ISL-1表达水平对胃癌细胞化疗耐药性的影响及机制探究

【立论依据】 化疗是一种重要的胃癌辅助治疗方法,但由于不同患者对化疗药物的耐药性差异极大,而影响其治疗效果。哪些因素会导致胃癌细胞呈现不同的耐药性目前尚未阐明。最新的研究表明,自噬可以帮助细胞对抗微环境中的化疗药物,导致耐药。胰岛因子1(Islet-1,ISL1),在正常成体胃组织中不表达,但我们发现ISL1在人胃癌组织中呈中等丰度的表达,且不同胃癌细胞系表达量有明显差异,并对胃癌经典化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性亦不同。胃癌细胞中ISL1表达量的差异是否与化疗耐药性相关,目前国内外尚未见报道。我们还发现,5-FU处理下,ISL1表达丰度高的胃癌细胞,其自噬发生标志LC3的剪切也明显增加,那么ISL1是否通过增强肿瘤自噬能力来介导胃癌细胞的化疗耐药性?故本课题试图阐明胃癌细胞中ISL1表达量的差异可导致肿瘤细胞产生不同的化疗耐药性,其分子机制与ISL1能够增强肿瘤自噬能力有关。 【设计思路】 (1)明确胃癌细胞中ISL1表达量的差异能否导致肿瘤细胞产生不同的化疗耐药性;(2)证实胃癌细胞中自噬与耐药性的关系;(3)探究ISL1与自噬之间的相关性,阐明ISL1促进肿瘤耐药性的机制是通过促进自噬来实现的。 【实验内容】 (1)CCK-8实验和蛋白质印迹实验分别检测ISL1表达量不同的两株胃癌细胞系对5-FU的耐药性差异和自噬强度;(2)过表达/敲低ISL1,检测两种细胞对5-FU的耐药性变化和自噬强度;(3)在过表达或敲低ISL1基础上抑制或增强自噬,检测两株胃癌细胞系在5-FU处理下的自噬强度和各自耐药性的改变。 【材料】 人胃癌细胞系MGC803、MKN28;5-FU;CCK-8试剂盒;过表达或抑制ISL1的质粒;雷帕霉素;3-甲基腺嘌呤;各蛋白抗体。 【可行性】 本实验所涉及的转录因子ISL1为本实验室主要研究对象,因此,本实验在理论指导、材料准备上都有很大的可行性。 【创新性】 自噬与肿瘤耐药之间的关系尚无定论;自噬在胃癌细胞耐药性中的作用也未见报道。因此,本实验属理论创新,且具有应用价值,对肿瘤治疗乃至药物靶点设计方面都有一定意义。     

多药耐药基因MDR 1 和细胞自噬在 肿瘤多重耐药机制中的研究进展

肿瘤是威胁人类健康的恶性疾病。化疗是目前临床抗肿瘤最常用的治疗方法,化疗药物具有 较广的抗瘤谱。但肿瘤多重耐药的发生是导致化疗疗效不佳的主要原因。肿瘤多重耐药机制非常复杂,与 药物代谢、药物靶点改变、DNA 修复增强、细胞周期改变及肿瘤微环境等均有密切联系。其中多药耐药基 因MDR 1 表达的膜转运蛋白P- 糖蛋白参与的化疗药物逆向转用是多药耐药发生的重要机制之一,但是针 对MDR 1 的一些抑制剂并不能很好地解决肿瘤的耐药问题。近年来研究发现,细胞自噬直接参与肿瘤多药耐 药,联合调控MDR 1 的表达及肿瘤细胞自噬水平将可能改善肿瘤细胞的多重耐药。该文主要从多药耐药基因 MDR1 的表达调控及细胞自噬水平改变两方面综述肿瘤细胞多重耐药机制的研究进展。     

干扰水通道蛋白3对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探究水通道蛋白3(AQP3)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响及其可能机制。方法:通过RT-PCR、Western-blot实验检测胃癌细胞株中的AQP3表达水平;小干扰RNA构建AQP3低表达细胞系;CCK-8增殖实验和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡水平;Western-blot检测细胞自噬水平,透射电镜观察自噬小体数目。结果:胃癌细胞AQP3表达水平较高;与干扰前相比,AQP3低表达细胞系中胃癌细胞增殖水平降低(P<0.05),凋亡水平提高(P<0.001),自噬标记蛋白LC3Ⅱ水平降低(P<0.001),P62表达水平上升(P<0.001)。结论:AQP3在胃癌细胞中高表达,干扰AQP3可通过降低自噬水平促进细胞凋亡,进而抑制胃癌细胞增殖,提示AQP3具有成为胃癌治疗分子靶点的潜能。     

环状RNA与自噬在胃癌中作用的研究进展

胃癌是世界上高发且病死率较高的恶性肿瘤之一,其早期诊断直接关系到患者的预后。化疗是晚期及复发转移胃癌必不可少的治疗手段,但肿瘤细胞在化疗过程中产生的耐药性却严重影响了患者的获益。环状RNA(circular RNA,circRNAs)是一种环状非编码RNA,近年来许多关于circRNAs的研究表明,其高特异性和高敏感度使得体液中的circRNAs有望成为胃癌早期诊断、预后预测的重要生物学标志物。此外,在化疗耐药分子机制中,circRNAs与自噬也扮演着非常重要的角色。因此,circRNAs与自噬在胃癌中作用机制的研究,引起了人们的广泛关注。本文就circRNAs作为胃癌诊断和预后预测的生物学标志物、circRNAs与自噬调控胃癌耐药的分子机制以及circRNAs作为治疗靶标的潜力做一综述。     

IL-33增强胃癌细胞顺铂抵抗的机制研究

目的研究IL-33对胃癌细胞自噬调节的作用,分析其对胃癌细胞的作用靶标,阐明胃癌细胞顺铂耐药的作用机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定不同剂量IL-33处理下,胃癌细胞MKN45和正常胃上皮细胞GES-1的增殖率、胃癌细胞对4种化疗药物的敏感性及胃癌细胞对顺铂及其抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）的敏感性。Westernblot法检测IL-33作用下,胃癌细胞自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3α/β（LC3A/B）、Beclin1和生长刺激表达基因2蛋白（ST2）相对表达量的变化。结果高剂量IL-33促进胃癌细胞增殖。≥128ng/LIL-33处理后,胃癌细胞对顺铂产生显著抵抗作用,顺铂共培养的胃癌细胞增殖率显著上升（P＜0.05）。IL-33作用下胃癌细胞自噬相关蛋白LC3A/B和Beclin1相对表达量提高（P＜0.05）,3-MA逆转了IL-33对胃癌细胞的顺铂耐药效应（P＜0.05）。添加iST2-1,IL-33处理下的胃癌细胞自噬相关蛋白相对表达量上调,顺铂共培养的胃癌细胞增殖率降低（P＜0.05）。结论IL-33能够通过与ST2结合介导胃癌细胞自噬水平增加,进而产生对顺铂的耐药性。     

葫芦素B抑制人顺铂耐药胃癌细胞的作用及机制研究

目的:探讨天然化合物葫芦素B(Cucurbitacin B,Cu B)在顺铂(Cisplatin,DDP)耐药的人胃癌细胞(Gastric cancer,GC)中的作用及作用机制。方法:通过MTT法和软琼脂集落形成实验测定Cu B对DDP耐药的人胃癌细胞系SGC7901/DDP的毒性作用;Western blot法检测Cu B对耐药相关因子的表达水平的影响;激光共聚焦显微镜检测自噬、DAPI染色检测凋亡;Western blot和PP2A活性检测探讨Cu B在SGC7901/DDP中的作用机理。结果:Cu B能够抑制SGC7901/DDP细胞的生长,诱导自噬、凋亡及逆转DDP耐药。并且能够抑制与肿瘤多药耐药相关蛋白的表达,包括P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药性相关蛋白(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1),抑制CIP2A/PP2A/m TORC1信号通路活化。结论:Cu B能够抑制SGC7901/DDP细胞增殖并且通过抑制CIP2A/PP2A/m TORC1信号通路诱导细胞自噬和凋亡,可以作为治疗DDP耐药的新的有效药物进行研究。     

自噬与凋亡在骨肉瘤中的作用

骨肉瘤是儿童和青少年中最常见的原发性骨肿瘤,其恶性程度高,严重影响患者的生存。虽然手术和多靶点化疗的联合治疗使得患者整体的生存率有了大幅度的提高,但化疗耐药仍然是骨肉瘤治疗的阻碍。骨肉瘤化疗耐药与其在发生发展过程中的凋亡和自噬等有一定关系。现在骨肉瘤中细胞凋亡、自噬的机制以及相互作用已经被初步探索,参与细胞凋亡、自噬的分子靶点、介质及相关机制已经开始研究,这对缓解骨肉瘤治疗过程中的化学耐药指导引领新的方向。     

胃癌组织中MiR-186-5p表达水平及与血管生成的关系

目的探讨MiR-186-5p在胃癌组织中的表达及与血管生成的关系。方法选取2012年10月至2013年10月郑州大学附属肿瘤医院进行手术治疗的73例胃癌患者,手术切除的癌组织为胃癌组,另选择70例检测正常的胃黏膜组织为对照组。采用q RT-PCR法检测胃癌组织及对照组中MiR-186-5p mRNA相对表达水平,采用抗CD34抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD);分析MiR-186-5p与胃癌患者临床指标的相关性;Spearman法分析MiR-186-5p与MVD的相关性。结果 qRT-PCR检测显示MiR-186-5p在胃癌组织中的表达明显低于正常胃黏膜组织(P0.05);胃癌组织MVD(32.6±7.5)显著高于正常胃黏膜组织MVD(13.8±3.4);临床病理资料比较显示MiR-186-5p、MVD表达水平与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、分化程度无显著相关性,与淋巴结转移和临床分期相关;Spearman相关性分析显示MiR-186-5p表达与MVD呈显著负相关(r=-0.733,P=0.000)。结论 MiR-186-5p的表达水平高低在胃癌肿瘤血管生成中具有重要作用,且与胃癌的淋巴结转移和临床分期密切相关。     

自噬影响结直肠癌奥沙利铂耐药的研究进展

结直肠癌是世界上最常见的癌症之一,其发病率在全球呈上升趋势。奥沙利铂是治疗结直肠癌的一线化疗药物,在治疗结直肠癌时,可通过多种信号通路影响细胞自噬而导致治疗性耐药。自噬是细胞内的一种分解代谢过程,将自身的细胞质成分如细胞器、蛋白质等物质进行降解。自噬在奥沙利铂治疗结直肠癌时具有双重作用,既可以促进肿瘤细胞存活又可以导致肿瘤细胞死亡。因此,深入研究自噬通路有望为克服结直肠癌耐药提供理论依据。本文就自噬如何影响结直肠癌细胞对奥沙利铂的耐药进行综述,为结直肠癌患者的治疗提供新思路。     

自噬对PC9/GR细胞吉非替尼敏感性及PD-L1影响的体外研究

目的 探讨在体外影响自噬对吉非替尼耐药肺腺癌细胞PC9/GR药物敏感性及程序性死亡配体-1(PD-L1)的影响.方法 实时荧光定量PCR及Western blot法检测吉非替尼敏感细胞株PC9及吉非替尼耐药细胞株PC9/GR自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1及PD-L1表达水平;CCK-8实验检测PC9和PC9/GR细胞对吉非替尼敏感性以及抑制PC9/GR自噬后各组细胞增殖情况;Western blot法检测调控PC9/GR自噬后LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p62及PD-L1的表达.结果 PC9/GR细胞中自噬及PD-L1表达高于PC9细胞,CCK-8实验显示PC9/GR细胞对吉非替尼IC50.高于PC9细胞,抑制自噬后PC9/GR细胞对吉非替尼药物敏感性部分恢复(P＜0.05).Western blot显示在PC9/GR细胞中诱导自噬PD-L1表达增加,抑制自噬PD-L1表达减少,且随自噬抑制剂处理的时间及浓度的改变而变化(P＜0.05).结论 体外实验结果提示,抑制自噬可能增强肺腺癌耐药细胞对吉非替尼的敏感性,提示PD-L1可能被自噬调控,PD-L1可能参与体外抑制自噬逆转吉非替尼耐药的过程.     

LncRNA CASC2、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性研究

目的：分析长链非编码RNA(LncRNA)癌易感性候选基因2(CASC2)、miR-155-5p与上皮性卵巢癌病人化疗敏感性及预后的相关性关系。方法：采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测87例上皮性卵巢癌病人(上皮性卵巢癌组)及72例卵巢良性肿瘤病人(对照组)LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平,比较2组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平,分析上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与临床病理特征的相关性关系。根据上皮性卵巢癌组病人术后化疗是否出现继发耐药分为化疗耐药组(n=32例)和化疗敏感组(n=55例),分析LncRNA CASC2、miR-155-5p表达水平与化疗敏感性的关系。同时采用Pearson法分析上皮性卵巢癌组织中LncRNA CASC2与miR-155-5p的相关性关系,采用Kaplan-Meier法分析两者与上皮性卵巢癌病人5年生存情况的关系。结果：上皮性卵巢癌组LncRNA CASC2表达水平低于对照组,而miR-155-5p表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);...     

胃癌组织中血管生成素样蛋白2和miR-211表达水平与其预后的关系

目的 探讨胃癌组织中血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)和miR-211表达水平与其预后的关系.方法 采用免疫组化法检测胃癌根治术治疗的62例患者胃癌组织及其相应癌旁组织中ANGPTL2和miR-211的表达水平,并分析其对胃癌患者预后的影响.结果 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率分别为88.71%和83.87%,均显著高于其癌旁正常组织的3.23%和8.06%(P<0.05).62例患者随访3年的复发率、无病生存期(DFS)和3年生存率分别为45.16%、(16.62±4.78)个月和62.90%,且ANGPTL2和miR-211阳性表达患者的复发率高于阴性表达患者,DFS短于阴性表达患者,3年生存率则低于阴性表达患者(P<0.05).logistic线性回归分析结果显示,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率均可明显影响其预后情况(P<0.05).结论 胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达率较高且可影响其复发率、DFS和3年生存率等预后情况,胃癌组织中ANGPTL2和miR-211阳性表达可能作为其不良预后评估的参考指标.     

MicroRNA-122-5p、microRNA-33a-3p在胃癌患者中的表达及与临床病理特征和预后的关系

目的 探究胃癌患者血清microRNA-122-5p(miR-122-5p)、microRNA-133a-3p(miR-133a-3p)mRNA相对表达量与临床病理特征及预后的关系.方法 采集胃癌患者血清标本94例,以相同例数的健康体检者的血清样本作为对照.采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-qPCR)技术检测血清m...     

血清miR-31、miR-155和CCL26在溃疡性结肠炎中预后不良的诊断价值

目的 观察血清miR-31、miR-155和趋化因子配体26（CCL26）在溃疡性结肠炎中预后不良的诊断价值。方法 选择2019年1月—2020年6月在我院收治的溃疡性结肠炎的患者119例,根据Mayo评分将其分为活动期组（65例）和缓解期组（54例）;同时根据Mayo评分将活动期组分为轻度亚组(25例),中度亚组(22例)和重度亚组(18例);另选择同期在我院健康体检者45例为对照组。比较各组血清miR-31、miR-155和CCL26水平的变化;分析血清miR-31、miR-155和CCL26水平与溃疡性结肠炎严重程度的关系及影响溃疡性结肠炎预后不良的单因素和多因素分析;评估血清miR-31、miR-155和CCL26水平在2年内溃疡性结肠炎发生预后不良的诊断价值。结果 溃疡性结肠炎活动期组血清miR-31、miR-155和CCL26水平明显高于缓解期组和对照组（P<0.05）,而缓解期组明显高于对照组（P<0.01）。血清miR-31、miR-155和CCL26水平随着溃疡性结肠炎严重程度的增加而升高（P<0.05）。单因素和多因素分析发现UCEIS评分>6分,血清miR-31、miR-155和CCL26水平升高是发生溃疡性结肠炎预后不良的独立危险因素（P<0.05）。血清miR-31、miR-155和CCL26水平在诊断溃疡性结肠炎发生预后不良具有较高的诊断效能,联合检测的灵敏度为80%,特异度为99.4%,AUC为0.963明显高于单个指标miR-31（z=2.727,P=0.006）、miR-155（z=3.012,P=0.003）和CCL26（z=2.091,P=0.036）。结论 miR-31、miR-155和CCL26参与了溃疡性结肠炎的发生发展,与溃疡性结肠炎的严重程度有关,联合检测有助于提高对溃疡性结肠炎2年内发生预后不良的诊断价值     

幽门螺杆菌感染性胃癌组织microRNA-17、microRNA-490-3p的表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨幽门螺杆菌(Hp)感染性胃癌组织microRNA-17(miR-17)、microRNA-490-3p(miR-490-3p)的表达及其与临床病理特征和预后的关系.方法 选取2012年1月—2014年6月东莞市人民医院收治的146例Hp阳性及阴性胃癌患者的癌组织及癌旁组织.实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-P...     

胃癌组织中microRNA-144-3p 水平 及与临床病理特点和预后的关系

目的 探讨胃癌组织中microRNA-144-3p（miR-144-3p）水平,以及与临床病理特点和预后 的关系。方法 选取2011 年1 月—2013 年12 月在义乌市中心医院进行手术切除的100 例胃癌患者胃癌组织 及其癌旁组织标本。采用实时荧光定量聚合酶链反应测定胃癌和癌旁组织中miR-144-3p 水平。结果 胃癌 组织中 miR-144-3p 低于癌旁组织（0.53±0.12） VS（ 1.00±0.11）（P <0.05）。不同临床分期、淋巴结转移及 分化程度胃癌患者miR-144-3p 水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）;不同年龄和性别胃癌患者miR- 144-3p 水平比较,差异均无统计学意义（P >0.05）。miR-144-3p 高表达者5 年总生存率和无病生存率高于 低表达者（P <0.05）。Cox 多因素分析结果显示,miR-144-3p 低表达[Rl ^ R=3.627（95% CI ：1.514,8.783）]、 临床分期[Rl ^ R=1.627（95% CI ：1.073,4.735）]、淋巴结转移[Rl ^ R=4.025（95% CI ：1.043,8.931）] 及分化程 度[Rl ^ R=2.042（95% CI ：1.098,6.427）] 为影响胃癌预后的危险因素。结论 胃癌组织中miR-144-3p 水平 降低,其与临床分期、淋巴结转移、分化程度及预后关系密切。     

MicroRNA-155在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的探讨microRNA-155（miR-155）在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid cancer, PTC）患者中的表达情况及与临床病理 特征的相关性,miR-155指导PTC预后的可行性。方法收集86例PTC患者的癌及癌旁新鲜组织,用荧光定量PCR的方法检测 miR-155在上述组织中的表达,并结合其临床病理特点进行回顾性分析。结果69.8%（60/86）的PTC患者癌组织的miR-155表 达较癌旁正常组织上调,相对上调倍数为2.63±2.73倍;而在表达上调组中,PTC原发灶更大［（1.66±0.96）cm vs（1.19±0.52）cm, P=0.021］;更容易出现甲状腺包膜外侵犯（56.7% vs 23.1%,P=0.004）;淋巴结转移率更高（70% vs 46.2%,P=0.036）;具有更晚的 TNM分期,Ⅲ~Ⅳ期的比例更高（20% vs 0%,P=0.014）。PTC癌组织中miR-155相对表达量（ΔCT）高低与淋巴结转移个数具备 一定的相关性（r=0.531,P=0.001）。结论PTC中miR-155的高表达具有更大肿瘤病灶,更易甲状腺包膜外侵犯,更高颈部淋巴 结转移率及更晚的TNM分期等临床病理特点,可能作为不良临床预后的判断指标之一。     

人原发性肝癌中多药耐药相关蛋白MRP的表达、耐药机制及逆转的研究进展

原发性肝癌(primary of liver)是我国常见的恶性肿瘤之一.手术切除率相对较低,术后复发率较高,许多肿瘤常规化疗效果差,预后不良,而肿瘤多药耐药性(MDR)则是肿瘤化疗失败的关键因素.多药耐药相关蛋白(multidrug associated protein,MRP)是一种介导多药耐药性的跨膜转运蛋白,能减少细胞内药物聚积,或改变药物在细胞内分布,从而影响化疗疗效及患者生存.主要针对MRP的结构和功能、在正常组织和肝癌细胞中的表达,以及多药耐药相关蛋白MRP的耐药机制和耐药性逆转等因素进行综述,以为临床提高肝癌的综合治疗水平提供理论基础.     

Bcl-w基因在胃癌中的表达对化疗预后的影响分析

目的探讨Bcl-w（B细胞淋巴因子-w）在胃癌中的表达对化疗和预后的影响。方法通过免疫组化SP法,检测100例人胃癌组织中Bcl-w的表达。结果①100例胃癌中Bcl-w表达的阳性率为69.0%。②胃癌组织中Bcl-w的表达与肿瘤的大小、浸润深度、组织分化程度和淋巴结转移正相关（P〈0.01）。③Bcl-w表达与胃癌的整体生存时间及5年生存率有统计学意义阴性预后好（P〈0.01）;Bcl-w阳性患者中化疗患者与非化疗患者预后无显著差异;Bcl-w阴性者化疗患者预后优于非化疗患者。结论①Bcl-w在抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌侵袭转移中发挥了重要的作用,②Bcl-w在胃癌中的表达与预后负相关,Bcl-w在胃癌中的表达干扰了化疗效果,可作为胃癌预后以及化疗敏感性的评价指标。     

miR-155在结肠癌组织中表达的临床病理意义

目的:探讨结肠癌组织及细胞株中microRNA-155(miR-155)表达的临床病理意义.方法:采用RT-qPCR检测40例结肠癌组织及癌旁组织、结肠癌细胞株中miR-155的mRNA的表达,并对其临床病理指标进行分析,分析抑制miR-155表达对结肠癌细胞增殖、克隆形成及凋亡影响.结果:RT-qPCR检测结果表明40例结肠癌组织中miR-155相对表达量明显高于癌旁组织(P<0.01).不同分化结肠癌细胞miR-155相对表达量差异有统计学意义(P<0.05),其中低分化结肠癌细胞中表达均高于中、高分化结肠癌细胞(P<0.05~P<0.01).miR-155的异常高表达与病人肿瘤较大、分化程度差、淋巴结发生转移情况及远处有转移均有关(P<0.05~P<0.01),而与年龄和性别无关(P>0.05).抑制miR-155可明显抑制结肠癌细胞增殖、克隆形成.结论:结肠癌组织中高表达miR-155可以作为预测恶性程度、淋巴转移的有效指标,miR-155在结肠癌病人的临床靶向治疗中具有一定的价值.