熊果酸对球囊损伤大鼠颈总动脉后内膜增生及PCNA、NF-kB表达的影响

目的：探讨熊果酸对球囊损伤大鼠颈总动脉后血管内膜的增生及增殖细胞核抗原（ PCNA）、核因子kB （ NF-kB）表达的影响。方法32只SD大鼠随机分为假损伤组（对照组）、损伤组和熊果酸低剂量治疗组、高剂量组治疗组。对照组和模型组每天腹腔注射生理盐水及药物助溶剂1%DMSO,熊果酸低剂量治疗组、高剂量组治疗组每天腹腔注射相应药物。分别在术后7 d、21 d取颈总动脉,通过组织学检查、免疫组化结合图象分析技术测定血管壁形态学变化及PCNA、NF-kB的表达情况。结果与损伤组相比,术后21天熊果酸高、低剂量组内膜增生面积及内膜与中膜面积比均明显减少（ P﹤0.05）。与对照组比较,损伤组NF-kB、PCNA表达显著增强（ P﹤0.05）;术后各时间点上熊果酸高、低剂量组较损伤组NF-KB表达明显降低,差异有统计学意义（ P﹤0.05）。结论熊果酸可抑制球囊损伤后血管新生内膜增生,其作用机制可能与抑制NF-kB及PCNA表达有关。     

中国人白介素18结合蛋白基因的克隆及其序列分析

白介素18结合蛋白是新近发现的一种能与IL-8特异性结合并拮抗其相关生物学功能的蛋白质,它参与Th1介导的细胞免疫调控。另外,某些病毒编码的蛋白与IL-18BP有较高的同源性,提示这可能与此类病毒逃避机体免疫的机制有关。我们利用RT-PCR技术从人外周血细胞中扩增获得IL-18BPcDNA片段,将其克隆至T载体中并进行了核苷酸序列分析,为进一步表达和研究其生物学功能奠定了基础。     

曲匹地尔抑制大鼠胸主动脉球囊损伤后肌内膜增殖

以 2 F球囊导管剥脱大鼠胸主动脉内膜后 ,采用光镜和电镜定性观察和计算机图像分析定量方法研究曲匹地尔对大鼠胸主动脉内膜损伤后肌内膜增殖的影响。结果表明 ,与假手术组比较 ,单纯血管损伤组的动脉壁增厚和肌内膜增生明显 ,内皮下内弹力板破坏 ,血管平滑肌细胞多呈合成表型并大量迁移到血管内膜。曲匹地尔处理后 ,动脉壁明显变薄 ,肌内膜增生明显减弱 ,血管平滑肌细胞多呈收缩表型 ,较少平滑肌细胞迁移至内膜下。计算机图像定量分析表明血管损伤后 14d,内膜与中膜面积比和厚度比分别增加 34 5 %和 36 4% (均为 P<0 .0 1) ,曲匹地尔 10 m g/ (kg· d)、 2 0m g/ (kg· d)和 40 m g/ (kg· d)给药 17d,内膜与中膜的面积比分别降低 48%、 6 3%和 6 5 % (P值分别小于 0 .0 5、0 .0 1和 0 .0 1) ,使内膜与中膜的厚度比分别降低 5 0 %、 6 3%和 72 % (均为 P<0 .0 1) ,且抑制程度与曲匹地尔剂量有明显相关性 (r值分别为 - 0 .72 9和 - 0 .75 7,均为 P<0 .0 1)。提示 :曲匹地尔能明显抑制大鼠血管损伤后肌内膜的形成和血管管壁增厚、管腔狭窄     

阿奇沙坦酯对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的抑制作用及机制探讨

目的 探讨新型降压药阿奇沙坦酯（azilsartan medoxomil,TAK-491）能否抑制球囊损伤后血管内膜增生及其可能机制。方法 选取清洁级雄性200~250g SD大鼠48只,随机分为4组,即假手术组、模型组、阿奇沙坦酯低剂量组、阿奇沙坦酯高剂量组,每组12只。建立模型后,阿奇沙坦酯低剂量组与高剂量组SD大鼠分别按2mg/kg和4mg/kg每天给予3ml药物灌胃,模型组和假手术组大鼠每天用3ml生理盐水灌胃。于术后14、28天取大鼠颈总动脉行HE染色,观察血管形态学变化,同时计算内膜面积（IA）、中膜面积（MA）及内膜/中膜面积比（IA/MA）。免疫组化技术测量增殖细胞核抗原（PCNA）、Toll样受体4（TLR4）、核因子-κB （NF-κB） p65表达变化结果,酶联免疫吸附测定（ELISA）血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及白细胞介素-6（IL-6）水平。结果 与模型组对比发现,药物低、高剂量组术后14、28天IA、IA/MA明显减少（P<0.05）,颈总动脉的PCNA、TLR4、NF-κB p65蛋白的表达明显降低（P<0.05）,血清中TNF-α、IL-6表达明显降低（P<0.05）。与假手术组进行对比发现,手术组术后14、28天IA、IA/MA明显增加（P<0.05）,颈总动脉的PCNA、TLR4、NF-κB p65的表达明显增加（P<0.05）,血浆中TNF-α、IL-6表达明显增加（P<0.05）。结论 阿奇沙坦酯可以减轻损伤后血管再狭窄发生率,其作用机制可能是通过抑制TLR4介导的NF-κB通路,减少了下游炎性相关因子TNF-α、IL-6等的表达,继而减少内膜增生而实现的。     

高同型半胱氨酸血症对球囊损伤大鼠颈动脉核转录因子和单核细胞趋化因子蛋白-1表达的影响

目的 观察高蛋氨酸饮食诱导的高同型半胱氨酸(Hcy)血症对大鼠颈动脉球囊损伤后血管组织核转录因子(NF-κBP65)蛋白及单核细胞趋化因子蛋白-1(MCP-1)表达的影响,探讨血管成形术后Hcy对新内膜增生的可能机制.方法 采用免疫组织化学方法分别检测血管组织NF-κB P65蛋白和MCP-1蛋白表达.结果 低及高蛋氨酸组血管组织NF-κB P65蛋白和MCP-1蛋白的表达[分别为(12.32±2.37)μmol/L,(21.33±4.32)μmol/L和(26.32±3.34)panol/L,(33.35±3.87)μmol/L]均高于对照组[(5.17±1.49)μmoL/L,(15.78±2.13)μmol/L](P<0.05,P<0.01),高蛋氨酸组血管组织NF-κB P65蛋白和MCP-1蛋白表达与低蛋氨酸组比较也有明显差异(P<0.05);而且血管组织MCP-1蛋白表达与NF-κB P65蛋白的表达呈显著正相关(r=0.643,P<0.01).结论 高Hcy血症能使球囊损伤后颈动脉组织NF-κB P65、MCP-1蛋白过度表达;推测同型半胱氨酸有可能通过激活NF-κB通路上调血管内皮损伤后动脉组织MCP-1蛋白的表达,这可能是其促进血管成形术后新内膜过度增生的机制之一.     

中国人白介素18结合蛋白基因的克隆及其序列分析

白介素１８结合蛋白是新近发现的一种能与ＩＬ－８特异性结合并拮抗其相关生物学功能的蛋白质,它参与Ｔｈ１介异的细胞免疫调控。另外,某些病毒编码的蛋白与ＩＬ－１８ＢＰ有较高的同源性,提示这可能与此类病毒逃避机体免疫的机制有关。我们利用ＲＴ－ＰＣＲ技术从人外周血细胞中扩增获得ＩＬ－１８ＢＰｃＤＮＡ片段,将其克隆至Ｔ载体中并进行了核苷酸序列分析,为进一步表达和研究其生物学功能奠定了基础。     

血管球囊损伤后内膜增生及血管重塑对再狭窄的影响

目的:探讨在血管再狭窄形成过程中内膜增生及血管重塑的作用.方法:采用大鼠颈动脉球囊损伤后血管再狭窄的动物模型,经形态学观察及计算机图像分析,观测术后不同时间点血管壁各成分的变化. 结果:血管损伤后3 d血管内腔面可见增殖的血管平滑肌细胞,损伤后7 d新生内膜形成并继续增厚,损伤后28 d新生内膜厚度及面积达最大,损伤后35 d较损伤后28 d缩小(P<0.01). 损伤后各时间点中膜厚度无明显变化,但损伤后35 d的中膜面积较损伤后28 d及对照未损伤侧缩小(P<0.05). 管腔面积于损伤后前3 d略增大,损伤后7 d出现管腔面积减少,至损伤后28~35 d管腔面积明显小于对照未损伤侧(P<0.01). 外弹力膜内横截面积在损伤后3~7 d略增大,损伤后14 d最大,损伤后35 d较损伤后28 d及对照未损伤侧明显缩小(P<0.01). 结论:内膜增生与血管重塑是再狭窄形成的主要病理机制,血管再狭窄的形成是内膜增生与血管重塑的平衡所决定的,两者共同导致管腔狭窄.     

替格瑞洛对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响及机制研究

目的研究抗血小板药替格瑞洛对大鼠颈总动脉损伤后内膜增生的影响及机制。方法把42只普通SD大鼠用随机法分为正常对照组(6只)、球囊损伤组(12只)、替格瑞洛正常剂量组(12只)、替格瑞洛高剂量组(12只)。术后7天、21天取颈总动脉行H-E染色,观察颈总动脉病理形态变化,并测量内膜的面积(IA)和中膜的面积(MA)。免疫组化技术测定PDGF、PCNA的表达。结果药物正常剂量和高剂量组与球囊损伤组比较,7天、21天内膜的面积、内膜/中膜的面积比明显减少(P<0.05)。颈总动脉的PDGF、PCNA的表达明显降低(P<0.05)。药物正常剂量组与药物高剂量组比较,7天时药物高剂量组的内膜面积、内膜/中膜的面积比明显减少(P<0.05)。颈总动脉的PDGF、PCNA的表达明显降低(P<0.05)。药物高剂量组与正常药物剂量组21天与7天的内膜面积差比较无明显差异。颈总动脉的PDGF、PCNA的表达无明显差异。结论替格瑞洛能够减轻动脉损伤后内膜增生的程度,其可能机制为抑制血小板的活化,阻断血小板释放PDGF刺激血管平滑肌增生。球囊损伤前期高剂量药物组较正常剂量组抑制内膜增生较为明显,后期高剂量组与正常剂量组无明显差异。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对球囊损伤内膜修复的影响

目的建立兔髂动脉球囊损伤模型,观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM CSF)对损伤内膜修复的影响。方法健康雄性新西兰大白兔24只随机分为GM CSF组和对照组。GM CSF组皮下注射GM CSF10μg·kg1·d1,对照组皮下注射同等量生理盐水。7d后球囊扩张损伤髂动脉。4周后提取损伤动脉标本,观察内皮修复、内膜增生情况并测定病理形态学参数。结果术后4周病理组织学见GM CSF组内膜增生程度明显轻于对照组,新生内膜中血管平滑肌细胞和纤维组织明显少于对照组,内皮较完整、光滑,管腔狭窄程度较轻。形态学参数见GM CSF组的管腔面积明显大于对照组(1.27mm2±0.31mm2vs0.92mm2±0.24mm2),新生内膜面积与内膜增生百分比明显小于对照组(0.85mm2±0.34mm2vs1.18mm2±0.38mm2;40%±7%vs55%±6%)。结论GM CSF能促进损伤内膜修复,减少内膜增生,降低再狭窄率。     

维持性血液透析(MHD)患者外周血单个核细胞NF-κB活性与心血管疾病(CVD)相关

 目的 探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)核因子 κB(nuclear factor kappa B,NF κB)活性与心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)的关系。方法 选取MHD治疗3个月以上的稳定患者(n=32),以体检健康人为对照组(n=12),采用酶联免疫吸附法检测受试者PBMC的NF-κB活性及血浆五聚素3(pentraxin 3,PTX3)。用Pearson相关和线性回归分析PBMC的NF-κB活性与其他指标的相关性。用二分类Logistic回归分析PBMC的NF-κB活性与CVD的关系。用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线比较PBMC的NF κB活性、PTX3和高敏C反应蛋白(high sensitivity C-reactive protein,hsCRP)与CVD的相关性。结果 MHD患者PBMC的NF-κB活性、血浆PTX3和血清hsCRP皆显著高于对照组;单次透析后MHD患者PBMC的NF-κB活性和血浆PTX3显著升高;合并CVD患者PBMC的NF-κB活性显著高于非CVD患者。Pearson相关分析显示PBMC的NF-κB活性与白细胞计数(r=0.454,P=0.009)、血清hsCRP(r=0.590,P<0.001)、血浆PTX3(r=0.680,P<0.001)、心肌肌钙蛋白T(r=0.409,P=0.020)及颈动脉内膜中层厚度(r=0.541,P=0.011)呈显著正相关。线性回归分析显示白细胞计数(β=0.338,P=0.028)、血清hsCRP(β=0.440,P=0.005)、血浆PTX3(β=0.487,P=0.004)及颈动脉内膜中层厚度(β=0.453,P=0.032)与PBMC的NF κB活性独立相关。Logistic回归分析显示PBMC的NF κB活性升高是CVD的独立危险因素(OR=8.47,P=0.022)。受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析显示,PBMC的NF κB活性与CVD的相关性高于PTX3和hsCRP,三者的ROC曲线下面积分别为0.791(95%CI:0.633~0.950,P=0.006)、0.785(95%CI:0.628~0.943,P=0.007)和0.711(95%CI:0.514~0.907,P=0.046)。结论 MHD患者PBMC的NF-κB活性显著升高;血液透析(hemodialysis,HD)过程可激活PBMC的NF κB;MHD患者PBMC的NF-κB活性与CVD相关,可作为患者炎症和CVD危险因素的标志物。     

复方贞术调脂方对游离脂肪酸诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞的作用

目的 探讨复方贞术调脂方(FTZ)对游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛素抵抗HepG2细胞NF-κB-IRS1-GLUT4通路的影响,阐明FTZ缓解胰岛素抵抗的作用机制.方法 采用FFA诱导HepG2细胞使其产生胰岛素抵抗,3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,酶联免疫法检测HepG2细胞培养液上清液中TNF-α、IL-6的含量,Western blot检测HepG2细胞中NF-κB、IRS1、GLUT4蛋白表达,采用PDTC阻断NF-κB蛋白,测定其下游靶点IRS1的蛋白表达.结果 FTZ可降低细胞上清液中葡萄糖、TNF-α、IL-6的含量,下调NF-κB的蛋白表达,上调IRS1和GLUT4的蛋白表达.阻断NF-κB之后,再加入FTZ,IRS1的蛋白表达量较未阻断时显著降低.结论 FTZ可改善FFA诱导的胰岛素抵抗,其作用机制可能是通过抑制NF-κB介导的IRS1-GLUT4通路来改善胰岛素抵抗.NF-κB是FTZ作用的关键靶点.     

黑木耳提取物对脓毒血症大鼠全身炎症反应的影响

目的探讨黑木耳提取物对脓毒血症大鼠血清中内毒素、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)水平及肠、肝组织中核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响。方法将健康Wistar大鼠随机分为对照组、实验组、蒙脱石散组、黑木耳多糖组、黑木耳粗提物组,术前分别预防性灌胃3d。第4天行手术,使用盲肠结扎穿刺法制备脓毒血症动物模型,造模12h后分别于门静脉和腹主动脉取血,检测血清内毒素水平;应用ELISA试剂盒检测血清中TNF-α、IL-1、IL-6水平;采用免疫组织化学法检测肝、肠组织细胞中NF-κB的表达水平。结果实验组、蒙脱石散组、黑木耳粗提物组及黑木耳多糖组门静脉血清和动脉血清内毒素水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);黑木耳粗提物组及黑木耳多糖组门静脉血清和动脉血清内毒素水平均明显低于实验组及蒙脱石散组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组、蒙脱石散组、黑木耳粗提物组及黑木耳多糖组大鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-6水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05);蒙脱石散组、黑木耳粗提物组及黑木耳多糖组大鼠血清中TNF-α、IL-1较实验组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠肝、肠组织细胞NF-κB强阳性表达,蒙脱石散组、黑木耳粗提物组和黑木耳多糖组肝、肠组织细胞NF-κB弱阳性表达,通过半定量测定,蒙脱石散组、黑木耳粗提物组和黑木耳多糖组肝、肠细胞NF-κB表达水平较实验组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论黑木耳提取物在有效降低脓毒血症大鼠血清中内毒素的基础上,同时降低TNF-α、IL-1、IL-6含量,抑制脓毒血症大鼠肝、肠组织细胞NF-κB的表达。     

山莨菪碱对核因子-κB活化的抑制作用

观察山莨菪碱和脂多糖共同处理单核细胞（Ｍ）后对核因子－ｋＢ抑制蛋白降妥和核因子－ｋＢ活化的影响。方法分离、培养Ｍ,分为正常对照组;ＬＰＳ刺激组;６５４－２干预组（６５４－２ １０ｎｇ／ｍｌ）预孵育１ｈ后加入ＬＰＳ１０μｍｇ／ｍｌ）分别在刺激前（０）、刺激后０．２５、０．５、１和２ｈ留取Ｍ。检测Ｍ中ＩｋＢα水平和核提取物中ＮＦ－ｋＢ的活性。结果ＬＰＳ刺激组ＩｋＢα水平１５ｍｉｎ开始降低３０ｍｉｎ降到     

姜黄素对脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应的影响及分子机制

目的 研究姜黄素对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症因子表达的影响,初步探讨可能的分子机制.方法 使用LPS(1μg)和姜黄素(5μmol/L、15μmol/L或30μmol/L)处理HUVEC细胞24 h,收集细胞总RNA,实时定量PCR(RT-PCR)和ELISA方法检测细胞TNF-α、MCP-1水平;Western blot检测细胞TLR4、MAPKs、NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκBα的表达情况.结果 与空白对照组比较,姜黄素能显著抑制LPS诱导HUVEC细胞TNF-α、MCP-1和TLR4的过表达(P<0.05),明显降低NF-κB p65和MAPKs的磷酸化及IκBα蛋白降解(P<0.05).结论 姜黄素可能基于抑制TLR4/NF-κB,从而影响LPS诱导HUVEC细胞炎症因子的表达.     

核转录因子与细胞周期蛋白D1在宫颈癌中的表达及相关研究

目的 探讨核因子NF-κ B p65与细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在宫颈癌中的表达及期与肿瘤增殖之间的关系。方法 应用免疫组织化学检测NF-κ B p65，cyclinD1在32例宫颈组织及30例正常宫颈组织中的表达情况。结果 宫颈肿瘤中NF-κ B p65蛋白阳性表达率为68．8％(22／32)，cyclinD1 78．5％，30例正常宫颈组织中NF-κ B无1例阳性表达，cyclinD1表达率为18．5％。结论NF-κ B p65在宫颈癌中异常活化，并与cyclinD1过度表达密切相关，NF-κ B p65可能通过上网cyclinD1表达参与宫颈癌的发生与发展。     

外源性D-核糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨外源性D-核糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法:24只SD大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注I（schemia/reperfusionI,/R）组、D-核糖组。假手术组:只予以左冠状动脉前降支穿线不结扎I;/R组:左冠状动脉前降支结扎30min,再灌注120min;D-核糖组:左冠状动脉前降支穿线前30min,给予尾静脉缓慢推注D-核糖,余操作同I/R组。各组术毕取结扎处远端左心室游离壁心肌组织备用。RT-PCR检测心肌中细胞因子诱导的中性粒细胞趋化物-1（Cytokine-in-ducedneutrophilchemoattractantproperties1,CINC-1）mRNA,ELISA检测髓过氧化物酶（Myeloperoxidase,MPO）,Westernblot检测核因子-κB（Nuclearfactor-κB,NF-κB）,HE染色观察心肌病理改变。结果:与假手术组相比,D-核糖组I、/R组CINC-1mRNA的表达量,NF-κB和MPO的量均明显增高（P<0.05）,心肌组织病理学变化明显加重,中性粒细胞浸润明显增多。与I/R组相比,D-核糖组CINC-1mRNA的表达量,NF-κB和MPO的量又明显减少（P<0.05）,心肌组织病理学变化明显减轻,中性粒细胞浸润明显减少。结论:外源性D-核糖对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与减少心肌组织中NF-κB的含量,降低心肌组织CINC-1mRNA的表达,减少心肌中MPO含量,减少心肌组织中性粒细胞浸润有关。     

姜黄素对支气管哮喘大鼠气道重塑和核因子-κB的影响

目的:探讨姜黄素对支气管哮喘大鼠气道重塑及核因子-κB(NF-κB)的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为对照组、哮喘组、姜黄素组,各10只;采用卵蛋白(OVA)致敏复制大鼠哮喘模型。观察3组大鼠气道炎症、气道壁厚度、胶原沉积及NF-κB和转化生长因子(TGF-β1)表达情况。结果:哮喘组大鼠炎性细胞浸润、胶原沉积、气道壁厚度、NF-κB、TGF-β1表达与对照组比较有显著性差异(P<0.01),而姜黄素组较哮喘组明显减轻(P<0.01);NF-κB与TGF-β1表达、气道炎症、气道壁厚度、胶原沉积变化成正相关(P<0.01)。结论:姜黄素可抑制哮喘大鼠NF-κB活性以干预其气道重塑。     

MIF抑制剂ISO-1在妊娠大鼠重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在孕鼠重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤中的作用.方法 30只晚期SD孕鼠使用随机数字表法随机分为孕鼠组(SO组)、孕鼠SAP组(SAP组)和孕鼠MIF抑制剂ISO-1预处理组(ISO-1组),每组均为10只.逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型.术后12 h处死大鼠取血检测血清淀粉酶(AMY).取胰腺组织及肺组织行病理学检查并评分,免疫组化检测肺组织中MIF、核因子κB(NF-κB)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达.结果 SAP组孕鼠的血清淀粉酶(AMY)、胰腺及肺组织病理评分较SO组均有显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);SAP组孕鼠肺组织中的MIF、NF-κB及TNF-α表达较SO组也显著增强,差异有统计学意义(P<0.05).ISO-1组上述指标较SAP组均有显著改善,差异有统计学意义(P<0.05).MIF的表达与NF-κB及TNF-α的表达均呈正相关,相关系数分别为r=0.815和r=0.787,P<0.05.结论 MIF抑制剂ISO-1对孕鼠急性重症胰腺炎肺损伤具有一定的保护作用,其部分机制可能与抑制NF-κB及TNF-α的激活有关.