青藤碱对兔膝骨关节炎模型组织形态学及关节液炎性细胞和聚集蛋白聚糖酶含量的影响

目的观察不同剂量青藤碱对兔膝骨关节炎(OA)模型关节软骨和滑膜组织形态学及关节液白细胞介素(IL)-6、IL-17及聚集蛋白聚糖酶(ADAMTS)-4、ADAMTS-5含量的影响。方法采用Hulth法建立OA模型。将50只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组和青藤碱低、中、高剂量组。空白组不予任何处理,模型组给予生理盐水、给药组给予盐酸青藤碱注射液膝关节腔注射,共干预10次,青藤碱给药量分别为0.2 mL(5 mg)、0.35 mL(8.75 mg)和0.5 mL(12.5 mg)。干预结束后取关节软骨行番红O染色,取滑膜组织行HE染色,进行组织学评分;ELISA检测关节液IL-6、IL-17、ADAMTS-4和ADAMTS-5含量。结果模型组软骨Mankin’s评分和滑膜组织病理学评分显著高于空白组(P0.01),青藤碱中、高剂量组软骨Mankin’s评分和滑膜评分显著低于模型组(P0.05,P0.01);模型组关节液IL-6、IL-17、ADAMTS-4和ADAMTS-5含量较空白组显著升高(P0.01),青藤碱中、高剂量组关节液IL-6、IL-17、ADAMTS-4和ADAMTS-5含量较模型组显著降低(P0.05,P0.01)。结论中、高剂量青藤碱对OA模型病变软骨具有保护作用。     

丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达的影响

目的:观察丹参注射液对体外培养兔膝关节软骨细胞MMP-9、TIMP-1表达情况的影响。方法:取12只6月龄新西兰大白兔关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、模型组、玻璃酸钠组、丹参组4组。采用Western blot法测定软骨细胞内MMP-9、TIMP-1蛋白表达,RT-PCR检测软骨细胞内MMP-9 mRNA、TIMP-1mRNA相对表达量。结果:Western Blot检测结果:相对正常组,OA模型组的软骨细胞组织中MMP-9、TIMP-1蛋白表达明显上调(P0.01);玻璃酸钠组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.05),丹参组MMP-9、TIMP-1蛋白表达低于空白模型组(P0.01);丹参组MMP-9蛋白表达低于玻璃酸钠组,TIMP-1蛋白表达高于玻璃酸钠组。荧光定量PCR检测结果:与空白组相比,OA模型组家兔关节软骨组织MMP-9 mRNA相对表达量显著升高(P0.01),MMP-9/TIMP-1失衡;治疗后,与OA模型组相比,玻璃酸钠组、丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与玻璃酸钠组相比丹参组MMP-9mRNA相对表达量显著降低(P0.01),TIMP-1mRNA相对表达量显著升高(P0.01)。结论:丹参注射液能够有效纠正MMP-9和TIMP-1在骨性关节炎软骨组织中异常表达,减轻软骨损伤,有效治疗骨性关节炎。     

基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响

目的基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响。方法以改良Hulth法制备兔KOA模型。将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周。HE染色、MASSON染色法及电镜分别观察家兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法测兔血清IL-1β、TNF-α水平;Western blot及RT-PCR检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ蛋白及mRNA表达;免疫组化法检测NF-κB p65入核表达。结果与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL-1β、TNF-α水平上升(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达上调(P0.05,P0.01),CollagenⅡ蛋白及mRNA表达下调(P0.01),NF-κB p65入核表达升高(P0.05)。与模型组比较,散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨细胞结构仅轻度损伤,血清IL-1β、TNF-α水平降低(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达下调(P0.05,P0.01),NF-κB p65入核表达降低(P0.05,P0.01);散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织中CollagenⅡ蛋白及mRNA表达均上调(P0.05,P0.01)。结论散寒化痰方可能通过抑制膝关节软骨细胞NF-κB p65入核表达,阻止NF-κB信号通路激活,下调MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5及上调CollagenⅡ表达,抑制兔血清IL-1β、TNF-α水平升高,进而保护膝骨关节软组织,延缓KOA发生与发展。     

髋关节正常软骨与骨性关节炎软骨相关因子表达的对照研究

目的:对人髋关节正常关节软骨和骨关节炎关节软骨进行对比研究,对骨性关节炎生物学特性及炎症因子变化进行比较和评价。方法:选取股骨颈骨折排除关节炎的病例及骨性关节炎病例各22例,分为2组,正常关节软骨组及骨性关节炎软骨组。1)大体及组织染色的方法(甲苯胺蓝和Masson染色)观察骨性关节炎组及正常软骨组的组织形态、糖胺多糖及胶原蛋白含量。2)Western blot检测两组关节软骨中CollagenⅡ,Aggrecan,MMP-13,Caspase3和Cleaved caspase3蛋白表达量。3)ELISA法检测两组关节液中TNF-α的表达水平。结果:1)两组组织染色分别显示蛋白多糖和胶原纤维含量:骨性关节炎组比正常关节软骨组均明显减少。2)Western blot检测显示MMP-13,Caspase3和Cleaved caspase3各蛋白含量在骨性关节炎组中明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。3)Western blot检测显示Ⅱ型胶原和蛋白多糖蛋白表达量在骨性关节炎组中明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。4)ELISA法检测提示骨性关节炎组关节液中TNF-α的表达水平较正常组明显上升,差异有统计学意义(P0.05)。结论:骨性关节炎的病理过程是多种炎症因子调节下引起关节软骨细胞的凋亡,进而引起的软骨基质成分合成-分解代谢的平衡破坏的过程。     

姜黄素对骨关节炎软骨细胞增殖及分泌MMP-13,IL-6的影响

目的研究姜黄素对骨关节炎(OA)患者软骨细胞增殖、细胞因子MMP-13和IL-6分泌的影响。方法收集4例OA患者关节软骨作为实验组,3例股骨头骨折的关节软骨为对照组,分离软骨细胞进行体外培养。使用浓度为0,10,40,80,120μmol/L的姜黄素溶液共培养软骨细胞48 h,MTT检测姜黄素对软骨细胞增殖的作用,ELISA检测共培养细胞上清液中MMP-13和IL-6含量。结果姜黄素在40μmol/L浓度以上对OA软骨细胞增殖具有明显抑制作用(P<0.05),120μmol/L浓度对正常软骨细胞有明显抑制作用(P<0.05);80μmol/L以上浓度对OA软骨细胞和正常软骨细胞分泌MMP-13具有抑制作用(P<0.05);80μmol/L以上浓度对OA软骨细胞分泌IL-6具有抑制作用(P<0.05),120μmol/L浓度时对正常软骨细胞分泌IL-6具有抑制作用(P<0.05)。结论姜黄素能够抑制软骨细胞的细胞增殖,抑制软骨细胞释放MMP-13和IL-6,减轻炎症反应,保护软骨细胞,延缓软骨退变。     

健骨胶囊对免骨性关节炎软骨及滑膜影响的实验研究

目的:探讨健骨胶囊对实验性骨性关节炎(OA)家兔软骨及滑膜病变的影响.方法:通过兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶建立OA模型,8周后光镜及扫描电镜下观察软骨、滑膜组织学改变,Mankin法评分;采用免疫组化方法检测金属蛋白酶-1、3(MMP-1、3)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的分布和阳性程度.结果:与模型组比较,健骨胶囊组病理学改变明显减轻(P＜0.01),加MMP-1、加MMp-3、IL-1β表达显著减少(P＜0.01),TIMP-1表达增加(P＜0.05);健骨胶囊较维固力能明显降低IL-1β的表达(P＜0.05).结论:健骨胶囊能够减轻OA软骨退行性变和滑膜炎症,机理可能与下调IL-1β、调节MMP-1、MMP-3、TIMP-1表达有关.     

化淤祛湿法对膝骨关节炎早期诱导型一氧化氮合酶炎症途径影响的实验研究

目的 观察化淤祛湿法对膝骨性关节炎早期诱导型一氧化氮合酶(iNOS)炎症途径的影响,探讨其治疗作用机理.方法 通过切断膝关节前交叉韧带和内侧副韧带造成膝OA模型.将24只日本雄性大耳白兔随机分为A组(正常组)、B组(模型组)、C组(补肾法)、D组(化淤祛湿法).给药4周后处死实验兔,行关节腔大体观察,关节液NO含量检测,滑膜、关节软骨组织学观察,滑膜、关节软骨iNOS含量检测.结果 D组关节腔大体观察与C组比较,差异无显著性(P>0.05);D组关节液NO含量检测与C组比较,差异显著(P<0.05);D组滑膜、关节软骨组织学观察评分与C组比较,差异显著(P<0.05);D组滑膜组织及软骨中iNOS含量与C组比较有显著性差异(P<0.05).结论 化淤祛湿法通过抑制膝OA早期NO及iNOS的表达,可降低NO及iNOS含量,减少软骨细胞凋亡,促进软骨基质合成及抑制其分解,抑制滑膜炎症,延缓关节软骨退变,促进了关节软骨的修复.     

青藤碱关节腔注射对膝骨关节炎兔软骨和滑膜组织形态学及基质金属蛋白酶-13和软骨寡聚基质蛋白的影响

目的观察青藤碱关节腔注射对膝骨关节炎模型兔关节软骨和滑膜组织形态学及血清和关节液中基质金属蛋白酶(MMP)-13和软骨寡聚基质蛋白(COMP)含量的影响,探讨青藤碱治疗膝骨关节炎的部分作用机制。方法 38只新西兰大白兔随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组和青藤碱组。空白组不予任何处理,模型组、透明质酸钠组和青藤碱组通过木瓜蛋白酶关节腔注射法诱导膝骨关节炎模型后,分别用生理盐水、透明质酸钠和青藤碱干预。5周后取关节软骨及滑膜HE染色并进行组织学评分,ELISA检测血清及关节液中MMP-13和COMP的含量。结果模型组软骨Mankin's评分和滑膜组织病理学评分显著高于空白组,青藤碱组软骨Mankin's评分和滑膜组织病理学评分显著低于模型组(P0.01);模型组血清及关节液中MMP-13和COMP含量较空白组显著升高(P0.01);青藤碱组血清、关节液中MMP-13含量较模型组显著降低,关节液中COMP含量较模型组降低(P0.05,P0.01)。结论青藤碱具有改善滑膜炎症、延缓关节软骨退变进程的作用。     

威灵仙注射液关节腔离子导入对骨关节炎软骨和滑膜组织形态以及软骨MMP-1的影响

目的：研究威灵仙注射液关节腔离子导入对OA的软骨和滑膜组织形态和软骨MMP-1细胞凋亡的影响。方法：新西兰兔40只,除保留10只作为正常组外,余均采用木瓜蛋白酶关节腔注射复制OA模型。造模4周后,根据模型动物关节肿胀度随机分为模型组、Wlx组、Qand组。实验结束时,取模型动物关节软骨和滑膜进行病理形态学检查,同时观察软骨细胞凋亡情况。结果：威灵仙关节腔离子导入能明显降低模型动物关节软骨和滑膜的病理总积分,同时亦能明显降低软骨 MMP-1细胞的阳性表达率。结论：威灵仙关节腔离子导入可能具有抑制骨关节炎的软骨退行性改变的作用,能够延缓OA的炎症进程。     

复方健骨关节汤治疗骨关节炎的实验研究

目的:观察复方健骨关节汤对骨关节炎(OA)的治疗效果并探讨其作用机制。方法:将24只中国白兔随机分为正常对照组(A组)、空白对照组(B组)、中药治疗组(C组),每组各8只,A组不造模,B、C组均采用Hulth法建立兔OA模型;4w后,取胫骨平台关节软骨和滑膜进行光镜观察,采用免疫组化和末端原位标记细胞凋亡检测法分别检测关节软骨和滑膜中的白细胞介素-1β(IL-β),基质金属蛋白酶-1、3(MMP-1、3),软骨细胞凋亡指数(AI)的水平。结果:B组IL-1β,AI,MMP-1、3的水平均非常显著高于A组(P<0.01);B组IL-1β,MMP-3水平显著高于C组(0.01相似文献   

萆薢总皂苷对骨关节炎体外软骨细胞增殖及炎性因子的影响

目的:观察萆薢总皂苷(TRI)含药关节液对豚鼠骨关节炎(OA)体外软骨细胞增殖及炎性因子的影响。方法:将30只豚鼠进行OA造模,OA造模成功后体外提取关节软骨细胞进行培养、鉴定。将P3代软骨细胞分为TRI组、阳性药物牛膝总皂苷组(TSA)和空白对照组,分别用TRI+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)和10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液进行培养,对培养后的软骨细胞进行细胞形态学观察,用CCK-8法检测细胞增殖情况,免疫荧光检测Ⅱ型胶原蛋白表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞白细胞介素1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和基质金属蛋白酶13(MMP-13)。结果:OA软骨细胞体外分离成功,经甲苯胺蓝染色和细胞电镜观察鉴定细胞为来源于软骨细胞;CCK-8法观察3组细胞生长曲线,TRI组在第2～6天细胞增殖速度明显高于其他2组,差异有统计学意义(P0.05);连续培养7 d后,与空白对照组和TSA组比较,TRI组Ⅱ型胶原蛋白表达显著,差异有统计学意义(P0.05);ELISA检测显示,与空白对照组和TSA组比较,TRI组细胞炎性因子IL-1,TNF-α和MMP-13炎性因子显著减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:TRI含药关节液能有效提高细胞活力,促进软骨细胞增殖,提高Ⅱ型胶原蛋白表达,且降低软骨细胞炎性因子的表达,对证实TRI是萆薢作用于软骨细胞的主要物质基础具有重要意义。     

乌头注射液对KOA模型兔软骨细胞ADAMTS-4 ADAMTS-5表达影响的实验研究

目的:观察乌头注射液对膝骨性关节炎模型兔膝关节软骨细胞中ADAMTS-4、ADAMTS-5表达的影响。方法:采用随机分组的方式,将40只新西兰大耳白兔分为正常、模型(生理盐水)、阳性对照(玻璃酸钠)、乌头注射液组4组,除正常组外其他3组兔膝关节进行关节炎造模。造模完成后,分别于兔膝关节腔内按照0. 1 m L/kg的剂量标准注射生理盐水、玻璃酸钠、乌头注射液。饲养1周后处死取材,采用免疫组化法观察软骨细胞中ADAMTS-4、ADAMTS-5表达变化情况。结果:模型组兔膝关节软骨细胞中ADAMTS-4、ADAMTS-5表达较正常组有显著升高;乌头注射液组软骨细胞中ADAMTS-4、ADAMTS-5的表达较模型组组显著降低(P 0. 05),与阳性组比较差异明显(P 0. 05)。结论:乌头注射液能够抑制膝骨性关节炎兔膝关节软骨细胞中ADAMTS-4、ADAMTS-5的表达,保护膝关节软骨。     

牛膝总皂苷对实验兔膝骨关节炎滑膜组织的影响

目的:观察牛膝总皂苷(TSA)对兔膝骨关节炎(OA)模型滑膜组织的影响。方法:将40只实验兔分为正常组8只、OA模型组32只,OA造模成功后将OA模型组分为OA模型阳性对照组、OA模型空白组、OA模型TSA低剂量组、OA模型TSA中剂量组、OA模型TSA高剂量组,各6只,分别予硫酸氨基葡萄糖、蒸馏水、TSA低剂量、TSA中剂量、TSA高剂量灌胃2个月后进行关节粘连改善度测定、滑膜组织病理HE染色、滑膜炎KRENN评分、β-catenin蛋白免疫组化检测,及关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3含量检测。结果:实验兔OA模型造模成功后灌胃2个月,与OA模型空白组关节粘改善度比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA低、中、高剂量组差异有统计学意义(P0.05),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高剂量组比较差异有统计学意义(P0.01);滑膜HE染色和滑膜炎评分比较,OA模型空白组见大量滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列紊乱,滑膜组织周边可见较多毛细血管增生,呈重度滑膜炎表现,OA模型阳性对照组见中度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列不规则,滑膜组织周边可见少量毛细血管增生,呈中度滑膜炎表现,OA模型TSA高剂量组见轻度滑膜组织炎细胞浸润、纤维组织增生以及滑膜细胞增生、排列尚规则,滑膜组织周边可见微量毛细血管增生,呈轻度滑膜炎表现;β-catenin蛋白免疫组化比较,OA模型阳性对照组和OA模型TSA高剂量组与OA模型空白组比较,差异有统计学意义(P0.01),OA模型阳性对照组与OA模型TSA高剂量组比较差异有统计学意义(P0.05);各组与正常组比较TNF-1,IL-1β,MMP-3指标差异有统计学意义(P0.05),OA模型TSA高剂量组与OA模型阳性对照组比较差异无统计学意义(P0.05),两者与OA模型空白组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论:牛膝总皂苷能有效抑制OA滑膜炎症,改善关节粘连度,降低滑膜组织β-catenin蛋白表达以及减少关节液TNF-1,IL-1β,MMP-3因子含量,其作用机理有待进一步探索。     

桉油β-环糊精包合物对膝骨性关节炎NO及iNOs影响的实验研究

目的:通过观察桉油β-环糊精包合物对膝骨性关节炎血清及关节液NO及关节软骨iNOs影响的实验研究,探讨其治疗作用机理及膝骨性关节炎的发病机制。方法:按照Hulth造模方法将30只新西兰大白兔造成膝骨性关节炎模型,并随机分为正常组、模型组、壮骨关节丸对照组、桉油β-环糊精包合物治疗组,给药8周后测定血清、关节液一氧化氮(NO)含量,动物处死后对软骨及滑膜组织的匀浆进行一氧化氮合酶(iNOS)的测定。结果:显示桉油β-环糊精包合物治疗组关节液NO含量降低的程度与壮骨关节丸对照组比较,差异显著(P<0.05),软骨及滑膜组织中iNOS的含量同对照组比较有显著性差异(P<0.05)。结论:表明桉油β-环糊精包合物通过抑制iNOS的表达,降低NO含量,减少软骨细胞凋亡,促进软骨基质合成及抑制其分解,抑制滑膜炎症,延缓关节软骨退变,促进了关节软骨的修复。     

β-蜕皮甾酮抑制IL-1β诱导的关节软骨细胞退变的实验研究

目的:探讨β-蜕皮甾酮(β-Ecd)抑制IL-1β诱导关节软骨细胞退变的作用及机制。方法:进行关节软骨细胞的分离、培养和制备空白血清、β-Ecd含药血清。取对数生长期第三代软骨细胞按1×10~5接种于两块96孔酶标板中,分为4组,A组:正常软骨细胞+20%空白血清;B组:正常软骨细胞+20%β-Ecd含药血清;C组:IL-1β诱导软骨细胞+20%空白血清;D组:IL-1β诱导软骨细胞+20%β-Ecd含药血清。4组同一时间培养,并相同时间对C组和D组的正常软骨细胞加入10μg/L的IL-1β进行诱导退变,诱导时间为48 h。RT-PCR计数检测各组关节软骨细胞中胶原(I、II、X型)和软骨细胞外基质中金属蛋白酶(MMP-13、MMP-9)的表达。结果:关节软骨细胞中胶原表达结果显示:与A组比较,C组I型胶原mRNA表达升高(P0.05),B组差异无显著性(P0.05);与C组比较,D组差异无显著性(P0.05)。与A组比较,B组和C组Ⅱ型胶原mRNA表达明显降低(P0.05,P0.01);与C组比较,D组Ⅱ型胶原mRNA表达均明显升高(P0.01)。与A组比较, C组X型胶原mRNA表达明显升高(P0.05),B组差异无显著性(P0.05);与C组比较,D组差异无显著性(P0.05)。关节软骨细胞外基质中金属蛋白酶表达结果显示:与A组比较,C组MMP-9、MMP-13 mRNA表达均明显升高(P0.01),B组差异无显著性(P0.05);而与C组比较,D组MMP-9、MMP-13 mRNA表达均明显降低(P0.01)。结论:β-Ecd可能通过影响膝关节软骨细胞胶原和金属蛋白酶的表达而延缓关节软骨细胞的退变。     

杜仲干预大鼠膝骨性关节炎关节软骨破坏的机理研究

目的:探讨杜仲对膝骨性关节炎(OA)软骨和滑液中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的影响。方法:42只SD大鼠采用前交叉韧带切除的方法建立大鼠膝骨性关节炎模型,随机分为实验组和对照组。建模2wk后,实验组灌胃杜仲煎液,对照组灌胃等量生理盐水。连续用药4wk后,组织病理学检测膝关节软骨的形态,酶联免疫吸附试验检测关节冲洗液中MMP-1和TIMP-1的水平。结果:相比对照组,实验组大鼠膝关节冲洗液中MMP-1水平显著降低(P0.05),TIMP-1浓度显著升高(P0.05),实验组大鼠膝关节软骨退变程度减轻,软骨大体评分及改良Mankin评分均降低(P0.05)。结论:杜仲可调节MMPs和TIMPs的表达,对关节软骨有保护作用。     

温针灸对膝骨关节炎大鼠软骨组织ADAMTS-4及MMPs-3的影响

目的 观察温针灸对膝骨关节炎大鼠软骨组织ADAMTS-4、MMPs-3的影响.方法 将40只大鼠采用数字随机分组法,分为正常组(10只),造模组(30只).采用膝关节腔内注射木瓜蛋白酶造模,连续注射2周木瓜蛋白酶.对模型进行鉴定,将膝骨关节炎(KOA)造模成功的大鼠,分为造模组、温针灸组、针刺组.温针灸组给予针刺"后三里"和"膝前穴",并在针柄处放置艾柱,治疗10 d;针刺组仅给予针刺处理,方法同温针灸组,其他组不做处理.用ELISA法检测关节液中IL-6、TNF-α含量;Western blot检测滑膜组织中ADAMTS-4、MMPs-3蛋白表达;RT-PCR检测滑膜组织中ADAMTS-4,MMPs-3的mRNA.结果 造模组IL-6、TNF-α、ADAMTS-4、MMPs-3蛋白及mRNA相对含量均高于正常组(P<0.05);温针灸组各项指标均低于造模组(P<0.05).结论 温针灸能改善膝骨关节炎动物模型的病变程度,可能与抑制ADAMTS-4、MMPs-3表达有关.     

miR-141及MMP-16对骨性关节炎疼痛及软骨损伤的影响

目的观察miR-141及基质金属蛋白酶-16(MMP-16)对骨性关节炎(OA)疼痛及软骨损伤的影响,并探讨其部分调控机制。方法将30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组10只和实验组20只,实验组大鼠利用十字韧带损伤法制作OA模型,分别于术前及手术2周和8周后采用冷痛阈法测定2组大鼠冷痛阈值,HE染色法观察2组大鼠软骨组织结构变化,实时定量PCR法检测大鼠背根神经节组织中miR-141表达情况,免疫组织化学法观察软骨组织中MMP-16蛋白表达情况。结果手术2,8周后,对照组大鼠对冷丙酮刺激的阳性反应次数未见明显变化(P均0.05);实验组大鼠对丙酮刺激的阳性反应次数明显高于对照组(P0.05),并且随着时间的延长,阳性反应次明显增加(P0.05);HE染色显示,手术2周后实验组大鼠软骨细胞结构轻度紊乱伴少量炎性细胞浸润,同时细胞间质出现轻度纤维化;手术8周后,细胞形态基本消失,基质淡染,呈现广泛纤维化。手术2,8周后,实验组大鼠背根神经节组织中miR-141相对表达量和骨组织中MMP-16蛋白表达量均明显高于对照组(P均0.05),且手术8周后明显高于手术2周后(P0.05)。结论脊髓背角细胞中的miR-141在OA发展中调节疼痛的发生,而MMP-16促进OA的发展。     

补肾壮筋汤调节miR-140抑制脂多糖介导软骨细胞IL-1β、TNF-α表达的研究

目的探讨补肾壮筋汤抑制脂多糖(LPS)介导软骨细胞表达基质紊乱的作用机制。方法体外培养大鼠软骨细胞,采用甲苯胺蓝染色法、Ⅱ型胶原酶免疫组化法鉴定。采用10 ng/m L LPS建立软骨细胞炎症模型,将软骨细胞分为正常组、模型组、抑制剂组、氨基葡萄糖组和补肾壮筋汤组,分别进行相应干预后,酶联免疫法(ELISA)检测各组细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,Western blot法及qRT-PCR法检测各组基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13、解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)4、ADAMTS5及RAF蛋白、mRNA的表达,并用qRT-PCR法检测miR-140基因的表达。结果①甲苯胺蓝染色胞浆内可见蓝紫色异染颗粒,Ⅱ型胶原酶免疫组化可见胞浆呈棕黄色阳性染色,鉴定为软骨细胞。②与正常组比较,模型组IL-1β、TNF-α明显升高(P0.05),MMP-3、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5、RAF蛋白及m RNA的表达明显升高(P0.01,P0.05),miR-140表达下降(P0.01);与模型组比较,抑制剂组、氨基葡萄糖组和补肾壮筋汤组IL-1β、TNF-α明显降低(P0.05),MMP-3、MMP-13、ADAMTS4、ADAMTS5、RAF蛋白及m RNA的表达明显降低(P0.01,P0.05),miR-140表达升高(P0.01)。结论补肾壮筋汤通过抑制炎症相关的关键调控因子表达,从而抑制LPS介导软骨细胞表达基质紊乱,保护软骨细胞的功能。     

自拟益气化瘀补肾方对膝骨关节炎小鼠β-catenin信号通路的影响

目的研究自拟益气化瘀补肾方对β-catenin信号通路的影响及其治疗膝骨关节炎的作用机制。方法通过改良Hulth法切开小鼠右膝部内侧皮肤,切断内侧副韧带,切除内侧半月板,并切断前交叉韧带,造成小鼠膝骨关节炎模型,分为模型组和自拟益气化瘀补肾方组。假手术组单纯切开小鼠右膝部内侧皮肤。造模2个月后给予自拟益气化瘀补肾方灌胃,治疗2个月。采用Micro-CT扫描小鼠膝关节,ABH/OG染色观察小鼠膝关节软骨细胞变化,免疫组化染色观察小鼠膝关节β-catenin、MMP-13、Col X表达,RT-PCR检测Col X、MMP-9、MMP-13和OC基因表达。结果 (1)Micro-CT检测发现,与假手术组比较,模型组膝关节周围骨赘形成增加,自拟益气化瘀补肾方组膝关节周围骨赘形成少于模型组。(2)ABH/OG染色发现,假手术组关节软骨表面光滑,表浅层、移行层、放射层和钙化层4层结构清晰可辨,软骨细胞呈柱状排列,无软骨细胞巢聚;模型组关节软骨组织表浅层细胞数量减少,移行层和放射层见到大量软骨细胞巢聚,潮线前移,出现双潮线;自拟益气化瘀补肾方组关节软骨组织形态较模型组明显改善。(3)β-catenin免疫组化染色结果显示,与假手术组比较,模型组关节软骨细胞β-catenin蛋白表达显著增加,自拟益气化瘀补肾方组关节软骨细胞β-catenin表达比模型组显著减少(P0.05);免疫组化染色结果还发现,与假手术组比较,模型组关节软骨组织Col X、MMP-13蛋白表达显著增加(P0.05)。与模型组比较,自拟益气化瘀补肾方组关节软骨组织Col X、MMP-13蛋白表达显著减少(P0.05)。(4)RT-PCR反应检测结果显示,与假手术组比较,模型组关节软骨组织Col X、MMP-9、MMP-13和OC基因表达显著增加(P0.05)。与模型组比较,自拟益气化瘀补肾方组关节软骨组织中Col X、MMP-9、MMP-13和OC基因表达显著减少(P0.05)。结论自拟益气化瘀补肾方可以治疗膝骨关节炎,其作用机制可能是通过降低β-catenin的表达而实现。