电针对慢性内脏痛大鼠脊髓背角降钙素基因相关肽的影响

目的:检测电针对慢性内脏痛大鼠脊髓背角内降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)表达的影响。方法:SD大鼠随机分成正常对照组,慢性内脏痛模型组和模型加电针组,每组6只。慢性内脏痛模型采用新生幼鼠结直肠刺激方法制备;模型加电针组选取双侧"足三里"和"上巨虚",疏密波,强度1mA,持续30min,隔日一次,持续四次。记录结直肠扩张刺激下腹外斜肌放电幅值;免疫组织化学法检测各组大鼠胸腰段、腰骶段脊髓背角内CGRP的表达变化。结果:电针能够显著降低内脏痛大鼠结直肠扩张刺激诱导的腹外斜肌放电幅值(P0.05);免疫组织化学染色法显示:CGRP样免疫阳性物质的表达在模型组大鼠的胸腰段、腰骶段脊髓背角内均显著升高(P0.01),而模型加电针组的胸腰段、腰骶段脊髓背角内CGRP的表达与模型组相比有显著降低(P0.01)。结论:电针降低慢性内脏痛敏反应的镇痛机制与减少脊髓背角内CGRP样免疫阳性物质的表达有关。     

外源性NGF对大鼠坐骨神经切断缝合术后脊髓和背根节CGRP表达的影响

观察外源性神经生长因子(NGF)对坐骨神经切断立即缝合后大鼠脊髓和背根节(DRG)内不同时间点降钙素基因相关肽(CGRP)表达的影响。成年SD雄性大鼠随机分为NGF组、生理盐水(NS)组、假手术组与正常对照组。实验组动物右侧坐骨神经切断后立即缝合,每天给予NGF(400单位/kg腹腔注射),动物分别存活1、3、5、7、14、21、28d,免疫组织化学方法结合图像分析检测相应节段脊髓和背根节内CGRP的表达。结果表明,NGF处理组术侧背根节与脊髓后角内的CGRP表达明显高于同时间点的NS对照组,平均光密度值相比P<0.05。但各组中脊髓前角运动神经元内的CGRP表达没有明显变化(P>0.05)。结果提示外源性的NGF能明显增加损伤后背根节感觉神经元与损伤侧脊髓后角的CGRP表达,对CGRP在脊髓前角运动神经元内的表达没有明显影响。     

大鼠PAG内Nogo-A和CGRP参与痛觉调制的研究

目的:探讨Nogo-A在痛觉调制过程中的作用以及它在大鼠中脑导水管周围灰质(periaqueductal gray,PAG)内与降钙素基因相关肽(CGRP)和内源性阿片系统在痛觉调制过程中的相互关系。方法:选用雄性SD大鼠32只,随机等分为4组:其中空白对照组8只,分别向PAG内注射0.9%生理盐水1μl;痛敏模型对照组、吗啡组和纳洛酮组各8只,首先单侧后爪掌心皮下注射1%的福尔马林0.1 ml复制痛敏大鼠模型,3 d后分别向PAG内注射等量0.9%生理盐水、吗啡和纳洛酮各1μl。60 min后取大鼠大脑PAG区,采用免疫组化法观测各组大鼠PAG内CGRP和Nogo-A免疫反应阳性神经元的表达差异。结果:与空白对照组比较,模型对照组大鼠PAG内CGRP的表达量显著增高(P<0.01),Nogo-A显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,吗啡组大鼠PAG内CGRP的表达量显著降低(P<0.05),Nogo-A显著增高(P<0.01),而纳洛酮组PAG中CGRP的表达量显著增高(P<0.01),Nogo-A显著降低(P<0.05)。结论:Nogo-A和CGRP参与了痛觉调制过程,但Nogo-A与CGRP之间有反向调节作用;Nogo-A与内源性阿片系统之间可能也存在一定的功能联系。     

大鼠脊神经后根切断后脊髓和背根神经节CGRP的表达变化

为观察大鼠脊神经后根切断后相应背根神经节(DRG)和脊髓节段CGRP的表达变化,本研究采用25只健康成年SD大鼠随机分为正常对照组、假手术对照组和L4、5后根切断后3d、7d和14d组(n=5),用免疫组织化学方法结合图像分析技术检测各组相应DRG和脊髓节段内CGRP的表达变化。结果如下:后根切断后3d、7d和14d伤侧DRG内CGRP表达较对照组和对侧明显增强;后根切断后3d脊髓后角CGRP免疫阳性纤维减少,7d、14d时进一步减少;后根切断后3d脊髓前角运动神经元内CGRP表达增加,免疫阳性细胞数增多,7d和14d时表达进一步增强。以上结果提示,脊神经后根切断后DRG和脊髓CGRP表达变化呈现一定的时空模式,可能参与了神经损伤后的再生过程。     

外源性bFGF对坐骨神经钳夹损伤后脊髓DRG感觉神经元CGRP变化的影响

目的:观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤后大鼠背根神经节(DRG)和脊髓后角内降钙素基因相关肽(CGRP)变化的影响。方法:成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、阳性对照组和bFGF组。阳性对照组动物右侧坐骨神经钳夹损伤,bFGF组动物右侧坐骨神经损伤后给予bFGF,在不同时间点运用免疫荧光技术结合图像分析检测相应背根节和脊髓后角CGRP的变化。结果:bFGF处理组术侧DRG内中小型神经元和脊髓后角内的CGRP表达明显高于阳性对照组,积分光密度值相比(P<0.05);但DRG内大型神经元内CGRP表达没有明显变化。结论:结果提示外源性bFGF能明显促进损伤后同侧DRG中小型神经元和脊髓后角CGRP的合成,对DRG内大型神经元中CGRP的表达没有明显影响。     

三七总皂苷预处理对炎性内脏痛大鼠磷酸化细胞外信号调节激酸表达的影响

目的:研究三七总皂苷(PNS)预处理对磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)在炎性内脏痛大鼠脊髓及背根节的表达影响,探讨PNS对炎性内脏痛影响的可能机制。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、PNS预处理组、生理盐水(NS)预处理组,处理后15 d行乙酸腹腔注射造模,每15 min记录内脏痛指数;取小肠组织进行H-E染色,光镜下计数粒细胞数目;应用免疫组织化学检测脊髓及背根节p-ERK的表达。结果:乙酸腹腔注射后,小肠炎性反应明显增强,小肠黏膜下层增厚,但各时间点与对照组比较,实验组粒细胞数无差异;120 min时PNS预处理组内脏痛指数明显低于NS预处理组;两预处理组脊髓后角pERK表达较正常组明显增高,30、60 min时PNS预处理组脊髓后角及相应背根节p-ERK表达明显高于NS预处理组。结论:PNS预处理缓解乙酸致炎性内脏痛可能是通过调节中枢神经系统起作用的,且可能与抑制p-ERK表达有关。     

DA和SD大鼠在福尔马林诱发痛反应和机制的差异观察

目的:观察福尔马林诱发的Dark-Agouti(DA)和Sprague Dawley(SD)大鼠痛反应差异。方法:分别采用行为学、电生理学、免疫组织化学方法观察福尔马林痛模型中DA和SD大鼠的伤害性行为、初级传入神经放电和脊髓背角磷酸化的c AMP反应元件结合蛋白(phosphorylated c AMP response element binding protein,p CREB)的表达。结果:DA和SD大鼠福尔马林注射后均出现典型的双相性伤害性行为,但是DA大鼠的抬舔爪行为更显著(P0.01,P0.001),SD大鼠的轻触时间和缩爪次数更显著(P0.01,P0.001)。福尔马林注射后1h内,DA和SD大鼠L5背根Aδ和C类纤维放电显著增加,以DA大鼠更显著(P0.01)。福尔马林注射后DA和SD大鼠L4/L5脊髓背角Ⅰ-Ⅱ和Ⅴ-Ⅵ层p CREB表达均显著增加,但是SD大鼠更显著(P0.001)。结论:结果提示DA和SD大鼠在福尔马林诱发的疼痛模型中存在不同的伤害性行为反应,并且其机制也不同。     

CGRP样阳性终末在脊神经结扎模型大鼠脊髓背角浅层内的表达变化

目的:观察降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)样阳性终末在L5脊神经结扎模型大鼠脊髓背角浅层内的表达变化。方法:建立大鼠L5脊神经结扎模型(L5 spinal nerve ligation model,SNL),建模后分别在1、3、5、7 d和14 d不同时间点通过von Frey丝检测大鼠后爪的机械性痛敏,然后在大鼠分别存活7 d和14 d时灌注取材,采用免疫组织化学染色结合平均光密度(optical density,OD)分析的方法以及免疫电镜标记技术检测脊髓背角浅层内CGRP样阳性物质的表达变化。结果:(1)行为学结果显示:模型组大鼠的机械性痛敏的阈值明显降低,与正常组比较有显著性差异(p<0.05),提示建模成功;(2)免疫组织化学染色显示:正常大鼠脊髓背角浅层内存在大量密集分布的CGRP样阳性终末,主要分布于脊髓背角的I层和II层。SNL模型大鼠在结扎7 d和14 d后脊髓背角浅层内CGRP样阳性产物的表达明显增多,其平均OD值分别为38.30±3.11和35.70±2.36,与正常对照组(25.10±2.30)比较,具有显著性差异(P<0.05);(3)电镜结果显示:CGRP样免疫活性物质只分布于轴突终末内,且主要与树突结构形成非对称性突触。结论:CGRP样免疫阳性物质在SNL模型大鼠脊髓背角浅层内的表达增加,提示CGRP样阳性终末在伤害性信息的传递中具有重要作用。     

慢性坐骨神经结扎神经痛大鼠脊髓背角和背根神经节p-JNK表达及意义

目的： 观察磷酸化应激激活蛋白激酶(p-JNK)在神经病理性疼痛大鼠脊髓背角和背根神经节表达的变化,探讨慢性神经痛的发生机制。方法: 采用坐骨神经慢性结扎损伤（CCI）模型,18只SD大鼠随机分为3组（n=6）。对照组（Con组）：不接受任何手术操作;假手术组（sham组）：只分离坐骨神经;CCI组：结扎坐骨神经。于术前2 d和术后1、3、5、7、10、14 d 测定机械痛阈（MWT）和热痛阈（TWL）,术后3、7、14 d取大鼠术侧L4、L5脊髓背角和背根节, 免疫组化法分析脊髓背角和背根节p-JNK动态变化。结果: CCI组较Con组术后各时点TWL和MWL明显降低（P<0.05）。CCI组较Con组各时点脊髓背角和背根神经节p-JNK表达明显增加（P<0.01）。结论: 初级感觉神经元中p-JNK表达可能是神经损伤的因素之一。     

穴位电针对慢性神经病理性疼痛大鼠脊髓前列腺酸性磷酸酶表达的影响

目的 观察电针对神经病理性痛大鼠脊髓前列腺酸性磷酸酶（PAP）的表达,及腺苷含量及大鼠痛阈变化的影响,探讨电针镇痛机制。方法 21只雄性SD大鼠采用慢性坐骨神经压缩模型(CCI),取“足三里”及“太冲”穴。设假手术组（sham组）、模型组(CCI组）和电针治疗组（EA组）。采用行为学检测大鼠术前、术后第7天和电针治疗后大鼠机械痛敏值和热敏痛阈值变化,采用Real-time PCR技术检测脊髓PAP mRNA的表达,高效液相色谱法检测脊髓腺苷含量。结果 相比CCI组大鼠,电针组大鼠机械痛敏值和热敏痛阈值明显提高（P<0.05, P<0.05）。电针组大鼠脊髓PAP mRNA表达和腺苷含量比CCI组大鼠显著增加（P<0.05）。与CCI组大鼠相比,电针组大鼠脊髓腺苷含量增加（P<0.01）。结论 电针可提高神经病理性痛大鼠机械痛阈值和热敏痛阈值,其机制可能是通过增加脊髓PAP mRNA的表达和腺苷含量发挥作用。     

不同延迟时间后修复大鼠坐骨神经缺损对CGRP表达的影响

目的：观察大鼠坐骨神经缺损不同延迟时间后修复对降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响.方法：大鼠右侧坐骨神经切断分别预变性0、3、7、14和21 d后（n=6）以左侧自体新鲜神经桥接,神经再生6周后用免疫组化方法检测CGRP在脊髓和背根节（DRG）的表达变化.结果：术侧DRG CGRP表达均明显增强,其中21 d组明显强于0 d组（P＜0.05）;术侧脊髓后角CGRP免疫阳性面积明显增大,21 d组明显大于0 d组（P＜0.05）,其CGRP表达在0 d、3 d和21 d组均强于对侧（P＜0.05）,而3 d和21 d组又明显强于0 d组（P＜0.05）;3d组脊髓前角的CGRP表达在明显强于0 d组和对侧（P＜0.05）.结论：预变性处理可以影响CGRP的表达从而影响神经再生过程.     

Studies on the changes of c-fos protein in spinal cord and neurotransmitter in dorsal root ganglion of the rat with an experimental peripheral neuropathy

Animal models for human chronic pain syndromes have been developed and widely used for pain research. One of these neuropathic pain models by Kim and Chung (1992) has many advantages for operation and pain elicitation. In this neuropathic model we have examined the c-fos protein, substance P, CGRP immunoreactivity in dorsal root ganglia and dorsal horn. 50 Sprague-Dawley rats were used for this study. L5 and L6 spinal nerves were ligated tightly to produce the neuropathic pain model. After 2, 4, 8, 16, and 24 hours and 1 week of surgery, rats were anesthetized and sacrificed by perfusion. After confirmation of the roots transected by the surgery, the L5 and L6 dorsal root ganglions and spinal cord were removed and processed for immunohistochemistry. All tissue sections were immunohistochemically stained for substance P, CGRP and c-fos using the peroxidase-antiperoxidase (PAP) method. The number of immunostained substance P and CGRP dorsal root ganglion cells and c-fos immunoreactive dorsal horn cells were counted and analyzed statistically with Mann-Whitney U test. The results are as follows. The number of c-fos protein immunoreactive neurons in the superficial layer of dorsal horn were increased markedly 2 hours after operation, and gradually decreased to normal level 1 week after operation. The number of c-fos protein immunoreactive neurons in the deep layer of the dorsal horn gradually increased to a peak 24 hours after operation, then decreased to the normal level 1 week after operation. The number of substance P and CGRP immunoreactive L5 and L6 dorsal root ganglion neurons were decreased markedly 1 week after the pain model operation. In conclusion, after neuropathic pain model operation, c-fos proteins were immediately expressed in the superficial layer of spinal dorsal horn, thereafter c-fos proteins in the deep layer of spinal dorsal horn were expressed. CGRP and substance P immunoreactive neurons in DRG were decreased markedly 1 week after neuropathic pain model operation. These decrements do not coincide with the other chronic pain models, which show great increases in these pain transmitting substances. Therefore, the relationship between pain and c-fos, SP and CGRP should be investigated further.     

与坐骨神经和盆神经对应的后根节中CGRP、SP、NOS样阳性神经元分布特点分析——荧光金逆标和荧光免疫组化结合的研究

为了探索大鼠坐骨神经（躯体性）和盆神经（内脏性）内与传递痛信号有关的初级传入神经元在后根节内的分布特点,本研究采用荧光金逆行追踪与免疫荧光组化技术相结合的方法,对ＣＧＲＰ能、ＳＰ 能和ＮＯＳ样神经元在相应的后根节内（坐骨神经,Ｌ４～Ｌ６ ;盆神经,Ｌ６～Ｓ１）的分布状况进行了分析。结果表明：（１）坐骨神经和盆神经初级传入神经元中有相当数量的ＣＧＲＰ和ＳＰ样阳性细胞,与这二者相比,ＮＯＳ样细胞数量稀少;（２）盆神经初级传入神经元中ＣＧＲＰ／ＦＧ、ＳＰ／ＦＧ、ＮＯＳ／ＦＧ 双标细胞的比率高于坐骨神经,而其前两种双标细胞与各该活性物质单标细胞的比率则低于坐骨神经;（３）三种物质与ＦＧ 的双标神经元以小型为主,少有中型细胞。因为既往的研究证明,分布有大量的ＣＧＲＰ、ＳＰ、ＮＯＳ样终末的骶髓后连合核（ＳＤＣＮ）接受盆腔脏器伤害性信息传入,并且ＣＧＲＰ、ＳＰ都以外周来源为主。故本文结果进一步核实了ＳＤＣＮ 区接受来自外周的ＣＧＲＰ、ＳＰ投射,且确为经盆神经传入的细纤维。     

Time-related decrease of substance P and CGRP in central and peripheral projections of sensory neurones in Mycobacterium leprae infected nude mice: a model for lepromatous leprosy in man.

We have previously shown the depletion of cutaneous calcitonin gene-related peptide (CGRP)- and substance P-containing nerves in human leprosy. The aims of this study were to investigate the temporal effects of leprosy on nerves in skin and spinal cord. Tissues were taken from nude mice, 6 and 12 months after inoculation of Mycobacterium leprae into the hind footpads, and from age-matched controls. Sections were immunostained with antisera to substance P or CGRP. After 6 months of infection, substance P- and CGRP-immunoreactive nerves were reduced in skin from all body areas; by 12 months, the reduction was substantially greater. In the spinal cord, sensory fibres immunoreactive for substance P had decreased compared with controls at 6 and 12 months [by 60 per cent (0.022 mm2) and 80 per cent (0.048 mm2), respectively, P less than 0.001], as with CGRP [30 per cent (0.018 mm2) (P less than 0.02) and 40 per cent (0.028 mm2) (P less than 0.01), respectively]. CGRP immunoreactivity was completely absent in motor neurones after 12 months of infection. Loss of CGRP- and substance P-immunoreactive fibres in skin and spinal cord, and CGRP in motor neurones is in accord with impaired pain sensation and muscle weakness in leprosy.