Notch1在调节小细胞肺癌多药耐药中的作用

目的探讨Notch1在小细胞肺癌多药耐药中的作用。方法首先通过QRT-PCR和Western-blot从基因和蛋白水平检测小细胞肺癌敏感细胞株(H69)和耐药细胞株(H69AR)中Notch1的差异表达;应用siRNA抑制耐药细胞株H69AR中的Notch1的表达,通过CCK8检测细胞对各种化疗(ADM,DDP,VP-16)的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果 Notch1在H69AR中的表达明显高于H69,抑制耐药细胞株中Notch1的表达能够增加细胞对化疗药物的敏感性,促进细胞的凋亡。结论 Notch1可能参与了调节小细胞肺癌对多药耐药性。     

转化生长因子β1在大鼠周围神经再生过程中的作用

目的：探讨转化生长因子β1(TGFβ1)在大鼠周围神经损伤后再生过程中的作用及是否参与了再生中脊髓前角运动神经元碱性成纤维生长因子（bFGF）表达的调节。方法: 将48只成年SD大鼠在右侧坐骨神经压榨损伤术后随机分为TGFβ1组和生理盐水（NS）组。TGFβ1组在坐骨神经压榨损伤近心端注射TGFβ1 50μL(0.1μg/mL)，术后隔日在右侧下肢后群肌内注射TGFβ1 50μL, 对照组同样方法注射等量NS。实验动物分别存活3，7，14和21d后运用免疫组织化学方法检测TGFβ1对脊髓前角运动神经元bFGF蛋白的表达变化。存活21d的实验动物还用半薄切片和Fast Blue逆行荧光示踪方法观察TGFβ1对坐骨神经损伤后远端的再生情况。结果：TGFβ1组脊髓前角bFGF蛋白的表达高于NS组（P<0.05）；损伤远侧端再生轴突数目、直径与髓鞘厚度TGFβ1组均明显好于NS组（P<0.05）； TGFβ1实验组脊髓和背根节内荧光标记细胞数量明显多于NS组（P<0.01）。结论：外源性TGFβ1可以促进周围神经损伤后再生；TGFβ1上调周围神经损伤后脊髓前角运动神经元bFGF的表达。     

转化生长因子β1、P21WAF1/CIP1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:研究转化生长因子β1(TGF-β1)、P21^WAF1/CIP1在非小细胞肺癌中的表达以探讨肿瘤对TGF-β信号通路负调控的逃逸机制。方法：对非小细胞肺癌60例标本组织及15例正常肺组织中TGF-β1、P21^WAF1/CIP1蛋白表达进行免疫组化研究。结果：TGF-β1、P21^WAF1/CIP1在肿瘤组织中均高表达，且TGF-β1与淋巴结转移、肿瘤浸润程度、TNM分期等临床病理因素有关。结论：TGF-β1在肺癌中可作为一个较好的预后因子，TGF-β1、P21^WAF1/CIP1的表达一定程度上均能反映肿瘤的生物学行为。     

CyclinD1 MDR1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的　探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)中细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及多药耐药基因 (MDR1)的表达及临床意义。方法　用鼠抗人CyclinD1及鼠抗人MDR1单克隆抗体对 40例石蜡包埋的原发性NSCLC组织进行免疫组化染色 ,并与 10例肺良性病变比较。结果　CyclinD1及MDR1在NSCLC中均有较高的表达 ,其阳性率分别为 67 5 %和 47 5 % ;而在肺良性病变中 ,CyclinD1无 1例表达 ,而MDR1有 1例表达 ,阳性率为 10 % ;在NSCLC中 ,CyclinD1表达与肿块大小、有无淋巴结转移、分化程度及临床分期无关 (P >0 0 5 ) ;而MDR1表达则在肿块≥ 3cm高于肿块 <3cm(P <0 0 5 ) ;有淋巴结转移高于无淋巴结转移 (P <0 0 5 )。结论　CyclinD1的过表达与肺癌的发生有关 ,是NSCLC的早期分子事件之一 ,而与NSCLC的发展和预后无关 ,可作为NSCLC早期诊断的指标之一。MDR1的过表达与NSCLC的发展与预后有关 ,可作为NSCLC预后的指标之一 ,同时 ,有利于进行NSCLC耐药的监测与评价。     

多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌中的表达和预后

目的 :研究非小细胞肺癌中多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达同临床病理特征和病人预后生存期的关系。方法 :采用免疫组织化学S P法检测 6 2例非小细胞肺癌中MRP的表达。结果 :6 2例非小细胞肺癌中MRP总阳性率为 83.88% (5 2 / 6 2 ) ,强阳性率为 4 6 .77% (2 9/ 6 2 ) ,其中鳞癌的阳性率为 87.5 0 % (35 / 4 0 ) ,腺癌为 77.2 7%(17/ 2 2 )。MRP表达与患者性别、组织分化程度、淋巴结转移均无关。MRP表达阴性者术后平均生存期为 (6 9.81± 17.4 1)月 ,表达阳性者为 (2 5 .38± 4 .4 6 )月 ,二者差异具有显著性 (P =0 .0 15 6 )。鳞癌中MRP阴性和阳性者术后生存期存在显著差异 (P =0 .0 15 3)。结论 :非小细胞肺癌中 ,尤其是鳞状细胞癌MRP的表达与术后生存期呈负相关 ,是影响病人预后的因素。MRP阴性表达者术后生存期相对较长。     

非小细胞肺癌患者血清肝细胞生长因子及转化生长因子-β的检测及临床意义

目的 探讨血清肝细胞生长因子(HGF)和转化生长因子-β(TGF-β)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,阐明HGF、TGF-β在NSCLC疾病的侵袭和进展中的作用.方法 采用ELISA法检测72例术前NSCLC患者(NSCLC组)和70例健康体检者(对照组)血清HGF、TGF-β水平.结果 NSCLC组血清HGF、TGF-β均显著高于对照组,相比较差异有显著性(t =4.046,3.994,P ＜0.05).临床分期Ⅳ期的血清HGF、TGF-β水平显著高于Ⅲ期,相比较差异有显著性(t=3.941,3.898;P ＜0.05);肿瘤低分化组血清HGF、TGF-β水平明显高于高中分化组,相比较差异有显著性(t =3.471,3.656;P ＜0.05);发生肿瘤转移组血清HGF、TGF-β水平显著高于肿瘤未转移组,相比较差异有显著性(t=3.357,3.615;P ＜0.05).血清HGF、TGF-β水平在性别、年龄和肿瘤病理类型之间比较差异无显著性(P＞0.05).结论 HGF、TGF-β在NSCLC血清中呈高表达,NSCLC患者术前血清HGF、TGF-β水平与肿瘤临床分期、肿瘤分化程度和肿瘤转移有关,高水平的HGF、TGF-β表明NSCLC疾病的侵袭和进展.     

人重组转化生长因子β1促进牙髓干细胞的增殖和矿化

目的：研究人重组转化生长因子β1（recombinant human transforming growth factor β1, rhTGF-β1）对牙髓干细胞生物学性能的影响,包括确定促进牙髓干细胞增殖的最佳作用浓度和该浓度下对牙髓干细胞分化的作用。方法： 分离培养人健康第三磨牙牙髓干细胞,分别加入1 μg/L、6 μg/L、10 μg/L的rhTGF-β1,CCK 8（cell counting kit-8）法检测对牙髓干细胞增殖的影响,选择出最佳浓度在成骨/成牙本质诱导条件下连续培养,酶标仪检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）光密度值,二喹啉甲酸（bicinchoninic acid, BCA）蛋白质定量试剂盒计算总蛋白含量,两者比值作为ALP相对活性的指标。茜素红染色观察矿化结节形成能力,染色液洗脱后检测光密度值,比较rhTGF-β1对牙髓干细胞增殖和分化的作用。结果：牙髓干细胞具有体外形成矿化结节的能力,6 μg/L rhTGF-β1可促进牙髓干细胞增殖;连续培养7 d后,6 μg/L rhTGF-β1组细胞ALP的光密度值为0.31±0.03,显著高于对照组0.02±0.01(P<0.05);6 μg/L rhTGF-β1组总蛋白含量为（2 775.46±83.54） mg/L,对照组为（1 432.20±110.83） mg/L (P<0.05);ALP相对光密度值,6 μg/L rhTGF-β1组较对照组提高了6倍。茜素红染色下显示矿化结节形成增加,洗脱液光密度值6 μg/L rhTGF-β1组和对照组分别为0.83±0.02和0.55±0.05, P<0.05。结论： 6 μg/L rhTGF-β1具有促进牙髓干细胞增殖和促进体外成牙本质分化的作用。     

非小细胞肺癌中肺耐药蛋白mRNA的表达及临床意义

目的:探讨肺耐药蛋白(LRP)基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法:应用RT-PCR半定量法检测60例NSCLC患者癌组织及癌旁组织中LRP mRNA的表达。用t检验、方差分析,Kaplan-Meier生存曲线和Log-rank检验进行统计分析。结果:NSCLC患者的癌组织中LRP mRNA表达量显著高于癌旁组织(P=0.000),LRP mRNA表达量在肺腺癌中高于鳞癌(P=0.02),中高分化组高于低分化组(P=0.033),但LRP mRNA的表达量与其他临床病理相关因素及生存期无相关性。结论:LRP在NSCLC的原发性多药耐药(MDR)中可能起重要作用,检测LRP对于预测NSCLC患者化疗效果、协助临床选择化疗方案可能具有一定的意义。     

胰岛素样生长因子1在非小细胞肺癌EGFR-TKIs耐药机制中的作用

目的探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)在表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)耐药的非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株和患者中的表达和临床意义。方法 ELISA法检测PC9、A549、H1975细胞和患者血清IGF-1水平,蛋白质印迹和免疫细胞化学法检测细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP)的表达;MTT法检测吉非替尼和IGF-1受体拮抗剂BMS536924处理后的细胞增殖;收集84例接受EGFR-TKIs治疗患者的临床资料,分析IGF-1表达与临床病理特征和生存期的相关性。结果同吉非替尼敏感细胞株PC9相比,耐药细胞株H1975和A549中IGF-1表达增加(P<0.05),IGFBP表达降低;加入不同浓度的BMS536924可促进吉非替尼对耐药细胞株的增殖抑制(P<0.05)。在接受EGFR-TKIs治疗的患者中,疾病进展者的IGF-1水平较疾病控制者有所增高(P=0.052);原发性耐药者较获得性耐药者的IGF-1水平升高(P=0.02)。IGF-1表达阴性患者的生存期高于阳性患者(P=0.002)。结论 IGF-1在耐药NSCLC细胞株及患者血清中均有高表达,使用IGF-1R拮抗剂可逆转耐药细胞对EGFR-TKIs的反应;IGF-1表达与患者预后相关。     

非小细胞肺癌耐药机制及其逆转耐药的研究进展

化疗是肿瘤治疗的重要手段之一,多药耐药是许多肿瘤化疗失败的原因,肺癌也不例外。本文对耐药相关分子磷酸化糖蛋白、多药耐药相关蛋白、乳腺癌耐药蛋白、肺耐药蛋白、谷胱甘肽-S-转移酶、拓扑异构酶Ⅱ参与调控的非小细胞肺癌耐药的机制和中西药领域有关逆转耐药的研究进展进行简单综述,旨在为进一步寻找中药逆转肿瘤多药耐药的药物奠定理论基础。     

YKL-40蛋白在小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨YKL-40蛋白的表达与小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)临床病理特征及预后的关系?方法:采用免疫组织化学Envision法检测105例SCLC组织和40例癌旁组织YKL-40蛋白的表达情况?结果:YKL-40 在SCLC组织和癌旁组织中的阳性率分别为72.4%和22.5%,差异有统计学意义(P < 0.01);YKL-40的表达与患者性别?年龄和吸烟情况无显著相关,而与临床分期?淋巴结转移有关,差异有统计学意义(P < 0.05)?105例SCLC患者的中位生存期(overall survival,OS)为16.3个月;YKL-40阳性表达者中位OS为12.4个月,明显短于阴性表达者的中位OS 25.6个月,两者差异有统计学意义(P < 0.05)?单因素分析显示,临床分期和YKL-40表达与预后相关;多因素分析显示YKL-40的表达可以作为SCLC的独立预后因素?结论:YKL-40蛋白可以作为一个预测SCLC患者术后复发?转移及预后的分子标记物?     

胰腺导管腺癌中microRNA-21与TGF-β1信号通路相关

目的：对胰腺导管腺癌样本进行基因分析,筛选与胰腺导管腺癌相关的microRNA(miRNA),并初步分析目标miRNA与胰腺癌转化生长因子-β1(TGF-β1)信号通路的相关性。方法：收集在海南省中医院住院的胰腺导管癌患者术前外周静脉血血清标本19份,健康体检人群的外周静脉血血清标本21份作为非胰腺导管癌对照组。利用GCBI(Gene-Cloud Biotechnology Information)数据平台筛选与胰腺导管腺癌样本有关的基因并对其进行生物信息学分析,将筛选出的基因作为研究对象,用real-time PCR和蛋白质印迹法验证该基因在胰腺导管腺癌中的表达。通过改变胰腺导管腺癌细胞中该基因的表达水平观察其与TGF-β1之间的关系。结果：通过聚类分析和基因功能富集分析筛选出miRNA-21为胰腺导管癌相关基因。MiRNA-21在胰腺导管腺癌患者体内高表达。在miRNA-21过表达的PANC-1细胞中,TGF-β1表达受到抑制;但当miRNA-21的表达受到抑制时,TGF-β1的表达明显上升。结论：MiRNA-21在胰腺导管腺癌患者体内高表达,可调控TGF-β1的表达,从而参与胰腺导管腺癌的发生发展。     

小细胞肺癌患者外周血中Th9细胞水平检测及其临床意义

目的: 检测小细胞肺癌(SCLC)患者血清中白细胞介素9(IL-9)的水平和外周血中Th9的细胞比例,探讨Th9在SCLC疾病进展过程中的作用。方法: 选择20例局限期SCLC患者(局限期SCLC组)、16例扩散期SCLC患者(扩散期SCLC组)和10名健康对照者(健康对照组)。ELISA法检测各组研究对象血清中IL-9水平,流式细胞术检测各组研究对象外周血Th9细胞在CD4⁺T细胞中所占比例。结果: SCLC组患者外周血中Th9细胞比例高于健康对照组(t=3.731,P<0.01),局限期SCLC患者外周血中Th9细胞比例低于扩散期SCLC组(t=2.825,P<0.01)。SCLC组患者血清IL-9水平高于健康对照组(t=4.001,P<0.01),局限期SCLC组患者血清中IL-9水平低于扩散期SCLC组(t=3.089,P<0.01);结论: Th9可能通过分泌IL-9直接促进SCLC的疾病进展,外周血中Th9细胞和IL-9可能成为评价小细胞肺癌的分子标志。     

神经生长因子在NCI-H466细胞中的表达及其生物学意义

目的： 探讨神经生长因子（nerve growth factor,NGF）在小细胞肺癌细胞株NCI-H466中的表达及肺癌脑转移的可能机制。方法： 采用免疫荧光标记技术观察人小细胞肺癌NCI-H466细胞中NGF的亚细胞定位表达,并采用MTT试验及Transwell试验观察NGF对NCI-H466细胞增殖及侵袭能力的影响。结果： NGF在NCI H466细胞中亚细胞定位表达存在细胞周期特异性,在分裂间期,NGF主要呈颗粒状分布于细胞核内;在分裂中期,NGF分布于纺锤丝上。加入外源性NGF的NCI-H466细胞增殖明显加速,侵袭能力增强。结论： NGF可以促进NCI-H466细胞增殖和迁移,中枢神经系统内高NGF水平可能是肺癌易于发生脑转移的原因之一。NGF在肺癌细胞内具有亚细胞定位表达的特点,有可能作为一种新的治疗靶点。     

多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌中共表达的临床意义

目的 检测多药耐药相关蛋白在非小细胞肺癌中共表达情况,并探讨共表达对预后的影响.方法 采用免疫组化SABC技术检测49例非小细胞肺癌中P-gP、 MRP、LRP、GSTπ的单表达及共表达水平,并随访生存时间.结果 各耐药蛋白单表达的阳性率分别为P-gP:7.7%,MRP:2.8%,LRP:5.8%,GSTπ:7.4%.两种共表达的阳性率为77.8%、78.1%、 87.4%、72.8%.3种共表达的阳性率为70.1%、53.9%、66.7%、50.1%.共表达阳性率明显高于单一表达阳性率,二者间具有显著差异性(P＜0.05);随着耐药蛋白表达种类的增加,生存曲线水平下降.结论 非小细胞肺癌的MDR现象是由多个耐药蛋白共同参与作用引起的,耐药蛋白表达种类的多少对预后有直接的影响.     

人肺腺癌多药耐药细胞系的建立及其生物学性状的测定

目的：体外建立人肺腺癌细胞多药耐药细胞系。方法：以阿霉素(adriamycin，ADM)为诱导药。人肺腺癌细胞系(SPC-A-1)为诱导对象。逐步增加ADM药物浓度进行诱导，以一定浓度ADM培养46周后．光镜观察细胞形态，采用MTT法检测细胞耐药指数(RF)，并同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇、ADM6种药物进行交叉耐药检测。结果：SPC-A-1／ADM形态不规则。SPC-A-1／ADM对ADM的RF为11．3．同时对长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、紫杉醇5种抗癌药物有不同程度的耐药性。结论：建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC-A-1／ADM，可用于多药耐药性机制及逆转的研究。     

Expression of Beclin1 in non small cell lung cancer and its clinical significance

Objective:To investigate the expression of autophagy related gene;Beclin1 in human non-small cell lung cancer(NSCLC)tissues.Methods:Protein expression of Beclin1 was determined by immunofluorescence staining and Western Blot,mRNA expression was analyzed by RT-PCR.Results:Immunofluorescence staining revealed that the level of Beclin1 expression in lung cancer was significantly lower than that in adjacent noncancerous tissues and normal tissues(expression rate 8.3%,P=0.000).The Beclin1 mRNA expression in lung cancer,adjacent noncancerous tissues and normal tissues was 1.372(±0.475)1.721(±0.521)and 1.553(±0.554)when F = 15.0,P < 0.01.Beclin1 protein expression in lung cancer,adjacent noncancerous tissues and normal tissues was 3.453(±0.852)5.423(±1.351)and 6.878(±0.997)F = 11.2,P < 0.01.Conclusion:The protein and mRNA expression of Beclin1 in lung cancer was much lower than those in and around cancer tissues and normal tissues,those differences having statistical significance.However in adjacent noncancerous tissues and normal tissues,the expression showed no difference.     

人小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达基因的克隆研究

目的 构建小细胞肺癌多药耐药细胞(H446/CDDP)差异表达消减cDNA文库.方法 ①以H446/CDDPcDNA为实验方(Tester),小细胞肺癌细胞H446 cDNA为对照方(Driver),应用抑制消减杂交(SSH)技术结合T/A克隆技术构建小细胞肺癌多药耐药细胞差异表达消减cDNA文库.②通过斑点杂交筛选、测序及同源性分析获取H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段.结果 成功构建了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP差异表达消减cDNA文库,获得21个H446/CDDP细胞差异表达cDNA片段,经测序及同源性分析表明它们分别代表6个已知基因(同源性为96%～100%).结论 SSH技术是筛选新的功能基因的有效方法;获取的6个差异表达基因可能参与了小细胞肺癌多药耐药细胞H446/CDDP的耐药形成,进一步的功能研究有利于了解它们在小细胞肺癌多药耐药机制中所发挥的作用.     

多药耐药相关蛋白在肝癌耐药细胞系HepG2/Oxal中的作用机制研究

目的:探讨多药耐药(multi-drug resistance,MDR)相关蛋白在肝癌细胞系HepG2及不同浓度耐奥沙利铂(oxaliplatin,Oxal)亚系中的表达及参与肝癌对Oxal耐药的机制。方法:以浓度递增法诱导肝癌细胞系HepG2,建立2.5、5.0μg/ml的Oxal耐药亚系,以半定量RT-PCR法测定MDR、多药耐药相关蛋白(multi-drug resistance related protein,MRP)和乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在亲代和不同耐药亚系中的mRNA表达,并在蛋白水平以Western blot法验证基因表达的差异性。结果:成功建立了IC50值为15和25倍亲代细胞的Oxal耐药亚系(HepG2/Oxal);在mRNA和蛋白水平,BCRP的表达与HepG2的耐药性呈正相关,而MDR、MRP的表达在耐药的早期升高不明显,随着耐药程度的增加其表达增加。结论:BCRP在HepG2对Oxal获得性耐药中起着重要作用,MDR和MRP在HepG2/Oxal耐药过程中早期起的作用不明显,随着耐药浓度的增加,表达越来越高。