Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的：探讨 Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法培养 H9C2心肌细胞并建立心肌细胞缺氧(21 h)/复氧(6 h)模型。细胞随机分成4组：对照组,缺氧/复氧组(H/ R 组),缺氧/复氧+ Ghrelin 组(H/ R +G 组),缺氧/复氧+ Ghrelin +生长激素促分泌素受体(GH-SR)-siRNA 组(H/ R + G + G-siRNA 组);采用 siRNA 干扰技术阻断 Ghrelin 受体 GHSR 的表达以及 Hoechst 33258染色剂和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot 法检测各组凋亡相关蛋白表达情况。结果 GHSR 存在于正常H9C2心肌细胞中,GHSR-siRNA 可以显著抑制 H9C2心肌细胞中 GHSR 的表达。与 H/ R 组相比,在 H/ R + G 组中缺氧/复氧损伤所导致心肌细胞的凋亡率明显下降(P <0．05),B淋巴细胞瘤-2蛋白/ Bcl-2相关 X 蛋白(Bcl-2/ Bax)比率明显上调(P <0．05),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达水平被显著抑制(P <0．05)。而与 H/ R + G组相比,H/ R + G + G-siRNA 组心肌细胞凋亡率增加( P <0．05),Bcl-2/ Bax 比率显著下降(P <0．05),caspase-3表达上调(P <0．05)。结论 Ghrelin 具有减轻缺氧/复氧所引起的心肌细胞损伤、抑制心肌细胞凋亡的作用。     

miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制

目的 探讨miR-138通过靶向LCN2在七氟醚诱导的大鼠认知障碍中的作用及机制。 方法 将90只7周龄SD大鼠随机分为对照组(n=20)、七氟醚组(n=20)、七氟醚+NC mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组(n=20)、七氟醚+miR-138 mimic组+vector组(n=5)、七氟醚+miR-138 mimic+pcDNA-LCN2组(n=5)。构建七氟醚诱导的大鼠认知障碍模型,七氟醚诱导的大鼠分别注射10 μL miR-138 mimic、NC mimic慢病毒悬液。采用Morris水迷宫实验分析潜伏期、跨台时间和游泳速度;HE染色检测海马神经元的病理变化;TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况;实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR)检测miR-138、脂质运载蛋白2（LCN2）的mRNA水平表达;双荧光素酶报告基因系统用于检测miR-138和LCN2之间的关系;Western blotting 检测海马组织中LCN2、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白水平;ELISA实验检测海马组织中IL-6、TNF-α、IL-1β。 结果 与对照组比较,七氟醚组中miR-138表达水平显著降低（P<0.05）;大鼠逃避潜伏期显著增加,穿越平台次数显著减少,海马神经元损伤,海马神经元凋亡数量显著增加,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2显著降低,IL-1β、TNF-α、IL-6水平升高,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平降低（均P<0.05）。与七氟醚+NC mimic组比较,七氟醚+miR-138 mimic组中大鼠逃避潜伏期减少,穿越平台次数增加,神经元病理损伤减轻,海马神经元凋亡数量显著减少,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白水平降低,Bcl-2水平升高,IL-1β、TNF-α、IL-6水平降低,p-JAK2和p-STAT3蛋白水平升高（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因结果显示LCN2 是miR-138的靶基因,过表达LCN2可显著逆转miR-138对七氟醚诱导的认知障碍大鼠凋亡的作用（P<0.05）。 结论 miR-138靶向LCN2通过JAK2/STAT3通路对七氟醚诱导的认知障碍具有神经保护作用。     

miR-22对脂多糖诱导的心肌损伤的研究

目的 探讨miR-22对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及可能机制。方法 采用LPS刺激H9c2大鼠心肌细胞诱导心肌细胞损伤模型。采用miR-22模拟物转染心肌细胞,将细胞随机分为4组,即对照组、LPS组、miR-22+LPS组和miR-NC+LPS组。RT-PCR法检测细胞中miR-22表达;MTT法检测细胞活性;TUNEL染色检测细胞凋亡;免疫印迹法检测相关蛋白的表达;通过双荧光素酶报告基因实验证实miR-22对靶基因的调控作用。结果 miR-22的表达在LPS组显著低于对照组;MTT试验结果显示LPS组细胞活性明显低于对照组,miR-22+LPS组细胞活性高于LPS组;TUNEL染色显示LPS组细胞凋亡数量明显高于对照组,miR-22+LPS组细胞凋亡数量低于LPS组。与对照组比较,LPS组Bcl-2/Bax比值显著下降;与LPS组比较,miR-22+LPS组Bcl-2/Bax比值明显升高。RT-PCR和Western blot法检测结果表明,上调miR-22表达后,HMGB1蛋白表达和mRNA水平明显降低。双荧光素酶报告实验显示miR-22靶向调控HMGB1的mRNA的3′非编码区(3′UTR)。结论 miR-22可能通过负向调控HMGB1的表达减轻LPS诱导的心肌细胞损伤。     

MicroRNA-21在缺血再灌注损伤早期大鼠心肌的表达及抗细胞凋亡作用

目的：观察microRNA-21(miR-21)在缺血再灌注损伤(I/R)早期大鼠心肌的表达及对细胞凋亡的影响。方法：SD大鼠随机分为对照组(冠状动脉注射转染空白对照病毒rAAV9-ZsGreen),miR-21组(冠状动脉注射转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21),Sham组(仅开胸挂线),I/R组(进行I/R处理),I/R+miR-21(转染rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21后再进行I/R处理)。用Realtime-PCR检测大鼠miR-21水平,免疫组织化学及Western印迹方法检测Bcl-2, Bax,caspase-3水平并计算Bcl-2/Bax比值。结果：冠状动脉注射rAAV9-ZsGreen-pre-miR-21可使miR-21表达增加4.43倍(P<0.001);与Sham组比较,I/R组大鼠缺血区miR-21水平下调(P<0.05),而非缺血区miR-21升高(P<0.05);与Sham组比较,I/R组再灌注1,2,6 h miR-21水平进行性下降(P<0.05),在同一时间点I/R+miR-21组较I/R组miR-21表达升高(P<0.05);与Sham组比较,再灌注6 h时I/R及I/R+miR-21组Bcl-2增高、caspase-3增高、Bcl-2/Bax降低(P<0.05),与I/R组比较,I/R+miR-21组Bcl-2下调、caspase-3下调、Bcl-2/Bax增高(P<0.05)。结论：I/R早期大鼠心肌缺血区miR-21表达下降,细胞凋亡增加,过表达miR-21可改善细胞凋亡。     

miR-425-5p通过靶向HSPB8表达介导心肌缺血再灌注损伤

目的：探讨miR-425-5p及其下游靶点HSPB8对心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的影响及相关机制。方法：将AC16细胞随机分为control组,H/R组,H/R+miR-NC组,H/R+miR-425-5p inhibitor组,H/R+miR-425-5p mimic组,H/R+OE-NC组,H/R+OEHSPB8组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法测定AC16的增殖能力;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素（IL）-6水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法（western blotting）分别检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的mRNA和蛋白表达情况,荧光素酶报告基因检测验证miR-425-5p及HSPB8间的靶向关系。结果：miR-425-5p在MIRI患者中表达显著高于正常人群;HSPB8在MIRI患者中表达低于正常人群;与control组相比,H/R组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-425-5p mimic组、H/R+OE-NC组细...     

VitaePro抑制线粒体通路对心肌细胞缺氧损伤的保护作用

目的：探讨VitaePro对心肌细胞缺氧损伤的保护作用及其机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为四组：正常对照组(H9c2)、缺氧损伤模型组(Hypoxia+H9c2)、红花油组(Safflower oil+hypoxia+H9c2)和VitaePro组(VitaePro+hypoxia+H9c2)。MTT和流式细胞术分别检测心肌细胞增殖和凋亡情况;Western blot检测线粒体凋亡通路相关蛋白的表达,包括B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白X (BAX)、凋亡蛋白-3(Caspase-3)和裂解后的Caspase-3(Cleaved caspase-3);试剂盒检测各组心肌细胞硫代巴比妥酸反应物(TBARS)水平、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。最后,Western blot检测心血管损伤标志蛋白的表达,包括心肌肌钙蛋白T (cTnT)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶同工酶MB (CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)。结果缺氧损伤模型组与对照组比较,细胞增殖显著下降,凋亡率显著增高(4.2%~14.6%,P<0.05),Bcl-2蛋白的表达明显降低,Bax和Cleaved caspase-3的表达显著升高(P<0.05),TBARS水平和MDA含量升高(P<0.05),SOD活性从44.9 U/mg降低到13.2 U/mg,心血管损伤标志蛋白cTnT、Mb、CK-MB和LDH的表达显著升高(P<0.05)。VitaePro组与缺氧组相比,细胞的增殖升高(P<0.05),凋亡率降低到6.4%,Bcl-2的表达升高,Bax和Cleaved caspase-3的表达明显降低(P<0.05),TBARS水平和MDA含量明显降低(P<0.05),SOD活性增大到41.0 U/mg,cTnT、Mb、CK-MB和LDH的表达显著降低(P<0.05)。结论 VitaePro可以通过抑制线粒体凋亡通路和通过抗氧化作用减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。     

心痛舒含药血清对乳鼠缺氧/复氧心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因表达的影响

目的 研究心痛舒含药血清对乳鼠缺氧/复氧(H/R)心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax基因表达的影响,探讨其对心肌细胞H/R保护的作用机制.方法 建立H/R心肌细胞模型,乳鼠心肌细胞分为4组:正常血清对照组、缺氧/复氧(H/R)组、AG490组、心痛舒含药血清组.采用罗丹明B染色法观察心肌细胞形态、A0/EB双荧光染色法观察心肌细胞凋亡,RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达.结果 与正常血清对照组比较,H/R组Bcl-2的mRNA表达减少,而Bax mRNA表达增多,差异有统计学意义(P＜0.01);与H/R组比较,AG 490组和心痛舒含药血清组Bcl-2的mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,差异有统计学意义(P＜0.01);与AG 490组比较,心痛舒含药血清组Bcl-2的mRNA表达增加,Bax mRNA表达减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 心痛舒能保护乳鼠心肌细胞,其作用机制与下调促凋亡基因Bax,上调抑制凋亡基因Bcl-2,升高Bcl-2/Bax比值有关.     

下调miR-320a表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨下调miR-320a表达对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型的影响,并阐明其相关作用机制。方法：采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测急性心肌梗死(AMI)患者血清中和H/R诱导的心肌H9C2细胞中miR-320a表达水平。将miR-320a inhibitor、inhibitor NC、小干扰Janus激酶(si-JAK2)和si-NC质粒分别转染至H9C2细胞中,同时设空白对照组,确定转染成功后进行H/R处理。H9C2细胞分为对照组、H/R组、H/R+inhibitor NC组、H/R+miR-320a inhibitor组、H/R+miR-320a inhibitor+si-NC组和H/R+miR-320a inhibitor+si-JAK2组。双荧光素酶报告基因检测miR-320a与Janus激酶2 (JAK2)的靶向关系,CCK-8法检测各组细胞增殖率,生化法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平和细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-qPCR法检测各组细胞中miR-320a和JAK2 m...     

TRPV1对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的影响及机制

目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道V亚族成员1(TRPV1)对H9c2心肌细胞缺氧复氧后凋亡的保护作用及可能机制。 方法 将H9c2心肌细胞随机分为对照组、模型组(缺氧/复氧组)、辣椒素(TRPV1激活剂)组(缺氧/复氧+辣椒素组)、辣椒素+LY组[缺氧/复氧+辣椒素+LY294002(PI3k抑制剂)组]。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率，采用流式细胞仪测定各组心肌细胞凋亡率，采用Western blot法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定各组细胞caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)水平。 结果 与对照组比较，模型组、辣椒素组、辣椒素+LY组心肌细胞存活率和Bcl-2水平降低(均P<0.05)，细胞凋亡率和caspase-3、Bax、p-Akt水平升高(均P<0.05)；与模型组比较，辣椒素组心肌细胞存活率和Bcl-2、p-Akt水平升高(均P<0.05)，细胞凋亡率和caspase-3、Bax水平降低(均P<0.05)；模型组与辣椒素+LY组各指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。 结论 TRPV1可抑制缺氧复氧后H9c2心肌细胞凋亡，其机制可能与TRPV1激活磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)/Akt信号通路有关。      

miR-133b靶向YES1抑制心肌缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡和活性氧簇的积累

目的 探究miR-133b对心肌缺血再灌注（I/R）诱导心肌细胞凋亡的作用及机制。方法 体内实验,将大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、转染腺病毒对照组、转染miR-133b腺病毒组,每组9只。在左心室心肌的6个随机点注射转染复合物后,利用左侧冠状动脉前降支打活结方法诱导心肌I/R。通过RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,FDP-1 HRV和BRS分析系统测定心功能,酶联免疫吸附法测定血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白（I CTnI）水平,HE染色观察心肌损伤,流式细胞术检测细胞凋亡,2,7-二氯荧光素双乙酸酯（DCFH-DA）探针测定ROS含量。体外实验,心肌H9C2细胞经缺氧/复氧（H/R）处理后,转染miR-NC或miR-133b mimic,RT-qPCR检测miR-133b的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量;双荧光素酶报告实验验证靶向关系;转染pc-YES1或miR-133b mimic后,Western blot检测YES1的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡,DCFH-DA探针测定ROS含量。结果 与I/R组相比,AdmiR-133b组大鼠心肌中miR-133b的表达显著上调,LVEDP、cTnI和CK-MB水平显著降低,LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR和CF水平显著升高,病理损伤显著减轻,心肌细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。与H/R组相比,miR-133b mimic组H9C2细胞的miR-133b表达显著上调,细胞凋亡和ROS积累显著减少（P<0.01）。miR-133b与YES1在3’UTR区存在靶向结合位点,共转染YES1 WT和miR-133b mimic可以显著降低荧光素酶活性（P<0.01）。miR-133b mimic 组与H/R组相比H9C2细胞中YES1蛋白的表达显著下调（P<0.01）。共转染pc-YES1逆转miR-133b过表达对心肌细胞凋亡和ROS积累的作用。结论 无论是在体内还是体外,miR-133b靶向YES1抑制I/R引起的心肌细胞凋亡和ROS的积累,从而减轻心肌I/R损伤。     

P2X7受体拮抗剂BBG抗大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的:观察P2X7受体拮抗剂亮蓝G(BBG)抗大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的作用,并探讨其可能机制.方法:取新生24 h内的SD大鼠10只,原代培养星形胶质细胞,实验分为正常对照组、缺氧/复氧(H/R)组和50 nmol/L BBG+H/R组.MTT法检测星形胶质细胞存活率;荧光示踪法检测星形胶质细胞缝隙连接(GJ)功能,Western blotting检测星形胶质细胞connexin 43(Cx43)、Bax和Bcl-2蛋白表达;Hoechst 33258染色法检测星形胶质细胞凋亡率.结果:MTT法检测结果显示H/R损伤后星形胶质细胞存活率明显下降(P<0.01),50 nmol/L BBG预处理后,H/R损伤的星形胶质细胞存活率明显增加(P<0.01);荧光示踪法检测结果显示H/R损伤后星形胶质细胞GJ功能增强(P<0.01),Western blotting法检测结果显示H/R损伤后Cx43和Bax/Bcl-2比值显著表达增高(P<0.01),50 nmol/L BBG预处理后,H/R损伤的星形胶质细胞间GJ功能下降(P<0.05),Cx43及Bax/Bcl-2比值明显下降(P<0.05);Hoechst 33258染色法检测结果显示,H/R损伤后,星形胶质细胞凋亡率明显增加(P<0.05),BBG预处理后,H/R损伤的星形胶质细胞凋亡率减少(P<0.01).结论:BBG拮抗P2X7受体对H/R损伤后的星形胶质细胞起保护作用,其机制可能与抑制Cx43组成的GJ有关.     

miR-34a调节人卵巢颗粒细胞凋亡

目的: 探讨miR-34a对人卵巢颗粒细胞的作用及其机制。方法: 体外培养人卵泡颗粒细胞,分为模拟物转染组、抑制物转染组、模拟物阴性对照转染组、抑制物阴性对照转染组,分别转染miR-34a模拟物、miR-34a抑制物、模拟物阴性对照和抑制物阴性对照,另设空白对照组不做任何处理;实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测各组细胞miR-34a、Bcl-2、Bax、生存素、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、生存素、Caspase-3、剪切体Caspase-3等凋亡相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果： miR-34a模拟物转染明显下调Bcl-2 mRNA表达水平,降低Bcl-2、生存素蛋白表达,并增加Bax、Caspase-3蛋白表达,促进人颗粒细胞凋亡;miR-34a抑制物转染作用则与之相反;然而,miR-34a模拟物和抑制物转染对Bax、生存素、Caspase-3 的mRNA水平均无明显影响。结论： miR-34a可通过调控凋亡相关的蛋白与基因的表达,促进人颗粒细胞凋亡。     

KATP通道E23K突变对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响

目的 研究ATP敏感性钾通道Kir6.2亚基E23K突变对阿霉素诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 （1）在心肌组织中提取总RNA,RT-PCR法获取cDNA,合成特异性引物,用PCR法获得kir6.2、SUR2A的ORF片段,用T4DNA连接酶将上述片段与线性化的pEGFP-C1连接,重组的pEGFP-C1/kir6.2用PCR法进行E23K定点突变,获得真核表达质粒pEGFP C1/kir6.2,pEGFP C1/kir6.2（E23K）及pEGFP C1/SUR2A。（2）重组质粒采用脂质体法瞬时共转染H9C2细胞,使其在H9C2细胞中表达。（3）生理盐水与1mg/L阿霉素（Adriamycin,ADR）分别处理转染后细胞,分为4组：A组为野生型重组质粒+生理盐水处理组（WT+NS）;B组为含E23K突变重组质粒+生理盐水处理组（E23K+NS）;C组为野生型重组质粒+阿霉素损伤组（WT+ADR）;D组为含E23K突变重组质粒+阿霉素损伤组（E23K+ADR）。（4）采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数（AI）。（5） Western blot法测定caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达。AlphaEase FC软件取值读取各样品条带灰度值。结果 （1） TUNEL结果示,应用ADR后凋亡比例升高,与WT+ADR组相比,E23K+ADR组凋亡比例更高（P<0.05）。（2）阿霉素处理后,所有组促凋亡相关蛋白（caspase-3、Bax）表达均增高,抗凋亡蛋白（Bcl-2）表达降低,且E23K+ADR组caspase-3与Bax蛋白表达均大于WT+ADR组,Bcl-2蛋白表达低于WT+ADR组（P<0.05）。结论 K_ATP通道kir6.2亚基E23K突变加重阿霉素诱导的细胞凋亡。     

lncRNA EGOT靶向miR-320a对LPS诱导肺泡上皮细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

目的探讨长链非编码RNA (lncRNA)嗜酸性粒细胞转录因子(EGOT)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549凋亡、炎症反应的影响及可能机制。方法将A549细胞分为对照组(Con)、LPS组、LPS+pcDNA组、LPS+pcDNA-EGOT组、LPS+anti-miR-NC组、LPS+anti-miR-320a组、LPS+pcDNA-EGOT+miR-NC组、LPS+pcDNA-EGOT+miR-320a组。实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测EGOT和miR-320a表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;试剂盒检测白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定EGOT和miR-320a之间靶向作用。结果与Con组比较,LPS组A549细胞凋亡率、IL-6和IL-1β水平均升高(P < 0.05),EGOT表达水平降低(P < 0.01),miR-320a表达水平明显升高(P < 0.01)。与LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-EGOT组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均降低(P < 0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P < 0.05)。与LPS+anti-miR-NC组比较,LPS+anti-miR-320a组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P < 0.01),Bcl-2蛋白表达明显升高(P < 0.01)。与LPS+pcDNA-EGOT+miR-NC组比较,LPS+pcDNA-EGOT+miR-320a组A549细胞凋亡率、Bax蛋白表达、IL-6和IL-1β水平均明显升高(P < 0.01),Bcl-2蛋白表达明显降低(P < 0.01)。双荧光素酶报告实验显示,EGOT靶向负性调控miR-320a表达。结论lncRNA EGOT通过靶向miR-320a可减轻LPS诱导肺泡上皮细胞炎症反应和细胞凋亡。     

miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的：探讨miR-302b-3p对食管癌EC-109细胞增殖和凋亡的影响,阐明miR-302b-3p抑制食管癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的相关机制。方法：选取体外培养的食管癌EC-109细胞和正常食管上皮HET-1A细胞,采用实时荧光定量PCR法检测EC-109细胞和HET-1A细胞中miR-302b-3p表达水平。对EC-109细胞进行瞬时转染,分为空白对照组（未转染）、miR-NC组（转染miR-302b-3p mimics阴性对照）、miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p mimics）、anti-miR-NC组（转染miR-302b-3p inhibitor阴性对照）和anti-miR-302b-3p组（转染miR-302b-3p inhibitor）。MTT法检测各组EC-109细胞活性,流式细胞术检测各组不同周期EC-109细胞百分比和细胞凋亡率,Western blotting法检测各组EC-109细胞中CyclinD1、CDK2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验和Western blotting法检测各组EC-109细胞的荧光素酶活性和细胞中上皮细胞转化序列2（ECT2）蛋白的表达水平。结果：与HET-1A细胞比较,EC-109细胞中miR-302b-3p表达水平明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,miR-302b-3p组EC-109细胞活性、S期细胞百分比和EC-109细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-302b-3p组细胞活性、S期细胞百分比和细胞中CyclinD1及CDK2蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而G₀/G₁期细胞百分比、细胞凋亡率和细胞中Bax及Cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）。与miR-NC+ECT2-WT组比较,miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性降低（P<0.05）;与anti-miR-NC+ECT2-WT组比较,anti-miR-302b-3p+ECT2-WT组EC-109细胞的荧光素酶活性明显升高（P<0.05）。结论：miR-302b-3p可抑制EC-109细胞增殖并诱导凋亡,其作用机制可能与靶向调控ECT2蛋白表达有关。     

miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响

目的:探究miR-133过表达对结肠癌细胞SW480凋亡、增殖和裸鼠成瘤的影响。方法:将miR-133 mimic转染至SW480细胞,将细胞分为3组:对照组、Scramble组和miR-133 mimic组。RT-PCR检测miR-133表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western 印迹检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9、c-Myc蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞增殖倍数;克隆形成实验检测细胞克隆形成率;裸鼠右侧腋窝处皮下注射SW480细胞悬液建立裸鼠移植瘤模型,检测肿瘤重量,RT-PCR检测肿瘤组织miR-133表达水平,免疫组化检测Caspase-3、Ki67阳性细胞数。结果:与对照组相比,miR-133 mimic组miR-133表达升高（F=136.70,P＜0.05）,细胞凋亡率升高（F=59.995,P＜0.05）,Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3、cleaved Caspase-9/Caspase-9表达升高（F=726.85、138.76、55.85,均P＜0.05）,c-Myc蛋白表达水平降低（F=88.98,P＜0.05）,细胞活力降低（F=48.50,P＜0.05）,克隆形成率降低（F=42.63,P＜0.05）,肿瘤重量降低（t=1.788,P＜0.05）,肿瘤组织miR-133表达水平升高（t=1.043,P＜0.05）,Caspase-3阳性细胞数升高（t=1.167,P＜0.05）,Ki67阳性细胞数降低（t=1.557,P＜0.05）。结论:miR-133过表达诱导SW480细胞凋亡,抑制SW480细胞增殖和裸鼠肿瘤的形成。     

硫化氢抑制高糖诱导的内皮细胞损伤的研究

目的观察高糖环境下细胞内硫化氢的生成及硫化氢对高糖诱导的内皮细胞损伤的影响并探讨其机制。方法将人脐静脉内皮细胞分为4组:A组为正常糖浓度组(5.5 mmol/L),B组为高糖组(25 mmol/L),C组为高糖(25 mmol/L)+硫氢化钠(50μmol/L)组,D组为正常糖浓度(5.5 mmol/L)+硫氢化钠(50μmol/L)组,处理48 h后,测定细胞内硫化氢的含量,M TT检测细胞存活率,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Cleaved caspase-3的表达。结果①与A组相比,B组硫化氢生成量明显减少(P<0.05),与B组相比,C组硫化氢生成量明显增多(P<0.05);②与A组相比,B组的细胞存活率明显减少(P<0.05),而C组的细胞存活率较B组显著升高(P<0.05);③与A组相比,B组Bax表达显著升高(P<0.05),Bcl-2的表达显著降低(P<0.05),而Caspase-3活性明显增强(P<0.05);与B组相比,C组Bax水平显著降低(P<0.05),Bcl-2水平显著升高(P<0.05),Caspase-3活性显著下降(P<0.05)。与A组相比,D组各指标表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论高糖对内皮细胞硫化氢的生成具有抑制作用;外源性硫化氢可保护高糖诱导的内皮细胞损伤,其机制可能与抑制细胞凋亡有关。