胰甘油三酯脂酶在大鼠两型星形胶质细胞中的表达

目的比较胰甘油三酯脂酶在1型星形胶质细胞(T1A)和2型星形胶质细胞(T2A)中的表达情况。方法取新生大鼠脑皮质,体外分离培养纯化的T1A和T2A,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR))技术检测胰甘油三酯脂酶mRNA在两型星形胶质细胞中的表达差异,并且通过激光共焦免疫荧光双标技术从蛋白水平进一步证实。结果胰甘油三酯脂酶在T1A中不表达或低表达,主要定位于细胞核中;而在T2A中表达水平较高,分布广泛,在胞浆、胞核及细胞突起中均有表达。结论胰甘油三酯脂酶在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,胰甘油三酯脂酶在T2A中高表达,提示T2A在中枢神经系统脂代谢方面起重要的作用。     

蛋白脂蛋白在两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达

目的:探讨蛋白脂蛋白(PLP)在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达。方法:用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测PLP在分化成熟的两型星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达情况。结果:在O-2A谱系来源的成熟2型星形胶质细胞和少突胶质细胞中PLP抗体标记为阳性,而在T1A谱系来源的成熟1型星形胶质细胞中则未检测到PLP的表达,从而在蛋白质水平验证本室研究两型星形胶质细胞基因表达谱差异基因芯片结果中PLP mRNA在T2A中高表达,而在T1A中低表达的现象。结论:PLP等脂代谢相关基因可能在O-2A谱系发生和分化过程中起重要作用,O-2A谱系与神经髓鞘发生以及脑内脂质代谢内在机制密切相关。     

巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达

目的 观察1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)是否表达神经干细胞的标志物、是否具有神经干细胞的特性.方法 取新生大鼠脑皮质,体外培养纯化的O-2A祖细胞、T1A和T2A,应用激光共焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达;观察O-2A祖细胞、 T1A和T2A在碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液中生长方式的改变.结果 巢蛋白在O-2A祖细胞和T2A中表达,T1A不表达;SSEA-1仅在T2A中表达.在干细胞培养基中培养10d,T2A形成能增殖和连续传代的细胞球,细胞球巢蛋白标记阳性,贴壁后分化细胞具有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞样形态;但相同培养条件下的O-2A祖细胞和T1A生长方式无改变.结论 巢蛋白和SSEA-1在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,T2A具有神经干细胞的某些生物学特性.     

大鼠FEZ1基因的克隆及其在中枢神经系统的表达

轴突成束和延伸蛋白ζ-1(fasciculationandelongationproteinzeta-1,FEZ1),是线虫UNC-76蛋白在哺乳动物中的一种同系物,与轴突向外生长、成束、延伸相关。为了克隆该蛋白的基因并观察其在中枢神经系统(CNS)的表达情况,本研究通过FEZ1的特异引物从SD大鼠脑组织中经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得FEZ1基因;通过RT-PCR法分析FEZ1在生后7d的SD大鼠CNS的不同部位(大脑皮层、嗅球、脊髓)的表达情况。成功获得FEZ1的基因克隆,并观察到生后7d的SD大鼠的大脑皮层、嗅球、脊髓内均有FEZ1表达,且脊髓的表达水平较高。本研究结果为进一步研究大鼠FEZ1基因的生物学活性及在神经系统内的表达和应用奠定了基础。     

两型星形胶质细胞损伤后胰甘油三酯脂酶的表达

目的:通过建立两型星形胶质细胞体外机械损伤模型,于损伤后不同时间点检测两型星形胶质细胞中胰甘油三酯脂酶(PTL)的表达变化。方法:采用震荡培养和差速贴壁法分离纯化新生SD大鼠的1型星形胶质细胞(T1As)和2型星形胶质细胞(T2As),以real-time PCR和Western Blot分别检测损伤后的两型星形胶质细胞中PTL mRNA和蛋白表达变化。结果:损伤后两型星形胶质细胞中PTL表达均出现先升高后降低的趋势,而在T2As中的表达远高于在T1As中的表达水平(P<0.01)。结论:PTL在T2As中高表达提示,中枢神经系统损伤后再生与修复过程中,T2As对脂质代谢及髓鞘形成发挥作用。     

桩蛋白在两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达

目的:观察桩蛋白在大鼠两型星形胶质细胞及神经元中的差异表达情况。方法:通过细胞培养并结合免疫荧光和RT-PCR方法,观察了桩蛋白的mRNA及蛋白在大鼠两型星形胶质细胞T1A和T2A以及神经元中的表达。结果:RT-PCR显示体外培养的T1A表达桩蛋白mRNA,而T2A和神经元未表达桩蛋白mRNA;免疫荧光染色显示桩蛋白主要分布于T1A的胞浆及突起中。结论:桩蛋白在T1A中表达,但未表达于T2A和神经元中;本实验结果为进一步研究桩蛋白在T1A中的生物学作用奠定了基础。     

衰老1型星形胶质细胞的Aβ1-40及相关分子表达变化

目的:通过体外建立1型星形胶质细胞(T1A)衰老模型,研究衰老T1A中β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)及相关蛋白的表达变化。方法:采用振荡培养与差速贴壁法分离纯化新生SD(Sprague-Dawley)大鼠的T1A,免疫细胞化学标记检测体外培养21d(21DIV)及90d(90DIV)的T1A中β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)的表达;以WesternBlot检测微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)、caspase-3及Bcl-2的表达水平。结果:体外长程培养的T1A中Aβ1-40蛋白表达增加,同时90DIV组细胞中LC3II及活化的caspase-3表达水平提高,Bcl-2表达水平降低。结论:研究结果提示衰老的T1A表达Aβ,细胞内自噬及凋亡活性增强,在年龄相关的神经变性过程中,T1A的衰老可促进神经元的损伤,衰老T1A表达的Aβ很可能是Alzheimer病老年斑的重要来源。     

1型糖尿病模型大鼠白细胞介素-17A和B细胞活化因子水平变化及其作用分析

目的:分析白细胞介素-17A (IL-17A)和B细胞活化因子(BAFF)在1型糖尿病(T1DM)发病中的作用。方法:15只SD大鼠随机分为正常对照组(CON组)、T1DM组和2型糖尿病组(T2DM组),链脲佐菌素(STZ)造模成功6周后,称取每只大鼠体重(BW),检测三组大鼠空腹血糖(FBG)和C肽(FCP)及血清、脾脏组织IL-17A、BAFF水平和脾脏抗凋亡基因Bcl-2mRNA水平,比较各组各指标差异。结果:T1DM组FBG显著高于CON组和T2DM组(P0.01),FCP和BW显著低于CON组和T2DM组(P0.01)。T1DM组血清IL-17A和BAFF水平显著高于CON组和T2DM组(P0.01)。三组间脾组织IL-17A和BAFF蛋白表达T1DM组和T2DM组均高于CON组(P0.01),T1DM组更高于T2DM组(P0.01)。三组间脾组织Bcl-2mRNA表达水平与BAFF蛋白表达趋势一致,T1DM组和T2DM组脾组织Bcl-2 mRNA基因表达均高于CON组(P0.01),T1DM组更高于T2DM组(P0.01)。结论:T1DM大鼠外周血和脾组织IL-17A、BAFF及Bcl-2mRNA表达变化具有相同趋势,提示它们共同参与了T1DM的发生。     

波形蛋白和S-100β在T1A系和T2A系细胞分化中的表达差异

目的：观察波形蛋白和S-100β在T1A和T2A系细胞分化中的表达差异。方法：根据T1A、O-2A祖细胞的生长时间差异及细胞的黏附特性不同,采用振荡法和差速贴壁法,分别纯化T1A系细胞(T1A前体细胞和T1A)和T2A系细胞(O—2A祖细胞、未成熟T2A和成熟T2A);免疫细胞化学法观察波形蛋白和S-100β在T1A系和T2A系细胞中的表达情况。结果：T1A前体细胞、T1A和D2A祖细胞均表达波形蛋白和S-100β;未成熟T2A只表达S-100β,成熟T2A不表达波形蛋白和S-100β。结论：在星形胶质细胞的发育过程中,波形蛋白和S-100β的表达可能存在时间和谱系间的差异。     

内皮型一氧化氮合酶基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达

根据大鼠内应型一氧化氮合酶（eNOS）和3-磷酸甘油醛脱氨酶（GAPDH）的cDNA序列分别设计特异引物,用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测eNOS基因在大鼠心肌细胞和非心肌细胞中的表达,并以GAPDH为内标,用内参比法作RT-PCR定量。结果表明：eNOS基因在新生大鼠心、肾、脑等组织皆有表达,脑中最多、肾脏次之、心脏较少;在培养的新生大鼠心肌细胞和非心肌细胞中,检测到eNOS基因的表达,其中在心肌细胞的表达高于非心肌细胞;培养基中不同的血清浓度对心肌细胞和非心肌细胞的oNOS基因表达无明显影响。     

Cerebral gene expression of superantigen encephalitis in the lewis rat induced by staphylococcal enterotoxin a

Superantigens were suggested to play a role in the pathogenesis of different autoimmune diseases including multiple sclerosis (MS). Previously, it was demonstrated that local expression of the superantigen, staphylococcal enterotoxin A (SEA) in the brain of rats may lead to encephalitis which was amplified by using intravenous injection of concanavalin A (ConA)-activated splenocytes. In the present investigation, gene expression was studied in the rat brain 8 days after an injection of 50 μl of 1 mg/ml SEA or saline and 5 days after an intravenous injection of 1 × 10⁷ ConA-activated spleen cells. Of 8800 genes investigated (Affymetrix, rat genome U34A), the expression of 106 genes was significantly and at least threefold increased with SEA, while the expression of 29 genes was decreased at least threefold. Increased gene expression was compatible with an intracerebral inflammatory response mediated by antigen-presenting cells and CD8⁺ T lymphocytes. Elevated chemokines comprised RANTES (CCL5), osteopontin, MCP-1 (CCL2) and CXCL10. Further, genes with increased expression were assigned to the extracellular matrix, microglia/macrophage cell elements, astrocytes (GFAP) and phagocytosis. There was considerable conformity between previously reported gene expression profiles for experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) or MS and the present findings. Our data are in line with the concept that T-cell superantigen locally expressed in the central nervous system induces an inflammatory response. Therefore, the study of gene expression profiles does not seem to allow clear conclusions with respect to the aetiology of central nervous system autoimmune diseases.     

喉癌组织中FEZ1／LZTS1基因的表达及其临床意义

目的：探讨FEZ1／LZTS1基因在喉鳞状细胞癌中的表达缺失及其与临床病理的关系。方法：采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法,分析50例原发性喉癌组织和癌旁组织中FEZ1／LZTS1基因的表达情况。结果：FEZ1／LZTS1基因在癌旁组织中表达率明显高于喉癌组织（P〈0．01）;在喉癌组织中FEZ1／LZTS1基因阳性表达率随其病理分级、临床分期升高而降低（P〈0．01）,而与患者年龄、性别和原发灶部位无关。结论：FEZ1／LZTS1基因的表达缺失可能对LSCC的发生发展起重要作用,是LSCC发展中的重要分子事件。     

FEZ1基因在食管癌变过程中的作用

目的探讨FEZ1基因在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其与患者预后的关系。方法采用Western blot和免疫组化法分析FEZ1基因在ESCC中的表达情况,应用SPSS 13.0软件分析其与临床病理资料及预后的关系。结果 FEZ1蛋白阳性表达在食管癌中的表达与浸润深度、肿瘤大小相关(P<0.05);而与肿瘤组织分化程度、淋巴结转移无关(P>0.05)。正常食管组织中FEZ1的蛋白表达(4.3±0.39)明显高于食管癌组织中(1.6±0.25),且差异有显著性(P<0.05)。FEZ1的高表达提示患者的5年生存率高。结论 FEZ1基因在食管癌的发生、发展过程中起着重要的作用;FEZ1基因在食管癌中可能是候选的抑癌基因。