β-胡萝卜素与番茄红素体外抗肿瘤作用研究

目的 :研究 β-胡萝卜素与番茄红素的抗肿瘤作用及范围。方法 :采用体外细胞培养技术观察 β-胡萝卜素和番茄红素对大鼠正常肝细胞 (BRL)、人肝癌细胞 (QGY- 770 3,Q3)、人宫颈癌细胞 (Hela)、人肾癌细胞 (786 - O)4种细胞系的细胞存活量及蛋白质含量的影响。结果:β-胡萝卜素只在 3× 10 - 4 mol/ L对 Hela细胞呈现抑制作用 ,而在 3× 10 - 4 m ol/ L、3× 10 - 5m ol/ L对 Q3和 786 - O都具有明显抑制作用。番茄红素在 10 - 5mol/ L和 10 - 6mol/ L对 3种癌细胞均显示出明显的抑制作用。β-胡萝卜素和番茄红素对 BRL细胞的生长未显示出抑制作用。结论 :β-胡萝卜素和番茄红素对上述 3种癌细胞均有抑制生长作用。     

β—胡萝卜素抗肿瘤研究进展

β－胡萝卜素具有抗突变作用，抑制多种动物性肿瘤的发生及生长，也可抑制体外肿瘤 增殖。β－Ｃ这一作用不同于转化成ＶｉｔＡ的作用，可能与其自身抗氧化性，促进免疫及抑制癌基因表达等有关。     

β-胡萝卜素抗肿瘤研究进展

β-胡萝卜素（β-Carotene，β-C）具有抗突变作用，抑制多种动物性肿瘤的发生及生长，也可抑制体外肿瘤细胞的增殖。β-C这一作用不同于转化成VitA的作用．可能与其自身抗氧化性、促进免疫及抑制癌基因表达等有关。     

β—胡萝卜素对促癌剂抑制细胞间隙连接通讯的影响

研究了β－胡萝卜素在Ｓｗｉｓｓ ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中的代谢情况及其对促癌剂ＴＰＡ抑制ＮＩＨ／３Ｔ３细胞间隙连接通讯的影响，结果显示：β－胡萝卜素在ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中不能转化为视黄醇，对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＧＪＩＣ功能有诱导作用，同时对ＴＰＡ抑制ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＧＪＩＣ功能有不同程度的拮抗作用。提示β－胡萝卜素的抗癌作用可能与细胞ＧＪＩＣ功能变化有关。     

X线对小鼠毛髓细胞数影响及β—胡萝卜素的防护作用

作者观察了受到不同剂量Ｘ射线照射后ＢＡＬＢ／ｃ鼠毛髓细胞计数的变化，并研究了β－胡萝卜素对毛髓细胞的辐射防护作用。结果表明：１～Ｇｙ照射后ＭＣＣ随剂量增加而降低，每Ｇｙ平均减少１５．８７％。２．５Ｇｙ照前３天以５０ｍｇ／ｋｇ ＢＣ每天１次灌胃能有效地保护毛囊增殖能力，维持ＭＣＣ近正常值。     

X线对小鼠毛髓细胞数影响及β－胡萝卜素的防护作用

作者观察了受到不同剂量Ｘ射线照射后ＢＡＬＢ／ｃ鼠毛髓细胞计数（ｔｈｅｍｅｄｕｌｌａｒｙｃｅｌｌｃｏｕｎｔｓ，ＭＣＣ）的变化，并研究了β－胡萝卜素（β－ｃａｒｏｔｅｎｅ，ＢＣ）对毛髓细胞的辐射防护作用。结果表明：１～５Ｇｙ照射后ＭＣＣ随剂量增加而降低，每Ｇｙ平均减少１５．８７％。２．５Ｇｙ照前３天以５０ｍｇ／ｋｇＢＣ每天１次灌胃能有效地保护毛囊增殖能力，维持ＭＣＣ近正常值。     

β-胡萝卜素对吸烟所致大鼠支气管炎的保护作用

吸烟是慢性阻塞性肺疾病 (ＣＯＰＤ)的重要致病因素之一[1] 。但其引起ＣＯＰＤ的机理尚不完全清楚。临床上对ＣＯＰＤ也没有比较特效的早期防治方法。β 胡萝卜素是体内必需的抗氧化维生素 ,它具有增强细胞间的信息传递、刺激机体免疫功能增强等作用[2 ] 。近年来研究发现 ,β 胡萝卜素可以抑制氧自由基诱发的急性炎症反应 ,但其对慢性炎症有无作用和对体内 (ＮＯ)、白细胞介素 (ＩＬ)ＩＬ 6、ＩＬ 8含量的影响尚少见报道。一、材料和方法1 大鼠慢性支气管炎模型的复制与分组 :选用Ｗｉｓｔａｒ雄性大鼠 ,体重 2 30～ 30 0ｇ(购于首都医科…     

冠心病患者血清β-胡萝卜素及微量元素水平分析

为了解β-胡萝卜素及微量元素在冠心病(CHD)患者血清中的变化,作者对CHD患者和正常人血清β-胡萝卜素及微量元素Zn、Cu、Fe、Se等的水平进行了测定,以揭示其与CHD之间的关系,并对其意义及相互作用进行了初步分析。     

β─胡萝卜素对促癌剂抑制细胞间隙连接通讯的影响

研究了β－胡萝卜素（β－ｃａｒｏｔｅｎｅ）在ＳｗｉｓｓＮＩＨ／３Ｔ３细胞中的代谢情况及其对促癌剂ＴＰＡ（１２－ｏ－ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌ－１３－ｐｈｏｒｂｏｌ－ａｃｅｔａｔｅ）抑制ＮＩＨ／３Ｔ３细胞间隙连接通讯（ＧＪＩＣ）的影响。结果显示：β－胡萝卜素在ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中不能转化为视黄醇，对ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＧＪＩＣ功能有诱导作用，同时对ＴＰＡ抑制ＮＩＨ／３Ｔ３细胞ＧＪＩＣ功能有不同程度的拮抗作用。提示β－胡萝卜素的抗癌作用可能与细胞ＧＪＩＣ功能变化有关。     

人pre-miR-15a真核表达载体的构建及其对Raji细胞生长的抑制作用

目的 构建人pre-miR-15a真核表达载体,并研究其对Raii细胞的生长抑制作用.方法 将pre-miR-15a与目标载体(PGCSIL-GFP)定向连接,转化细菌感受念细胞,PCR鉴定阳性克隆,并测序.利用脂质体法将该载体转染Raji细胞,实验分为空白对照组、阴性对照质粒组和pre-miR-15a组(n=5).RT-PCR检测Bel-2 mRNA表达,间接免疫荧光法检测Bcl-2蛋白表达,台盼蓝细胞计数法检测细胞增殖活性.结果 PCR 阳性克隆鉴定及测序结果 均与日的序列一致.倒置荧光显微镜下见绿色荧光表达;RT-PCR法示各组间Bcl-2 mRNA表达差异无显著性(P>0.05);间接免疫荧光法示pre-miR-15a组的Bcl-2蛋白表达量较空白对照组和阴性对照质粒组显著降低(P<0.05);台盼蓝拒染法示pre-miR-15a组Raji细胞生长受抑.结论 本实验成功构建了per-miR-15a真核表达载体,且pre-miR-15a可以抑制Raji细胞生长.     

金黄色葡萄球菌不同菌株黏附和侵袭293细胞的比较

目的对金葡菌不同菌株侵袭力进行比较。方法将金葡菌各菌株与293细胞共孵育,使细菌侵袭细胞（细菌与细胞的比例为15：1）,2h后,用溶葡萄球菌素杀死细胞外的细菌,用胰酶和Triton—X100消化裂解细胞并收集裂解液计数侵入细胞内的细菌克隆形成单位CFU,比较不同菌株的侵袭力。结果临床分离株04018具有较强的侵袭力。结论金葡菌的侵袭力主要由其表达的纤连蛋白结合蛋白FnBP介导。不同菌株由于FnBP表达水平的差异具有不同的侵袭力。但在细菌的侵袭过程中,除了FnBP蛋白的参与外,可能还有其他因素的参与。     

人TRBP基因在HEK-293细胞中的表达

目的：构建携带人TRBP（TAR RNA结合蛋白）基因的真核表达载体,并将其在HEK-293细胞中表达.方法：用RT-PCR的方法扩增获得TRBP全长cDNA,然后克隆入pFLAG-CMV4真核表达载体.脂质体法瞬时转染HEK-293细胞,间接免疫荧光和Western Blot检测目的蛋白表达.结果：成功获得了全长的TRBP cDNA,构建了含人的TRBP cDNA的真核表达载体.转染HEK-293细胞后提取蛋白,经电泳观察到在Mr46000存在与目的蛋白分子质量相符的条带,该条带可被抗TRBP多克隆抗体及抗FLAGmAb特异性识别.结论：TRBP哺乳动物表达系统的建立,为进一步研究TRBP的生物学效应奠定了基础.     

Math1基因重组慢病毒的构建及其在293T细胞中的表达

目的 构建携带Math1基因的重组慢病毒载体,检测其滴度,检测其在293T细胞中的表达.方法 PCR扩增Math1基因,将其连入慢病毒栽体pLenti-GFP中;在感受态细胞DH5α中培养扩增,并行Math1基因的测序鉴定;将重组的慢病毒四质粒共转染293T细胞,收获并浓缩病毒;感染293T细胞和提取细胞DNA后用实时定量PCR法检测病毒滴度.用逆转录PCR和westem blot法检测Mathl基因在感染病毒的293T细胞中的表达.结果 构建的慢病毒载体pLenti-Math1-GFP经测序分析证实基因序列正确.四质粒共转染293T细胞后,荧光显微镜下可见大量绿色荧光.包装后慢病毒测定滴度约为3X10"Tu/L.逆转录PCR和Western blot法均能检测Math1基因在感染病毒的293T细胞中的表达.结论 成功构建携带Math1基因的重组慢病毒,并能在293T细胞中表达.     

重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体转染293细胞和CD34+细胞

目的 研究重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体分别转染293细胞(人胚肾细胞)和人CD34⁺细胞后绿色荧光蛋白的表达情况。方法 用CS-3000血细胞分离机分离骨髓单个核细胞,免疫磁性分离仪纯化CD34⁺细胞,重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体分别转染两种细胞,并通过荧光显微镜、流式细胞仪对绿色荧光蛋白的表达进行分析。结果 荧光显微镜下两种细胞均可见绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪于一定时间内检测293细胞的基因转导效率最高为32.8%,CD34⁺细胞的基因转导效率最高为25%,在所观察的时间内,转染率呈先升高后降低趋势。结论 重组绿色荧光蛋白腺相关病毒载体能转染293和CD34⁺细胞,绿色荧光蛋白基因可作为良好的报告基因,为将来的干细胞基因治疗打下良好基础。     

VR1受体稳定真核表达细胞系的建立

目的：为研究VR1（Vanilloid receptor subtypel)受体的功能，建立VR1稳定真核表达细胞系。方法：采用RT－PCR的方法从大鼠脊髓克隆VR1 cDNA，并构建VR1表达载体。将VR1质粒通过电穿孔方法转染HEK293细胞，经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆。采用RT－PCR，Western blotting，免疫荧光，细胞Ca^2 浓度测定等方法检测VR1受体的表达。结果：筛选的阳性细胞克隆含有VR1的mRNA及蛋白质，细胞Ca^2 浓度的改变提示VR1受体的功能性表达。结论 建立了稳定表达VR1受体的真核表达细胞系。     

HEK-293细胞复苏培养及冻存

目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础。方法复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞。结果人胚肾293细胞在普通培养条件下生长良好,6h后大部分细胞已经贴壁,8h细胞已完全贴壁。结论人胚肾293细胞采用改进方法复苏培养及冻存是简便可行的,为进一步行干细胞标记实验奠定了坚实的前期基础。     

pB2 R-Venus 重组真核载体的构建及在 HEK293T细胞中的表达

目的：构建带有黄色荧光蛋白突变体 Venus标签的人缓激肽2型受体（bradykinin receptor 2, B2R）真核表达载体,用于B2R与相关受体及蛋白的相互作用、B2R受体介导的信号转导机制的研究等。方法根据人B2R基因序列设计引物,以质粒pcDNA3．1-B2R为模板,PCR扩增目的基因人B2R。EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切扩增产物及质粒pVenus-N1,经回收、连接、转化,获取重组质粒。对重组质粒进行酶切、测序鉴定。转染重组质粒至 HEK293T细胞,荧光显微镜观察受体B2R的细胞定位,蛋白印迹法检测目的蛋白人B2R蛋白的表达。结果 PCR扩增出了1条长度为1176 bp的基因片段,测序结果与GenBank （AY275465）相同。荧光显示B2R表达于质膜。Western blot结果显示,实验组蛋白印迹条带与目的蛋白大小相同,为44kDa。结论成功构建了pB2R-Venus重组真核表达载体,瞬时转染成功,获得了转染有重组质粒的HEK293T细胞。成功构建的重组质粒pB2R-Venus可用于后续BRET、FRET等实验研究,有助于B2R介导的信号转导机制的探讨和药物靶点的寻找。     

溶质转运体26A家族在HEK-293细胞中的表达和功能

目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族（SLC26A）的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法
构建多种人类SLC26A转运体－绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞（HEK-293）中。用
全细胞膜片钳技术记录表达有SLC26A蛋白的HEK-293细胞的膜电容。结果每个SLC26A转运体均能在HEK-293细胞的细
胞膜上表达,并表现出和离子相互作用的生理功能。SLC26A转运体与离子结合的数目与其在细胞膜上的表达程度正相关并
具有一定的离子选择性。结论SLC26A转运体家族能够在HEK-293 细胞上表达并具有与转运离子结合的生理功能。在
HEK-293细胞系中表达SLC26A转运体家族的研究方法,为进一步研究此家族成员转运功能及其转运机制提供了可能。
     

HEK293T细胞扩增重组腺病毒研究

目的探讨HEK293T细胞扩增重组腺病毒的可行性。方法重组腺病毒保存液稀释后感染HEK293T细胞,观察细胞病变效应,半数组织培养感染量测定扩增病毒的滴度,通过体外感染心肌细胞,成纤维细胞验证其感染活性。结果HEK293T细胞可以扩增带有绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒,病毒滴度为5×10^6PFU/mL,扩增后的腺病毒可以感染体外培养的心肌细胞和成纤维细胞。结论HEK293T细胞可有效扩增带有绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒。