血管内皮细胞生长因子基因转染诱导大鼠骨髓基质干细胞分化为内皮细胞

目的：评价经腺病毒介导的血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因转染后的大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)诱导成内皮细胞的可行性。方法：从大鼠骨髓中分离培养获取BMSCs，分别经Adv-VEGF、Adv-GFP转染，Western印迹分析检测VEGF蛋白的表达情况．细胞生长曲线测定BMSCs增殖特性．同时进行免疫表型鉴定．并与未转染细胞组比较。结果：Adv-VEGF转染组BMSCs可分泌VEGF蛋白，而其杂两组不分泌VEGF蛋白。转染VEGF基因后,BMSCs生长速度变快．向内皮细胞分化。与Adv-VEGF转染组BMSCs相比．Adv-GFP转集细胞组、未转染细胞组的BMSCs生长速度较慢．未有向内皮细胞分化的证据。结论：腺病毒介导的VEGF基因转繁可诱导BMSCs分化成内皮细胞。     

人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究

目的探讨人血管内皮细胞生长因子165（hVEGF165）基因转染骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）及对其影响。方法体外分离、培养、鉴定大鼠骨髓EPCs,ELISA检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,MTT法检测对其增殖的影响。结果FITC-UEA-I和DiI-ac-LDL荧光双染证实分化的EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组EPCs培养基上清中表达VEGF,hVEGF165基因转染促进EPCs增殖,注射转基因EPCs的大鼠皮下局部血管增加。结论hVEGF165基因可成功转染EPCs,并且具有血管内皮增殖刺激活性,为进一步研究hVEGF165基因修饰EPCs治疗血管内膜损伤性疾病提供实验依据。     

Ad.ANG体外转染骨髓基质细胞表达产物对血管内皮细胞生长的促进作用

目的:研究Ad.ANG转染骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的转染效率、产物表达和其表达产物的促血管内皮细胞生长作用。方法:体外培养扩增SD大鼠BMSCs,通过转染β-半乳糖苷酶基因评价腺病毒转染BMSCs的转染效率;通过Western印迹分析和ELISA检测血管生长素(ANG)在细胞内表达和细胞外分泌情况;通过细胞计数的方法研究转染Ad.ANG后的BMSCs培养上清的促内皮细胞生长作用。结果:腺病毒对于BMSCs具有很高的转染效率,转染倍数为50时,转染效率>95％,而且对细胞生长没有影响。Ad.ANG转染BMSCs后可以获得很高的表达水平,第7天达表达高峰[(1 086.808±83.301 pg/ml],15 d后仍可检测到蛋白表达。含有ANG的培养上清与对照组相比具有明显的促血管内皮细胞生长作用(P相似文献   

重组逆转录病毒hVEGF165基因转染对人骨髓基质细胞成骨影响

目的:观察重组逆转录病毒人血管内皮生长因子165(retrovirus pLXSN/hVEGF165)基因转染对人骨髓基质细胞(hM-SCs)成骨能力的影响。方法:从健康志愿者全骨髓中分离培养人hMSCs,体外扩增纯化后随机分为4组:①retrovirus pLXSN/hVEGF165组:培养液中加入人血管内皮生长因子基因重组逆转录病毒1×1010OPU/ml,孵育24h后换普通培养液继续培养;②retrovirus pLXSN组:培养液中加入逆转录病毒空载体,其余处理与retrovirus pLXSN/hVEGF165组相同;③阳性对照组:培养液中添加地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠;④空白对照组:不给予特殊处理。各组细胞处理后2周,免疫组化观察VEGF表达,Von Kossa染色检测人hMSCs中骨胶原结节形成,全自动生化分析仪检测培养上清碱性磷酸酶活性。结果:经多次换液传代,人hMSCs呈均一梭形形态。处理后retrovirus pLXSN/hVEGF165组与阳性对照组细胞形态逐渐趋于扁平,突起减少。retroviruspLXSN组和空白对照组形态无明显变化。免疫组化染色见VEGF主要在胞浆内表达,...     

bFGF基因转染骨髓基质细胞后的表达

目的用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因转染鼠骨髓基质细胞(BMSCs)，观察bFGF基因在BMSCs中的瞬时及稳定表达。方法用密度梯度离心法体外培养SD大鼠BMSCs，经传代培养，取第二代细胞，用脂质体法将bFGF真核重组表达质粒(bFGF-pcDNA3)转染，用免疫细胞化学法检测bFGF转染是否成功。结果bFGF基因能在BMSCs中瞬时及稳定表达。结论bFGF基因能转入BMSCs并稳定表达。     

血管内皮生长因子基因体外转染人脐静脉内皮细胞的实验研究

观察血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF)基因转染对人脐静脉内皮细胞的生物学作用,探讨其在人工血管抗血栓形成中应用的可行性。将真核表达质粒pCD－hVEGF165体外转染人脐静脉内皮细胞。原位杂交、免疫组化及ELISA法检测VEGF基因的表达并描绘内皮细胞生长曲线。结果发现：VEGF基因转染能明显促进内皮细胞的分裂增殖。提示VEGF基因有可能作为增强人工血管抗血栓能力的有效候选基因。     

VEGF121转染对诱导后血管内皮细胞增殖的影响

目的 探讨VEGF基因转染对VEGF诱导后血管内皮细胞生物学功能的影响,为组织工程血管构建提供血管内皮细胞的可能性.方法 应用VEGF体外诱导兔骨髓间充质干细胞定向诱导分化成血管内皮细胞后,再通过脂质体介导的方法将pCDI/VEGF121转染分化后的血管内皮细胞,通过MTT及流式细胞仪检测转染前后细胞的增殖与凋亡能力.结果 诱导培养2周后兔骨髓基质细胞转化为血管内皮细胞,VEGF基因转染血管内皮细胞后表达VEGF蛋白,转染后细胞增殖能力增加,凋亡能力下降.结论 转染VEGF是促进VEGF诱导血管内皮细胞增殖的有效途径,可望为组织工程血管构建提供血管内皮细胞衬层,为人工血管内皮化开辟一种新的途径.     

血管内皮细胞生长因子165基因转染对兔骨缺损修复的影响

目的 构建pcDNA3．1-血管内皮细胞生长因子（VEGF）165质粒,观察其对兔骨缺损修复的影响。方法构建成重组真核表达质粒pcDNA3．1-VEGF165;采用30只新西兰大白兔,制备双侧桡骨骨缺损模型,实验组以体积等大的明胶海绵置于创腔,局部直接注射稀释的质粒液200ng;对照组以同量生理盐水代替质粒液,同法处理。于术后1、2、4、6、8和12周行X线照片后获取标本,观察缺损局部组织修复及新生血管并计算微血管密度（MVD）。结果pcDNA3．1-VEGF165质粒构建成功,测序正确。术后X线：1周时两组无明显差别,实验组2周骨痂形成、骨质修复,12周时骨质已正常,对照组表现为修复迟缓;HE染色：实验组2周大量新生血管形成、通血,4周成骨细胞大量增殖、骨小梁形成,12周骨皮质改建完成,骨髓腔再通;对照组经历过程类似,但相对时间延迟,12周时骨髓腔及皮质改建尚未完成。2周时对照组及实验组MVD分别为56．1±6．1、69．1±5．4,均较1周时42．2±6．4、47．0±7．5时增加,组间及组内间差异有统计学意义（t=8．0347,P=0．0000）。结论骨缺损局部直接应用PcDNA3．1-VEGF165质粒液后,可表达并上调VEGF165,具有促进局部微血管形成、加快骨缺损修复的作用。     

转染逆转录病毒的VEGF在兔骨髓基质干细胞内的表达

目的 :检测逆转录病毒介导血管内皮细胞生长因子(VEGF1 65)基因转染兔骨髓基质干细胞 (BMSC)后目的基因表达情况及促血管生成作用 ,为进一步将其用于血管化组织工程骨构建奠定基础 .方法 :构建含VEGF基因的逆转录病毒表达载体 ,通过感染兔BMSC 使其获得稳定表达 ,使用免疫组化的方法检测其蛋白表达 ,并通过新生血管计数观察其促血管生成作用 .结果 :成功构建VEGF逆转录病毒表达载体 ,免疫组化方法显示经感染的BMSC 胞质中有阳性棕色颗粒出现 ,且动物实验显示新生血管计数明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) .结论 :采用逆转录病毒介导的基因转移技术可将VEGF基因转染至BMSC 中 ,可获得外源性蛋白的表达 ,且有明显的促血管生成作用 .     

静脉注射骨髓基质细胞对脑梗死大鼠血管内皮生长因子表达的研究

目的：观察静脉注射的骨髓基质细胞（MSC）在大脑中动脉闭塞（MCAO）再灌注模型大鼠脑内分布及血管内皮生长因子（VEGF）表达。方法：采用Longa线栓法建立Wistar大鼠MCAO再灌注模型；从大鼠后肢骨髓分离、培养MSc；CD34、CD44、CD54免疫细胞化学染色鉴定MSC；5-溴脱氧尿苷（BrdU）标记的MSC注射给动物模型，免疫组织化学染色观察BrdU阳性细胞分布及VEGF表达。结果：体外培养的MSC具有多态性和贴壁生长特性，多次传代后细胞生物学特性没有明显改变；MSC表达CD34（-）、CD44（＋）、CD54（＋）；治疗组BrdU阳性细胞主要分布于梗死灶周围。VEGF表达比对照组多（P〈0．05）。结论：静脉注射的MSC能游走、迁移至太鼠缺血脑组织并存活，同时促进VEGF表达。     

VEGF基因在兔骨髓基质细胞中的表达及活性测定

目的 探讨人血管内皮细胞生长因子(VECF)基因修饰的免骨髓基质细胞对VEGF基因的表达及表达产物的生物学活性。方法 制备真核表达质粒pAdCMV-VEGF165,以Superfect转染试剂介导VFGF基因转染兔骨髓基质细胞,收获转染后24h至6d的转染上清和细胞,采用RT-PCR技术、免疫组化SABC法检测转染细胞中外源性VECF165基因的转录及表达,用血管内皮细胞增殖试验测定转染细胞培养上清中VEGF的生物活性。结果 VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效转录VEGF165,其分泌于培养上清中的表达产物可促进血管内皮细胞增殖,具有很强的生物活性。结论 VEGF基因转染的兔骨髓基质细胞可有效表达具有生物活性的VEGF。     

人骨形态发生蛋白-2腺病毒表达载体转染人骨髓基质干细胞及对其增殖的影响

目的 :用人骨形态发生蛋白 - 2腺病毒表达载体 ( Ad- BMP- 2 )转染人骨髓基质干细胞( h BMSC) ,以探讨基因转染对 h BMSC增殖的影响。方法 :将 Ad- BMP- 2转染体外培养的成人骨髓基质干细胞 ,利用免疫组化、原位杂交染色方法检测细胞内骨形态发生蛋白 - 2 ( BMP- 2 )的表达 ,蛋白印迹法检测转染后细胞培养液中 BMP- 2分泌蛋白表达。然后通过流式细胞仪分析其对细胞增殖的影响。结果 :转染后 ,h BMP- 2基因在 m RNA水平和蛋白水平均有表达。蛋白印迹法检测到培养液中有 BMP- 2蛋白阳性表达。转染 h BMP- 2基因后 ,细胞经流式细胞仪分析 ,S期细胞比例增多 ,说明细胞 DNA的合成增加。结论 :Ad- BMP- 2可高效转染 h BMSC,且促进细胞增殖     

60Co-γ射线对小鼠骨髓基质细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的 探讨辐射对培养小鼠骨髓基质细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响及凋亡率变化。方法 采用流式细胞术和RT—PCR法。结果 经8．oGy射线照射后1h，骨髓基质细胞VEGF mRNA水平即较正常对照显著升高，12h达到高峰，24h恢复至正常水平；照射后不同时间，骨髓基质细胞凋亡率与正常对照无显著差异。结论 8．oGy^60Co—γ射线照射后骨髓基质细胞中VEGF mRNA表达增强，这可能与骨髓基质纫胞的辐射抵抗能力有关。     

骨形态发生蛋白-7基因转染骨髓基质细胞后的表达

为了观察重组人骨形态发生蛋白-7(rhBMP-7)基因转染骨髓基质细胞（BMSCs）后的表达及表达产物对BM-SCs增殖的影响，用脂质体介导法将rhBMP-7基因转染BMSCs，用逆转录PCR技术和免疫组化SABC法分别检测其瞬时表达和稳定表达；再用^3H-TdR掺入法检测基因表达产物对正常培养的BMSCs增殖的影响。结果表明：转基因细胞能高效表达外源基因，且表达时间长达4周；基因表达产物能明显促进BMSCs的增殖。该结果为基因增强的组织工程技术用于关节软骨缺损的修复提供了理论依据。     

骨髓基质细胞体外三维培养的研究

目的:建立骨髓基质细胞(BMSC)体外三维培养的方法,并观察其细胞生长形态及生物学特征。方法:制备鼠尾胶原,对BMSC进行三维培养,共聚焦显微镜观察细胞形态,MTT、ALP钙钴、苏丹Ⅲ染色观察BMSC增殖及分化。结果:三维培养的BMSC早期呈现集落生长特点,后逐渐向不同的形态转变,与二维培养相比,细胞增殖峰值提前,且向成骨及脂肪细胞分化能力增强。结论:BMSC在体外三维培养模式下生长良好,能够继续保持其自我更新能力及分化潜能。     

探索大鼠骨髓基质干细胞体外培养的方法

目的探讨体外培养大鼠骨髓基质干细胞的一些具体的方法、原则和技巧．方法通过具体的选材、取材、首次换液、换液、传代。获得大量的大鼠骨髓基质干细胞。从中探索培养的方法、原则和技巧．结果体外培养获得大量的大鼠骨髓基质干细胞．结论通过理论联系实际，遵循一定的方法、原则和技巧，在不同的环境可以快速准确的体外培养出大量的大鼠骨髓基质干细胞．     

基因芯片技术在骨髓基质细胞分化研究中的应用

基因芯片是一项应用杂交测序原理,用于基因差异表达分析、DNA再测序与分子诊断、微生物鉴定及检测等的新技术。目前其在骨髓基质细胞(BMSCs)的向软骨细胞、骨细胞、神经细胞及心肌细胞等的分化研究中发挥了极大的作用,尤其是利用BMSCs分化前后基因表达差异谱,对分化过程中的生物因子、分化靶点及分化机制得以进一步了解。中药基因组学的研究平台也日趋成熟,使得中药基础研究在基因水平得到突破。     

骨髓基质细胞体外诱导分化为内皮细胞的超微结构研究

目的采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)体外诱导骨髓基质细胞(BMSC)的方法,探讨BMSC向内皮细胞分化的可行性。方法在无菌条件下采集SD大鼠(雄性,体质量150~160g,10只)的长骨骨髓,获得骨髓细胞。实验组细胞以高质量浓度rhGM-CSF(400μg/L)为诱导剂,进行体外诱导分化;对照组培养基为常规1640培养液。培养至第8天,收集细胞后分别应用扫描电镜和透射电镜观察实验组分化后细胞的超微结构,并对分化后的细胞进行内皮细胞的鉴定。结果实验组细胞在透射电镜下可见内皮细胞结构特征及特征性的W-P小体结构,扫描电镜下可见细胞呈多边形,细胞膜表面有大量的细长丝状伪足及短小的微绒毛,符合内皮细胞的特点。结论BMSC在高浓度的rhGM-CSF诱导作用下分化的细胞具有内皮细胞的形态学特征。     

骨髓基质细胞移植治疗创伤性脑损伤研究进展

如何改善创伤性脑损伤后神经细胞的再生和神经行为的恢复,一直是困扰神经科医生的一大难题。骨髓基质干细胞具有多向分化潜能,在适宜条件下骨髓基质干细胞可分化为神经元和神经胶质细胞,促进创伤性脑损伤的修复。作用机制主要与替代受损细胞、产生内源性细胞因子和促进内源性神经干细胞增殖有关。虽然仍存在一些尚待解决的问题,但骨髓基质细胞治疗创伤性脑损伤仍是一种很有前途的治疗。     

异体骨髓基质细胞的免疫性研究

目的研究异体骨髓基质细胞（BMSCs）的免疫原性,同时探讨异体骨髓基质细胞作为组织工程种子细胞的可行性。方法抽取大耳白兔胫骨结节及股骨转子处骨髓,经密度梯度离心,贴壁筛选,获取BMSCs并培养、扩增。24只成年新西兰兔随机分成两组,每组12只,造成双侧12mm桡骨缺损,A组缺损区移植吸附异体BMSCs的明胶海绵,B组缺损区移植吸附自体BMSCs的明胶海绵。分别于术后2、4、8周抽取外周静脉血,样本用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群CD^＋4、CD^＋8的阳性率及CD^＋4／CD^＋8比值;于术后第2、4、8、10周拍摄X线片动态观察新生骨痂生长及骨组织愈合情况,于术后第2、4、8、10周取材进行组织学染色,观察骨缺损修复过程中的组织形态学变化。结果术后第2、4、8周A组、B组外周血T淋巴细胞亚群CD^＋4、CD^＋8的阳性率和CD^＋4／CD^＋8比值三者差异均无显著性（P〉0．05）;组织形态学显示A组无明显淋巴细胞浸润,A组与B组新骨形成方式及骨愈合时间两者无明显差异（P〉0．05）。结论异体骨髓基质细胞移植免疫性低,可作为组织工程理想的种子细胞。