基于HPLC-ICP-MS的冬虫夏草(繁育品)干品及鲜品中砷形态、价态研究及风险评估北大核心CSCD

该文首次对冬虫夏草(繁育品)干品和鲜品中砷形态、价态进行对比研究,以期明确冬虫夏草(繁育品)中砷的具体形态、价态及其安全性。采用仿生提取法结合HPLC-ICP-MS对干品和鲜品样品中砷甜菜碱(AsB)、亚砷酸根(AsⅢ)、二甲基砷(DMA)、砷胆碱(AsC)、一甲基砷(MMA)和砷酸根(AsⅤ)进行研究。HPLC色谱柱为DioncxIonPac^(TM)AS7阴离子交换柱,流动相为100 mmol·L^(-1)碳酸铵-水,室温下梯度洗脱,流速0.8 mL·min^(-1);HPLC与ICP-MS联用进行测定;结合化学计量学对砷含量特征进行分析;采用暴露限值法(MOE)对样品中无机砷的健康安全风险进行评估。方法学验证结果表明,6种砷化合物在10~500 ng·mL^(-1)线性关系良好(R^(2)>0.999),精密度RSD为1.8%~3.0%,回收率(n=6)为84.15%~98.28%,重复性RSD为6.4%~7.7%,样品在10 h内稳定性RSD为8.3%~14%。30批次冬虫夏草(繁育品)干品及鲜品中检出痕量AsⅢ和AsⅤ,其他形态、价态砷均未检出,其中干品AsⅢ为0.019~0.040 mg·kg^(-1),AsⅤ为0.024~0.061 mg·kg^(-1);鲜品AsⅢ为0.0023~0.0061 mg·kg^(-1),AsⅤ为0.008~0.016 mg·kg^(-1)。风险评估结果表明,干品及鲜品无机砷的MOE均远大于1,无机砷潜在的健康安全风险较小。该研究建立的冬虫夏草(繁育品)中6种砷化合物HPLC-ICP-MS检测方法高效快速、准确性及稳定性较好,研究结果为冬虫夏草(繁育品)安全性及质量可控性奠定基础。     

离子交换树脂-原子荧光光谱法测定三七中的4种形态砷

目的 建立分析三七中的有毒砷形态的方法.方法 应用水-盐酸将三七中的形态砷原样提取后,采用阴、阳离子交换树脂成功分离了4种形态砷,无机的As(Ⅲ)、As(V)和有机的一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA).再用氢化物发生原子荧光光谱仪,对各形态砷进行测定.结果 砷在0.5 ～40 μg/L范围内呈良好线形关系,方法的检出限为As(Ⅲ)0.20μg/L;DMA 1.25 μg/L;MMA 1.14μg/L.相对标准偏差为无机砷[As(Ⅲ)+As(V)]6.68％,As(Ⅲ)8.01％,As(V)13.42％,MMA13.95％,DMA2.71％,回收率无机砷As(Ⅲ)90.30％ ～92.24％,As(V )88.27％ ～90.91％,MMA 88.18％ ～90.82％,DMA90.54％～101.41％.结论 该方法克服了现行三七标准中将有机砷混入无机砷的缺点.     

HPLC-HG-AFS法分析西藏冬虫夏草中的砷形态化合物

目的建立同时测定西藏冬虫夏草中4种砷形态化合物As(Ⅲ)、DMA、MMA和As(Ⅴ)的高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光(HPLC-HG-AFS)方法。方法样品用纯水提取后经HPLC阴离子分析柱,流动相为20 mmol/L磷酸氢二铵水溶液,然后用AFS分光光度计进行定性和定量分析。结果在0~100μg/L范围内,各砷形态化合物均呈良好的线性关系,相关系数r均在0.999以上。然后,对0.5、1.0、2.0 mg/kg这3个水平进行方法验证,发现其加样回收率在87.0%~94.0%之间,RSD值在1.0%~4.5%之间,而且As(Ⅲ)、DMA、MMA和As(Ⅴ)的检出限分别为0.01、0.005、0.005、0.01 mg/kg。结论该方法简便易行,重复性好,可用于准确检测西藏冬虫夏草中砷形态化合物的含有量。     

雄黄中砷的不同形态及其毒性研究进展

对雄黄中不同形态砷的毒性及其毒性机制进行文献整理和分析。查阅了国内外有关文献28篇,进行归纳整理并分析汇总。首先介绍了其对肝、肾、膀胱、神经、皮肤、胎儿发育等的毒性损伤情况及损伤机制,砷在生物体内以无机砷和有机砷等不同形态存在,依形态不同毒性有较大差异:三价砷(AsⅢ)可引起肝细胞的凋亡和灶状坏死,五价砷(AsⅤ),五价甲基砷酸(MMAⅤ),五价二甲基砷酸(DMAⅤ)可引起肝细胞肿胀和灶状炎症。DMAⅤ的毒性较MMAⅤ大,若长期接触DMAⅤ和MMAⅤ可引起动物膀胱和皮肤组织肿瘤。MMAⅤ和DMAⅤ对调节神经丝蛋白基因的毒性较亚砷酸盐(iAsⅢ)和砷酸盐(iAsⅤ)强,能明显改变细胞骨架基因的表达水平。此外,iAsⅢ和MMAⅢ对人造血干细胞也能产生明显的毒性。这些总结将为系统探究雄黄不同形态砷与毒性的相关性提供基础。     

云南民族中草药毛喉鞘蕊花中微量砷的形态分析

采用离子交换和溶剂萃取相结合的分离技术,利用电感耦合等离子体发射光谱,对云南民族中草药毛喉鞘蕊花中微量砷的四种形态化合物As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、一甲基胂(MMA)、二甲基胂(DMA)进行了分离和测定。     

LC-AFS法测定灵芝孢子粉中4种砷形态

目的建立液相色谱-原子荧光光谱(LC-AFS)法测定灵芝孢子粉中4种砷形态的含有量。方法 LC分析条件为Hamilton PRPX-100阴离子交换柱(250 mm×4.1 mm,10μm);流动相15 mmol/L磷酸二氢铵(pH=6.0);体积流量1.2 mL/min。AFS分析条件为负高压270 V;As灯电流60 mA;载气高纯氩气;载流5%盐酸;还原剂0.5%氢氧化钾/1.5%硼氢化钾。结果五价砷(As~(5+))、三价砷(As~(3+))、二甲基砷(DMA)、一甲基砷(MMA)在1～50μg/L范围内线性关系良好(r0.999 0),加样回收率96.8%～100.3%。6种市售样品中均检测出As~(5+)、As~(3+),即为无机砷,而DMA、MMA仅分别在1种样品中被检测出。结论该方法准确快速,可用于测定灵芝孢子粉中砷形态。市售样品砷形态以无机砷为主,其摄入量在可接受暴露量范围内。     

基于微波消解ICP-MS法对蒙药材藤黄中5种重金属元素含量测定

目的:建立测定蒙药材藤黄中5种重金属元素含量的方法(微波消解-ICP-MS)。方法:样品加硝酸经微波消解后,使用电感耦合等离子体质谱仪测定;测定模式He;Ni采样锥和截取锥;等离子体气流量:15 L·min~(-1);载气流量:0.80 L·min~(-1)。结果:5种元素线性关系良好(r≥0.9995),Pb、Cd和As的质量浓度在0～50μg·L~(-1)范围内线性关系良好,检出限分别为0.020、0.012、0.035μg·L~(-1);Cu的质量浓度在0～500μg·L~(-1)范围内线性关系良好,检出限为0.05μg·L~(-1);Hg的质量浓度在0～5μg·L~(-1)范围内线性关系良好,检出限为0.007μg·L~(-1)。以柑橘叶为质控样测定5种元素含量,均在指定范围内。结论:该方法科学准确、灵敏度高,可有效控制蒙药材藤黄中重金属元素含量。     

微波消解电感耦合等离子体质谱法测定3种中药材中4种重金属含量

目的 建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定淫羊藿、当归、黄芪3 种中药材中铅(Pb)、镉(Cd)、铜(Cu)、砷(As)含量的方法.方法 样品经微波消解,用ICP-MS测定淫羊藿、当归、黄芪3种中药材中上述4 种元素含量.结果 对于所测元素,校准曲线的相关系数r > 0.999 6 ,回收率为96.3 %～112.0 % ,RSD< 7.26 %.测定结果显示,被测的元素含量因不同药材而存在较大差异,各元素的变动范围 Pb 0.306 2～0.806 2 μg·g -1 ,Cd 0.040 9～0.080 4 μg·g -1,Cu 14.260 0～18.230 0 μg·g -1,As 0.246 4～1.152 3 μg·g -1.结论 研究所建立的方法具有简便、快速、准确、灵敏度高的优点,可用于中药材的质量控制.     

中药黄芩中砷的形态分析

采用离子交换树脂静态吸附和溶剂萃取分离技术,对五种黄芩中砷的化学形态即As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、MMA、DMA进行了分离,并用石墨炉原子吸收法(GFAAS)测定了其含量。     

HPLC-ICP-MS联用测定小儿咳喘灵颗粒中Cr(Ⅵ)和Cr(Ⅲ)

目的:采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法(HPLC-ICP-MS)测定小儿咳喘灵颗粒中六价铬和三价铬含量。方法:参照EPA Method 3060A方法碱提六价铬,微波消解提取三价铬,使用Hamilton PRP-X100(250 mm×4.1 mm,10μm)色谱柱,流动相为0.075 mol·L~(-1)硝酸铵溶液,ICP-MS分析同位素~(52)Cr、He模式。结果:六价铬和三价铬在5～100μg·L~(-1)线性关系良好(r0.999),Cr(Ⅵ)加样回收率为82.1%～90.4%;Cr(Ⅲ)加样回收率为94.1%～95.2%。8批样品均检出Cr(Ⅵ),检出值为0.027～0.082μg·g~(-1),平均值为0.051μg·g~(-1),Cr(Ⅲ)检出值为5.775～18.743μg·g~(-1),平均值为10.366μg·g~(-1)。结论:实验所建方法准确可靠,为更客观、合理地评价中成药中铬的安全性提供参考。     

HPLC-PDA同时测定地笋中7种酚酸的含量

目的:建立同时测定地笋中丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、咖啡酸、阿魏酸和迷迭香酸7种酚酸的高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-PDA),并对不同产地地笋中酚酸类成分进行分析评价。方法:样品采用80%甲醇超声提取,采用资生堂CAPCELL PAK C18色谱柱(4. 6 mm×250 mm,5μm);流动相甲醇-0. 02%甲酸水溶液(pH 3. 0)梯度洗脱;检测波长279,324 nm;柱温30℃;流速1. 0 mL·min~(-1);进样体积20μL。结果:7种酚酸成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(r≥0. 999 9),平均回收率96. 49%～103. 45%,RSD 0. 5%～2. 8%,检出限(S/N=3)0. 008～0. 046 mg·L~(-1),定量限(S/N=10)0. 027～0. 154 mg·L~(-1)。不同产地地笋均检出7种酚酸类成分,总质量分数5 811. 01～11 747. 23μg·g~(-1),平均质量分数7 421. 05μg·g~(-1),不同种酚酸类化合物含量存在较大差异,其中各产地均以迷迭香酸含量最高,平均值7 111. 19μg·g~(-1),占酚酸总量的95. 8%,为地笋酚酸的主要成分;主成分分析和聚类分析结果均显示产地为山东菏泽的地笋质量较优,其次为重庆万州。结论:该方法操作简便、灵敏度高、准确性好、实用可靠,适用于地笋酚酸的含量测定,以期为地笋药材质量标准和产品开发提供参考。     

地龙药材及其处方制剂散寒化湿颗粒中总砷及砷形态研究

目的 探究地龙药材至制剂过程中总砷及砷形态、价态的传递规律,以期建立地龙药材及散寒化湿颗粒（Sanhan Huashi Granules,SHG）中砷含量的限度,保障SHG的安全。方法 采用电感耦合等离子体质谱法（inductively coupledplasma mass spectrometry,ICP-MS）对经微波消解后的地龙药材到SHG进行总砷含量的测定;采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法（high performance liquid chromatography–inductively coupled plasma mass spectrometry,HPLC-ICP-MS）对其进行砷形态、价态的测定分析;并考察多批次SHG、不同产地地龙药材中砷总量以及各形态、价态的差异。结果 地龙药材、饮片、提取液及制剂在传递过程中总砷含量呈递减趋势,阴性样品中检出极少量的砷,总砷从药材至制剂的平均转移率为52.00%,饮片到制剂中的平均转移率为60.81%;28批SHG与24批地龙中砷形态及价态存在形式及规律基本一致,即基本以毒性较大的As(Ⅲ)和As(Ⅴ)为主,其他毒性较小的...     

基于毒性视角考察水飞雄黄的质量情况及其影响因素

对收集到的市售3个生产厂家的水飞雄黄采用HPLC-ICP-MS分析其砷的形态及不同形态砷的含量。结果发现,3家企业游离As(Ⅲ)均未超过药典限值,但按游离砷[As(Ⅲ)+As(Ⅴ)]的总值计算,1家企业超出药典限值。现有药典游离砷检定方法为古蔡氏检砷法,存在一定局限性,未能有效规避三价砷以外的其余价态砷伴生的毒性风险。随后考察了水分和温度对水飞雄黄中可溶性砷的含量及形态的影响。结果表明:(1)水分对水飞雄黄中可溶性砷的含量有显著影响,随着水分的含量的增加,可溶性砷的含量呈上升趋势,形态未发生改变,仅有As(Ⅲ)和As(Ⅴ);(2)单纯性的温度因素,样品中可溶性砷的含量变化存在增多趋势,最大增量分别是As(Ⅲ)2.489 mg·g~(-1),As(Ⅴ)0.546 mg·g~(-1);(3)当水分与温度共同作用时,样品中可溶性砷的增加量发生显著变化,最大增量分别是As(Ⅲ)23.690 mg·g~(-1),As(Ⅴ)0.468 mg·g~(-1)。综合分析认为:雄黄质量容易受到水分和温度的影响,单纯的水分,以及水分和温度共同作用均能显著改变雄黄中可溶性砷的含量,水分为高危因素。现行《中国药典》2015年版中游离砷的检测方法存在局限性,新的技术应当被引进;于此同时,现行药典中雄黄药材项下未设置水分检查项,应当补足。     

外源甲基睾酮对自然越冬蚂蟥生长及性腺发育的影响

为了探究外源甲基睾酮(MT)对蚂蟥自然越冬期间生长、性腺发育的影响,在蚂蟥冬眠前,使养殖水体中MT质量浓度分别0. 1,1. 0,10. 0,100. 0,150. 0μg·L~(-1),养殖6周后停止添加,让蚂蟥自然冬眠,60 d出冬眠后测定蚂蟥生长指标、性腺指数、内源性类固醇激素及药材品质;同时采用组织切片技术,对蚂蟥精卵细胞进行观察。结果表明,蚂蟥体质量、存活率以及性腺指数随外源MT浓度升高呈先升高后降低趋势,雄性腺指数在外源MT质量浓度10. 0μg·L~(-1)时最大,雌性腺指数在外源MT质量浓度1. 0μg·L~(-1)时值最大;蚂蟥存活率在外源MT质量浓度10. 0μg·L~(-1)时最高,而体质量在质量浓度100. 0μg·L~(-1)时达到顶峰(P0. 05)。精巢中初级精母细胞数量与外源MT浓度呈负相关,次级精母细胞以及精细胞数量则呈先升高再降低趋势,100. 0μg·L~(-1)外源MT处理时次级精母细胞数量最多;卵巢中卵母细胞数量、体积及卵黄颗粒随外源MT浓度升高呈先升高再降低趋势,在外源MT质量浓度100. 0μg·L~(-1)时最高。蚂蟥内源性类固醇激素随外源MT浓度升高呈先升高后降低趋势,内源雄激素和孕激素质量浓度在100. 0μg·L~(-1)外源MT处理时最高(P0. 05),而雌激素在外源MT质量浓度10. 0μg·L~(-1)时浓度最高(P0. 05)。添加外源MT后,蚂蟥水分、酸不溶性灰分、酸碱度和抗凝血酶活性等指标均符合《中国药典》2015年版药材水蛭标准,且抗凝血酶活性均升高,1. 0μg·L~(-1)外源MT处理时显著高于对照组(P0. 05)。综上,冬眠前短期添加1. 0～100. 0μg·L~(-1)外源MT,能够促进冬眠蚂蟥生长、精卵细胞发育,提高抗凝血酶活性。     

LC-MS/MS测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分的含量

目的:建立液相色谱串联质谱法测定紫草中醇溶性成分和水溶性成分(左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸)的含量,用于紫草的质量控制。方法:采用Agilent ZORBAX SB C_(18)色谱柱(4. 6 mm×50 mm,1. 8μm),以0. 1%甲酸乙腈(A)-0. 1%甲酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0～3 min,5%～95%A;3～7 min,95%A; 7～7. 01 min,95%～5%A; 7. 01～8. 50 min,5%A);流速0. 2 mL·min-1,柱温35℃,进样量5μL;采用负离子电离模式,MRM扫描模式进行定量。结果:左旋紫草素,β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁,紫草酸,咖啡酸,迷迭香酸分别在10. 12～1 012μg·L~(-1)(r=0. 998 1),10. 88～1 088μg·L~(-1)(r=0. 991 2),10. 08～806. 4μg·L~(-1)(r=0. 997 6),20. 32～1 016μg·L~(-1)(r=0. 996 6),10. 37～1 037μg·L~(-1)(r=0. 999 6),10. 26～1 026μg·L~(-1)(r=0. 997 8)均有良好线性关系(r≥0. 991 2);平均加样回收率分别为95. 8%(RSD 3. 2%),103. 5%(RSD 2. 3%),105. 3%(RSD 2. 1%),96. 1%(RSD 3. 3%),98. 9%(RSD 2. 7%),100. 8%(RSD 3. 4%)。13批次紫草样品中6个种成分含量存在较大差异。结论:所建立的方法合理可行,为综合评价紫草质量提供一定依据。     

鲜冬虫夏草中6种不同砷形态化合物含量的HPLC-ICP-MS法测定

目的建立高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)法同时测定鲜冬虫夏草样品中6种砷形态化合物(AsC、AsB、AsIII、DMA、MMA、AsV)的分析方法。方法样品采用0.15 mol/L的硝酸溶液热水浴提取后经Hamilton PRP-X100阴离子分析柱分离,流动相为碳酸铵、磷酸+硝酸+氨水及水组成的三元梯度洗脱模式,然后用ICP-MS进行定性和定量分析。结果 AsC、AsB、AsIII、DMA、MMA、AsV在各自线性范围内线性关系良好(r0.9998),样品平均加样回收率为96.3%～105.4%(RSD4.3%),6种砷形态化合物的检出限均低于0.15 ng/mL。结论该方法操作简便、结果准确可靠,可用于鲜冬虫夏草样品中不同砷形态的含量分析。     

基于高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法的大鼠口服纳米雄黄后体内砷形态分析

目的对大鼠口服雄黄与纳米雄黄后血清、肝、肾、脾中三价砷[As(III)]、五价砷[As(V)]、一甲基砷酸(MMA)、二甲基砷酸(DMA)4种砷形态进行定量分析,比较两组大鼠体内砷形态的差异。方法 SD大鼠分别ig给予800 mg/kg的雄黄与纳米雄黄,28 d后采集血清及各组织样本,经前处理后采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法(HPLC-ICP-MS)测定生物样本中砷形态含量并进行比较。结果 4种砷形态在大鼠血清和肾脏样本中均被检出,肝脏中检出了3种,脾脏中检出了2种;各砷形态在纳米雄黄组中的含量明显高于雄黄组。结论纳米化提高了雄黄的生物利用度,更多的砷被吸收进入体内并发生代谢转化,这可能导致纳米雄黄肝、肾等毒性增加。     

比例方程-氢化物发生原子荧光法测定昆布中4种有毒砷

目的建立比例方程-氢化物发生原子荧光法测定昆布中4种有毒砷的含有量。方法 0.15 mol/L硝酸90℃下提取砷,采用氢化物原子荧光法测定样品的荧光强度,通过比例方程测定砷的含有量。结果 As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)的检出限分别为25、31、68、68 ng/L,加样回收率86.0%~103.7%,与HPLC-ICP-MS法测定结果相近。结论该方法结果准确,步骤简便,成本及仪器要求低,适用于国内一般实验室。     

基于HPLC-ICP-MS的藏药佐塔汞、砷元素形态、价态分析及安全性评价

目的 对藏药佐塔中汞、砷元素形态和价态进行分析,并结合其在复方制剂中用法用量进行安全性评价,以期为佐塔临床应用提供理论依据。方法 采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)法测定佐塔在人工胃肠液汞、砷的形态和价态,并根据佐塔在藏药复方制剂中用法用量来计算可溶性汞、砷的摄入量。结果 9批佐塔在人工胃肠液中以无机汞(Hg²⁺)、三价砷(AsⅢ)和五价砷(AsV)形式存在,其质量分数分别为11.25～725.13、6.68～67.53、36.06～289.03μg/g,未检测出甲基汞(MeHg)、乙基汞(Et Hg)、砷胆碱(AsC)、砷甜菜碱(AsB)、一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)。结论 根据佐塔在藏药复方制剂最大日服量0.2 g计算,可溶性Hg、As的摄入量分别在2.3～145.0μg和10.6～63.4μg,在规范使用情况下,具有较高的临床安全性。     

UPLC-MS/MS同时测定谷红注射液中7种有效成分

目的:建立同时测定谷红注射液中乙酰谷酰胺,羟基红花黄色素A,芦丁,紫丁香苷,山柰素,山柰酚,槲皮素含量的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法。Phenomenex Kinetex C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速0.5 m L·min~(-1);质谱采用正负离子同时监测,多反应监测模式(MRM),进样量5μL。结果:谷红注射液中乙酰谷酰胺,羟基红花黄色素A,芦丁,紫丁香苷,山柰素,山柰酚,槲皮素质量浓度线性范围分别在10.36~663.0,0.500 0~32.00,0.047 8~3.059,0.200 0~12.80,0.032 4~2.074,0.675 0~43.20,0.142 5~9.120μg·L~(-1)线性关系良好;平均加样回收率分别为97.0%~99.2%,RSD3.4%(n=6);7种成分在3批样品中的质量浓度依次为乙酰谷酰胺28.5~32.4 g·L~(-1),羟基红花黄色素A 1.02~1.23 g·L~(-1),芦丁14.3~17.6 mg·L~(-1),紫丁香苷101~123 mg·L~(-1),山柰素12.1~14.9μg·L~(-1),山柰酚0.138~0.155 mg·L~(-1),槲皮素73.4~95.6μg·L~(-1)。结论:该方法简、快速、高效、准确、可靠,适用于同时测定乙酰谷酰胺,羟基红花黄色素A,芦丁,紫丁香苷,山柰素,山柰酚,槲皮素7种有效成分,为该制剂建立更全面的质量控制方法提供依据。