基础。     

产生物碱和石杉碱甲蛇足石杉内生真菌的初步研究

 目的 筛选产生物碱和石杉碱甲的内生真菌。方法 以分离自健康蛇足石杉植株组织中的14株内生真菌为材料,采用酸性染料比色法筛选产生物碱的菌株;在此基础上,对内生真菌发酵液进行HPLC测定,分析是否产生石杉碱甲;并利用形态学和rDNA ITS序列分析进行菌种的初步鉴定。结果 筛选出8株产生物碱的菌株,并从中筛选出一株产生石杉碱甲的内生真菌SY-02,初步鉴定内生真菌SY-02为1株炭角菌。结论 在分离自蛇足石杉的内生真菌中,能产生生物碱的真菌比例较高,内生真菌菌株SY-02能在发酵条件下产生石杉碱甲。以产生物碱的菌株为出发菌株,结合活性及结构检测,可以使产石杉碱甲内生真菌的筛选更具有方向性。     

绿色木霉Tv04—2的筛选及其对人参立枯病菌拮抗机制的研究

用对峙培养法，筛选出1株对人参立枯病Rhizoctonia solani Kuhn具有较强拮抗作用的木霉菌株Tv04—2。显微观察发现，该菌株产生的大量较细的螺旋状菌丝对立枯菌具有缠绕作用，两种菌丝结合位点伴有细胞壁溶解现象。进一步研究发现，木霉菌孢子悬浮液、代谢液、难挥发性物质对人参立枯菌均有较高的抑制作用，而易挥发性物质对人参立枯菌的影响不显著。研究结果表明，木霉菌Tv04—2对人参立枯病菌的拮抗作用是营养、空间竞争、重寄生作用及代谢产物抗生作用的综合体现。     

5种人参内生真菌对6种人参病害拮抗作用的研究

目的:研究菌株As1(毛壳属)、菌株As2(毛壳属)、菌株Ab2.21(曲霉属)、菌株AXY2(枝顶孢属)和菌株AY10-11(盾壳霉属)5种人参内生真菌对人参锈腐病病原真菌、人参根腐病病原真菌、人参疫病病原菌、人参菌核病病原菌、人参立枯病病原真菌和人参灰霉病病原真菌6种人参病害的拮抗作用。方法:以抑菌率为指标,通过EXCEL软件对实验数据进行处理,处理方法两组间比较采用独立样本t检验法。结果:As1的对于人参病害的抗菌谱较广;As2的抑菌谱也较为广,且对人参根腐病的拮抗作用最强;Ab2.21对于菌核病和疫病的抑菌能力最强;AXY2对人参病害的整体的抗菌能力较弱;AY10-11对于人参根腐病和菌核病的拮抗能力较强。结论:毛壳属的两种真菌As1、As2以及Ab2.21的抗菌能力的广泛性可以被进一步研究和开发。