法尼醇X受体在胆汁淤积幼龄大鼠模型中的表达及利胆合剂的干预作用

目的研究法尼醇X受体(FXR)在胆汁淤积幼龄大鼠模型中表达及利胆合剂干预作用。方法将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组、利胆合剂高、低剂量组。正常和模型组羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余UDCA或利胆合剂灌胃。第5天(正常组除外)给予α-异硫氰酸奈酯(ANIT),ANIT 48h处死。检测血清TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、GGT、ALP,实时荧光定量PCR检测肝组织FXR及小异源二聚体伴侣(SHP)、UDP葡糖醛酸基转移酶家族2多肽B4(UGT2B4)、胆盐输出泵(BSEP)mRNA;Western blot检测肝组织FXR及SHP、UGT2B4、BSEP蛋白。结果模型组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平较正常组增高(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组TBIL、DBIL、TBA、ALT、AST、ALP、GGT水平降低(P0.01);与利胆合剂低剂量组比,高剂量组AST、TBA、GGT水平降低(P0.01)。模型组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量较正常组降低(P0.01);与模型组比较,UDCA组、利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及高剂量组蛋白表达量升高(P0.01),低剂量组FXR、BSEP蛋白表达量升高(P0.05);与UDCA组比较,利胆合剂高、低剂量组FXR、SHP、UGT2B4、BSEP mRNA及蛋白表达量升高(P0.01,P0.05);与利胆合剂低剂量组相比,高剂量组FXR、SHP、UGT2B4、 BSEP mRNA表达量升高(P0.01,P0.05), SHP、UGT2B4蛋白表达量升高(P0.01)。结论利胆合剂可缓解ANIT诱导的胆汁淤积大鼠,且在一定范围内,剂量越高,效果越明显,其疗效优于UDCA,其机制可能与促进FXR及下游的SHP、UGT2B4、BSEP分子表达有关。     

基于Sirt1-FXR通路探究京尼平苷酸对胆汁淤积大鼠胆汁酸肝肠循环的影响

通过体内外结合的方式探究京尼平苷酸(GPA)对胆汁淤积大鼠胆汁酸肝肠循环作用影响及其基于去乙酰化酶1(Sirt1)-法尼醇X受体(FXR)通路的作用机制探究。将60只SD大鼠随机分为6组,分别为空白对照组、α-萘异硫氰酸酯(ANIT)模型组、阳性对照组(100 mg·kg~(-1)·d-1UDCA),以及100,50,25 mg·kg~(-1)·d-1GPA高、中、低剂量组,每组10只,给药10d。在第8天药后,除空白大鼠其余均一次性灌胃65 mg·kg~(-1)ANIT,末次药后,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GGT)和碱性磷酸酶(ALP)活性以及总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA)的含量; RT-PCR法检测肝组织中胆汁酸肝肠循坏关键基因Sirt1,FXR,多药耐药相关蛋白2(MRP2),胆盐输出泵(BSEP),钠离子-牛磺胆酸协同转运多肽(NT-CP),回肠中顶端钠-胆汁酸转运体(ASBT),回肠胆汁酸结合蛋白(IBABP) mRNA转录水平的影响;免疫荧光三染法检测MRP2,BSEP和NTCP在肝脏中表达,ASBT,IBABP在回肠中表达; Western blot法检测肝组织中Sirt1,FXR表达;体外培养原代肝细胞观察GPA对EX 527(Sirt1抑制剂)抑制与否,RT-PCR和Western blot法检测细胞中Sirt1和FXR的mRNA和蛋白表达。在体实验表明,GPA能显著降低或改善ANIT诱导的胆汁淤积大鼠血清ALT,AST,γ-GGT,ALP活性和TB,TBA的含量(P0. 01)以及肝组织病理损伤; GPA能显著升高肝组织Sirt1,FXR,MRP2,BSEP,NTCP和回肠中ASBT,IBABP mRNA转录水平和蛋白表达(P0. 01);体外原代肝细胞实验表明,EX-527能通过抑制原代肝细胞中Sirt1基因和蛋白功能来抑制FXR基因和蛋白表达(P0. 01),GPA可显著提高改善EX-527抑制的原代肝细胞中Sirt1和FXR基因和蛋白的表达(P0. 01)。以上结果发现GPA的改善作用呈剂量正相关性。GPA可改善ANIT诱导的胆汁淤积大鼠的胆汁酸肝肠循环发挥保肝利胆作用,其可能机制是GPA通过激活改善氧化应激损伤关键调控基因Sirt1来激活核受体FXR,激活的FXR再调控胆汁酸肝肠循环的相关蛋白来实现。     

残黄片对ANIT诱导黄疸模型大鼠的退黄作用机制分析

目的:考察残黄片对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导黄疸模型大鼠肝脏法尼醇X受体(FXR),尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)mRNA和蛋白表达的影响,探讨其治疗残留黄疸的作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组、残黄片(CHP)组和熊去氧胆酸片(UDCA)组,ANIT灌胃复制黄疸模型,相应药物干预后进行血清总胆红素(TBIL),总胆汁酸(TBA),丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和碱性磷酸酶(ALP)的含量检测和肝组织病理学检查,以评价残黄片的治疗作用。应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测各组大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2 mRNA和蛋白的相对表达量。结果:CHP能显著降低由ANIT引起的大鼠血清TBIL,TBA,ALT,AST,ALP的升高,抑制肝脏病理学改变,退黄作用优于UDCA。与正常组比较,ANIT造模后显著抑制大鼠肝组织FXR,UGT1A1,MRP2的mRNA水平(P0.01)。与模型组比较,CHP和UDCA干预后均显著提升了各蛋白目的基因mRNA水平(P0.01),在提升胆红素代谢酶UGT1A1的mRNA水平上CHP优于UDCA(P0.01)。在影响蛋白表达方面,与正常组比较ANIT造模使大鼠FXR表达明显升高(P0.05),CHP干预有促进FXR表达的趋势,而UDCA未见有促进趋势,但二者无显著差异。在促进胆红素代谢和胆汁排泄方面,ANIT造模使得UGT1A1,MRP2的表达显著降低(P0.01),而CHP治疗后显著提高了UGT1A1和MRP2蛋白的表达(P0.01)。在提高胆红素与胆汁酸外排蛋白MRP2的表达上CHP优于UDCA(P0.01)。结论:CHP退黄作用机制与激活肝脏FXR mRNA的表达,促进胆红素代谢酶UGT1A1和胆汁酸转运体MRP2的mRNA和蛋白表达,提高肝脏对游离胆红素的代谢并促进胆汁酸排出肝脏,缓解胆汁淤积性肝损伤有关。     

茵陈蒿水煎液对ANIT所致肝内胆汁淤积模型小鼠肝损伤影响及其机制初步探讨

目的探讨茵陈蒿水煎液对ANIT所致肝内胆汁淤积小鼠肝损伤的影响作用及可能机制。方法雌性C57BL/6小鼠分组灌胃茵陈蒿水煎液10 d,第7天给药后1 h采用ANIT造模。检测血清总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;HE染色观察肝脏病理;采用LC-MS/MS测定血、肝和胆囊胆汁酸。RT-PCR法检测CAR、PXR、MRP2、MRP3、MRP4、BSEP、CYP3A11和UGT1A1基因表达。结果与模型组比较,茵陈蒿水煎液低剂量组(0.945 g·kg~(-1)·d~(-1))血清TBIL、ALP、AST、ALT明显下降(P0.05),肝损伤好转,血浆、肝脏胆汁酸总量明显减少(P0.05),胆囊中胆汁酸明显增加;茵陈蒿水煎液中剂量组(1.8 g·kg~(-1)·d~(-1))AST和ALT明显下降(P0.05),血浆胆汁酸总量减少(P0.05);茵陈蒿水煎液高剂量组(3.78 g·kg~(-1)·d~(-1))血清酶活性无明显改变,血浆、肝脏和胆囊胆汁酸总量无明显增减。各剂量组的CAR、MRP2、MRP3、BSEP、CYP3A11和UGT1A1表达增加。结论茵陈蒿水煎液低剂量组(0.945 g·kg~(-1)·d~(-1))对ANIT诱导的小鼠肝内胆汁淤积肝损伤有保护作用,可能与茵陈蒿诱导CAR和相关靶基因增加胆汁代谢和胆汁排泌有关。     

大黄素对大鼠血清肝功能、肝脏转运蛋白及代谢酶UGT1A1表达的影响

目的研究长期灌胃给予大黄素对大鼠血清肝功能、肝脏转运蛋白及代谢酶UGT1A1表达的影响,探讨大黄素肝毒性作用机制。方法将大鼠随机分为空白组、大黄素低剂量组(20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中剂量组(40 mg·kg~(-1)·d~(-1))及高剂量组(80 mg·kg~(-1)·d~(-1)),灌胃30 d后,检测大鼠血清中的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)水平。采用实时荧光定量RT-PCR测定大鼠肝脏中转运蛋白P-gp、Mrp2、Mrp3、Oatp1、Oatp2、Bsep、Ntcp及代谢酶UGT1A1的mRNA表达,以Western blot方法测定大鼠肝脏中P-gp、Mrp3、Ntcp及UGT1A1的蛋白表达。结果中剂量组及高剂量组大鼠血清ALP、TBIL、DBIL、TBA明显升高(P0.05或P0.01),肝脏P-gp、Mrp3 mRNA及蛋白表达均显著上调(P0.01);而肝脏中Ntcp及UGT1A1 mRNA及蛋白表达显著下调(P0.05或P0.01)。结论长期给予较高剂量的大黄素有肝脏毒性的风险。大黄素致肝毒性可能与肝脏中P-gp、Mrp3表达的上调、Ntcp及UGT1A1表达的下调有关。     

白花蛇舌草对肝内胆汁淤积模型大鼠的保护作用

目的:研究白花蛇舌草对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导肝内胆汁淤积模型大鼠保护作用。方法:采用灌服ANIT法建立肝内胆汁淤积大鼠模型,大鼠随机分为正常对照组、模型组、白花蛇舌草组、熊去氧胆酸阳性对照组。连续给药5 d后,测定大鼠胆管胆汁排泄量、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、胆红素(TB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、肝组织病理学变化及其胆盐输出泵(BSEP)和多药耐药相关蛋白2(MRP2)表达等指标,研究白花蛇舌草对肝内胆汁淤积大鼠肝功能、胆汁酸排泄、炎症因子及肝组织病理学变化的影响。结果:与模型组比较,白花蛇舌草能显著促进胆汁排泄,降低大鼠血清中ALT、AST、TBA、TB、TNF-α、IL-1β水平(P0.01),诱导肝内BSEP、MRP2蛋白表达,改善大鼠肝组织病理学。结论:白花蛇舌草具有保护ANIT诱导肝内胆汁淤积模型大鼠肝损伤的作用。     

茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症大鼠胆汁酸转运蛋白MRP2与BSEP表达的影响

目的:观察茵黄合剂对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)大鼠胆汁酸转运蛋白多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein 2,MRP2)与胆盐输出泵(bile salt export pump,BSEP)表达的影响,探讨茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症可能的分子机制.方法:运用雌孕激素联合的方法建立孕鼠妊娠肝内胆汁淤积症模型,随机分为正常组、模型组、茵黄合剂低剂量组(9 g·kg-1·d-1,ig)和茵黄合剂高剂量组(18 g·kg-1 ·d-1,ig),分别给予生理盐水、低剂量与高剂量的茵黄合剂5d,取血,检测血清总胆汁酸(total bile acid,TBA)、总胆红素(total bilirubin,TBil)、丙氨酸转氨酶(alanine transarninase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活性,留取肝脏组织,置于液氮中保存,分别运用实时定量PCR法及蛋白免疫印迹法检测胆汁酸转运蛋白MRP2 BSEP mRNA与蛋白表达情况.结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TBA,TBil水平增加,MRP2,BSEP mRNA与蛋白表达水平降低(P＜0.01),模型组ALT,AST含量与正常组比较虽有增加,但差异无统计学意义.与模型组比较,茵黄合剂低、高剂量均能降低妊娠肝内胆汁淤积症模型大鼠血清TBA,TBil水平(P＜0.01),并且可明显增加肝脏组织MRP2,BSEPmRNA与蛋白表达水平,P＜0.01.结论:茵黄合剂治疗妊娠肝内胆汁淤积症的分子机制可能是通过增加肝脏组织胆汁酸转运蛋白MRP2,BSEP,mRNA与蛋白表达水平实现的.     

利胆退黄汤对ANIT诱导的胆汁淤积型黄疸模型大鼠的治疗作用

目的:探讨利胆退黄汤对胆汁淤积型黄疸大鼠的疗效及其作用机制。方法:Wistar雄性大鼠48只,随机分成6组:对照组,模型组,阳性药组,利胆退黄汤低、中、高剂量组,每组8只。除对照组外,其余5组均一次性灌胃α-萘基异硫氰酸盐(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)溶液(5mL/kg)造模,诱发大鼠急性肝内胆汁淤积病变。造模48h后,利胆退黄汤低、中、高剂量组给药量分别是10、20、40g/(kg·d),阳性药组给予茵栀黄颗粒1.6g/kg灌胃,同时对照组和模型组每天给予生理盐水灌胃,连续给药7天,各组大鼠采集血液及肝脏组织,分析血清指标、肝脏组织中钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(Sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)、胆汁酸盐输出泵(Bile salt export Pump,BSEP)蛋白表达、mRNA表达和观察病理切片。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、总胆红素(Total bilirubin,TBil)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBil)、总胆汁酸(Total bile acid,TBA)水平均显著升高(P0.05);与模型组比较,利胆退黄汤低、中、高剂量组血清指标显著降低(P0.05)。与对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中NTCP、BSEP蛋白表达及mRNA表达均明显降低(P0.05)。与模型组比较,利胆退黄汤低、中、高剂量组大鼠肝组织中NTCP、BSEP蛋白表达及m RNA表达均明显升高(P0.05);病理切片观察可见模型组大鼠肝细胞肿大,排列无序不规整,显点状或灶性坏死,轮廓不清,胆管上皮细胞增生,肝窦变大,可见大量炎细胞浸润,利胆退黄汤低、中、高剂量组大鼠肝组织病理炎细胞浸润和脂肪细胞减少,肝细胞肿胀明显改善,肝细胞排列比较规整,细胞大小大致相等。与阳性药组比较,利胆退黄汤高剂量组大鼠肝组织病理改善较明显,血清中ALT、ALP、AST、γ-GT、TBA水平均显著升高(P0.05),NTCP蛋白表达及mRNA表达均显著升高(P0.05)。结论:利胆退黄汤可降低调节ANIT诱导的胆汁淤积型黄疸大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBil、DBil、TBA的水平,且疗效优于茵栀黄颗粒。利胆退黄汤可能通过调节NTCP、BSEP mRNA的表达来改善胆汁淤积大鼠的肝胆功能。     

小异源二聚体伴侣受体在淤胆型肝炎模型中的表达及大黄素的干预作用

目的研究小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)在急性淤胆型肝炎大鼠模型中的表达及大黄素的干预作用。方法 40只Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:正常对照组,模型组,大黄素组,熊去氧胆酸(UDCA)组,每组10只。除正常对照组外,其余3组给予α-异硫氰酸萘酯(alphanaphthylisothiocyanate,ANIT)50 mg·kg~(-1)一次灌胃,建立大鼠急性淤胆型肝炎动物模型,并给予相应的药物干预,造模后48 h留取标本,以实时荧光定量PCR法及Western blot法分别检测肝组织中SHPm RNA表达及蛋白表达的变化;全自动生化分析仪检测血清总胆红素(total bilirubin,TB)、直接胆红素(direct bilirubin,DB)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、胆汁酸(total bile acid,TBA)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转移酶(gamma glutamine transferase,GGT)的水平;肝组织切片、HE染色后显微镜下观察肝组织病理学改变。结果模型组肝组织中SHP m RNA及蛋白表达水平分别为0.559±0.194、0.313±0.087,均低于正常对照组(P0.05),大黄素组肝组织中SHP m RNA及蛋白表达水平分别为0.892±0.390、0.706±0.193,均高于模型组(P0.05);大黄素组血清TB、DB、ALT、TBA、AST、ALP均明显低于模型组(P0.05),且大黄素组TB、DB、ALT、TBA、AST、ALP明显低于熊去氧胆酸组(P0.05);大黄素组肝组织病理改变较模型组明显减轻,熊去氧胆酸组肝组织病理改变亦较模型组明显减轻,但程度重于大黄素组。结论大黄素可升高ANIT诱导的大鼠急性淤胆型肝炎肝组织中SHP m RNA及蛋白表达水平。大黄素可降低血清中TB、DB、ALT、TBA、AST、ALP水平及减轻肝组织病理学损害,疗效优于熊去氧胆酸,其作用机制与促进SHP表达有关。     

裸茎金腰逆转ANIT致小鼠IC型肝损伤有效部位的筛选探究

目的筛选特色裸茎金腰Chrysosplenium nudicaule Bunge(亚吉玛)逆转ANIT致小鼠肝内胆汁淤积(IC)型肝损伤的有效部位。方法灌胃ANIT的橄榄油溶液诱导小鼠急性IC,测定小鼠血清中生化指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、直接胆红素(DBIL)和总胆红素(TBIL)的水平;RT-PCR法测定各极性部位对小鼠肝组织中小异源二聚体伴侣(SHP)、Na~+-牛磺胆酸转运体(NTCP)mRNA的表达的影响。结果与模型组比较,乙酸乙酯部位(EAP)和正丁醇部位(BAP)高剂量组(4.0 g/kg)能降低小鼠血清中ALT、AST、ALP、TBA、DBIL、TBIL水平(P0.05,P0.01),且能上调小鼠肝组织SHP、NTCP mRNA的表达(P0.05,P0.01)。结论乙酸乙酯和正丁醇萃取部位为裸茎金腰逆转小鼠急性IC的活性部位。     

白花蛇舌草对ANIT 诱导的胆汁淤积大鼠保肝作用研究

目的研究白花蛇舌草对α-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导的胆汁淤积肝病大鼠的保肝作用及机制。方法 将48 只SD 大鼠随机分为正常对照组,模型组,白花蛇舌草高、中、低剂量组（1、0.5、0.25 g·kg-1）,熊去氧 胆酸组（100 mg·kg-1）,每组8 只,均连续灌胃给予相应药物5 d。其中第3 天除正常对照组外,其他各组采用 灌胃给予ANIT（65 mg·kg-1）制备ANIT 诱导胆汁淤积肝病大鼠模型。检测各组大鼠血清肝功指标谷丙转氨 酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）,血清黄疸指数总胆汁酸（TBA）、总胆红素（TBIL）及肝脏抗 氧化应激因子谷胱甘肽（GSH）和超氧化物歧化酶（SOD）水平;测定各组大鼠胆汁流量以及胆汁中TBIL 和TBA 的含量;采用HE 染色检测肝脏病理变化;Real-time PCR 法检测肝脏组织中胆汁酸合成、转运、排泄和重吸 收等相关基因的表达水平。结果与正常对照组大鼠相比,模型组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL 水平显著增加,而胆汁流量和胆汁中TBA 和TBIL 的排泄则显著降低,差异均具有统计学意义（P＜0.01）;胆 汁酸合成与转运的主要核受体（FXR、SHP）、胆汁酸顶腔侧膜转运体（BSEP、MRP2、MDR2）、胆汁酸合成 酶（CYP7A1、CYP8B1、CYP27A1）和胆汁酸重吸收转运体（NTCP、OATP1A1、OATP1A2）的mRNA 表达水平显 著降低,而胆汁酸基底侧膜转运体（MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ）的mRNA 表达水平则显著升高,差异均具有 统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）。与模型组相比,白花蛇舌草组大鼠血清的ALT、AST、ALP、TBA、TBIL 水 平显著降低（P＜0.01）,而大鼠胆汁流量和胆汁中TBA 和TBIL 的排泄量则显著升高（P＜0.01）;肝脏组织病理 损伤显著改善;胆汁酸核受体（FXR、SHP）、胆汁酸顶腔侧膜转运体（BSEP、MRP2、MDR2）和胆汁酸基底侧 膜转运体（MRP3、MRP4、OSTα、OSTβ）的mRNA 表达水平显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,而胆汁酸合成 酶（CYP7A1）和胆汁酸重吸收转运体（NTCP、OATP1A1）的mRNA 表达水平显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。 结论白花蛇舌草具有改善胆汁淤积肝损伤作用,其机制可能通过激活FXR-SHP 轴的表达,从而促进胆汁酸 外排,减少胆汁酸合成与重吸收作用有关。     

短穗兔耳草对α-萘异硫氰酸脂致肝损伤小鼠保护作用的研究

目的研究短穗兔耳草对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致肝损伤小鼠的保护作用。方法取昆明种小鼠60只,随机分为6组,每组10只,分别为正常组,模型组,联苯双酯组(0.15 g·kg~(-1)),短穗兔耳草提取物低、中、高剂量组(1.0,2.0,4.0 g·kg~(-1))。采用灌胃ANIT 100 mg·kg~(-1)花生油溶液的方法制备小鼠急性肝损伤模型,连续灌胃给药7 d,末次给药1 h后取血、取肝脏,检测血清中ALT、AST、TBA、TBIL和TNF-α的含量;检测肝组织匀浆中SOD、MDA、GSH-Px的含量,PCR检测肝组织中TNF-αm RNA的表达量,HE染色显微镜下观察肝组织病理变化。结果与模型组比较,短穗兔耳草低、中、高剂量组均能显著降低肝损伤小鼠血清ALT、AST、TBA、TBIL和TNF-α的水平和肝匀浆中MDA含量,同时显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSHPx的含量,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01);短穗兔耳草提取物各剂量组均可显著下降肝组织中TNF-αm RNA的相对表达量(P0.05,P0.01)。病理切片显示短穗兔耳草各剂量组能显著改善肝组织的病理变化。结论短穗兔耳草对ANIT所致小鼠肝损伤有保护作用。     

大黄对胆汁淤积幼龄大鼠的预防保护作用

目的:探讨大黄对胆汁淤积幼龄大鼠的保护效果。方法:将42只幼龄大鼠随机分为正常组、模型组、熊去氧胆酸(UDCA)组,地塞米松(DEX)组,大黄低、中、高剂量组,每组6只,正常组和模型组给予羧甲基纤维素钠溶液灌胃,其余组分别给予UDCA、DEX、及大黄灌胃。第5天各组动物(正常组除外),采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)50 mg/(kg·d)一次性灌胃建立肝内胆汁淤积模型,ANIT灌胃后48 h分别处死各组动物。比色法检测总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、总胆汁酸(TBA)、碱性磷酸酶(ALP)、γ谷氨酰转移酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。采用苏木精-伊红染色于光镜下观察各组肝脏形态学改变。结果:模型组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较正常组明显升高(P0.01)。UDCA组血清TBIL、TBA、ALP、GGT、AST水平较模型组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。DEX组血清TBIL、TBA、AST水平较模型组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄各剂量组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较模型组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄高剂量组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较UDCA组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄中剂量组血清TBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较UDCA组明显降低(P0.01)。大黄低剂量组血清TBIL、TBA、ALT、AST与UDCA组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄不同剂量组血清TBIL、DBIL、TBA、ALP、GGT、ALT、AST水平较DEX组有不同程度降低(P0.01,P0.05)。大黄低剂量组血清DBIL,TBA,ALP,ALT,AST水平较中剂量组、高剂量组有不同程度升高(P0.05,P0.01)。中剂量组血清DBIL,TBA,ALP,ALT,AST水平较高剂量组无显著性差异(P0.05)。模型组大鼠肝脏病理改变最重,UDCA组、DEX组、大黄不同剂量组肝脏病理较模型组有明显改善,其中大黄高剂量组病理改善最明显。结论:大黄可以缓解ANIT诱导幼龄大鼠肝内胆汁淤积,其效果优于UDCA和DEX,高剂量组效果最好。     

苗药结石草总生物碱对α-异硫氰酸萘酯所致肝损伤小鼠的保护作用及机制研究

目的研究苗药结石草总提物及总生物碱部位对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)所致黄疸型肝损伤小鼠的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用灌胃ANIT(60 mg·kg-1)橄榄油溶液造成小鼠急性肝损伤模型,连续给药5 d,末次给药1 h后取血、肝脏,检测血清中谷氨酸-丙酮酸转氨酶(ALT),天门冬氨酸转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),总胆汁酸(TBA),总胆红素(TBIL)和游离胆红素(DBIL)的含量;检测肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量,RT-PCR检测肝组织中FXR,CYP7A1,BSEP,MRP2 mRNA的表达量,苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理变化。结果与模型组比较,结石草总提物及总生物碱各组均可显著降低肝损伤小鼠血清ALT,AST,ALP,TBIL,DBIL和TBA的水平和肝匀浆中MDA含量,且能显著升高小鼠肝匀浆中SOD和GSH-Px的含量,各组均能显著升高肝组织中FXR,MRP2 mRNA相对表达量,且高剂量组可显著升高BSEP mRNA相对表达量,并能显著降低CYP7A1的mRNA相对表达量。病理切片显示结石草总提物和总生物碱各组能显著改善肝组织的病理变化。结论结石草总提取物及总生物碱对ANIT所致小鼠黄疸型肝损伤有保护作用,生物碱部位为其抗肝损伤活性部位。     

大黄素对肝内胆汁淤积大鼠P-gp表达的影响

目的:探讨大黄素对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)致急性肝内胆汁淤积的保护作用及其机制。方法:采用ANIT灌胃制备大鼠急性肝内胆汁淤积病理模型,将32只大鼠随机分为正常组、正常+大黄素组、模型组和模型+大黄素组,观察各组实验动物肝功能各项生化指标和肝组织病理学改变,并采用实时荧光定量RT-PCR检测肝细胞膜转运蛋白基因多药耐药蛋白1a(mdr1a)、多药耐药蛋白1b(mdr1b)和多药耐药蛋白2(mdr2)mRNA水平的表达,Western blot方法检测肝脏P-糖蛋白(P-gp)的变化。结果:模型+大黄素组与模型组比较,TBiL,DBiL,ALT,AST,ALP,TBA浓度明显降低(P0.01或P0.05);肝细胞变性和坏死、中性粒细胞浸润均减轻;在mRNA水平mdr1a,mdr1b,mdr2的表达均上调(P0.01或P0.05),P-gp表达同时也增高(P0.05)。结论:大黄素对胆汁淤积型肝炎有保护作用,上调肝脏中与胆汁酸代谢相关的转运蛋白P-gp的表达以减少胆汁酸及其他有毒化合物在肝脏中的蓄积可能为其退黄、恢复肝脏功能的作用机制之一。     

不同治则中药复方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠尿激酶型纤溶酶原激活剂的影响

目的 观察补益肝肾、活血化瘀方二至丸、失笑散及其合方对胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的影响.方法 采用胆管结扎复制胆汁淤积性肝纤维化大鼠模型.造模大鼠于术后1周随机分为模型组、优思弗组、二至丸组、失笑散组及合方组:各药物干预组分别给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,至4周末处死全部动物取材.观察各组大鼠一般情况、肝功能(ALT、AST、ALP、TBi 1)、肝组织病理,uPA蛋白表达(western blot法).结果 与假手术组比较,模型组大鼠ALT、AST、ALP、TBi 1、纤维化程度均显著升高.与模型组比较,3个复方均能降低大鼠血清ALP、ALT、AST水平(P＜0.01),失笑散及合方能降低TBi 1(P＜0.01),合方改善ALP、ALT优于两个单方.3个复方均能不同程度地减轻模型大鼠肝纤维化程度(P＜0.01),合方优于两个单方.优思弗能降低ALT、AST水平,但对肝脏纤维化无明显改善作用.与模型组比较,3个复方组uPA蛋白表达显著增加(P＜0.01),其中合方组最高,失笑散组次之,再次为二至丸组,三者之间比较差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 二至丸、失笑散及其合方均可不同程度地干预胆汁淤积性肝纤维化形成,其机制可能与调控uPA蛋白表达有关.     

京尼平苷酸对ANIT诱导胆汁淤积大鼠的酮洛芬肝代谢和胆汁排泄的影响及机制探究

目的探讨京尼平苷酸(GPA)对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导胆汁淤积模型大鼠的酮洛芬(Ketoprofen,KP)及结合型代谢产物酮洛芬葡萄糖醛酸复合物(KPG)的肝代谢和胆汁排泄的影响及其可能机制。方法将80只SD大鼠随机分为5组,依次为灌胃100、50、25 mg·kg~(-1)·d~(-1)的GPA高、中、低剂量组,ANIT模型组以及空白对照组,给药10 d;在第8天给药后,除空白对照组外,所有大鼠一次性灌胃65 mg·kg~(-1)ANIT诱导肝内胆汁淤积模型;末次给药后,各组静脉注射KP 20 mg·kg~(-1),以HPLC-UV法测定大鼠血浆、胆汁中KP及其酮洛芬葡萄糖醛酸结合物(S-KPG和R-KPG)含量。检测各组大鼠血清中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TB)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测大鼠肝组织中组成型雄甾烷受体(CAR)、孕烷X受体(PXR)以及尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(Ugt1a1)mRNA的转录。蛋白质印迹法(WB)检测CAR、PXR、Ugt1a1的蛋白表达情况。结果与空白对照组比较,ANIT模型组大鼠KPG的累计胆汁排泄量显著降低(P 0.01);与ANIT模型组比较,100和50 mg·kg~(-1)·d-1GPA干预组大鼠KPG的累计胆汁排泄量显著提高(P 0.01)。与空白对照组比较,ANIT模型组大鼠血浆中KP曲线下面积AUC0-∞显著增加(P 0.01)、消除半衰期T1/2显著延长(P 0.01);与ANIT模型组比较,100,50 mg·kg~(-1)·d~(-1)GPA干预组大鼠血浆中KP的曲线下面积AUC0-∞显著降低(P 0.01)、消除半衰期T1/2显著缩短(P 0.01)。与ANIT模型组比较,100和50 mg·kg~(-1)·d~(-1)GPA干预组血清中TB、GPT、GOT和TB的含量明显下降(P 0.01),25 mg·kg~(-1)·d~(-1)GPA干预组降低不明显,无统计学意义。GPA能显著增加CAR、PXR、Ugt1a1 mRNA转录和蛋白表达量,与剂量呈正相关。结论 ANIT诱导的胆汁淤积大鼠KPG胆排泄降低,可引起KP的药动学参数的变化。GPA可改善胆汁淤积大鼠对酮洛芬肝代谢和胆汁排泄的影响,有可能是通过调节CAR和PXR对Ugt1a1基因转录和蛋白表达来实现的。     

基于FXR探讨茵栀黄注射液利胆退黄的机制研究

目的:通过研究茵栀黄注射液对肝内胆汁淤积湿热证大鼠FXR、BSEP、NTCP蛋白和基因表达的影响,探讨茵栀黄注射液的作用靶点及机制。方法:51只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(7只)、模型组(7只)、茵栀黄注射液组(7只)、GW4064组(7只)、Guggulsterone组(7只)、茵栀黄+GW4064组(8只)、茵栀黄+Guggulsterone组(8只)共7组。造模干预后观察各组大鼠肝组织FXR、BSEP、NTCP蛋白和基因的表达。结果:茵栀黄注射液可以上调FXR蛋白和基因的表达,P0.05。FXR和BSEP在蛋白和基因表达量上存在显著相关,P0.05。结论:茵栀黄注射液通过干预FXR上调BSEP利胆退黄治疗肝内胆汁淤积。     

茵陈对肝内胆汁淤积湿热证大鼠利胆退黄作用机制的研究

目的通过研究茵陈对肝内胆汁淤积湿热证大鼠肝组织中胆盐输出泵(BSEP)基因表达的影响,从分子水平探讨茵陈利胆退黄的作用机制。方法 45只雄性SD大鼠随机分为3组:正常组、模型对照组和茵陈组。检测治疗后大鼠血清生化指标、肝脏组织病理的变化和肝脏BSEP的表达。结果治疗后茵陈组大鼠体质量增加明显高于模型对照组(P<0.05)。茵陈组大鼠血清TB、DB、ALT、AST、ALP、TBA浓度低于模型对照组(P<0.05);HE染色显示茵陈组大鼠肝脏的病理损害轻于模型对照组。免疫组织化学染色显示茵陈组大鼠比模型对照组有更多的BSEP阳性细胞。荧光定量RT-PCR法显示模型对照组大鼠肝组织中BSEP mRNA表达明显低于茵陈组(P<0.05)。结论茵陈能有效改善肝内胆汁淤积湿热证大鼠的肝功能、减轻病理损害,并能上调肝脏BSEP的表达。     

清热卡森颗粒对肝内胆汁淤积大鼠模型的治疗作用及机制研究＊

目的 探究清热卡森颗粒对α-萘异硫氰酸酯（ANIT）诱导的肝内胆汁淤积性肝损伤模型大鼠的保护作用及机制。方法 将SPF级雄性SD大鼠36只随机分为正常对照组，模型对照组，清热卡森颗粒低、中、高剂量组（1 g·kg^-1，2 g·kg^-1，和4g·kg^-1）以及阳性对照组（熊去氧胆酸，UDCA，60 mg·kg^-1），每组6只。清热卡森颗粒各治疗组和阳性对照组分别预防性灌胃给药，连续5天，实验第3天采用ANIT（60 mg·kg^-1）灌胃构建急性肝内胆汁淤积模型，正常对照组给予等量橄榄油。实验第6天，大鼠腹主动脉取血，检测血浆中天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、胆汁酸（TBA）、还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）；收集胆汁，计算胆汁流量；取肝脏，称肝重，计算肝重比；观察肝脏组织病理学变化；Western blot法检测肝脏核受体法尼醇X受体（FXR）和胆汁酸合成酶、转运体以及氧化应激通路核因子E2相关因子2（Nrf2）及下游调控蛋白表达的变化。结果 清热卡森颗粒能改善胆汁淤积大鼠的肝重比、胆汁流量水平和病理损伤情况，恢复血浆中AST，ALT，ALP，TBA，MDA的含量水平（P<0.05）；上调FXR，BSEP，MRP2，NRF2，GCLM，HO-1蛋白表达（P<0.05），下调NTCP，CYP7A1，CYP8B1蛋白表达（P<0.05）。结论 清热卡森颗粒可以缓解ANIT诱导的肝内胆汁淤积性肝损伤，其作用机制可能与调控FXR信号通路介导的胆汁酸平衡以及NRF2信号通路介导的抗氧化应激作用有关。