大鼠脑出血后血肿周围脑水肿与 Mip1 表达的关系

摘要： 目的 通过分析大鼠脑出血（ICH）后血肿周围脑组织中 Mip1 的表达, 探索 Mip1 对脑水肿的保护作用。 方法 90 只雄性 SD 大鼠随机分为假手术组（n=15）和 ICH 组（n=75）, ICH 组再根据造模后脑出血时间均分为 ICH 6 h、 12 h、 1 d、 3 d 和 7 d 组。应用自体股动脉血液建立大鼠尾状核脑出血模型。于上述时点断头处死大鼠, 取血肿 周围脑组织。采用 HE 染色观察血肿周围脑组织病理形态学变化, 干/湿质量法测定脑含水量 （BWC）, 免疫组化法检 测 Mip1 蛋白的表达。结果 脑出血后血肿周围区域神经元胞体明显变小, 胞浆淡染, 胞质内尼氏体明显减少, 细胞 周围出现水肿裂隙, 而假手术组脑组织神经细胞形态未见明显变化。脑出血 6 h 后脑含水量逐渐增高, 在 3 d 时达 高峰 （均 P＜0.05）, 7 d 时大致恢复正常 （P＞0.05）。大鼠脑出血后脑组织血肿周围有大量胞质或胞核呈棕色的 Mip1 阳性细胞分布, 脑出血 6 h 后 Mip1 蛋白表达水平较假手术组明显升高（均 P＜0.05）, 至 7 d 时大致恢复正常（P＞ 0.05）。结论 脑出血后血肿周围脑组织中 Mip1 高表达, 并与脑水肿进展趋势基本一致, 提示活化的 Mip1 可能参与 出血性脑水肿的病理过程。     

他莫昔芬对高血压脑出血模型大鼠早期脑损伤的神经保护作用研究

目的:研究他莫昔芬对高血压脑出血模型大鼠早期脑损伤的神经保护作用。方法:取大鼠随机分为假手术组、模型组和高、中、低剂量实验(他莫昔芬10、5、2.5 mg/kg)组,每组48只,除假手术组外其余各组大鼠建立高血压脑出血模型,建模后分别腹腔注射相应药物,每24 h给药1次。考察给药后4、8、12、24、72 h和7 d时各组大鼠血肿周围脑组织中Fas相关死亡域蛋白(FADD)的阳性细胞数、凋亡细胞数、脑水肿情况以及脑组织形态学变化情况。结果:与假手术组比较,其余各组大鼠不同时间的脑组织中FADD阳性细胞数、凋亡细胞数、脑水肿比例均明显增加(P<0.05);与模型组比较,低剂量实验组大鼠的FADD阳性细胞数(给药后24、72 h)、凋亡细胞数(给药后24、72 h和7 d)和脑组织含水量(给药后72 h)均明显减少(P<0.05),中、高剂量实验组大鼠的FADD阳性细胞数(给药后8、12、24、72 h)、凋亡细胞数(给药后12、24、72 h和7 d)和脑组织含水量(给药后12、24、72 h和7 d)均明显减少(P<0.05),各剂量实验组大鼠血肿周围组织水肿范围变小、程度减轻,炎症细胞的浸润减轻,固缩细胞减少,肿胀细胞增多,细胞周围间隙变小,且均呈剂量依赖性。结论:他莫昔芬能够呈剂量依赖性地抑制高血压脑出血模型大鼠的FADD阳性细胞表达,减少脑组织细胞的凋亡,同时减轻脑出血后的脑水肿,发挥显著的神经保护作用。     

脑出血微创抽吸术联用单唾液酸四己糖神经节苷脂对大鼠脑水肿的影响

目的：探讨实验性脑出血微创抽吸术联合腹腔、血肿腔应用单唾液酸四己糖神经节苷脂（monosialoganglioside，GM1）对脑出血急性期脑水肿的影响。方法：将Ⅳ型胶原酶注入SD大鼠尾状核诱导形成脑出血10h后，向血肿腔内注入尿激酶溶解血凝块，实施微创血肿抽吸术排出脑内血肿，通过对抽吸组与抽吸腹腔给药组及抽吸血肿腔给药组之间的脑组织含水量测定，不同时间脑组织水通道蛋白4（Aquaporin-4，AQP4）免疫组化检测，对微创抽吸术联合2种途径应用GM1治疗脑水肿的疗效进行评估。结果：抽吸血肿腔给药组，抽吸腹腔给药组注胶原酶3d的脑组织含水量明显少于抽吸组（P〈0．05），注酶3d时间点血肿周围AQP4表达细胞数和累积光密度值小于抽吸组（P〈0．05），5，7d AQP4表达细胞数和累积光密度值减少明显（P〈0．01）。结论：大鼠脑出血微创抽吸术联合腹腔、血肿腔应用GM1治疗能减轻脑出血急性期脑水肿，AQP4参与脑水肿形成，而且可能是GM1减轻脑水肿的潜在靶点；微创血肿抽吸血肿腔给药用药量更少，脑出血治疗更经济。     

大鼠脑出血周边组织VEGF表达及Ang-1对其变化的影响

目的:研究Ang-1对大鼠脑出血周边组织脑含水量、脑组织EB含量、VEGF的表达的影响。方法:制备大鼠脑出血模型150只,随机分为正常对照组50只(A组)、脑出血组50只(B组)、Ang-1干预组50只(C组),分别设6h、12h、1d、3d、7d五个时间点各10只,检测脑含水量、脑组织EB含量、VEGF的表达情况。结果:1Ang-1对大鼠脑出血周边组织水肿有治疗作用,并能有效地减轻BBB的通透性。2脑出血后血肿周边组织VEGF表达增高,可诱导小血管生长,建立侧支循环,改善血液供应,促进脑功能的恢复。3Ang-1干预后VEGF阳性细胞数表达持续增高与微血管生长增高有正相关,能共同促进血肿周边组织的微血管形成作用和血液供应。结论:Ang-1对促进血肿周边新生血管的生成和降低脑水肿具有统计学意义。     

脑出血大鼠血肿周围脑组织Mg~（2＋）水平、MDA含量与脑水肿的关系

目的：观察镁离子（Mg2＋）以及丙二醛（MDA）、在大鼠脑出血血肿周围脑组织中的表达。探讨Mg2＋及脂质氧化与脑水肿的关系。为丰富脑出血后脑水肿治疗奠定一定理论基础。方法：采用干湿重法、酶联免疫吸附法,火焰原子吸收法测50只脑出血模型组大鼠和50只假手术对照组大鼠血肿周围脑组织中含水量、Mg2＋以及MDA水平。结果：（1）脑出血组各时间点脑组织Mg2＋含量均低于对照组（P〈0.05）。脑出血组Mg2＋含量3d达最低,5d升高,5d与7d差别不显著。（2）脑出血组各时间点脑组织MDA含量均高于对照组（P〈0.05）。脑出血组MDA水平于3d达高峰,5d降低,5d与7d差别不显著。（3）脑出血组各时间点脑组织含水量均高于对照组（P〈0.05）。脑出血组脑组织含水量3d达高峰,5d下降,5d与7d差别不显著。结论：①大鼠脑出血血肿周围脑组织脂质氧化指标：MDA水平于血肿初期升高,3d达高峰,5d降低,5d与7d差别不显著。②大鼠脑出血血肿周围脑组织Mg2＋水平于血肿初期降低,3d达最低,5d升高,5d与7d差别不显著。③大鼠脑出血血肿周围脑组织Mg2＋水平与MDA及脑水肿程度呈负相关。     

高血压性大鼠脑出血血肿量对NF-κB表达的影响

目的观察高血压性大鼠脑出血后血肿周围组织核因子-kB（necular factor kappa B,NF—kB）的表达,分析其表达与血肿量及出血时间的关系。方法成年sD大鼠100只,体重250～300g。随机分为对照组、脑出血A组、脑出血B组。大鼠高血压性脑出血模型采用双侧肾动脉前支部分热凝．立体定位仪下自体血脑内注入法建立。3组在相应时间点用免疫组化方法观察NF-kB在细胞内的表达情况。结果大鼠高血压性脑出血后1h后NF-kB即开始表达,24h达到高峰,持续至72h开始下降,并且血肿量大的脑出血组（脑出血B组）相应时间点NF-kB的表达较血肿量小的脑出血组（脑出血A组）明显增高（P〈0．05）。结论高血压性脑出血后早期即有NF-kB的表达,并且随血肿量的增加表达也增加,从而加重了脑出血后周围脑组织的继发性损伤。     

尼莫地平对大鼠血肿周围组织热休克蛋白表达的影响

目的研究热休克蛋白（Hsp 70）在脑出血(ICH)后的血肿周围脑组织的表达，及应用尼莫地平对其表达的影响，探讨尼莫地平对血肿周围缺血脑组织的保护作用。方法120只SD雄性大鼠随机分为3组: 假手术组（n＝20）、ICH治疗组（n＝50）和ICH模型组（n＝50）。按术后6，24，48，72 h和5 d分为5个亚组。采用自体股动脉取血并向大鼠尾壳核注射方法复制脑出血模型，假手术组仅进针入尾壳核不注血，ICH模型组及 ICH治疗组于尾壳核处注自体动脉血50 μL。ICH治疗组于造模即刻腹腔内注射尼莫地平（1.6 mg·kg 1）一次，此后每天1次；ICH模型组注入等量0.9%氯化钠溶液。于造模动物醒后由“盲”合作者根据Bederson法进行神经缺陷评分，评分≥2分入选实验。假手术组全部入选。入组实验动物按以上5个时间点腹腔注射10%水合氯醛0.5 mL·（100 g） 1，0.9%氯化钠溶液200 mL心脏灌流后迅速断头取脑，经尾壳核行冠状切片，分别行脑含水量的测定及免疫组化测定Hsp 70表达。结果①脑含水量：ICH模型组脑组织的含水量6 h变化不明显，于24 h开始升高，48～72 h逐渐达高峰，之后逐渐下降；ICH治疗组脑组织含水量的动态变化与ICH模型组一致，但各时间点的值均较低（P＜0.05）；两组与假手术组比较差异有显著性（P＜0.05）。②血肿周围组织Hsp 70表达：脑出血后6 h可见Hsp 70阳性细胞表达，24～48 h达高峰，之后缓慢下降，至5 d仍保持较高水平未见消失；给予尼莫地平后表达增加，ICH治疗组与ICH模型组差异有极显著性（P＜0.01），ICH模型组及ICH治疗组与假手术组比较差异有极显著性（P＜ 0.01）。结论脑出血后Hsp 70表达升高，提示其与脑出血血肿周围组织损伤有一定关系。尼莫地平诱导Hsp 70表达增强，减轻ICH后血肿周围组织的细胞凋亡程度，对神经细胞起到保护作用。 尼莫地平降低血肿周围组织脑含水量，具有减轻ICH后脑水肿作用。     

谷红对大鼠脑出血血肿周围NGB和IL-6表达的影响

目的研究谷红对脑出血大鼠的脑保护作用。方法建立大鼠脑出血模型,检测NGB和IL-6在脑出血后血肿周围不同时间的表达。结果药物干预组较出血组神经功能缺损评分明显降低。干预组NGB表达较脑出血组明显增多。脑出血组IL-6阳性表达比干预组明显增加。结论谷红对脑出血所致的神经元损伤有明显的保护作用。     

大剂量纳洛酮在脑出血微创术后的应用研究

目的观察大剂量纳洛酮治疗脑出血微创术后的临床效果,并与对照组比较。方法选择经临床、头颅CT或MRI确诊的90例脑出血患者,随机分为2组,各45例,大剂量纳洛酮组给予纳洛酮4.8mg/d＋内科基础治疗＋微创颅内血肿清除术,对照组：内科基础治疗＋微创颅内血肿清除术,两组均行微创手术。结果大剂量纳洛酮组患者用药后神智、神经功能缺损积分减少程度、并发症、总有效率及显效率均优于常规剂量组（P〈0.05）。结论大剂量纳洛酮对脑出血微创术后有较好疗效,能促醒、促进神经功能恢复、减少并发症,具有一定的脑保护的作用。     

黄芪联合红花对脑出血大鼠出血灶周围神经细胞凋亡的影响

目的 比较早期不同时间联合使用黄芪和红花治疗脑出血（ICH）模型大鼠对出血灶周围神经细胞凋亡的影响.方法 ICH大鼠模型制造成功后,在出血前24h和出血后0、6、12、24h分别用红花、黄芪、黄芪＋红花治疗,72h后处死,作TUNEL染色和Caspase-3免疫组织化学染色.结果 出血对照组血肿周边及外围Caspase-3阳性细胞明显较多.黄芪组、红花组及黄芪＋红花组脑出血大鼠血肿周围Caspase-3阳性细胞计数均少于出血对照组,并且黄芪＋红花组的Caspase-3阳性细胞数明显低于红花组（P〈0.01）.黄芪＋红花术前24h组、术后0、6、12h脑出血大鼠的血肿周围Caspase-3阳性细胞数差异无统计学意义（P〉0.05）.但黄芪＋红花组术后应用24h脑血肿周围Caspase-3阳性细胞数均多于术前应用24h,术后0、6h和术后12h,差异有统计学意义（P〈0.05或P＜0.01）.黄芪组、红花组和黄芪＋红花组术后6、24h大鼠脑血肿周围TUNEL阳性细胞数均少于对照组,且红花组TUNEL阳性细胞数多于黄芪＋红花组,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 联合使用黄芪和红花治疗脑出血优于单纯使用红花治疗脑出血;ICH 24h以后联合黄芪和红花治疗脑出血的效果较ICH以前24h给药治疗好;联合使用黄芪和红花对脑出血可能的保护机制是,通过抑制细胞内的Caspase-3蛋白的表达而延缓细胞凋亡.     

脑出血大鼠脑内NGF和BDNF蛋白表达变化的研究

目的观察脑出血大鼠脑组织内神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的变化,探讨神经营养因子在脑出血后脑损伤的作用。方法SD雄性大鼠随机分为正常组、假手术组和脑出血组,通过自体血脑内注射法建立脑出血动物模型,采用免疫组织化学法检测脑出血后3、6、12、24、48、72h、7d脑组织中NGF和BDNF蛋白表达情况。结果脑出血组6hNGF表达增加,12hBDNF表达增加,均于24h达高峰,与假手术组及正常组相比差异具有显著性(P<0.05)。结论脑出血后可诱导NGF和BDNF蛋白表达增加,有利于对脑出血后损伤神经元的保护和修复。     

依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织Caspase-3和Pdcd-5蛋白表达的影响

目的:探讨依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织Caspase-3和Pdcd-5蛋白表达的影响.方法:102只健康雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组6只、脑出血组48只和依达拉奉治疗组48只.后2组又分为3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d8个亚组,每组6只.采用大鼠尾动脉自体不凝血50 μL注入尾状核区建立脑出血模型.免疫组化法检测Caspase-3和Pdcd-5蛋白表达变化.结果:与脑出血组相比,依达拉奉治疗组于出血后3h血肿周围组织Caspase-3和Pdcd-5蛋白表达减少,但差异无统计学意义(P＞0.05),出血后6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d,2组的Caspase-3和Pdcd-5蛋白差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:依达拉奉可抑制Caspase-3和Pdcd-5蛋白表达,对脑出血后脑组织损伤有保护作用.     

RhEPO对脑出血大鼠缺氧诱导因子和细胞凋亡影响的实验研究

目的研究重组人促红细胞生成素（RhEPo） 对大鼠实验性脑出血后凋亡细胞及缺氧诱导因子（ hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α） 的影响。方法随机分为脑出血组、脑出血 RhEPO 干预组、假手术组,动物模型采用自体血脑内注射的方法,其中脑出血 RhEPO 干预组为大鼠造模后给予 5 000 U/kgRhEPO腹腔注射,取组织后应用免疫组化方法检测脑出血后不同时间血肿周边脑组织中 HIF-1α蛋白表达情况,应用 TUNEL 法检测凋亡细胞。结果出血后,HIF-1α蛋白阳性表达率随时间进行性增加,并于出血后 72 h 达到高峰,此后 HIF-1α蛋白表达的阳性率逐渐下降,脑出血后不同时间点阳性率比较差异有统计学意义（P 〈0. 05） ; 脑出血 RhEPO 干预组较脑出血组及假手术组各时间点细胞凋亡数低及 HIF-1α蛋白阳性率低（P 〈0. 05） 。结论 EPO 能显著降低 HIF-1α表达,并对脑出血后脑组织有良好的保护作用。     

脑出血大鼠脑组织缺氧诱导因子的动态变化及促红细胞生成素对其的影响

目的探讨实验性脑出血大鼠脑组织中缺氧诱导因子（HIF-1α）在脑出血后不同时间点的动态演变过程及促红细胞生成素（EPO）对其影响。方法应用自体血脑内注射法建立脑出血大鼠模型并随机分为假手术组、脑出血非干预组及脑出血EPO干预组,应用免疫组化方法检测脑出血后不同时间及组别血肿周边脑组织中HIF-1α蛋白表达情况。结果大鼠脑出血后HIF-1α蛋白阳性表达率在72 h内随时间进行性增加,并于出血后72 h达到高峰,此后HIF-1α蛋白表达的阳性率逐渐下降,脑出血EPO干预组较脑出血组各时间点HIF-1α蛋白阳性率明显减少,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论脑出血后HIF-1α表达存在一定变化规律,EPO能显著减少HIF-1α表达。     

新型水蛭肽嵌合蛋白治疗脑出血后脑水肿的实验研究

目的探讨新型基因工程药物水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）对大鼠脑出血后脑水肿的治疗作用及其机制。方法将96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血模型组、TNHH组,以自体血注入大鼠尾状核方法建立脑出血模型,假手术组只进针不注血。TNHH组静脉注射TNHH（2mg／kg）,分别于造模前30min及造模后每12h给药1次。于6,24,72,168h时分别用Longa标准测定神经功能缺损,干、湿重法检测脑含水量,分光光度法测定脑血肿周围脑组织髓过氧化物酶（MPO）活性。结果与假手术组相比,脑出血模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、MPO活性均显著增高（P〈0．05或P〈0．01）;与脑出血模型组相比,TNHH组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、MPO活性显著下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论TNHH对大鼠脑出血后脑水肿有治疗作用,其机制可能与抑制凝血酶活性、降低中性粒细胞浸润有关。     

原花青素对实验性脑出血大鼠脑组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的探讨原花青素对脑出血大鼠脑组织细胞凋亡的影响及其可能机制。方法采用Ⅶ型胶原酶诱导大鼠脑出血,建立脑出血模型。54只健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、原花青素低剂量组(50 mg.kg-1)、中剂量组(100 mg.kg-1)、高剂量组(200 mg.kg-1)及尼莫地平对照组(10 mg.kg-1)。术后24 h,检测大鼠脑组织谷胱甘肽(GSH)含量与过氧化氢酶(CAT)的活性,采用免疫组化法检测各组大鼠脑组织切片bax和bcl-2蛋白表达,TUNEL法检测各组大鼠脑组织凋亡细胞的数量。结果与模型组比较,原花青素低、中、高剂量组大鼠脑中GSH含量与CAT活性明显升高(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,与模型组相比,原花青素低、中、高剂量组的大鼠脑组织bax蛋白表达降低,原花青素中、高剂量组大鼠脑组织bcl-2蛋白表达升高,差异均有显著性(P<0.05,P<0.01)。TUNEL结果显示,与模型组相比,原花青素低、中、高剂量组细胞凋亡数有所减轻(P<0.05,P<0.01)。结论原花青素能够减轻脑出血大鼠的细胞凋亡,其机制可能与原花青素能够提高机体的抗氧化能力,同时增强抗凋亡基因bcl-2的表达,降低促凋亡基因bax的表达有关。     

同型半胱氨酸与脑出血关系探讨

目的 探讨脑出血与同型半胱氨酸(Hcy)的关系。方法 选取脑出血患者90例,另选对照者60例,分别测定血浆Hcy的浓度。结果 脑出血组的血浆Hcy平较对照组明显升高, 差异有统计学意义(P﹤0.05)。结论 血浆Hcy水平与动脉粥样硬化关系密切,可能是脑出血的独立危险因素。     

尼莫地平治疗脑出血后神经原特异性烯醇化酶的变化

目的 研究尼莫地平对脑出血患者的神经细胞保护作用.方法 40例脑出血患者随机分为Ⅳ组治疗组和对照组,治疗组分别在发病后12 h内,48 h,5 d时给予静滴尼莫地平8 mg,每日一次,共15 d,对照组常规治疗.每组抽取5例分别用放免法测定其在入院时,48 h,5 d,7 d,10 d的神经原特异性烯醇化酶.结果 48 h内尼莫地平治疗可使脑出血后升高的神经原特异性烯醇化酶水平快速从高峰下降,具有神经细胞保护作用.结论 尼莫地平应用于脑出血有较好临床疗效,早期(48 h内)疗效更佳.     

依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织细胞凋亡及P38MAPK蛋白表达的影响

目的:探讨依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织细胞凋亡及P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。方法:将Ⅶ胶原酶注入大鼠苍白球内诱导建立脑出血模型,2h后将大鼠分为脑出血组、依达拉奉治疗组、假手术组和正常对照组。前3组分别腹腔注射生理盐水(NS)、依达拉奉3mg·kg-1和NS每天1次、最长连续7d,最后一组不作任何处理。分别于建模后3、6、12h及1、2、3、5、7d断头取脑制作切片,分别用TUNEL法及免疫组化法检测各时间点细胞凋亡数及P38MAPK蛋白表达的变化。结果:建模后血肿周围组织存在细胞凋亡并于2～3d达高峰,3h后可见P38MAPK蛋白表达,并于1d后达高峰;与脑出血组比较,依达拉奉治疗组于脑出血后6h～7d血肿周围组织细胞凋亡数及P38MAPK蛋白表达均减少(P<0.05或P<0.01);正常对照组未见凋亡阳性细胞,假手术组术后偶见凋亡阳性细胞,均可见少量p38MAPK蛋白表达。结论:依达拉奉可抑制脑出血后血肿周围组织细胞凋亡,此作用可能与其下调P38MAPK蛋白表达有关。