RAEB型骨髓增生异常综合征患者血清蛋白质组学研究

目的 利用蛋白质组学方法,寻找与RAEB(refractory anemia with excess blasts in transformation)型骨髓增生异常综合征(MDS)相关的特异性血清蛋白质标志物.方法 应用双向电泳分别分离RAEB型MDS、急性髓性白血病及正常人的血清蛋白,通过对3组图谱进行比较分析,识别差异反应的蛋白质点,根据差异反应蛋白质点位置在平行胶上找出匹配的蛋白质点.并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定.通过数据库搜索鉴定出差异反应的蛋白质.结果 以MDS组为参照,经过胶图分析得到7个差异蛋白质点,质谱鉴定提示4种蛋白有统计学意义,包括二肽基肽酶(dipeptidylpeptidase,DPP/CD26)、DNA聚合酶、未命名蛋白2044和类白蛋白物质.结论 以2-DE为基础的血清蛋白质组学方法可用于筛选与MDS相关的蛋白质标志物;DPP在RAEB型MDS中的异常高表达提示DPP/CD26可能与进展类型的MDS相关.     

SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术建立胃癌血清特异性标志物诊断分类树研究

目的:观察胃癌手术前后血清蛋白质谱的变化,筛选能够快速诊断胃癌的特异性标志物。方法:采用IMAC#3蛋白质芯片和表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)蛋白质芯片技术,对46例胃癌患者和40例正常人的血清蛋白质谱进行分析。结果:胃癌术前血清与正常人血清蛋白质谱有14个蛋白质表达量有明显差异。以热休克蛋白27、葡萄糖调节蛋白、抑制素、蛋白质二硫化物异构酶A 3这4个蛋白质所组成的模板,可将胃癌与正常人正确分组,利用该模板建立胃癌诊断的分类树模型用于诊断胃癌的灵敏度95.7%,特异性92.5%,术后血清蛋白质谱中,原表达上调的蛋白质明显下调。结论:SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术为建立蛋白质模板用以诊断胃癌提供了可靠的技术平台。     

应用液体芯片-质谱技术筛选肺鳞癌患者血清标志蛋白

目的 探讨液体芯片-质谱技术(CLINPROT系统)在肺鳞癌患者血清标志蛋白筛选中的应用.方法 应用CLINPROT系统检测34例肺鳞癌患者(肺鳞癌组)、46例良性肺疾病患者(良性对照组)及44名正常人(正常对照组)的血清蛋白表达谱,应用FlexAnalysis 3.0软件进行数据分析,筛选差异表达蛋白质;采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术鉴定标志蛋白.结果 分别比较肺鳞癌组与正常对照组以及肺鳞癌组与良性对照组血清蛋白表达谱,在质荷比(M/Z)800～10 000范围内,前者筛选出96个差异表达蛋白峰,其中M/Z为4054.13和4267.46的蛋白峰在2组间差异最大,用这2种差异蛋白建立的坐标系具有良好的区分肺鳞癌与正常人的能力;后者筛选出99个差异表达蛋白峰,其中M/Z为5065.27和4054.02的蛋白峰在2组间差异最大,用这2种差异蛋白建立的坐标系具有良好的区分肺鳞癌与良性肺疾病的能力.取M/Z为1778和1865的蛋白行LC-MS/MS鉴定,结果提示二者可能均为补体C3片段或C3前体.结论 肺鳞癌患者与正常人以及与良性肺疾病患者之间血清蛋白表达谱存在明显差异,应用液体芯片-质谱技术可能从血清中筛选出敏感性高、特异性强的肺鳞癌标志蛋白.     

肝癌转移相关分子的血清蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛查血清中与肝癌转移相关的蛋白质分子.方法 收集具有相同疾病背景原发性肝癌(肝内转移和未转移)患者以及正常人的血清(每组各20例),经过去高丰度蛋白预处理后.进行双向电泳(2-DE)分析,筛选出肝内转移肝癌与未转移肝癌相比较有显著性差异的蛋白质斑点,进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定;使用Western blotting验证蛋白质组分析的结果.结果 对3组血清的双向电泳图谱分析,与正常人和未转移肝癌患者的血清相比.在肝内转移肝癌血清中共筛选出12个差异大于2倍的蛋白质斑点,MALDI-TOF/TOF成功鉴定出3个表达下调的蛋白质[包括Inter-alpha (globulin)inhibitor H4、Complement factor H-related protein 1 precursor(FHR-1)、apolipoprotein E]和一个上调蛋白(Cytokeratin 9,CK9).Western blotting对所有样本血清中的CK9进行了检测,结果与蛋白质组分析结果相一致.结论 肝癌的转移与多种蛋白表达改变相关,其中CK9的高表达可能与肝癌的转移有关,可能作为肝癌转移相关的潜在血清标志物.     

人类巨细胞病毒感染的特异性血清蛋白差异表达

目的应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术,筛选在人类巨细胞病毒(HCMV)血清差异表达蛋白。方法收集HCMV感染者与正常人的血清各10例,去除高丰度蛋白,iTRAQ试剂标记后采用液相色谱-串联质谱技术鉴定特异性蛋白,并比较蛋白的表达差异。结果共鉴定出362种蛋白质。对比发现有49种血清蛋白的表达差异超过两倍,其中蛋白表达显著上调的有19种,显著下调的有30种;这些差异蛋白中有6种与HCMV感染具有较高的相关性,分别是:脂联素、α-1抗胰蛋白酶、载脂蛋白E、C反应蛋白、结合珠蛋白和血清淀粉样蛋白A1。结论定量的血清蛋白质组学分析,可有效地获得HCMV感染者与正常人的血清蛋白质组差异表达图谱,筛选出与HCMV感染相关的特异性蛋白,为HCMV的早期诊断与治疗提供依据。     

新生儿神经管畸形的血清蛋白组学研究

目的 寻找神经管畸形新生儿血清中异常表达的蛋白质。 方法 通过二维凝胶电泳分离神经管畸形新生儿及正常新生儿血清,用PDQuest图像软件比较电泳图谱中的异常蛋白质点,用MALDI TOF/ TOF串联质谱仪分析蛋白质,所得的质谱图通过GPS软件在Mascot数据库中检索并鉴定蛋白质。结果 筛选出35个表达差异的蛋白质点,其中有8个蛋白质点表达上调,27个蛋白质点表达下调。选取四个蛋白质点进行鉴定,其中结合珠蛋白前体表达升高, HP protein, 血清载脂蛋白A-1前体及immunoglobulin heavy constant gamma 1三种蛋白表达均降低。 结论 神经管畸形可以导致血清中多种蛋白的的异常表达。     

结直肠癌患者与正常人血清蛋白质双向凝胶电泳差异分析

目的 利用血清蛋白质组学技术分析结直肠癌患者与正常人血清蛋白质表达谱的差异,寻找结直肠癌相关血清标志物.方法 分别采用pH3～10和pH4～7的IPG干胶条,在优化的实验条件基础之上,利用双向凝胶电泳(2-DE)分离结直肠癌患者和正常人血清蛋白质,硝酸银染色,获取图像后PDQuest软件分析差异表达的血清蛋白质点.结果 采用pH值3～10的胶条分离血清蛋白共有17个,结直肠癌组表达量上调的蛋白质点7个,表达量下调的蛋白质点7个.采用pH值4～7的胶条分离血清蛋白共有13个,结直肠癌组表达量上调的蛋白质点8个,表达量下调的蛋白质点5个.结论 所筛选的差异蛋白质点为进一步结直肠癌相关血清蛋白质的鉴定和其他肿瘤血清蛋白质学研究奠定了良好的基础.     

利用2DE-MS技术筛选和鉴定大肠癌血清标志物

目的 利用2DE-MS技术对大肠癌患者血清和正常人血清蛋白进行比较分析,筛选和鉴定差异蛋白.方法 收集正常人(n=10)和大肠癌患者(n=15)术前血清,进行去除白蛋白和免疫球蛋白及脱盐浓缩预处理,应用2DE-PAGE分离处理后血清蛋白,比较两者的差异蛋白质点,采用MALDI-TOF分析鉴定差异蛋白质.结果 血清经预处理后,可提高样品的上样量,2DE-PAGE图谱的蛋白质点数明显增加,水平条带明显减少.大肠癌患者血清中共筛选2个差异的蛋白点,经质谱鉴定为转甲状腺素蛋白( transthyretin,TTR)和细胞角蛋白1(cytokeratin-1,CK-1).其中TTR在大肠癌患者血清中为低表达,而CK-1为高表达.大肠癌患者血清中TTR含量为(245.87±60.72) mg/L,明显低于大肠腺瘤组和正常血清组[分别为(299.53±67.91)、(311.31±67.01) mg/L,P＜0.01].结论 2DE-MS技术是筛选和鉴定疾病血清标志物的良好工具,TTR可能是大肠癌潜在的血清标志物.     

糖尿病肾病大鼠血浆差异表达蛋白的质谱分析

目的 探讨应用比较蛋白质组学分析糖尿病肾病大鼠血浆的差异表达蛋白,寻找和糖尿病肾病发生相关的蛋白质.方法 建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,将DN模型组和正常组大鼠血浆采用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离血浆蛋白,经PD-Quest软件分析结合人工对比确认差异蛋白点,MALDI-TOF/TOF鉴定差异表达的蛋白. 结果 成功建立2-DE血浆蛋白图谱,经质谱鉴定出8种差异蛋白,这些差异蛋白主要与氧化应激、炎症反应及脂质代谢紊乱等相关. 结论 双向电泳质谱技术可有效筛选糖尿病肾病相关蛋白,为进一步早期诊断提供依据.     

应用蛋白质组学技术筛选胰腺癌血清肿瘤标志物

目的:比较胰腺癌患者与健康志愿者血清蛋白的差异以寻找候选血清肿瘤标志物,为胰腺癌早期诊断提供依据.方法:通过免疫亲合柱去除丰度最高的14种血清蛋白,用双向电泳分离蛋白并比较差异.选取在胰腺癌患者血清中明显差异表达蛋白点,行质谱鉴定和生物信息学分析.结果:建立了稳定性、重复性良好的凝胶蛋白图谱.对筛选出的在胰腺癌患者血清中明显差异表达的78个蛋白点,共有54个蛋白点被成功鉴定,其中胰腺癌患者血清中高表达者29个,低表达者25个.结论:胰腺癌患者、健康志愿者血清蛋白之间存在明显差异,通过蛋白质组学方法可筛选并鉴定出这些差异蛋白,后者有望为早期诊断胰腺癌提供依据.