SOD1基因缺陷型小鼠耳蜗毛细胞和螺旋神经节及神经纤维的定量观察

定量观察了出生后13个月的先天缺失SOD1基因小鼠的耳蜗毛细胞以及螺旋神经节和疆孔内的神经纤维,并与同龄野生型和出生后2个月的野生型小鼠进行了比较.发现毛细胞和螺旋神经节的缺损约为50%,神经纤维的减少则超过50%,提示由于与铜和锌相结合的过氧化物歧化酶的缺失导致了耳蜗神经与终器的严重退变.     

定量观察卡铂引起的灰鼠耳蜗毛细胞和神经纤维的早期损害过程

目的：定量观察和比较灰鼠耳蜗毛细胞和缰孔内神经纤维数量在卡铂耳中毒早期损害过程中的变化。方法：在耳蜗基底膜铺片的基础上制备耳蜗毛细胞图；从骨性螺旋板切片上对缰孔内的神经纤维计数。结果：缰孔内的神经纤维数量在注射卡铂后24h内明显减少。而内毛细胞的缺失是发生在注射上学铂后72h。结论：在卡铂耳中毒早期，缰孔内神经纤维的破坏早于内毛细胞的缺失。     

豚鼠耳蜗单离螺旋神经节细胞外毛细胞同时分离法

随着细胞生物学及分子生物学技术的进步 ,保持活性的单离螺旋神经节细胞 ( SGC)和 (或 )外毛细胞 ( OHC)已成为听觉生理、生化、病理及药理实验的重要模型。OHC为听觉的感受细胞 ,SGC为听觉初级神经元 ,观察同一因素对 OHC及 SGC的影响有重要意义 ,这就需要同时获得来源于同一耳蜗的单离的 SGC和 OHC。为此 ,我们尝试了在同一耳蜗同时分离单离的 SGC和 OHC的可能性 ,获得较好结果 ,报告如下。1　材料与方法1 .1 　 实验动物及溶液配制选用耳廓反射阳性、体重 2 0 0～ 30 0 g的花色豚鼠 6只 ,雌雄兼有。培养液为标准细胞外液 ,组…     

缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞及神经纤维的影响

目的:建立耳蜗器官体外培养模型,详细观察缺氧对体外培养耳蜗螺旋神经节细胞(SGC)及神经纤维的影响。方法:分离生后3 d Wistar大鼠耳蜗基底膜,平铺在含有DMEM培养液的培养基内(每盘6条基底膜),2盘为1组,随机分为5组。4组作为实验组,按不同时间段(6 h、12 h、24 h、48 h)进行缺氧(37℃,90%N2,5%CO2,5%O2)培养。1组作为对照组放置在37℃、5%CO2培养箱。用抗神经丝蛋白作为一抗,对耳蜗SGC及神经纤维进行免疫荧光染色。激光共聚焦显微镜下观察缺氧时耳蜗SGC及神经纤维形态变化并计数单位面积(24 mm×36 mm)SGC数即细胞密度。结果:缺氧早期(6 h)神经纤维局灶性水肿,SGC变化不明显。12 h神经纤维局灶性断裂及崩解,SGC减少,细胞密度与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。随缺氧时间延长,神经纤维崩解和SGC缺失逐渐加重,48 h神经纤维完全崩解破坏,SGC严重缺失,细胞密度与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论:缺氧造成体外培养耳蜗SGC及神经纤维损伤,神经纤维对缺氧更敏感。     

卡铂导致毛细胞及其传出神经损害的耳蜗分析图

目的：介绍一种同时评估耳蜗传出神经和毛细胞的简便的组织化学技术。方法：首先应用脱氢酶染色选择性标记毛细胞,再用乙酰胆碱醌酶染色标记传出神经纤维,双重染色的耳蜗铺片样品在光学显微镜下沿着耳蜗基底膜的全长分别对毛细胞和穿越Ｃｏｒｔｉ隧道的传出神经纤维计数,根据卡铂耳中毒灰鼠的毛细胞及其传出神经纤维损伤的百分比制备耳蜗图。结果：耳蜗分析图充分显示;当绝大多数内毛细胞坏死以及部分外毛细胞坏死时,越隧道的传     

卡铂引起的灰鼠耳蜗内毛细胞缺损模式

目的:研究卡铂损害灰鼠耳蜗内毛细胞(IHCs)的模式,即IHCs何时出现缺损、给药后不同时间基底膜上IHCs缺损的范围、基底膜上IHCs最大缺损部位以及致绝大部分IHCs缺损所需时间等。方法:对成年灰鼠采用一次性卡铂腹腔注射(100mg/kg),给药后不同时间处死动物,常规制备耳蜗铺片和耳蜗图,以定量观察灰鼠耳蜗毛细胞的缺损情况。结果:注射卡铂后从24h～3个月,灰鼠的外毛细胞基本无缺损。IHCs损伤模式的特征:①注射卡铂后24h耳蜗毛细胞完整无损,IHCs从注药后第3天开始出现缺损;②从注射卡铂后3d到3个月期间,IHCs的最大缺损率均出现在第1回和第2回交界处;③IHCs缺损从第1回和第2回交界处开始,范围逐渐向底回和顶回扩展,与顶回相比,底回的IHCs缺损出现早且更严重;④至注射后3个月基底膜上IHCs的缺损呈平坦型。结论:100mg/kg卡铂腹腔注射对各回IHCs的破坏是不均等的,对卡铂的敏感度不一致可能造成了各回IHCs缺损在时间上的差异。     

卡铂对灰鼠螺旋神经节的早期损害

实验中观察了卡铂(50mg/kg)对灰鼠耳蜗螺旋神经节细胞的急性损害.注药后6小时即可发现在Ⅰ型神经元胞体和神经纤维中有空泡形成.注药后1天可见Ⅰ型神经元内充满大空泡并开始发生坏死.其结果表明卡铂产生对螺旋神经节的毒害相当迅速.提示耳蜗传入神经系统可能是卡铂的第一个靶组织.     

内皮素1在豚鼠耳蜗螺旋神经节的分析

内皮素1是1988年日本学者Yanagisawa从猪主动脉内皮细胞培养液中分离纯化的一种活性肽，研究发现内皮素1不仅是收缩能力最强的血管收缩物质，而且具有多种生物学活性，对气道张力形成，细胞增殖与凋亡，离子转运，基因调控等均发挥多种生物学影响，近来发现内皮素1对神经系统的生理活动亦具有调控作用。     

单个耳蜗毛细胞扫描电镜观察

由于扫描电镜能立体观察组织细胞表面结构 ,现已广泛应用于耳蜗组织的研究。但扫描电镜只能从细胞顶部观察 ,难以立体地全面研究其细胞表面结构。本文试图研究一种能扫描单个毛细胞的方法。1　材料与方法1 .1 　 实验动物Sprague Dawley(SD)大鼠 5只 ,2周龄 ,雌雄兼用 ,由上海医科大学实验动物中心提供。1 .2 　 人工外淋巴液配方 (mmol/L)A液 :Na Cl 1 42 ,KCl 5.4,Ca Cl2 1 .3,Mg SO4 0 .9,HEPES 5.0 ,Glucose 5.0 ,1 N Na OH调 p H7.4,4N Na Cl调渗透压 30 0 m Os/L。 B液 :A液去掉 Ca Cl2 、Mg SO4 。 C液 :B液加木瓜蛋…     

大鼠耳蜗螺旋神经节细胞的定量观察

目的 为定量观察SASCO Sprague Dawley(SD)大鼠耳蜗蜗轴螺旋管(Rosenthal's canal)切片中螺旋神经节细胞的数量提供实验依据.方法 11只SD大鼠用于本实验研究,其中5只正常SD大鼠用于对照,另966只SD大鼠用于制备乌苯苷引起的螺旋神经节细胞损害模型.耳蜗样品制作耳蜗中轴半薄切片,常规甲苯胺蓝染色,对耳蜗各回蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞进行计数,计数结果采用方差分析检验.结果 一个完整蜗轴螺旋管内的螺旋神经节细胞数量在底回末段多于耳蜗底回起始段和中回中段.与正常大鼠耳蜗螺旋神经带数量相比,1mM乌苯苷仅造成耳蜗底回的部分螺旋神经节细胞破坏,而10mM乌笨苷可破坏绝大部分螺旋神经节,乌苯苷引起的螺旋神经节破坏模式是从耳蜗底回逐渐向顶回发展.结论 计数耳蜗各回不同部位切片中的蜗轴螺旋管内螺旋神经节细胞数量是一种简便可靠的耳蜗螺旋神经节细胞定量分析方法.