Cdc42蛋白参与中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的人气道上皮细胞黏蛋白高分泌

目的 探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)与中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)5AC高分泌的关系。方法 体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以Cdc42 siRNA和NE进行干预,将细胞分为6组：对照组、NE组、NE+Cdc42 siRNA组、Cdc42 siRNA组、阴性siRNA组、NE+阴性siRNA组。采用Western blot法检测Cdc42蛋白的相对含量,ELISA和免疫荧光检测各组细胞MUC5AC蛋白的表达水平。结果 与对照组相比,NE组Cdc42蛋白含量明显增加(P<0.05),细胞MUC5AC蛋白表达水平亦显著增高(P<0.001);与NE组比较,NE+Cdc42 siRNA组的MUC5AC蛋白水平显著降低(P<0.05),其Cdc42蛋白含量亦明显降低(P<0.001);Cdc42 siRNA组以及阴性siRNA组的Cdc42蛋白、MUC5AC蛋白含量相较于对照组变化不大(P>0.05)。结论 Cdc42在NE诱导的气道上皮细胞黏液高分泌的形成过程中可能发挥着重要的介导作用。     

ROS／Src／JNK信号通路在香烟诱导气道上皮细胞黏液高分泌中的作用

目的 探讨在香烟诱导气道上皮细胞黏蛋白MUC5AC表达过程中Src/JNK信号通路的作用.方法 香烟抽提物预处理的人气道上皮A549细胞,分别以活性氧(ROS)清除剂DMTU、JNK特异性抑制剂SP600125及Src激酶抑制剂PP2干预.测定各组细胞中ROS的含量,采用RT-PCR、ELISA法观察细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC蛋白水平的改变,以Western blot法检测细胞表皮生长因子受体(EGFR)的蛋白表达.结果 细胞暴露于不同浓度的香烟抽提物中,ROS的量呈浓度递增;ROS清除剂DMTU显著降低香烟所致的Src磷酸化;Src特异性抑制剂PP2处理组中的JNK磷酸化水平与对照组比较有明显下降,MUC5AC的表达水平也明显降低;JNK特异性抑制剂SP600125组中MUCSAC的蛋白表达和基因转录水平较对照组均明显降低.结论 ROS-Src-JNK信号通路可能参与A549上皮细胞中MUCSAC的表达调控.     

Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC的调节作用

目的探讨天然内生多肽Elafin对气道上皮细胞黏蛋白5AC(MUC5AC)的调节作用。方法通过培养气道上皮细胞,选择采用香烟烟雾提取物(CSE)以及脂多糖(LPS)作为刺激因素,使用细胞免疫荧光法以及ELISA法,分别检测各组气道上皮细胞MUC5AC的胞内蛋白以及胞外蛋白分泌的表达情况。结果单纯LPS刺激组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.785±0.005)μg/ml,单纯CSE刺激组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.803±0.005)μg/ml,均较对照组明显增多(均P0.01)。在LPS刺激前予Elafin预处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.363±0.003)μg/ml,显著低于单纯LPS刺激组(P0.01)。在CSE刺激前予Elafin预处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平为(0.406±0.006)μg/ml,显著低于单纯CSE刺激组(P0.01)。单纯予Elafin处理组细胞内的MUC5AC蛋白的分泌水平先后为(0.176±0.002)μg/ml及(0.193±0.004)μg/ml(P0.05),均较对照组显著降低。结论 Elafin可以通过阻断气道黏蛋白的生成及分泌,从而达到抑制气道黏液高分泌的目的。     

柚皮素对炎症性气道黏液高分泌的作用

目的 探讨柚皮素对炎性刺激时气道上皮细胞黏液高分泌的作用和相关的分子机制.方法 通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激时气道黏液高分泌模型,分别以柚皮素和活性氧(Ros)清除剂DMTU进行干预,用活性氧试剂盒测定各组细胞中ROS的含量,观察黏蛋白(MUC)5AC、表皮细胞生长因子受体(EGFR)和磷酸化EGFR(P-EGFR)的表达.培养细胞经甲基偶氮唑盐法测定活性后分为对照组、FINE处理组、DMTU组、柚皮素组和柚皮素+DMTU组.逆转录PCR方法检测各组MUC5AC mRNA、EGFRmRNA的变化;western blot法检测EGFR和P-EGFR蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法观察察MUC5AC蛋白表达的变化,并用细胞免疫激光共聚焦显微镜观察柚皮素作用前后黏蛋白的分布.结果 不同浓度的HNE处理A549后,细胞内ROS的含量逐渐增加,而柚皮素预处理组与50nmol/L的HNE刺激组相比细胞内ROS的含量明显减少(P<0.01);HNE处理组MUC5AC的mRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.92±0.08)和(152±6)μg/mg,EGFRmRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.91±0.05)和(0.86±0.03)μg/mg,均较对照组[(0.70±0.02),(112±4)μg/mg和(0.73±0.10),(0.39±0.03)μg/mg]明显升高(P<0.05),P-EGFR和总EGFR.蛋白表达均较对照组显著增加(P<0.01);给予柚皮素预处理后,与HNE刺激组相比,EGFR和P-EGFK表达下调;而柚皮素+DMTU组MUC5ACmRNA和MUC5AC的蛋白较单独DMTU处理组更为明显,其吸光度和面积积分值分别为(0.40±0.03)和(113±2)μg/mg(P<0.01),差异均有统计学意义.结论 HNE可刺激气道上皮细胞产生大量ROS,柚皮素可抑制ROS的产生、下调ROS诱导的EGFR表达水平、并部分阻断EGFR磷酸化,从而抑制炎性刺激时气道黏液高分泌的形成.     

慢性机械压力诱导气道上皮黏蛋白5AC的表达

目的 探讨慢性机械压力能否诱导气道上皮黏蛋白(mucin,MUC)5AC表达及通过的相关信号通路.方法 培养大鼠气道上皮细胞建立气液相界面(air liquid interface,ALI),通过对Transwell培养板上的气道上皮细胞每天施加10、20、30 cmH2O水平的气体压力1 h并持续7 d来模拟慢性机械压力作用,并以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)特异性抑制剂AG1478、细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase, ERK)激酶抑制剂PD98059分别作为干预因素处理细胞.将细胞分为空白对照组、单纯压力组、AG1478+30 cmH2O压力组、PD98059+30 cmH2O 压力组,单纯压力组分为10、20、30 cmH2O 3个压力水平. RT-PCR检测MUC5AC mRNA 表达水平, ELISA法检测MUC5AC蛋白含量, Western blot 检测磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化c-Jun 氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)和磷酸化P38(p-P38)水平.结果 与空白对照组比较,单纯压力组MUC5AC蛋白及mRNA表达水平随压力水平的升高而升高(P<0.05),呈压力依赖性,同时伴随p-ERK蛋白含量增加(P<0.05),但p-JNK和p-P38含量没有明显变化(P>0.05).30 cmH2O压力水平MUC5AC蛋白及mRNA表达水平[(0.65±0.09)、(0.62±0.04)]明显高于空白对照组[(0.28±0.04)、(0.20±0.05),P<0.01],p-ERK蛋白含量(0.68±0.05)较空白对照组(0.27±0.07)显著增加(P<0.01).应用AG1478和PD98059分别预处理后,MUC5AC蛋白、mRNA表达水平及p-ERK蛋白水平在AG1478+30 cmH2O 压力组分别为(0.39±0.08)、(0.40±0.06)、(0.25±0.04),PD98059+30 cmH2O压力组分别为(0.36±0.09)、(0.38±0.13)、(0.26±0.11),与单纯压力组30 cmH2O水平比较均显著降低(P<0.05).结论 慢性机械压力能诱导气道上皮MUC5AC表达增加,这一作用可能通过机械压力压缩侧面胞间隙来实现,而EGFR及ERK信号通路参与其中.     

SOCS3经JAK/STAT信号通路调控气道黏蛋白高分泌

目的 研究细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)在炎症情况下经JAK/STAT通路调控气道黏液高分泌.方法 培养人气道16HBE上皮细胞,设置空白对照组、白介素(IL)-6处理组、IL-6和microRNA (miR)-203处理组,Westernblot法分析细胞中磷酸化JAK激酶(p-JAK1/2)、SOCS3、黏蛋白(MUC) 5AC蛋白水平;Real-time法检测各组细胞中SOCS3、STAT3、MUC5AC mRNA表达量;ELISA法检测各组培养上清液中p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白含量.结果 在IL-6刺激下,IL-6处理组的p-JAK1/2、SOCS3、MUC5AC蛋白量及SOCS3、STAT3 mRNA含量较空白对照组显著升高(P＜0.05),IL-6和miR-203处理组的p-JAK1/2、MUC5AC蛋白量及STAT3 mRNA含量较IL-6处理组显著升高(P＜0.05),但SOCS3 mRNA与IL-6处理组比较差异无统计学意义,SOCS3蛋白含量较IL-6处理组显著降低(P＜0.05).结论 细胞在IL-6刺激后SOCS3呈现高表达,同时经JAK/STAT信号通路负反馈调控MUC5AC.     

激活蛋白-1对香烟烟雾提取物诱导气道 黏蛋白5AC基因表达的调控作用

目的：了解激活蛋白-1（AP-1）参与调控香烟烟雾诱导的气道黏蛋白（MUC）5AC表达的作用机制,探讨此过程中AP-1活化的可能信号途径。 方法：体外培养人气道上皮细胞BEAS-2B,给予香烟烟雾提取物（CSE）刺激,干预实验用c-Jun 的显性负性突变体TAM67转染细胞阻断AP-1的DNA结合活性;用SP600125和PD98059预处理分别阻断c-Jun氨基端激酶（JNK）和细胞外信号调节激酶（ERK）的活性。以ELISA法检测MUC5AC蛋白含量,Western印迹检测磷酸化JNK（p-JNK）、磷酸化ERK（ p-ERK）和磷酸化P38（ p-P38）含量,RT-PCR检测MUC5AC mRNA 表达水平, EMSA测定AP-1的 DNA结合活性。 结果：CSE（1 g/L）刺激后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量明显高于对照组（均P＜0.01）,AP-1 的DNA结合活性也明显强于对照组（P＜0.01）,伴随p-ERK和p-JNK蛋白含量显著增加,与对照组相比,差异有统计学意义（均P＜0.01）,而P38含量无明显变化(P＞0.05);与CSE组相比,TAM67转染细胞后MUC5AC mRNA表达水平和蛋白含量均显著降低 (P＜0.01);与CSE组相比,用SP600125或PD98059处理细胞后可明显抑制AP-1的 DNA结合活性 (均P＜0.05),并下调MUC5AC蛋白含量和mRNA的表达（均P＜0.05）。 结论：AP-1参与调控CSE诱导的气道MUC5AC基因表达的过程,此过程是由JNK和ERK信号转导通路激活AP-1,再由AP-1与MUC5AC启动子上AP-1 DNA反应元件结合后在转录水平上调MUC5AC的表达而实现的。     

水通道蛋白5对PMA诱导的原代小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响

 目的 探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对卟啉醇肉豆蔻酸乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导的原代培养小鼠气道上皮细胞MUC5AC合成的影响及可能机制。方法 原代培养两种小鼠(AQP5基因敲除鼠和野生鼠)气道上皮细胞,Transwell建立气液平面,2周后扫描电镜及角蛋白免疫组化鉴定气道上皮细胞。蛋白激酶(protein kinase C,PKC)特异性激动剂PMA刺激原代小鼠气道上皮细胞及PKC通路特异性阻断剂Calphostinc阻断该通路,ELISA检测两组小鼠MUC5AC蛋白水平的变化,用Western blot检测小鼠气道上皮细胞PMA刺激后PKC、p-PKC、p-p38、p38、ERK、p-ERK的表达差异。结果 气液平面培养后,扫描电镜显示培养的细胞上皮有微绒毛和纤毛覆盖,细胞角蛋白14免疫组化染色为阳性。PMA 20ng/mL 刺激24h后,两组小鼠气道上皮细胞分泌的MUC5AC明显升高,AQP5基因敲除鼠增加更显著(P<0.05),两者差异有统计学意义。PKC特异性阻断剂Calphostinc能阻断PMA引起的两组小鼠MUC5AC分泌。原代小鼠气道上皮细胞经PMA刺激后,Western blot检测显示PKC、p38磷酸化激活,ERK通路无变化。结论 AQP5通过PKC-p38信号通路影响黏蛋白MUC5AC的合成和分泌。     

肿瘤坏死因子转换酶在炎性气道黏液高分泌中的作用

目的：探讨肿瘤坏死因子转换酶(TNF-α converting enzyme,TACE)对炎症条件下气道上皮细胞形成黏液高 分泌过程的影响。方法：通过不同剂量人中性粒细胞弹性蛋白酶(human neutrophil elastase,HNE)刺激人肺腺癌的气道 上皮细胞A549,构建炎症条件下气道黏液高分泌模型,以TACE抑制剂-1(TNF-α converting enzyme inhibitor-1,TAPI-1) 进行干预,观察TACE、黏蛋白(mucin,MUC)5AC的表达。将A549细胞分为5组：对照组,HNE(15,25,50 nmol/L) 组,TAPI-1组。RT-PCR检测各组TACE和MUC5AC mRNA的表达;Western印迹检测TACE蛋白的表达;酶联免疫吸附 测定法(ELISA)观察MUC5AC蛋白的表达。结果：各剂量HNE处理后,TACE和MUC5AC的mRNA和蛋白表达均较对照 组明显升高(P<0.01),且呈现剂量依赖性。而给予TAPI-1预处理后,与HNE刺激组比,各指标明显下调(P<0.01)。结 论：TACE参与了黏液高分泌的细胞转导途径,并可促成炎性气道黏液高分泌的形成。     

依赖Ca2+的ATP过量释放在机械牵张所致气道上皮黏蛋白5AC高分泌中的作用

目的探讨人气道上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)释放量的改变在机械通气所致气道黏液高分泌中的作用。方法人气道黏膜上皮细胞(HBE16)体外培养,通过节律性倾斜细胞培养板,利用液体的表面张力、大气压及液体重力所产生的牵张力(剪应力)及压力(压应力)给予压力牵张刺激,并利用向密闭盒中注入医用氧气增加压力以模拟机械通气,各组培养细胞依施加条件不同而分为对照组、单纯倾斜组、倾斜+钙离子螯合剂BAPTA-AM、倾斜+BAPTA-AM+钙离子螯合剂EGTA、加压+倾斜、加压+倾斜+嘌呤P2Y受体阻断剂reactive blue-2(RB-2)、加压+倾斜+BAPTA-AM、加压+倾斜+BAPTA-AM+EGTA,共8组,分别采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞活性、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平、ELISA法检测细胞培养上清液中MUC5AC含量、高效液相色谱法(HPLC)检测培养液中ATP释放量。结果加压+倾斜组细胞MUC5AC mRNA相对含量、培养上清液中ATP释放量和MUC5AC蛋白分泌量分别为:(11.80±0.01)、(7.41±0.45)μmol/g、(0.77±0.26),显著高于单纯倾斜组的(6.60±0.01)、(2.76±0.47)μmol/g、(0.25±0.01)及对照组的(3.40±0.01)、(0.00±0.01)μmol/g、(0.02±0.01)(均P<0.05)。RB-2、EGTA+BAPTA-AM处理后的加压+倾斜组细胞的MUC5AC mRNA相对含量分别为:(10.5±0.03)、(11.9±0.11),与加压+倾斜组相比抑制作用不显著(P>0.05);培养上清液中ATP释放量分别为:(0.05±0.02)μmol/g、(0.08±0.02)μmol/g,较加压+倾斜组显著降低(均P<0.05)。结论机械通气可以显著提高气道黏膜上皮MUC5AC的分泌,其机制与气道上皮细胞依赖Ca2+的ATP的过量释放密切相关。     

中性粒细胞弹力蛋白酶引起黏蛋白5AC高表达的信号转导机制

目的研究中性粒细胞弹力蛋白酶（NE）通过表皮生长因子受体（EGFR）引起黏蛋白（MUC）5AC高表达的上游信号通路。方法培养人气道BEAS@B上皮细胞,给予NE刺激,以肿瘤坏死因子转换酶抑制剂-1（TAPI-1）及活性氧（ROS）清除剂DMTU为干预因素。RT-PCR检测干预前后细胞中MUCSACmRNA含量;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测培养上清中MUCSAC、可溶性转化生长因子（TGF）-α蛋白含量;Westem印迹分析磷酸化表皮生长因子受体（P-EGFR）蛋白水平。结果NE刺激后引起MUCSAC基因转录和蛋白表达水平明显高于未给予NE刺激的对照组（P〈0．01）,同时伴随可溶性TGF-α及p-EGFR蛋白水平的增高,与对照组相比,差异有统计学意义（均P〈0．01）;加入浓度为20umol/L的肿瘤坏死因子转换酶抑制剂TAPI-1后可明显下调上述指标的表达水平（均P〈0．01）,DMTU也同样降低了MUC5AC的基因转录、产物水平以及可溶性TGF-α蛋白相对含量,与单纯NE刺激组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）,但对单纯外源性TGF-α刺激组引起的MUCSAC基因转录和蛋白合成增加无明显作用（均P〉0．05）。结论NE能刺激细胞产生ROS,再活化肿瘤坏死因子转换酶（TACE）引起黏蛋白产生的增多,组成EGFR通路上游的主要信号分子,故ROS／TACE／TGF-α前体／EGFR转导途经是NE引起气道黏液高分泌的重要机制。     

张力敏感性阳离子通道在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用

目的 观察张力敏感性阳离子通道、Ca2+内流和豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物(MARCKS)在机械牵张引起气道黏液高分泌中的作用.方法 人气道黏膜上皮细胞(HBE16)体外培养,采用小型生物撞击机给予机械牵张刺激,各组培养细胞依施加条件不同而分为对照、牵张、牵张+钆、牵张+硝苯吡啶、牵张+低分子量肝素、牵张+MARCKS效应结构域(ED)锁核酸(LNA)以及牵张+MARCKS的ED无关对照LNA序列共7组,分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光法观察与胞吐相关的突触相关膜蛋白SNAP23以及黏蛋白(MUC)5AC mRNA和蛋白表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞培养上清中MUC5AC分泌.结果 机械牵张能显著升高人气道黏膜上皮细胞中SNAP23和MUC5AC表达,显著提升细胞培养上清中MUC5AC分泌(P＜0.05);钆、硝苯吡啶、MARCKS的ED-LNA均能抑制机械牵张对SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌的提升作用(均P＜0.05);而低分子量肝素未能显著降低SNAP23表达和MUC5AC表达、分泌(P＞0.05).结论 机械牵张能升高人气道黏膜上皮细胞MUC5AC的表达,其机制可能与张力敏感性阳离子通道、Ca2+内流和MARCKS途径有关.     

水通道蛋白1对气道高反应大鼠粘液高分泌的影响

目的:本实验观察臭氧应激后大鼠肺组织AQP1的表达对气道粘液的量和质影响。方法:30只SD大鼠随机分为3组:正常对照组;臭氧应激组;臭氧应激+地塞米松治疗组;每组10只。分组检测支气管分泌粘蛋白总量、肺组织粘蛋白基因MUC5AC表达改变和臭氧应激后肺组织AQP1的量,分析它们之间的相关性。结果:大鼠肺组织有MUC5AC表达,臭氧应激数天后,大鼠气道粘液分泌量明显增加,且MUC5AC表达随之增多,两者呈现正相关趋势。随着AQP1的表达下降,气道高反应大鼠粘液分泌量明显增多,MUC5AC的表达也增多。提示AQP1的表达与气道粘液分泌总量呈现负相关的趋势;AQP1的表达与粘液中的MUC5AC表达呈现负相关的趋势。结论:在气道高反应性过程中,粘液高分泌状态与MUC5AC的表达水平有关,AQP1的表达下调可增加支气管粘液的分泌量和MUC5AC的表达。     

透明质烷和CD44参与调节气道黏液高分泌的分子机制

目的了解透明质烷（HA）和CD44在气道黏液高分泌中的作用,探索信号因子活化表皮生长因子（EGF）／表皮生长因子受体（EGFR）信号通路的分子机制。方法体外培养BEAS-2B气道上皮细胞,给予中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）刺激,以活性氧（ROS）清除剂（DMTU）、透明质酸酶（Hase）、CD44抗体和组织激肽释放酶抑制剂（PI）作为干预因素。RT—PCR检测黏蛋白（MUC）5ACmRNA表达。ELISA法检测MUC5AC及EGF蛋白含量;Westernblotting分析磷酸化EGFR（p-EGFR）蛋白水平。结果NE刺激后MUC5AC、EGF、P—EGFR蛋白及MUC5ACmRNA表达均较对照组显著增高（P〈0．01）,给予DMTU干预后上述指标水平均明显降低（P〈0．01）;在加入DMTU后用Hase处理细胞,上述指标水平均较DMTU组明显升高（P〈0．05）,EGF蛋白含量增高更为明显（P〈0．01）;CD44抗体或PI处理后上述指标水平均明显低于NE组（P〈0．05）,EGF蛋白含量降低更为显著（P〈0．01）。结论NE可刺激细胞产生ROS,后者可裂解HA致其解聚,并使之与CD44结合而活化组织激肽释放酶（TK）,由活化的TK对前体EGF加工处理成EGF,由此启动EGFR信号级联反应,上调MUC5AC基因的表达。     

JNK1/2-AP1信号转导通路对PM2.5所致气道黏液高分泌的介导作用

 目的研究直径≤2.5μm空气中可吸入颗粒（PM2.5）所致气道黏液高分泌的信号转导机制。方法PM2.5刺激大鼠建立气道黏液高分泌模型,Wistar大鼠随机分为对照组、PM2.5组、PM2.5+SP600125组。ELISA检测各实验组中粘蛋白（MUC）5AC在蛋白水平的表达量,Realtime-PCR检测MUC5AC在mRNA水平的表达量,Westernblotting检测JNK1、JNK2、p-JNK1/2的蛋白含量,EMSA检测该信号通路下游激活蛋白1（AP-1）与DNA的结合活性。结果PM2.5刺激组与空白对照组相比,前者MUC5AC在mRNA水平和蛋白水平的表达量均显著高于后者（P<0.01）,通过WesternBlotting法测得JNK1、JNK2各自的蛋白总量无明显变化,活化的JNK1/2(p-JNK1/2)的含量则明显高于对照组（P<0.01）,EMSA结果提示：PM2.5组,测得激活蛋白1结合活性明显升高（P<0.01）,给予JNK特异性抑制剂SP600125后,测得激活蛋白1结合活性明显降低（P<0.05）。与PM2.5刺激组比较,PM2.5+SP600125组的MUC5AC在mRNA水平和蛋白水平的表达明显降低（P<0.05）。结论PM2.5可以通过JNK1/2-AP-1信号传导通路调节气道黏液高分泌。     

晚期糖基化终末产物受体促进甲苯二异氰酸脂哮喘小鼠MUC5AC表达及气道黏液高分泌

目的 探讨晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号对甲苯二异氰酸脂(TDI)哮喘小鼠黏蛋白MUC5AC表达及气道黏液分泌的影响.方法 在体内水平上建立TDI小鼠哮喘模型,实验分4组:对照组、TDI溶剂(AOO)致敏激发组、TDI致敏激发组、RAGE抑制剂处理组.采用糖原染色评估各组间气道黏液分泌情况,Western blotting及免疫组化法检测MUC5AC表达水平.同时通过Western blotting检测各组间细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路磷酸化水平.在体外水平配制TDI-人血清白蛋白(TDI-HSA)复合物,刺激人支气管上皮细胞(16HBE)及经慢病毒转染空载体和shRNA-RAGE载体的人支气管上皮细胞,检测各组MUC5AC及ERK通路分子表达情况,加入ERK抑制剂U0126后,进一步评估MUC5AC mRNA表达情况.结果 与对照组相比,TDI哮喘组小鼠糖原染色阳性率及MUC5AC表达升高(P<0.05),p-ERK表达增多(P<0.05),RAGE抑制剂处理组糖原染色阳性率及MUC5AC表达较TDI组减少(P<0.05).同时,p-ERK表达下降(P<0.05).体外水平,与对照组相比,TDI-HSA处理组MUC5AC mRNA及p-ERK表达增多(P<0.05),sh RNA-RAGE组MUC5AC mRNA及p-ERK表达下调(P<0.05),ERK抑制剂预处理组,MUC5AC mRNA表达下调(P<0.05).结论 TDI小鼠哮喘模型下RAGE可能通过激活ERK通路促进黏蛋白MUC5AC的表达及黏液高分泌的发生.