高迁移率族蛋白B1基因沉默抑制子宫内膜癌侵袭与转移的机制

目的：探讨小干扰RNA抑制高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)表达后对p38MAPK通路的影响,从而了解HMGB1影响子宫内膜癌侵袭与转移的机制。方法：运用RNA干扰技术,设计合成4条HMGB1 shRNA,将HMGB1沉默效果最好的HMGB1 shRNA转染子宫内膜癌HEC-1A细胞,通过RT-PCR和Western 印迹技术检测转染后细胞HMGB1及p38MAPK在基因和蛋白水平的表达情况,MTT实验检测转染后细胞生长活力状态。结果：RT-PCR和Western 印迹结果均证实HMGB1 shRNA载体成功抑制HMGB1和p38MAPK在HEC-1A细胞中mRNA和蛋白的表达(P<0.05);MTT结果显示HMGB1 shRNA转染后HEC-1A细胞生长明显受抑(P<0.05)。结论：HMGB1表达下调可有效抑制子宫内膜癌细胞HEC-1A的增殖、侵袭和转移,此过程可能通过p38MAPK信号通路进行调节。     

冬凌草甲素对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、迁移和侵袭及lncRNA CCAT1表达的影响

目的:探讨冬凌草甲素对子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明其可能机制.方法:取对数生长期的子宫内膜癌HEC-1B细胞分为对照组(DMSO培养液)、阳性对照组(2.5 mg·L-1顺铂)、低剂量(10μmol·L-1)冬凌草甲素组、中剂量(20μmol·L-1)冬凌草甲素组和高剂量(40μmol·L-1...     

RhoC-shRNA对子宫内膜癌细胞RL-952增殖和侵袭能力的作用

目的探讨RhoC-shRNA对子宫内膜癌细胞RL-952生物学行为的影响。方法首先重组RhoC-shRNA表达载体,并以脂质体转染法将之稳定转染入子宫内膜癌细胞RL-952。免疫印迹检测转染RhoC-shR-NA后,观察RL-952细胞中RhoC蛋白表达的变化。继续观察转染前后子宫内膜癌RL-952细胞增殖和侵袭能力的变化。结果测序结果表明成功构建RhoC-shRNA表达载体。将其转染子宫内膜癌细胞后,RhoC蛋白表达水平受到抑制,抑制了肿瘤细胞的增殖、降低肿瘤细胞侵袭力。结论干扰RhoC蛋白的表达可抑制子宫内膜癌细胞RL-952增殖和侵袭能力,本研究为子宫内膜癌的治疗提供了新的思路。     

HMGB1及MMP9在Ⅰ型及Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的：探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及基质金属蛋白酶9（MMP9）在Ⅰ型及Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法选择两种子宫内膜癌标本存档蜡块100例作为研究对象,将其按照病理分型分成Ⅰ型组和Ⅱ型组,而后采用免疫组织化学法展开HMGB1及MMP9水平检测,并对检测结果进行统计分析。结果Ⅰ型组中HMGB1阳性者46例,MMP9阳性者47例,Ⅱ型组HMGB1阳性者49例,MMP9阳性者49例。显然HMGB1及MMP9在Ⅰ型子宫内膜癌组织中呈现高表达;HMGB1及MMP9在Ⅱ型子宫内膜癌组织中表达水平高于Ⅰ型子宫内膜癌组（P＜0.05）。结论 HMGB1及MMP9在子宫内膜癌的形成中表达存在一定异常。在今后的临床工作中,应对其给予足够的重视。     

PSME1/2通过抑制CDK15的表达促进子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭

目的 探索人类蛋白酶体激活剂（proteasome activator subunit,PSME）1/2在子宫内膜癌（endometrial carcinoma,EC）中的表达水平及其对EC细胞增殖和侵袭的影响。方法 检测子宫内膜细胞系和原代细胞中PSME1/2和细胞周期蛋白依赖性激酶15（cyclin-dependentkinase 15,CDK15）的表达,以敲低株分析PSME1/2与CDK15的表达相关性及其对肿瘤增殖和侵袭影响。比较PSME1/2和CDK15在EC组织和癌旁组织中的表达水平差异,并分析其对EC患者预后的影响。结果 与人正常子宫内膜细胞系相比,PMSE1/2在HEC1B（human endometrial adenocarcinoma cells,HEC1B）及原代细胞中mRNA（messenger RNA,mRNA）高表达和蛋白高表达,CDK15蛋白表达量下降。与对照组和双敲组比,CDK15在HEC1B系PSME1/2敲低株的蛋白表达升高,提示CDK15可能受PSME1/2抑制。在EC组织PMSE1/2高表达,CDK15低表达。PSME1/2表达与患者临床资料如年龄、术后诊断分型、分化程度、术后分期等差异无统计学意义（P>0.05）。PSME1/2、CDK15的表达与EC患者的不良预后无明显相关性（P>0.05）。结论 PSME1/2抑制CDK15的表达而促进EC细胞的增殖和侵袭,PSME1/2具有促EC作用。     

甲基化转移酶抑制剂zebularine对人子宫内膜癌细胞ECC-1高迁移率族蛋白B1基因表达的影响

目的:研究甲基化转移酶抑制剂zebularine对人子宫内膜癌ECC-1细胞系增殖、迁移及高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1,HMGB1)基因表达的影响。方法:采用MTT法和划痕实验检测zebularine对人子宫内膜癌ECC-1细胞系的增殖抑制率及其细胞迁移率的影响,采用real-time PCR检测作用前后HMGB1 mRNA表达的变化。结果:⑴终浓度为200μmol/L的zebularine作用24 h能显著抑制ECC-1细胞系的增殖率和迁移率。MTT法对照组吸光度为0.64±0.05,实验组为0.46±0.04(P<0.05);对照组划痕愈合率为(87.45±6.05)%,实验组为(45.23±3.45)%(P<0.05);⑵终浓度为200μmol/L的zebularine作用24 h能显著降低HMGB1 mRNA的表达,对照组相对表达量为1.02±0.10,实验组为0.25±0.06(P<0.05)。结论:甲基化转移酶抑制剂zebularine可以有效抑制ECC-1细胞系的增殖和迁移,其效应可能与降低HMGB1 mRNA的表达有关。     

太白楤木皂苷下调sirtuin 1表达对HEC-1B细胞侵袭和迁移的影响

目的 太白楤木皂苷(SAT)具有明显的抗肿瘤功能,本研究通过探究SAT对子宫内膜癌细胞HEC-1B增殖、迁移、侵袭的影响,以期为子宫内膜癌的治疗提供理论依据。 方法 实验分为对照组(未加药物)、阳性对照组(30μmol/L环磷酰胺)、SAT 10μmol/L组、SAT 20μmol/L组、SAT 30μmol/L组。以不同浓度SAT及环磷酰胺处理HEC-1B细胞后,采用CCK8法检测HEC-1B细胞增殖情况,平板细胞克隆形成实验检测菌落形成;Transwell小室试验检测SAT对HEC-1B细胞迁移、侵袭能力的影响,实时荧光定量(qRT-PCR)法检测去沉默调控蛋白-1(sirtuin 1) mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测sirtuin 1蛋白、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、金属基质蛋白酶-9(MMP-9)表达。 结果 与对照组相比,阳性对照组、SAT处理组细胞增殖、侵袭、迁移数量显著降低(均P<0.05),且呈剂量依赖;与阳性对照组相比,SAT 20μmol/L组、30μmol/L组细胞增殖、侵袭、迁移数量显著降低(均P<0.05);与对照组相比,阳性对照组、SAT处理组MMP-2、MMP-9、sirtuin 1 mRNA、sirtuin 1蛋白水平显著降低(均P<0.05),且随SAT浓度升高而下降;与阳性对照组相比,SAT 20μmol/L组、SAT 30μmol/L组MMP-2、MMP-9、sirtuin 1 mRNA、sirtuin 1蛋白水平显著降低(均P<0.05)。 结论 太白楤木皂苷可抑制子宫内膜癌细胞HEC-1B细胞迁移、侵袭,可能与下调sirtuin 1表达有关,能为子宫内膜癌的治疗提供新可能。      

LSD1体外促进子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)已被报道在多种恶性肿瘤中发挥作用,但其在子宫内膜癌中的作用少有报道。本研究旨在探讨LSD1在子宫内膜癌中的作用及其可能的机制。方法 在子宫内膜癌细胞系Ishikawa和HEC1A中分别使用慢病毒和质粒对LSD1进行敲除和过表达。通过定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(WB)验证转染结果。采用CCK-8实验、集落形成实验、伤口愈合实验和transwell侵袭实验分别检测LSD1对子宫内膜癌细胞体外增殖、克隆、迁移和侵袭的影响。通过肿瘤异种移植实验验证LSD1对子宫内膜癌细胞增殖的影响。结果 与正常子宫内膜组织相比,LSD1在子宫内膜癌中表达水平升高,与肿瘤的分期及分级有关,并影响患者的预后。下调LSD1后,CCK-8实验和集落形成实验显示子宫内膜癌细胞的增殖能力明显下降,伤口愈合实验显示细胞的迁移能力减弱,transwell侵袭实验则证实了细胞的侵袭能力随之降低,而上调LSD1后结果则相反。通过WB和免疫组化法发现CD9的表达水平随着LSD1的降低而升高。此外,下调LSD1可抑制Ishikawa和HEC1A细胞在体内的肿瘤发生...     

高迁移率族蛋白B1过表达对子宫内膜癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制研究

目的:探讨高迁移率族蛋白(HMG)B1过表达对子宫内膜癌细胞增殖、周期和凋亡的影响及机制.方法:将对数生长期的Ishikawa细胞分为三组:pcDNA3.0组、pcDNA3.0-HMGB1组与对照组.pcDNA3.0组、pcDNA3.0-HMGB1组分别转染pcDNA3.0载体与pcDNA3.0-HMGB1载体,对照组...     

抵抗素对人子宫内膜癌细胞增殖、黏附及侵袭的影响

目的研究抵抗素对人子宫内膜癌细胞系Ishikawa增殖、黏附及侵袭的影响。方法采用MTT法检测细胞的增殖活性及细胞黏附能力,实时定量PCR方法检测MMP-2、MMP-9及TIMP-1、TIMP-2的表达。结果10、50、100和150 ng/ml的抵抗素均能促进Ishikawa细胞的生长,并有时间和剂量依赖性,以100 ng/ml作用48 h的增殖作用最为明显,与对照组相比差异均有统计学意义（P〈0.01）;能增强细胞黏附能力,4个浓度的细胞黏附率分别为67%、69%、75%和98%,与对照组0%的黏附率比较差异有统计学意义（P〈0.01）;能促进MMP-2、MMP-9的表达,使MMPs/TIMPs的表达失衡,增强细胞侵袭能力。结论抵抗素可以促进子宫内膜癌细胞系Ishikawa的增殖,增强细胞的黏附及侵袭能力。     

肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）促进Ⅰ型子宫内膜癌细胞增殖和侵袭

 目的  研究肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)对Ⅰ型子宫内膜癌增殖转移的影响及其分子生物学机制。方法 免疫组化方法分析正常及各类型子宫内膜增生性病变(增殖期、分泌期、单纯增生、复杂增生、不典型和I型子宫内膜癌)组织中巨噬细胞浸润情况。CCK-8法和Transwell法分别检测单核巨噬细胞系THP-1(构建为M2型TAMs后)对Ⅰ型子宫内膜癌细胞系RL95-2增殖和侵袭能力的影响,Transwell法检测RL95-2对THP-1的招募作用。Western blot技术检测THP-1对RL95-2的CyclinD1和MMP-2表达影响。 结果  免疫组化结果显示,TAMs浸润数目与子宫内膜增生性病变进展程度呈正相关。RL95-2可招募THP 1,招募的THP 1促进RL95 2的增殖和侵袭,MMP-2和CyclinD1表达随THP-1作用而呈时间依赖性上调(P<0.05)。结论  巨噬细胞浸润增加造成的肿瘤周围炎症微环境可能是Ⅰ型子宫内膜癌发展的机制之一。     

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的：探讨微小RNA-216a-5p（miR-216a-5p）靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白（WASL）对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法：收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物（miR-216a-5p）、模拟物阴性对照（miR-con）、沉默对照（si-con）、沉默WASL的小干扰RNA（si-WASL）、抑制物阴性对照（anti-miR-con）、miR-216a-5p抑制物（anti-miR-216a-5p）、miR-216a-5p及空载质粒（pcDNA）和miR-216a-5p及WASL过表达质粒（pcDNA-WASL）分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR（Real-time RT-qPCR）和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果：与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低（P<0.05）,WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,两者呈负相关关系（r=-0.317,P<0.01）。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平（P<0.01）和细胞增殖活性均明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

过表达丝裂原诱导基因6对子宫内膜癌细胞凋亡和侵袭力的影响

目的:观察过表达丝裂原诱导基因6(mitogen-inducible gene 6,MIG6)对子宫内膜腺癌细胞(Ishikawa cell)增殖?凋亡和侵袭能力的影响?方法:脂质体法介导MIG6过表达质粒转染Ishikawa细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染前?后MIG6表达变化;流式细胞仪检测细胞凋亡的变化;Western blot检测凋亡相关蛋白和周期蛋白的表达;5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭能力的变化?结果:转染MIG6过表达质粒后,Ishikawa细胞中MIG6 mRNA和蛋白的水平分别为对照组的24.2倍和2.8倍,差异具有统计学意义(P < 0.05)?增加Ishikawa细胞中MIG6表达后,裂解的半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase 3)表达显著上升(P < 0.05);早期凋亡率?晚期凋亡率分别较对照组升高1.7倍(P < 0.01)?2.7倍(P < 0.05);Cyclin D1蛋白表达明显下降(P < 0.05),ERK蛋白磷酸化水平下降,pERK/ERK比值降低(P < 0.05);细胞增殖率由(43.4 ± 2.4)%下降至(30.5 ± 4.3)%(P < 0.05);穿过Transwell膜的细胞数从(36.2 ± 6.9)个下降至(26.2 ± 3.8)个(P < 0.05)?结论:MIG6表达上调能抑制Ishikawa细胞的增殖水平和侵袭能力,并促进其凋亡?     

miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

目的探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22 对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b 和FOXO1 的表达;运用RT-PCR 的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、 RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通 过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 mRNA 的变化,Western blotting 检测在FOXO1 蛋白的变化。结果miR-135b 在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高（P< 0.05）, FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低（P<0.05）。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与 FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖（P<0.05）。上调miR-135b能够降低FOXO1 mRNA和蛋白 的表达（P<0.05）,下调miR-135b能够提高FOXO1 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论miR-135b在子宫内膜癌的发生发展 中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。     

大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其机制研究

目的探讨大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响及其作用机制,为临床应用植物雌激素提供理论依据。方法体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,采用MTT法检测不同浓度大豆甙元对子宫内膜癌细胞增殖的影响,同时采用RT-PCR及Western Blot方法检测细胞中雌激素受体相关受体α(ERRα)mRNA及蛋白水平的变化。结果大豆甙元对Ishikawa细胞体外增殖有明显的抑制作用,并随药物浓度的增加及作用时间的延长其抑制作用逐渐增加,呈剂量及时间依赖性。低浓度(<40 mmol/L)大豆甙元对细胞中ERRαmRNA及蛋白水平无明显影响,而高浓度(≥40 mmol/L)大豆甙元可上调细胞中ERRα的表达。结论大豆甙元可抑制子宫内膜癌细胞的增殖,这种抑制作用可能通过调控细胞中ERRα的表达实现。     

MiRNA-381 抑制肾癌侵袭能力及其分子机制

目的：研究miRNA-381对肾癌侵袭的抑制作用,并探索其机制。方法：上调miRNA-381表达后,观察 miRNA-381对肾癌细胞侵袭的抑制作用。通过miR数据库starBase研究miRNA-381靶基因,再通过双荧光素酶实验验 证。分析miRNA-381及相应靶基因在细胞和组织水平的表达丰度。结果：转染miRNA-381后,其表达增加,跨膜细胞 数目显著下降,细胞侵袭力受抑制。生物信息学分析显示miRNA-381靶基因为CREB绑定蛋白(CREB binding protein, CBP)、β-catenin和淋巴增强因子-1(lymphoid enhancer binding factor-1,LEF-1);包含野生型靶基因3'-非编码区载体组的 荧光素酶活性明显降低。实时定量PCR显示肾癌细胞中miRNA-381低表达,在高转移潜能肾癌细胞株786-OHM中表达 更低;相反,在细胞、组织水平miRNA-381靶基因CBP,β-catenin与LEF-1表达均增高。结论：MiRNA-381可抑制肾癌 细胞的侵袭能力,其机制可能是通过CBP,β-catenin和LEF-1实现的。     

胃癌组织高迁移率族蛋白B1的表达及与临床病理特征的关系

目的：检测高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在胃癌组织的表达,分析其与胃癌临床病理特征的关系。方法112例胃癌及癌旁组织标本应用免疫组织化学法、反转录 PCR、Western‐blot检测 HMGB1的表达、定量,应用统计学方法分析其与胃癌临床病理特征关系。结果免疫组织化学染色显示：HMGB1阳性颗粒主要位于细胞核;反转录 PCR、Western‐blot显示：胃癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织和正常胃组织（P＜0．01）,HMGB1过度表达与胃癌的分化程度、组织学的类型及有无淋巴结转移关系密切。结论 HMGB1在胃癌组织中高表达与胃癌的临床病理特征密切相关,推测其过表达可能与胃癌的侵袭、转移有关。