骨髓基质干细胞移植对脑缺血大鼠神经组织及功能的影响

目的探讨骨髓基质干细胞(BMSCs)对脑缺血大鼠神经组织及功能的影响。方法选用24只SD大鼠制备大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分为移植组、注射组、对照组,每组8只。局部给予移植组动物BMSCs,由尾静脉给予注射组动物BMSCs,对照组动物尾静脉注射等量生理盐水。采用5-溴脱氧尿苷嘧啶(BrdU)标记新生细胞。MCAO术后第7、14天,每组各处死4只动物,采用改良神经功能缺损评分(mNSS)评估大鼠神经功能(处死前),取脑组织进行双标免疫组织化学染色,观察神经元样细胞和胶质细胞的生成情况。结果 MCAO术后第7、14天,移植组和注射组动物BrdU+NES双标阳性细胞均多于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。移植组动物术后第7、14天及注射组动物术后第7天BrdU+GFAP双标阳性细胞均少于对照组(均P<0.05)。术后第14天,移植组和注射组大鼠mNSS评分均低于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论局部移植或静脉给予MCAO后大鼠BMSCs,可减少胶质瘢痕的形成,增加神经元样细胞的生成,改善神经功能。     

人脐血干细胞移植促进大鼠脊髓损伤神经恢复

目的观察移植人脐血CD34 干细胞是否可以存活、分化、促进脊髓损伤的行为和功能恢复.方法26只Wister大鼠随机分成移植组和对照组.移植组行脊髓半切术并移植5-溴脱氧尿核苷(Brdu)标记的脐血CD34 细胞,对照组行脊髓半切术后注射PBS液.采用改良Tarlov评分标准对移植组和对照组所有大鼠在术前和术后24 h、1、2、3、4周进行运动功能评价.组织学和免疫组化分析移植细胞的定位和分化情况.结果移植后在脊髓病理切片中出现Brdu标记人脐血细胞,激光扫描共聚焦显微镜通过免疫荧光双标检测到7%Brdu阳性细胞表达神经胶质元纤维酸性蛋白(GFAP),2%Brdu阳性细胞表达神经元核抗原(NeuN).神经功能检测发现1周后移植组功能恢复较对照组具有显著性差异(P＜0.05).结论移植人脐血干细胞可以促进脊髓损伤的行为和功能恢复,为神经损伤治疗提供了有用的细胞源.     

经冠脉自体骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死兔血管新生和心脏功能的影响

目的 探讨经冠脉注射法移植自体骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对兔急性心肌梗死(AMI)心脏的血管新生和心脏功能的影响. 方法取日本大耳白兔45只,随机分为BM-MSCs移植组、对照组和假手术组,各15只.BM-MSCs移植组抽取骨髓液分离、纯化BM-MSCs并体外扩增,结扎兔冠脉左前降支(LAD),建立AMI模型.再灌注后,BM-MSCs移植组经冠脉注射自体BM-MSCs悬液1 ml(5×106个).对照组以相同的方法 建立AMI 模型,注入等量的无血清培养液.假手术组除不结扎LAD外,其余操作同对照组.术后24 h 和4 周,以超声心动图仪测量各组左室射血分数(LVEF)和左室短轴缩短率(FS).4周后,通过抗5-溴脱氧尿核苷(BrDU)抗体免疫组化染色评价移植细胞的存活情况,并测定各组血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达及毛细血管密度的改变情况. 结果 术后4周,假手术组的LVEF和FS分别为(62.1±2.5)%、(32.2±1.7)%,对照组分别为(53.2±2.3)%、(23.8±0.8)%,BM-MSMs移植组分别为(62.4±2.6)%、(30.8±1.9)%,对照组的LVEF 和FS与BM-MSCs移植组比较差异有统计学意义(P<0.01),与假手术组比较差异亦有统计学意义(P<0.01),而BM-MSCs移植组的LVEF和FS与假手术组比较差异无统计学意义(P＞0.05).BM-MSCs移植组在梗死区可见抗BrDU抗体染色阳性细胞.假手术组的新生血管数目为(2.0±1.2)个,对照组为(4.1±1.8)个,BM-MSCs移植组为(12.5±1.7)个;病理图像测量系统测定平均光密度值(400×),假手术组VEGF蛋白表达为(0.07±0.01),对照组为(0.11±0.01),BM-MSCs移植组为(0.15±0.03);BM-MSCs移植组的新生血管数目、VEGF蛋白与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01),BM-MSCs移植组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 经冠脉注射法移植自体BM-MSCs可在AMI区存活,增加VEGF蛋白表达,诱导血管新生,改善心脏功能.     

鹿茸对大鼠下肢缺血模型CD34+、FLK-1+阳性细胞比例影响

目的:观察鹿茸对大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞比例的影响。方法:将54只SD大鼠随机分为3组:鹿茸组18只、模型组18只、假手术组18只。鹿茸组和模型组均采用左下肢股动脉结扎及分支剔除术,造成大鼠下肢缺血模型,假手术组仅暴露股动脉但不结扎股动脉及其分支。鹿茸组术后按0.571 g·kg-1·d-1剂量灌服,连续14 d。检测各组术前1d、术后第1、3、7、14天5个时间点大鼠外周血酶肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平变化及双荧光阳性细胞(CD34+、FLK-1+)比例。结果:术后模型组外周血酶学指标CK、AST、LDH水平较假手术组均显著上升,术后第7、14天鹿茸组各项酶学指标水平较模型组及术后第1、3天均显著下降(P<0.05)。术后鹿茸组和模型组CD34+、FLK-1+双荧光阳性细胞比例较假手术组均显著升高(P<0.05),且鹿茸组升高较模型组更为显著(P<0.05或P<0.01)。结论:鹿茸可增加大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞的比例,改善下肢缺血状态,促进血管新生,其作用可能与其能增加外周血血管内皮祖细胞(EPCs)数量有关。     

疏肝活血法对下肢缺血模型大鼠血管内皮祖细胞的影响

[目的]观察疏肝活血法时下肢缺血模型大鼠外周血管内皮祖细胞(EPC)的影响.[方法]将50只SD大鼠随机分为3组:中药组20只,模型组20只,假手术组10只.中药组和模型组均采用右下肢股动脉结扎及分支剔除术复制大鼠下肢缺血模型,假手术组仅暴露股动脉但不结扎股动脉及其分支.中药组术后按0.5 g·kg-1·d-1剂量灌服柴胡疏肝散合大黄座虫丸煎剂,连续7 d.检测各组术前1 d、术后第1、3、7天4个时间点大鼠外周血酶学指标肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平变化及双荧光阳性细胞[CD34+、血管内皮生长因子受体(VEGFR2+)]比例.[结果]术后模型组外周血酶学指标AST、CK、LDH、HBDH水平较假手术组均显著上升,术后第3、7天中药组各项酶学指标水平较模型组及术后第1天均显著下降(P<0.05).术后中药组和模型组反映EPC变化的CD34+、VEGFR2+双荧光阳性细胞比例较假手术组均显著升高(P<0.05),且中药组升高较模型组更为显著(P<0.05或P<0.01).[结论]疏肝活血法可有效地改善下肢缺血状态,其作用可能与其能增加外周血EPC数量有关.     

大黄素对大鼠脑爆炸伤的保护作用

目的:观察大黄素对大鼠脑爆炸伤是否具有保护作用.方法:成年SD大鼠78只,随机分为大黄素治疗组(n=36)、模型对照组(n=36),正常对照组(n=6).模型对照组和大黄素治疗组制作大鼠脑爆炸伤模型,大黄素治疗组腹腔注射大黄素10mg/(kg·d),模型对照组注射生理盐水,伤后6,12h和1,3,5,7d各时相点随机各取6只大鼠观察呼吸、肢体活动等生理、行为学变化,光镜下检测病理学改变,测定血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)浓度及皮层NSE免疫组织化学反应阳性细胞数目、损伤区脑含水量变化.结果:爆炸伤后各组出现短暂呼吸骤停、四肢抽搐,模型对照组和大黄素治疗组血清NSE浓度及脑含水量较正常对照组显著升高,皮层NSE免疫组织化学反应阳性细胞数目显著减少;大黄素治疗组在1d后各时相点血清NSE浓度及脑含水量较模型对照组显著降低,皮层NSE免疫组织化学反应阳性细胞数目显著增多(P<0.05).结论:大黄素可降低大鼠血清NSE浓度,增加皮层NSE表达,减轻脑水肿程度,对大鼠脑爆炸伤具有保护作用.     

小儿体外循环对中性粒细胞CD11/CD18表达水平的影响

目的:观察小儿体外循环(CPB)对中性粒细胞CD 11/CD 18的表达水平,探讨CD 11/CD 18在小儿体外循环诱发的全身炎症反应中的作用。方法:30例房室水平左向右分流型先天性心脏病在CPB下行心内直视手术患儿(CPB组)和20例非CPB胸科或腹部手术患儿(对照组)被纳入本研究对象,于麻醉诱导后、体外循环转流后10~15 m in、体外循环转流结束、术后2 h和术后第1、2、3天取外周静脉血,采用流式细胞术检测外周血中性粒细胞CD 11/CD 18分子表达水平,酶联免疫法(EL ISA)定量测定血浆中IL-6、IL-8水平。结果:CPB组体外循环停机后血浆IL-6、IL-8水平开始升高并于术后2 h达峰值(P<0.05),随后开始下降,但仍高于诱导后水平(P<0.05);对照组血浆IL-6、IL-8水平于术后2 h达峰值(P<0.05),但其变化幅度小于CPB组相应时间点的值。CPB组外周血中性粒细胞CD 11b/CD 18表达水平于转流后10~15 m in明显升高(P<0.05)并达峰值,术后第1、2天低于基础水平(P<0.05),第3天与基础水平比无显著性差异(P>0.05)。对照组外周血中性粒细胞CD 11b/CD 18表达水平在各时间点间无显著性差异(P>0.05)。CPB组和对照组外周血中性粒细胞CD 11a/CD 18、CD 11c/CD 18表达水平于各时间点均无显著性差异(P>0.05)。结论:小儿体外循环可促发外周血中性粒细胞CD 11b/CD 18表达水平增高,而对CD 11a/CD 18和CD 11c/CD 18的表达水平无明显影响,CD 11b/CD 18在小儿体外循环诱发的全身炎症反应中可能发挥重要作用。     

舱室内爆炸致大鼠脑血流量改变及其意义

目的 研究舱室内爆炸致伤后大鼠脑血流量(cerebral blood flow,CBF)变化及其意义.方法 160只SD大鼠完全随机分为舱内组、舱外组,S-亚硝基谷胱甘肽(S-Nitrosoglutathione, GSNO)治疗组,各48只,采用DDNP纸质点爆源在模拟装甲舱室和舱外开阔地爆炸建立颅脑爆炸伤模型.GSNO治疗组为舱室内致伤后立即给予GSNO 50 μg/kg腹腔内注射.另设正常对照组(16只);采用激光多普勒血流仪(LDF)和双抗体夹心法(ELISA)检测伤前、伤后1、6、12、24、48 h CBF和血浆神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)浓度,取脑组织测脑水肿指数并行病理学观察.结果 舱内组伤后1 h CBF较伤前明显降低,达最低值(P<0.01),伤后24 h 仍低于伤前(P<0.01).舱外组伤后1 h CBF降低达最低值(P<0.01),伤后12 h恢复至伤前水平.2组CBF在伤后1、6、12、24 h存在显著差异(P<0.01).舱内组经GSNO 治疗后CBF明显升高,在伤后1、6、12、24 h存在显著差异(P<0.01).舱内组血浆NSE浓度及脑水肿指数均在伤后6 h 达峰值,显著高于对照组(P<0.01),伤后48 h仍高于对照组(P<0.05).舱外组则在伤后12 h达峰值,显著高于对照组(P<0.01),伤后48 h恢复致伤前水平.舱内组血浆NSE浓度及脑水肿指数均较舱外组升高显著(P<0.05).舱内组经GSNO治疗后血浆NSE浓度及脑水肿指数明显降低(P<0.01).病理学观察舱内组可见明显脑水肿改变, 表现为血管内皮细胞肿胀,神经元皱缩、变性、坏死、周围间隙明显增宽等改变.舱外组及治疗组均仅见少量神经细胞变性、坏死.结论 舱室内爆炸较开阔环境地爆炸大鼠脑血流量下降程度重、持续时间长.脑血流量的下降可能参与了大鼠颅脑爆炸伤后的继发性脑损害.     

骨髓间充质干细胞不同移植方式治疗大鼠糖尿病足溃疡的疗效观察

目的: 探索骨髓间充质干细胞(bone-marrow derived mesenchymal stem cells,BM-MSCs)经创缘皮下和小腿肌肉移植对大鼠糖尿病足溃疡(diabetic foot ulcers,DFUs)的治疗效果。方法: 全骨髓贴壁法体外培养雄性Wistar大鼠BM-MSCs至第3代,经4, 6-联脒-2-苯基吲哚(4,6-diamino-2-phenylindole,DAPI)标记。48只雄性Wistar大鼠随机分成A组(BM-MSCs创缘皮下移植组,n=12)、B组(BM-MSCs小腿肌肉移植组,n=12)、C组(正常大鼠对照组,n=12)和D组(DFUs对照组,n=12)。大鼠糖尿病经腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导,在其双后足背切取一3 mm×7 mm矩形全层皮肤制成大鼠DFUs模型。于移植后第2,5,8,11天评估各组大鼠的创面愈合率,冰冻切片观察DAPI标记的BM-MSCs在创伤组织中的示踪,肉芽组织的厚度采用HE染色法检测,CD31和Ki-67的表达采用免疫组织化学法检测,血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在创伤组织中的表达采用ELISA和RT-PCR检测。结果: C组的创面愈合最快(P<0.05),第11天B组的创面愈合率大于A组(P<0.05)。第2天和第5天的冰冻切片观察发现B组的荧光强度及区域均大于A组。HE染色显示第5天B组的肉芽厚于A组。CD31的免疫组织化学显示第5天和第8天B组的小血管数目多于A组(P<0.05),而Ki-67的免疫组织化学结果显示两组无差异(P>0.05)。ELISA和RT-PCR的结果均显示第8天和第11天B组的VEGF表达水平高于A组(分别P<0.05,P<0.01)。结论: 两种移植方式均促进了大鼠DFUs的愈合,但在愈合的后期,小腿肌肉内的移植方式体现出更好的持续性及高表达的VEGF,疗效更优。     

趋化因子和CD34+干细胞联合移植对梗死后大鼠左室重塑影响的实验研究

目的 探讨趋化因子SDF-1联合同种异体CD34+干细胞移植对心肌梗死后大鼠左室重塑的影响.方法 wistar雄性大鼠38只,随机分成3组:SDF-1联合干细胞移植组(13只);急性心肌梗死对照组(13只):假手术组(12只).移植组和对照组结扎左冠状动脉前降支造成急性心肌梗死模型.另选同种异体大鼠13只,粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员后免疫磁珠法分离外周血CD34+干细胞,在梗死模型制作后7 d,经静脉联合趋化因子SDF-1注入到移植组大鼠体内,对照组和假手术组注入等量磷酸盐缓冲液(PBS).分别于心梗术前、干细胞移植术后1周和4周行心脏超声检查,术后4周检测心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和胶原含量.结果 心肌梗死后4周,与对照组比较,移植组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS)明显提高(P<0.01),左室收缩末直径(LVESD)、左室舒张末直径(LVEDD)明显减小(P<0.01);移植组心肌组织AngⅡ、胶原含量也有不同程度下降(P<0.05).结论 经静脉联合移植趋化因子SDF-1和外周血干细胞是安全可行的,它能有效地改善心功能,抑制心室重塑,为造血干细胞在心血管疾病中的应用提供理论依据.     

2型糖尿病大鼠骨髓干细胞条件培养基促进糖尿病大鼠脑梗死后神经功能恢复

目的 探讨2型糖尿病（T2DM）大鼠骨髓干细胞条件培养基（BMSC-CM）对T2DM大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能恢复的影响.方法 将成年雄性SD大鼠用烟酰胺、链脲佐菌素（STZ）诱导制作T2DM模型,制备T2DM大鼠BMSC-CM,线栓法制作T2DM大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）脑缺血/再灌注模型.实验动物分为空白对照组、单纯培养基组和条件培养基治疗组（每组n=6）.治疗组分别于术后24、48 h经尾静脉注射T2DM大鼠BMSC-CM（10 ml/kg）,单纯培养基组经尾静脉注射培养基DMEM,空白对照组未给予任何干预措施.术后1、7、14天分别进行神经功能缺损评分（mNSS）和足错步试验.结果 术后第1天,各组mNSS、足错步次数比较差异无统计学意义（P＞0.05）.术后第7、14天,条件培养基治疗组mNSS、足错步次数明显低于空白对照组和单纯培养基组（P＜0.05）,空白对照组与单纯培养基组mNSS、足错步次数差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 T2DM大鼠BMSC-CM可明显促进T2DM大鼠脑梗死后的神经功能恢复.     

手术创伤动员血管内皮祖细胞入血与移植瘤生长的关系

目的 研究手术创伤动员荷瘤裸鼠血管内皮祖细胞（EPC）入血与实体瘤生长的关系。方法 将42只荷瘤裸鼠随机分为非手术1 d组、单纯麻醉组、手术创伤组（术后24 h、48 h、72 h、30 d组）及非手术30 d组,每组6只。单纯麻醉组24 h后取血及获取移植瘤组织,手术创伤组分别在术后24 h、48 h、72 h、30 d取血及获取移植瘤组织。流式细胞仪检测各组外周血EPC百分比;ELISA检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平;免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF表达及微血管密度（MVD）。结果 术后24 h、48 h、72 h组EPC百分比与非手术1 d组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;术后24 h组、48 h组、72 h组、单纯麻醉组VEGF水平与非手术1 d组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;各组MVD差异无统计学意义（P>0.05）。Pearson相关性分析显示,血清VEGF水平与外周血EPC百分比呈正相关（r=0.695 6,P<0.01）,外周血EPC百分比与MVD无相关性（r=0.221 4,P>0.05）,血清VEGF水平与MVD也无相关性（r=0.224 9,P>0.05）。结论 手术创伤对移植瘤生长无明显促进作用。     

电针结合脑内注射VEGF修复大鼠脑缺血后再灌注损伤的机制研究

目的 观察电针及电针结合脑内注射血管内皮生长因子（VEGF）对脑缺血后再灌注损伤大鼠caspase12、caspasse3、 葡萄糖调节蛋白-78 (GRP78)的影响,探讨电针结合脑内VEGF对脑缺血后再灌注损伤的修复机制。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组、电针+VEGF组,每组15只。后3组采用线栓法进行大脑中动脉缺血（MCAO）法制作脑缺血后再灌注损伤模型。电针组及电针+VEGF组造模后1 d开始电针干预（穴位:百会、曲池、足三里）,1次/d,每次30 min,共14 d。电针+VEGF组大鼠于造模成功后24 h行第一次电针干预后,向侧脑室内一次性注入10 μL VEGF165 (0.025 μg/μL)。每组于0 d（造模后1 d,开始电针干预前）、7 d、14 d时,各取5只大鼠进行神经功能评分（mNSS）后处死取材,尼氏染色观察脑梗死区组织形态,免疫组化法检测大鼠缺血脑组织GRP78活性,real-time PCR法检测大鼠缺血脑组织caspase12、caspase3、GRP78 mRNA表达量。结果 0 d、7 d、14 d时,与假手术组比较,模型组大鼠mNSS评分升高（ P<0.05),镜下可见脑梗死征象（尼氏小体数量明显减少且排列混乱,结构不清晰）,GRP78免疫阳性细胞数量增多,GRP78 mRNA表达升高（ P<0.05),caspase12及caspase3 mRNA表达升高（ P<0.05)。7 d和14 d时,与模型组比较,电针组以及电针+VEGF组大鼠的mNSS评分降低（ P<0.05）,镜下脑梗死征象减轻,GRP78免疫阳性细胞数量增多,GRP78 mRNA表达增多（ P<0.05）,caspase12、caspase3 mRNA表达降低（ P<0.05),电针+VEGF组上述指标变化均较电针组明显（ P<0.05）。假手术组各时点间上述指标差异无统计学意义（ P>0.05）,其余3组mNSS评分（ P<0.05)、脑梗死征象、caspase12、caspase3 mRNA表达随治疗时间降低（ P<0.05),GRP78免疫阳性细胞数量随治疗时间增多,GRP78 mRNA表达随治疗时间升高（ P<0.05）。结论 电针结合脑内注射VEGF可促进脑缺血损伤组织修复,其机制可能与下调caspase12、caspase3基因,上调GRP78基因的表达有关,且其效果比单纯使用电针法更具优势。     

间充质干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子含量的影响

目的 观察间充质干细胞（MSCs）移植对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑内胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）含量的影响,初步探讨间充质干细胞移植治疗新生大鼠HIBD的机制。方法 体外分离培养4～6周龄SD大鼠骨髓MSCs。采用新生7日龄SD大鼠结扎左颈总动脉后低氧暴露2.5h制作HIBD模型。24h 后,MSCs移植组（n=20）经尾静脉注射1×106个MSCs,PBS对照组（n=20）尾静脉注射PBS（0.01ml /g）,HIBD手术组（n=20）和正常对照组（n=20）不作注射。采用大鼠改良神经功能损害评分(mNSS)及ELISA法分别检测移植后1、3、7、14d各组大鼠神经功能及脑内GDNF含量。结果 MSCs移植后7、14d,MSCs移植组的神经功能损害评分明显低于PBS对照组和HIE手术组（P<0.05）。制模后,所有HIBD大鼠的GDNF含量均较正常对照组明显升高（P<0.05）。与PBS对照组和HIE手术组比较,MSCs移植组在各个时间点的GDNF含量升高更为明显（P<0.05）。结论 MSCs移植可改善HIBD新生大鼠的神经功能,促进脑内GDNF的合成和分泌,从而发挥神经保护和修复作用。     

17β-雌二醇对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的研究17β-雌二醇（E2）对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响。方法SD大鼠随机分为假手术组（A组）、磷酸盐缓冲液对照组（B组）及E2治疗组（C组）。应用重物打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型（A组仅行椎板切除术），分别于伤后7、14、21及28d，按照改良Tarlov评分法和Rivlin斜板试验观察脊髓功能恢复情况。伤后6、24h和3、7、14、28d分别处死动物取材，HE染色观察病理变化，TUNEL法和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果TUNEL法和流式细胞术检测结果均表明大鼠脊髓损伤后存在细胞凋亡。TUNEL法显示细胞凋亡在伤后3d达高峰，C组伤后24h、3d及7d凋亡细胞比率均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）；流式细胞术显示细胞凋亡率在伤后7d达高峰，C组细胞凋亡率在24h以后各观察时间点均显著低于B组（P〈0．01或P〈0．05）。14d以后，C组脊髓神经功能恢复显著好于B组（P〈0．01或P〈0．05）。结论E2能减少继发性脊髓损伤后细胞凋亡，促进脊髓功能的恢复。     

神经细胞牵张损伤后CsA对CaN活性和APP表达的影响

目的 研究神经细胞牵张损伤后环孢霉素A (cyclosporin A, CsA)对钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN)活性和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)表达的影响.方法 在Bioflex培养皿原代培养大鼠大脑皮层神经元.细胞分为正常对照组、损伤组和CsA组.多功能小型生物撞击机25 kPa的压力牵张细胞.损伤后损伤组不予以处理,而CsA组则给以10 nM CsA. 各组伤后1、6、24h,3d标本的CaN活性和APP蛋白表达,分别采用酶底物显色和Western blot方法进行检测.结果 牵张损伤后1h神经元的CaN活性已较正常对照组显著增加(P＜0.05),伤后6h更为明显(P＜0.01),并持续到伤后3d(P＜0.01);而伤后10nM CsA干预能在各时相点非常显著地降低CaN的活性(P＜0.01).APP伤后1h有增加趋势,但在伤后6h差异才具有统计学意义(P＜0.05),伤后24h、3d这种增加则更加明显(P＜0.01).伤后10nM CsA干预能在6、24h,3d显著地降低APP的表达增加(P＜0.05),其APP的表达仍显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 CsA能降低神经细胞牵张损伤后CaN活性的增加并减少APP表达的增加,可能起到神经保护作用.     

精氨酸营养干预对重型颅脑损伤大鼠细胞免疫功能和蛋白代谢的影响

目的探讨精氨酸营养干预对重型颅脑损伤大鼠免疫功能和蛋白代谢的影响。方法建立重型颅脑损伤大鼠模型。40只SD大鼠,雌雄各半,分为3组:正常对照组(C组);普通肠内营养组(EN组);普通肠内营养添加Arg组(Arg组)。各组用等氮、等热卡的营养支持,3、7d后取外周血标本。应用吞噬白色念珠菌计数法、免疫组化法、放射免疫法和ELISA法,分别测定白细胞吞噬功能、T细胞表型CD4 、CD8 含量、血清白介素-2(IL-2)水平、胰岛素(INS)、胰高血糖素(GIU)、皮质醇(Cor)、视黄醇结合蛋白(BPR)和前白蛋白(PA)的含量。结果重型颅脑损伤后两实验组大鼠细胞免疫功能均显著下降,但Arg组的CD4 /CD8 、IL-2水平和白细胞吞噬率在各时相点都非常显著高于EN组(P<0·01)。两实验组的PA、RBP在伤后第3天无显著性差异(P>0.05),第7天,Arg组的PA较EN组显著升高(P<0·05),RBP和EN组相比有增高的趋势,但无统计学意义(P>0.05)。两实验组的INS/GLU在伤后第3天无统计学意义(P>0.05),第7天Arg组则明显高于EN组(P<0.05)。EN组的Cor含量在各时相点都明显高于Arg组(P<0.01)。结论经肠道补充Arg能有效改善重型颅脑损伤后大鼠免疫功能和蛋白代谢紊乱。     

胰岛素样生长因子-1对局灶性脑缺血大鼠神经功能评分及碱性成纤维生长因子表达的影响

目的 探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-1）对脑缺血大鼠神经功能及碱性成纤维生长因子（bFGF）蛋白和bFGF mRNA表达的影响.方法 72只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血组和IGF-1治疗组,制备脑缺血模型,分别于脑缺血后12h、24 h、3d、7d采用改良mNSS评分量表评价大鼠的运动、感觉、平衡功能及反射等神经功能,采用免疫组织化学方法检测各组大鼠脑缺血皮层bFGF蛋白表达的变化,采用RT-PCR方法检测各组大鼠脑缺血皮层bFGF mRNA表达的变化.结果 在12h、24 h、3d、7d各时间点,IGF-1治疗组的mNSS评分值[（8.67±1.21）分,（7.50±1.52）分,（4.33±1.03）分,（3.67±1.37）分]均低于脑缺血组[（11.0±1.26）分,（9.83±1.33）分,（7.83±1.17）分,（7.17±1.72）分]（P＜0.05）.IGF-1治疗组各时间点bFGF蛋白表达均较脑缺血组升高（P＜0.05）,尤其是脑缺血后12h有统计学意义（P＜0.01）.IGF-1治疗组各时间点bFGF mRNA表达均较脑缺血组高（P＜0.05）,脑缺血后24 h有统计学意义（P＜0.01）.结论 IGF-1可促进脑缺血大鼠的神经功能恢复,可能与调控bFGF蛋白和bFGF mRNA表达有关.     

促红细胞生成素及其受体在大鼠视网膜光损伤后的表达

目的 观察大鼠视网膜光损伤后促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPOR）的表达变化。方法 选用32只雄性SD大鼠,其中29只建立视网膜光损伤大鼠模型（光损伤组）,另3只作为正常对照组。取正常对照组大鼠视网膜组织以及光损伤组大鼠光损伤后0、6、12、24、48、72 h和7、14 d的视网膜组织,分别采用Western blotting和RT-PCR法检测EPO、EPOR蛋白和mRNA的表达,并采用免疫组织化学法定位观察EPO和EPOR蛋白表达。结果 Western blotting检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR蛋白表达增加,光损伤后48 h达到高峰;光损伤组EPO蛋白的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR蛋白的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。RT-PCR检测显示：视网膜光损伤后,EPO和EPOR mRNA表达增加,分别于光损伤后24 h和48 h达到高峰;光损伤组EPO mRNA的相对表达量在光损伤后12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）,光损伤组EPOR mRNA的相对表达量在光损伤后6、12、24、48、72 h和7、14 d显著高于正常对照组（P<0.05或P<0.01）。免疫组织化学定位观察显示：视网膜光损伤后24 h,光感受器内外段EPOR蛋白表达略增强,EPO蛋白表达相对较弱。结论 大鼠视网膜光损伤后EPO和EPOR蛋白及mRNA表达增加,有一定的时效性,提示内源性EPO和EPOR参与视网膜光损伤的修复机制。