中药芪红合剂对肾间质纤维化模型大鼠肾皮质中bcl-2表达的影响

目的:探讨凋亡相关基因bcl-2在肾小管损伤及间质纤维化过程中的表达以及扶正活血化瘀中药芪红合剂在肾小管损伤及间质纤维化过程中的肾保护作用及可能的作用机制。方法:采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、中药芪红合剂组、依那普利组,术后10d处死各组大鼠,收集血清测定尿素氮(BUN)、血肌酐(Cr)水平,结扎侧肾组织行HE、Masson染色,Masson染色分析肾间质纤维化程度,免疫组化半定量检测各组大鼠肾组织中bcl-2、FN的蛋白表达。结果:模型组bcl-2、FN的蛋白表达及肾间质纤维化面积明显高于假手术组,BUN、Cr水平均显著升高(P<0.05);中药芪红合剂组、依那普利组较模型组bcl-2的蛋白表达显著上调,FN的蛋白表达及肾间质纤维化面积明显降低,BUN、Cr水平均显著下降(P<0.05)。结论:中药芪红合剂可能通过增强凋亡调控基因bcl-2蛋白表达的上调而减轻肾小管损伤及间质纤维化。     

黄芪当归在肾小管间质纤维化大鼠模型中的作用

目的:探讨黄芪、当归在肾间质纤维化大鼠模型中的作用及机制。方法:采用单侧输尿管结扎木(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型,将大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、依那普利(ACEI)治疗组、黄芪当归治疗组。手术后第9天处死大鼠,经免疫组化方法观察各组大鼠肾脏平滑肌肌球蛋白(α-SMA)的表达,Masson染色评定各组肾小管间质损伤指数。结果:模型组α-SMA的表达及肾小管间质损伤指数明显高于假手术组(P<0.01),而ACEI治疗组、黄芪当归治疗组明显低于模型组(P<0.01),两治疗组间无显著差别(P>0.05)。结论:黄芪、当归合剂可通过抑制成肌纤维细胞的形成,在肾间质纤维化中发挥和ACEI相类似的肾保护作用。     

肾间质纤维化组织中组织型转谷氨酰胺酶和结缔组织生长因子共表达

目的:探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)和结缔组织生长因子(CTGF)在肾间质纤维化组织中的表达及二者的关系.方法: 采用单侧输尿管结扎(UUO)致肾间质纤维化大鼠模型.将大鼠随机分为假手术组(5只)、模型组(6只)、依那普利治疗组(6只).术后9天处死各组大鼠,肾组织标本用过碘酸-席夫染色(PAS)确证肾间质纤维化病变.以免疫组织化学染色方法观察肾组织内tTG 和CTGF的表达部位,以及细胞外基质成份纤维连接蛋白(FN)的表达变化.用Western蛋白印迹方法分析肾组织内tTG 和CTGF蛋白表达水平.结果: 假手术组大鼠tTG,CTGF和FN分别在肾小管、肾间质区仅有微量表达,肾小球内无阳性表达;模型组大鼠tTG、CTGF和FN在肾小管、肾间质区的表达信号比假手术组强;依那普利治疗后三者表达减少.双重染色结果显示,在模型组肾间质tTG阳性表达部位同时表达CTGF,并且强度相似.Western blot结果显示,模型组tTG和CTGF蛋白水平明显高于假手术组;依那普利治疗组tTG和CTGF蛋白水平明显低于模型组.各组大鼠肾内tTG蛋白水平与CTGF蛋白水平之间(r=0.683,P<0.05)以及tTG蛋白水平与肾间质内FN半定量水平之间(r=0.737,P<0.05)均有显著相关关系.结论: tTG和CTGF可能共同参与肾间质纤维化,依那普利减轻肾间质纤维化的作用可能通过下调两者的表达而实现.     

p27在大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其干预后的影响

目的：研究单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）大鼠肾小管上皮细胞p27的表达与肾间质纤维化的关系，并探讨血管紧张素转化酶抑制剂依那普利干预后p27表达的变化，以进一步阐述其抗纤维化机制。方法：90只SD大鼠随机分成假手术组（sham—operated rates，SOR）、UUO模型组、依那普利治疗组（UUO＋Enalaparil treated group，T—UUO）。于术后第7，14，21天分别处死各组大鼠10只。用HE染色动态观察肾脏病理变化，免疫组织化学法测定p27的表达及动态变化．RT—PCR法测定p27 mRNA的水平。结果：SOR组肾小管上皮细胞p27蛋白及肾皮质P27 mRNA的表达均强，UUO组随着间质纤维化程度的加重，p27 mRNA的表达逐渐减弱，而依那普利在UUO术后第14，21天能增强p27的表达。结论：（1）p27参与了UUO大鼠肾间质纤维化的发病过程；（2）UUO大鼠肾间质纤维化模型中依那普利抗间质纤维化机制部分是通过增强p27的表达。     

通脉益肾方拮抗肾间质纤维化的作用机制

目的观察通脉益肾方对肾间质纤维化模型大鼠肾脏肾上腺髓质素及肾小管上皮细胞表型转化的影响,探讨其拮抗肾间质纤维化的作用机理。方法采用单侧输尿管结扎的方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为假手术组、模型组、通脉益肾方组和缬沙坦组。通脉益肾方组、缬沙坦组分别给予通脉益肾方1.5 g/(kg.g)和缬沙坦10 mg/(kg.d)灌胃治疗,假手术组及模型组给予等量的生理盐水。观察梗阻侧肾脏肾上腺髓质素(ADM)、肾小管上皮细胞表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达,做相关性分析;采用HE及天狼星红染色观察各组大鼠肾脏的病理改变。结果模型组及各治疗组大鼠肾脏中ADM蛋白表达较假手术组明显降低(P<0.05),通脉益肾方组、缬沙坦组的ADM的蛋白含量及表达均高于模型组(P<0.05),但两治疗组之间无显著性差异。模型及各治疗组α-SMA的蛋白表达较假手术组明显升高(P<0.05),通脉益肾方组、缬沙坦组的表达均低于模型组(P<0.05),但两治疗组之间无显著性差异。ADM与α-SMA的表达呈明显负相关。结论通脉益肾方可能通过上调间质纤维化大鼠肾脏ADM的表达、抑制肾小管上皮细胞的表型转化起到拮抗肾间质纤维化的作用。     

黄芪当归合剂对梗阻性肾病大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的 :研究黄芪当归合剂 (A&A)对梗阻性肾病大鼠肾小管间质纤维化的防治作用 ,探讨其抗纤维化作用的可能机制。方法 :采用单侧输尿管梗阻 (UUO)诱导肾间质纤维化的动物模型 ,以目前公认具有肾脏保护作用的血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)作为阳性对照 ,将大鼠随机分为假手术组 (Sham)、模型组 (UUO)、黄芪当归合剂组 (A&A)、依那普利组 (ACEI) ,术后第 1 0天处死大鼠 ,收集血清测定肌酐、尿素氮水平 ,肾组织用Masson染色后进行图像分析评定各组肾小管间质损害程度 ,免疫组化半定量检测各组肾间质的α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)、转化生长因子 β1 (TGF β1 )、纤维连接蛋白 (FN)和层粘连蛋白 (LN)的表达。结果 :UUO组的肾小管间质损伤指数及α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达明显高于Sham组 ,肾小管间质损伤指数与肾间质的α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达均呈正相关关系。A&A组、ACEI组的肾小管间质损伤指数及α SMA、TGF β1 、FN和LN的表达均明显低于UUO组 ;两治疗组间比较 ,A&A对TGF β1 表达的抑制作用弱于依那普利的作用 ,而其余各指标差异无显著性。结论 :在单侧输尿管梗阻诱导的肾间质纤维化大鼠模型中 ,中药复方A&A的防治作用与ACEI相似 ,可能是通过减少肾间质肌成纤维细胞的数量、抑制TGF β1 表达     

MMP-9与TIMP-1在肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的研究结扎大鼠单侧输尿管(UUO)制备的实验性肾纤维化模型梗阻肾基质金属蛋白酶9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)表达的动态变化,探讨MMP-9和TIMP-1在肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法将64只雄性大鼠随机分为假手术组和UUO组(n=32),UUO组结扎单侧输尿管,术后3d、7d、14d、21d每组各处死8只大鼠,用免疫组化法检测大鼠梗阻肾组织MMP-9、TIMP-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SAM)及纤维连接蛋白(FN)的表达。结果UUO术后3d,PAS染色见少量肾小管基底膜(TBM)局灶性断裂。术后7d,TBM断裂程度加重,基底膜断裂的肾小管数增多。术后14d直至术后21d,可见部分TBM增厚、扭曲,基底膜断裂程度和基底膜断裂的肾小管数较7d时略减轻和减少。与假手术组相较,UUO组随着梗阻时间的延长,肾间质中α-SMA、FN、TIMP-1蛋白表达逐渐增多。UUO组术后3d可见MMP-9在肾小管间质有强阳性表达,术后7d达高峰,14～21d呈下降趋势。α-SMA、MMP-9、TIMP-1主要表达于肾小管上皮和肾间质。MMP-9阳性染色面积与α-SMA阳性染色面积、TBM的断裂程度、基底膜断裂的肾小管个数均呈正相关(r分别为0.894,0.854,0.821,P均<0.05)。结论肾小管间质MMP-9和TIMP-1蛋白表达的动态变化影响TBM完整性与ECM堆积。MMP-9与TIMP-1相互拮抗调节肾小管基底膜代谢,参与肾小管上皮细胞转分化,影响肾纤维化进展。     

引经药物介导三七抗肾间质纤维化及肾靶向作用研究

目的观察三七和引经药物介导的三七复方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化及肾靶向作用的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为5组:UUO组、假手术(SOR)组、三七(RN)组、引经药物介导的三七复方(CRN)组和氯沙坦(ARB)组。每组纳入18只进行检测。HE、Masson和PAS染色观察肾间质病理学改变;化学比色法测定肾组织匀浆中羟脯氨酸的含量;Real-time PCR从mRNA水平观察α-SMA、collagenⅠ和fibronectin的表达。采用Western blot、免疫组化技术观察α-SMA蛋白的表达。结果 UUO组呈进行性肾间质纤维化改变,包括小管的萎缩、扩张、炎细胞浸润、肾间质胶原的沉积以及α-SMA、collagenⅠ、fibronectin mRNA水平的升高(P<0.05)。偏相关分析显示α-SMA的表达与肾小管损伤指数呈正相关(r=0.55;P<0.05)。RN组、CRN组、ARB组与UUO组比较均不同程度地减轻了胶原在肾间质的沉积,改善了肾脏病理损害,抑制了肾小管间质α-SMA的表达(P<0.05),且CRN作用强于RN(P<0.05)。结论三七和引经药物介导的三七复方对UUO所致的大鼠肾间质纤维化的形成均有抑制作用,且CRN作用强于RN。引经药物介导的三七复方对肾间质纤维化更具靶向治疗作用。     

杜仲对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织MMP-2表达的影响

[目的]观察杜仲对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织MMP-2的影响并探讨其可能机制。[方法]采用单侧输尿管梗阻(UUO)肾间质纤维化模型。将32只大鼠随机分为4组,每组8只,即假手术组、模型组、厄贝沙坦组和杜仲组。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦10mg·kg-1·d-1、杜仲组给予杜仲6g·kg-1·d-1治疗。术后2周处死大鼠,光镜下观察Masson和HE染色肾间质纤维化指数,观察肾组织病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织基质金属蛋白酶-2(Matrix metal proteinase-2,MMP-2)的表达。[结果]1.UUO组与假手术组相比,BUN,Scr水平均显著增加,杜仲组较UUO组呈下降趋势。厄贝沙坦组作用效果与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。2.与假手术组相比,肾组织行HE染色UUO组可见弥漫的肾小管上皮细胞空泡变性、扩张、部分萎缩,偶见坏死,肾间质增宽,大量的炎细胞浸润和间质纤维化,肾小球病理改变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。3.与假手术组相比,Mas-son染色结果显示UUO组可见肾间质增宽、有大量胶原纤维增生,肾小球病变不明显,杜仲组上述改变均有所减轻,厄贝沙坦组病理改变与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。4.MMP-2在假手术组大鼠肾间质中呈棕黄色颗粒状表达,UUO组中大鼠肾间质仅有少量表达且着色稀疏,杜仲组MMP-2表达较假手术组减轻,但其表达仍高于UUO组。厄贝沙坦组与杜仲组相似,且两组间比较,无显著差异(P0.05)。[结论]杜仲可上调MMP-2的表达,进而减缓肾纤维化的病程进展。     

UUO模型大鼠肾间质纤维化动态进展及α-SMA、TGF-β1和VDR表达变化

目的 观察单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管间质纤维化动态进展,研究该病理过程中肾脏纤维化相关蛋白表达的变化.方法 32只清洁级SD大鼠随机分为假手术组(n=16)和UUO模型组(模型组,n=16).两组大鼠分别于术后(模型组建模后)第2、5、9、14天分批(n=4)处死,留取手术侧(模型组梗阻侧)肾脏组织.分别采用HE和Masson染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,评价肾小管间质纤维化损伤程度并检测肾脏组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、维生素D受体(VDR)及转化生长因子β1(TGF-β1)等相关蛋白的表达.结果 肾脏组织形态学观察显示,随着输尿管梗阻时间的延长,肾小管间质纤维化程度逐步加重.免疫组织化学染色显示,模型组大鼠建模后各时间点肾间质α-SMA和FN阳性面积百分比均显著高于假手术组(P＜0.05),且随着梗阻时间的延长逐渐升高,至建模后第14天时达到高峰.Western blotting分析表明,模型组大鼠建模后各时间点α-SMA和TGF-β1相对表达量均显著高于假手术组(P＜0.05),而VDR相对表达量显著低于假手术组(P＜0.05);建模后第2天,模型组大鼠肾脏组织α-SMA相对表达量已显著增加;建模后第14天,模型组α-SMA和TGF-β1相对表达量分别增高至假手术组的12.7倍和8.8倍,而VDR相对表达量下降至假手术组的3%.结论 UUO模型大鼠建模后第14天可出现显著的肾间质纤维化;建模早期肾间质中α-SMA表达增加提示肾间质成纤维细胞的活化;VDR表达的进行性减少提示其与肾间质纤维化有关.     

P21在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达及依那普利对其表达的调节

目的：动态观察P21在单侧输尿管梗阻肾间质纤维化大鼠模型中的表达，以及依那普利对其表达的调节。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（SOR组）、单侧输尿管结扎组（UUO组）和依那普利治疗组（EnT组）。用免疫组织化学的方法检测3组大鼠术后7，14和21d肾小管上皮细胞P21的表达；用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）的方法检测肾脏p21 mRNA的变化；并观察依那普利对肾脏P21表达的调节。结果：在UUO大鼠模型早期，肾小管上皮细胞P21以及肾脏p21 mRNA的表达即有明显增高，随着梗阻时间的延长，P21的表达逐渐增强；依那普利能明显抑制P21的表达。结论：P21在UUO大鼠肾小管上皮细胞高表达，依那普利可抑制其表达。P21可能参与肾小管间质纤维化的发病过程。     

实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的观察

目的观察单侧输尿管结扎（UUO）大鼠肾小管上皮细胞凋亡。方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肾小管细胞凋亡,结果应用图像分析系统进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组检测到较多的凋亡细胞（P〈0.01）。随着时间延长,肾小管凋亡细胞逐渐增多,有显著差异（P〈0.01）。结论肾小管上皮细胞凋亡参与了肾间质纤维化的发生发展。     

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的:动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠64只随机分为假手术组(n=16)、模型组(n=24)和依那普利治疗组(n=24).治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 nag/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃.分别于造模后第3,7,14,21天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Westem免疫印迹检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达逐渐增加.依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少,与模型组比较,差异在第3,7,14天有统计学意义(P<0.05),而在第21天无统计学意义(P>0.05).结论:依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其能抑制肾组织Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达有关.     

蛋白磷酸酶2A 在肾间质纤维化中的作用

目的：探讨蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)在大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)及TGF-β1刺激的人近端肾小管上皮细胞-2(human kidney proximal tubular epithelial-2,HK-2)的肾纤维 化模型中的作用。方法：1)15只雄性SD大鼠随机分成假手术组( sham组)、模型组(UUO组)和UUO+冈田酸(okadaic acid,OA)干预组(OA组),每组各5只。术后OA组每日给予1.8%酒精稀释的OA 30 μg/kg,胃管饲喂72 h,对照组和模型 组给予相等体积的1.8%酒精胃管饲喂,72 h后处死大鼠,收集血和肾组织,检测肾功能并采用免疫组织化学、Western 印迹和RT-PCR法检测肾组织PP2A的c亚基(PP2Ac)、纤维连接蛋白(fi bronectin,FN)、胶原-I(collagen-I,Col-I)、E-钙黏 蛋白(E-cadherin,E-cad)和α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的蛋白及mRNA的表达。2)采用台盼蓝排斥 实验及MTT 法找出适宜的OA浓度。常规培养HK-2细胞,随机分为对照组、TGF-β1组(TGF-β1 5 ng/mL干预24 h)、TGF- β1+OA组(TGF-β1 5 ng/mL+OA 40 nmol/L,同时干预24 h),Western印迹检测肾小管上皮细胞PP2Ac,FN,Col-I,E-cad 和α-SMA 蛋白的表达。结果：1)肾功能表明UUO组尿素氮和肌酐较sham组升高,OA组尿素氮、肌酐均比UUO组下 降(均P<0.05)。免疫组织化学、Western印迹和RT-PCR均显示：与sham组比较,UUO组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表 达升高,而E-cad表达下降(均P<0.05);与UUO组比较,OA组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表达下降,E-cad表达升高(均 P<0.05);2) OA 40 nmol/L为最适宜的实验质量浓度;Western印迹显示：与对照组比较,TGF-β1组PP2Ac,FN,Col-I 和α-SMA表达升高,E-cad表达下降(均P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+OA组PP2Ac,FN,Col-I和α-SMA表达下 降,E-cad表达升高(均P<0.05)。结论：PP2A能促进肾间质纤维化。     

p27 在单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化模型中的表达

目的：观察单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction,UUO）大鼠模型中p27在肾小管中的表达,了解p27与肾间质纤维化程度的关系。方法：建立UUO大鼠模型,采用免疫组织化学方法检测UUO组及假手术组（Sham-operated rates,SOR）术后第7 d,14 d,21 d肾小管中p27的表达及其与肾间质纤维化程度的关系。结果：UUO组术后第7 d与SOR组比较,p27在肾小管上皮细胞中的表达无明显变化;术后第14 d UUO组p27的表达下降,与SOR组比较差异有显著性（P<0.05);术后第21 d UUO组p27的表达明显下降,与SOR比较差异有显著性（P<0.01)。结论：p27在早期UUO大鼠模型中的表达无明显变化,随着间质纤维化程度的增加,p27的表达明显下降。     

阿魏酸钠减轻大鼠肾间质纤维化机制的研究

目的探讨阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠。肾间质纤维化的保护作用及机制。方法将45只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿魏酸钠治疗组。分别于UUO术后3、7、14 d处死动物并取梗阻肾组织,比较病理改变;用SP法检测TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达,并比较分析。结果与假手术组相比,模型组TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达显著升高(P<0.05)且随时间延长,升高更显著;与模型组相比,治疗组TGF-β1、P-p38MAPK、α-SMA的表达显著降低(P<0.05);且TGF-β1、p-p38MAPK、α-SMA的表达呈现正相关性:TGF-β1与P-p38MAPK(r=0.745,P<0.05);p-p38MAPK与d-SMA(r:0.659,P<0.05);TGF-β1与α-SMA(r=0.770,P<0.05)。结论阿魏酸钠可能通过TGF-β1/p-p38 MAPK通路,下调α-SMA的表达,从而减轻大鼠肾间质纤维化。     

p21与TGF-β在大鼠肾间质纤维化模型中的表达

目的：探讨p21及TGF-β在肾间质纤维化中的作用及其可能的调控机制。方法：将SD大鼠随机分为假手术组（SOR组）和单侧输尿管结扎组（UUO组）。HE染色观察2组大鼠术后第7,14和21天肾小管间质的形态学改变;用RT—PCR法检测肾皮质p21mRNA和TGF-βmRNA的变化。结果-在UUO大鼠模型早期,肾皮质p21mRNA和TGF-βmRNA的表达即有明显增高,与SOR组大鼠比较,差异有显著性（分别P〈0．01及P〈0．05）,随着梗阻时间的延长,p21和TGF-β的表达逐渐增强（P〈0．05）,并且UUO组大鼠各时间点p21和TGF-β的表达呈正相关（各时间点分别为r=0．745、0．700、0．662,P〈0．05）。结论：p21可能参与了单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质纤维化的发病过程,TGF-β可能参与介导了p21在肾皮质表达的调控。