发育期大鼠内侧颞叶癫痫模型丙戊酸治疗前后的蛋白质组学研究

目的 研究丙戊酸(VPA)对发育期大鼠内侧颞叶癫痫(MTLE)模型海马蛋白质表达谱的影响,寻求与VPA抗癫痫作用相关的蛋白质以及探讨VPA在MTLE发病早期发挥抗癫痫作用的机制.方法 建立氯化锂-匹罗卡品诱导的发育期大鼠MTLE模型,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离海马总蛋白,PDQuest软件识别差异表达蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定.结果 建立了VPA治疗前后的MTLE模型大鼠海马蛋白质的2-DE图谱.质谱鉴定出9个差异表达的蛋白质,其中4个在VPA治疗后表达上调;5个下调.结论 本实验成功建立了发育期大鼠MTLE模型VPA处理前后的海马蛋白质2-DE图谱;β-synuclein、Neurogranin等差异表达蛋白可能与VPA在MTLE发病早期发挥抗癫痫作用的机制相关.     

养血清脑颗粒和丙戊酸联用对戊四氮点燃癫痫大鼠的影响

目的 探讨养血清脑颗粒(YXQNG)联用丙戊酸(VPA)对戊四氮(PTZ)慢性点燃模型大鼠癫痫发作、EEG、认知功能及颞叶、海马T型Ca2+通道蛋白(Cav3.2)表达的影响. 方法 成年雄性SD大鼠40只按随机数字表法分为PTZ组、VPA组、VPA+YXQNG组、NS组,每组10只.前3组大鼠腹腔注射PTZ溶液制作慢性点燃模型,VPA组大鼠在注射PTZ前1 h给予VPA灌胃;VPA+YXQNG组除给予VPA外,注射PTZ前1.5 h给予YXQNG灌胃;NS组腹腔注射生理盐水,每天一次.8周后观察各组大鼠的行为学变化、Y型电迷宫检查大鼠的正确反应率、捕记EEG并应用免疫组化染色检测颞叶和海马Cav3.2的表达. 结果 给药8周后PTZ组大鼠全部达到完全点燃(连续3 d出现Ⅳ级发作或达到Ⅴ级发作),VPA组和VPA+YXQNG组大鼠仅出现0～Ⅱ级发作;Y型电迷宫检查结果显示VPA+YXQNG组大鼠正确反应率高于PTZ组,差异有统计学意义(P＜0.05);EEG结果显示PTZ组大鼠癫痫发作时EEG有明显异常放电,总功率高于用药前,差异有统计学意义(P＜0.05).VPA组、VPA+YXQNG组大鼠用药前后EEG总功率的差值均高于PTZ组,差异有统计学意义(P＜0.05);免疫组化染色结果显示VPA组、VPA+YXQNG组大鼠颞叶和海马Cav3.2表达低于PTZ组,VPA+YXQNG组大鼠颞叶和海马Cav3.2表达低于VPA组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 YXQNG和VPA联用能降低癫痫大鼠发作级别、改善认知功能、减少脑部异常放电并降低脑组织Cav3.2水平,有抗癫痫和脑保护作用.

Abstract：

Objective To explore the effet of Yangxue Qingnao granule (YXQNG) on seizures and cognition function of pentylenetetrazole (PTZ)-kindled chronic epileptic rats models, expression of Cav3.2 in the hippocampus and the temporal lobe of these rats, and EEG features of the rats. Methods Forty healthy adult male SD rats were equally divided into 4 groups at random: PTZ group, VPA treatment group, VPA+YXQNG treatment group, normal saline (NS)-control group (n=10). PTZ solution was intraperitoneally injected for 8 weeks to induce the kindling model in the above 3 groups except the NS-control group. VPA by intragastric administration was given to the rats in the VPA treatment group 1 h before PTZ injection; YXQNG and VPA by intragastric administration were given to the rats in the VPA+YXQNG treatment group 1.5 h before PTZ injection. Behavioral changes of the rats were observed 8 weeks after PTZ injection; accuracy rate of response of the rats were examined by electric maze test;EEG was performed; and the expression ofT-type Ca2+ channel protein (Cav3.2) in the temporal lobe and hippocampus was detected by immunohistochemical staining. Results Rats in the PTZ group appeared grade Ⅳ or Ⅴ seizures for 3 consecutive d, and rats in the VPA treatment group, VPA+YXQNG treatment group appeared grade 0-Ⅱ seizures. The accuracy rate of response of the rats in the VPA+YXQNG treatment group was significantly higher than that in the PTZ group (P＜0.05). EEG indicated that paradoxical discharge was noted in rats of PTZ group when seizures appeared, and the total power at the time was obviously higher than that before PTZ injection (P＜0.05). The D-value of total power of EEG in rats of the VPA treatment group and VPA+YXQNG treatment group before and after treatment was significantly higher than that in the PTZ group (P＜0.05). And the level of Cav3.2 in the temporal and hippocampus in rats of the VPA treatment group and VPA+YXQNG treatment group was significantly lower than that in the PTZ group (P＜0.05); as compared with that in the VPA treatment group, the expression of Cav3.2 in the temporal and hippocampus in rats of the VPA+YXQNG treatment group was significantly reduced (P＜0.05). Conclusion The combination use of YXQNG and VPA can decrease the seizure stage, the paradoxical discharge of the brain and the level of Cav3.2 in brain tissue,and improve the cognitive function of the PTZ-kindled rats, indicating that using VAP and YXQNG simultaneously can treat epileptic seizure and protect the neurons.     

丙戊酸对癫癎大鼠海马兴奋性氨基酸类神经递质动态释放的影响

目的:观察丙戊酸(valproate,VPA)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃的自由活动大鼠海马胞外兴奋性氨基酸类神经递质动态释放过程的影响。方法:建立大鼠慢性癫癎模型及自由活动的清醒动物脑内在体微透析(microdialysis,MD)模型,用高效液相色谱测定急性腹腔注射VPA 200 mg·kg-1对大鼠海马胞外兴奋性氨基酸类神经递质释放的影响。结果:在惊厥发作期及发作间期,自由活动大鼠海马胞外谷氨酸及天冬氨酸水平显著上升,给予VPA 200 mg·kg-1后,两者浓度明显下降。结论:①VPA对海马胞外主要的兴奋性氨基酸类神经递质释放的调控为其发挥抗癎作用的重要机制之一;②在VPA对CNS兴奋性氨基酸类神经化学递质调控机制的研究中,PTZ点燃的大鼠癫癎模型较为理想。     

丙戊酸钠对慢性酒精中毒大鼠记忆损害的干预效应

观察丙戊酸钠(VPA)对慢性酒精中毒大鼠记忆功能的影响. 材料雄性Sprague-dawley大鼠,体质量160～180 g(河北医科大学实验动物中心提供)42只,简单随机抽样,编号后采用随机数字表分组分为酒精模型组、VPA干预组和正常对照组,每组14只.     

丙戊酸钠对慢性酒中毒模型大鼠学习记忆损害的影响

目的探讨慢性酒中毒对大鼠学习记忆的影响及丙戊酸钠(VPA)的干预效应及其可能机制。方法将56只SD大鼠随机分为酒中毒模型组、VPA干预组、VPA对照组和正常对照组。以乙醇浓度梯度递增式的方式灌胃8周制作慢性酒中毒模型,而第5周始酒中毒模型组腹腔注射生理盐水,VPA干预组于第5～8周腹腔注射VPA,VPA对照组灌注等体积的生理盐水4周后第5～8周给予VPA。8周后每组随机选取7只采用Morris水迷宫和Y迷宫检测大鼠的学习记忆功能,其余7只用Westernblot检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白的表达含量。结果与正常对照组相比,酒中毒模型组大鼠水迷宫的逃避潜伏期显著延长(P0.05),空间探索次数显著减少(P0.05);Y迷宫中2d的错误次数显著增加(P0.01);海马BDNF含量下降(P0.05)。与酒中毒模型组相比,VPA干预组大鼠的行为学成绩均得到改善(P0.01),海马BDNF含量显著增加(P0.01),与正常对照组的差异无统计学意义(P0.05)。VPA对照组与正常对照组各项指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论慢性酒中毒可以导致大鼠学习记忆障碍,而VPA对酒精诱导的学习记忆损害有干预作用,海马BDNF表达增加可能是其作用机制之一。     

丙戊酸钠影响癫痫大鼠脑细胞凋亡的剂量

目的 　研究抗痫药丙戊酸钠 (VPA)在不同剂量范围对癫痫发作及脑细胞凋亡的影响。 方法 　建立马桑内酯 (CL)急性致痫大鼠模型 ,实验动物分为单纯CL组和 5个VPA预处理组 ,VPA剂量分别为 10 ,15 ,2 0 ,30 ,35mg/kg。均于痫性发作 2 4h后断头取脑 ,用TUNEL法检测CA1区 ,CA2区 ,CA3区 ,门区 ,齿状回 ,丘脑 ,丘脑下部 ,杏仁核 ,额叶皮质 ,小脑的神经细胞凋亡现象。 结果 　预注射VPA 10～ 30mg/kg组与单纯CL组相比 ,痫性发作程度及各脑区TUNEL阳性细胞密度随着VPA给药浓度的增加而递减。但预注射VPA 35mg /kg组的痫性发作反而较剧烈 ,凋亡脑细胞密度与单纯CL组大鼠相近。结论　VPA在一定剂量范围内能显著有效地减少痫性发作 ,这种发作强度的减轻与多个脑区凋亡神经细胞密度明显减少相对应 ;但当VPA给药剂量超过一定范围则没有同样效应。     

学龄儿童长期用苯巴比妥或丙戊酸治疗对认知的影响

抗痫药物对认知和学习的影响在过去10年逐渐引起重视.研究表明,抗惊厥药在多药治疗和/或使用过量均可对精神运动性操作产生有害影响.本文旨在评价学龄儿童长期用苯巴比妥(PB)或丙戊酸(VPA)治疗对学习能力的影响.研究了64例癫痫患儿(32例服PB,32例服VPA)及60名年龄相匹配的正常对照组.治疗均单一用药,至少6个月以上,且血药浓度在治疗范围内(均不     

胰岛素抵抗对大鼠脑海马区Aβ蛋白表达的影响及认知行为学的改变

目的 研究胰岛素抵抗大鼠脑海马区β-淀粉样蛋白的表达及认知行为学的改变.方法 30只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(NC)、模型组(IR).模型组给予高脂高糖饮食诱导胰岛素抵抗模型,正常对照组给予标准饲料喂养；采用Morris水迷宫实验检测2组大鼠认知行为的变化,免疫组织化法测定大鼠脑海马区Aβ40蛋白的表达....     

吡哆胺干预对2型糖尿病大鼠行为及认知功能改变的影响

目的研究2型糖尿病大鼠行为及认知功能的改变及吡哆胺干预的影响。方法建立2型糖尿病大鼠模型,吡哆胺灌胃干预,通过行为学检测及Morris水迷宫试验观察大鼠行为及认知功能的变化。结果与对照组相比,模型组及干预组大鼠卒中指数显著增高(P<0.05),潜伏期明显延长,穿越平台位置次数明显减少(P<0.05);与模型组相比,干预组大鼠卒中指数显著降低,潜伏期显著缩短、穿越平台位置次数明显增加(P<0.05)。结论2型糖尿病可造成大鼠不同程度的行为及认知功能障碍,吡哆胺干预可改善2型糖尿病大鼠神经功能。     

从Th1、Th17细胞除极探讨丙戊酸干预实验性自身免疫性神经炎的机制

目的从Ⅰ型辅助T细胞(Th1)、17型辅助T细胞(Th17)细胞除极角度探讨丙戊酸(VPA)干预实验性自身免疫性神经炎(EAN)的机制。方法实验大鼠随机分为VPA治疗组、EAN组、正常组,应用周围神经髓鞘抗原(P257-81)多肽与完全弗氏佐剂的混合液免疫VPA治疗组和EAN组大鼠。VPA治疗组大鼠于免疫当天至第15天每天腹腔内注射300mg·kg-1丙戊酸钠。观察发病情况,坐骨神经电生理改变及组织病理学变化,检测腹股沟淋巴结中IFN-γ、IL-17 mRNA水平。结果 VPA治疗组的最初发病时间迟于EAN组(P<0.05),其高峰期临床评分显著低于EAN组(P<0.05),坐骨神经复合肌肉动作电位(CMAP)的波幅较EAN组明显升高,潜伏期和时限显著缩短(P<0.05)。髓鞘脱失和炎性细胞浸润较EAN组明显减少(P<0.05)。淋巴结中IFN-γ、IL-17mRNA表达明显下降(P<0.05)。结论 VPA通过影响Th1、Th17细胞除极,使IFN-γ、IL-17分泌下降,从而抑制EAN大鼠的自身免疫反应。     

拉莫三嗪及丙戊酸钠对锂-匹罗卡品致(癎)大鼠的神经保护作用及其对癫(癎)的治疗作用

目的:观察拉莫三嗪(LTG)及丙戊酸钠(VPA)对锂-匹罗卡品癫(癎)持续状态(SE)大鼠海马锥体细胞、齿状回门区神经元的保护作用及对癫(癎)的治疗作用.方法:用大鼠制作锂-匹罗卡品SE动物模型,分三组:SE对照组,LTG治疗组和VPA治疗组.此三组在SE后2h给予安定阻断(癎)性发作,再分别给予适量生理盐水(NS)、...     

全蝎醇提物对Li-Pilo癫痫持续状态大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的 探讨全蝎醇提物(Ethanol Extracts of Scorpion,EES)对大鼠癫痫持续状态(SE)后海马神经元凋亡的影响.方法 建立氯化锂.匹罗卡品癫痫持续状态(Lithium-Pilocarpine induced status epilepticus,Li-Pilo SE)模型.使用TUNEL技术观察正常对照组、Li-Piio SE模型组、丙戊酸钠组(VPA)和EES低(L)、中(M)、高(H)剂量组大鼠SE后6h、24h、48h、72h和7d海马CA_1区和CA_3区TUNEL阳性细胞的动态变化,并进行组间比较.结果 正常对照组未见TUNEL阳性细胞.造模各组大鼠SE后6h海马可见部分TUNEL阳性细胞,主要分布在CA_1、CA_3区,其中模型组和EES(L)组72h达高峰,而VPA、EES(M)和EES(H)组高峰提前到SE后48h,以后各组逐渐下降.VPA、EES(M)和EES(H)组SE后各观察时间点TUNEL阳性细胞数较模型组极显著减少(P<0.01),而EES(L)组除个别时间点外,与模型组比较无统计学差异(P>0.05),其中VPA和EES(H)组各时间点TUNEL阳性细胞数减少较EES(M)组(P<0.01,和P<0.05)及EES(L)组(P<0.01,和P<0.05)更显著,EES(M)组各时间点减少又较EES(L)组更显著(P<0.01),而VPA与EES(H)组TUNEL阳性细胞数在各时间点无统计学差异(P>0.05).结论 EES能防止Li-Pilo SE大鼠海马神经元凋亡,并呈明显的量-效关系,高剂量EES抗凋亡作用与VPA相近.     

老年癫痫患者合用阿司匹林对丙戊酸钠血药浓度的影响

目的 观察老年癫痫患者合并使用阿司匹林(ASA)对丙戊酸钠(VPA)血药浓度的影响.方法 选择门诊随访的单用VPA治疗的癫痫患者,65岁以上者为观察组,65岁以下者为对照组,测定VPA的血药浓度.对观察组,再根据有无使用ASA,比较血药浓度及肝肾功能情况.结果 观察组的VPA血药浓度明显高于对照组,服用ASA与未服ASA者的血药浓度及肝肾功能无明显区别.结论老年人在临床应用VPA时,应减少剂量.老年患者使用ASA不会对VPA血药浓度产生影响.     

丙戊酸钠所致的昏迷伴酮病和肉碱不足

作者报导2例癫痫患者应用丙戊酸钠(VPA)治疗而引起酮病和肉碱不足的昏迷.例1,女,29岁,患复杂部分性癫痫,每日酰胺咪嗪(CBZ)1600mg,因癫痫延长发作而住院.患者有偏头痛、行为异常和妊娠剧吐史.静注葡萄糖和加用每日VPA2000mg(32mg/kg)后,翌日诉恶心、呕吐和烦躁不安.3天后昏迷.动脉血含氧量为28%,pH值7.51,Paco_219mmHg,Pao_2ll6mmHg.静脉血二氧化碳容量15mmol/L.VPA血浓度60μg/ml     

丙戊酸与其它抗癫痫药相互作用的进展

本文综述VPA与其它抗癫痫药相互作用研究的近况。一般认为苯妥英钠、卡马西平等促进VPA代谢,VPA具有抑制其它抗癫痫药代谢作用。VPA蛋白结合率高,在蛋白结合部位上置换苯妥英钠·卡马西平,使它们游离浓度升高与VPA血浓度正相关。     

戊四氮对大鼠空间学习能力及情感行为的影响

目的 戊四氮(Pentylenetetrazole,PTZ)作为一种化学致癫剂往往用来在大鼠癫痫模型中检测某些潜在抗惊厥剂的抗癫效能,但目前关于戊四氮所模拟的癫痫发作后症状并未彻底研究.本研究旨在评估PTZ点燃大鼠的认知及情感功能损害的程度.方法 24只大鼠随机分为PTZ组(n=16)和对照组(n=8),PTZ组大鼠给予35mg·kg-1·48h-1,连续28天,对照组给予相应的生理盐水.停药一周后将造模成功大鼠进行学习能力和情感反应性的评估.结果 PTZ组大鼠在水迷宫测定中,寻找平台的潜伏期时间与对照组相比,没有显著差异,而对平台空间位置的记忆能力较对照组差(P＜0.01).在强迫游泳试验、系统性抓握试验(systematic handling test)及旷场探查试验中,PTZ组大鼠均出现异常的情绪反应,与对照组有显著性差异(P＜0.01).结论 用PTZ点燃模型研究癫痫大鼠学习记忆能力及情感行为发现,癫痫大鼠在水迷宫中学习记忆能力下降,并可引发或加重实验动物活动习性改变、警觉水平增高、惊恐行为、环境适应能力下降.因而,PTZ点燃大鼠能够为我们提供一个很好的模拟人类癫痫发作后功能损害的动物模型,为今后寻找治疗癫痫患者认知、情感损害的合适疗法提供了平台.     

CYP2C19基因型对丙戊酸及其与苯妥英联合用药时血药浓度影响

目的探讨细胞色素P450 2C19(CYP2C19)基因对丙戊酸(VPA)血药浓度,以及VPA和苯妥英(PHT)联合应用时对其VPA血药浓度的影响.方法应用变性高效液相(DHPLC)技术对CYP2C19两个常见的等位基因突变进行了分析;应用荧光偏振免疫法(FPIA)测定口服抗癫痫药物患者的血药浓度.结果81例癫痫患者中CYP2C19外显子4(*3)和外显子5(*2)位点均为野生型(*1/*1)的发生率为37.0%,CYP2C19*2和CYP2C19*3的等位基因频率分别为31.5%和3.7%.单一应用VPA时,弱代谢患者较正常代谢患者的VPA血药浓度有所升高(P＜0.05).联合应用PHT和VPA可使VPA血药浓度显著降低(P＜0.01),CYP2C19正常代谢患者VPA血药浓度降低尤为明显(P＜0.01);在VPA与PHT联合用药过程中,约半数CYP2C19正常代谢患者VPA血药浓度不能达到治疗血药浓度.结论CYP2C19基因多态性影响VPA的血药浓度变化,在联合应用PHT时对VPA血药浓度的影响尤为明显,从而影响抗癫痫的临床疗效.     

丙磺舒增强丙戊酸抗癫痫作用的试探性研究

本文研究了丙磺舒增强丙戊酸(VPA)的脑内作用,提示在VPA与丙磺舒合用后能显著提高CSF中的VPA浓度,而血中总浓度、游离浓度无显著性改变。本组12例病人在加用丙磺舒后使CSF中VPA浓度提高26～170％,6例癲痫发作频率显著减少,无明显副作用。它可能成为增强VPA脑内抗癲痫作用的一个重要途径。     

丙戊酸增效高级别胶质细胞瘤术后放化疗临床观察

目的分析高级别胶质细胞瘤术后放化疗同时应用丙戊酸(VPA)抗癫痫药对患者预后的影响。方法回顾性分析171例原发性高级别胶质细胞瘤患者,分为放化疗组[术后放疗同步尼莫司汀(ACNU)间质化疗、替莫唑胺(TMZ)口服化疗; VPA联合放化疗组(术后放疗同步ACNU与TMZ化疗联合VPA治疗)],VPA治疗少于3个月或无VPA治疗者纳入前组,大于3个月者纳入后组,分析两组癫痫的发生率、总生存期(OS)及不良反应。结果术后放化疗期间接受VPA防治癫痫的有124例(72. 5%),有癫痫发作史的患者92例(53. 8%),其中69例(75. 0%)癫痫得到完全控制。VPA联合放化疗组94例,中位OS为26个月,放化疗组77例,中位OS为20个月(P=0. 023);[风险比(HR):1. 48; 95%置信区间(CI):1. 08～2. 05; P=0. 016]。常见的不良反应为骨髓抑制、消化道反应、肝功能损害,两组患者不良反应的表现及发生率相近。结论高级别胶质细胞瘤术后放化疗期间规律应用VPA既可防治癫痫又可有效改善患者OS,作用安全,并且VPA和肿瘤病理分级作为独立的预后因素可影响患者的生存期。     

17-β雌二醇对血管性痴呆大鼠认知功能和神经营养因子表达的影响

目的 研究17-β雌二醇对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知功能及脑组织神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响.方法 采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型,应用Y迷宫,免疫组化法和ELISA法检测腹腔注射17-β雌二醇60d后VD大鼠认知功能以及脑组织中NGF和BDNF含量变化.结果 与正常对照组对比,大鼠学习尝试次数,记忆测试10次的正确次数在造模60d后差异有显著性意义(P＜0.01),腹腔注射17-β雌二醇60d后,大鼠认知功显著改善;造模60d后的大鼠,其脑内NGF和BD-NF的含量较正常对照组显著增高,雌二醇组大鼠脑组织内NGF和BDNF的含量较模型组显著增高.结论腹腔注射17-β雌二醇可显著改善VD大鼠的认知功能,增加VD大鼠脑内NGF和BDNF含量.