核因子κB抑制剂PDTC对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用

目的探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对颈椎病大鼠椎间盘炎症反应的抑制作用。方法构建动静力失衡性颈椎病大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组,PDTC低、中、高剂量组,另外设立假手术组(仅切开颈部皮肤),每组大鼠10只,PDTC低、中、高剂量组大鼠每天分别腹腔注射50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg PDTC,假手术组及模型组腹腔注射等量生理盐水,连续28 d。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠椎间盘组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-1β(IL-1β)及IL-6含量,Realtime PCR检测TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA表达,Western blot检测各组大鼠椎间盘组织中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白(IκBα)表达。结果与假手术组比较,模型组中大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量提高(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量上调(P <0. 05)。与模型组比较,PDTC低、中、高剂量组大鼠椎间盘组织中TNF-α,IL-1β及IL-6 mRNA及蛋白含量降低(P <0. 05),p-NF-κB p65、p-IκBα表达量下调(P <0. 05),并呈剂量依赖性。结论 PDTC能显著地抑制颈椎病大鼠椎间盘炎症反应,并其作用呈剂量依赖性。     

黄芩素对IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应的影响

[目的]探讨黄芩素对白介素-1β(IL-1β)诱导的软骨细胞炎症反应的影响.[方法]将软骨细胞分为正常组(加入不含任何刺激物的培养基),IL-1β组(10 ng/mL的IL-1β),黄芩素低、中、高剂量组(12.5,25,50 μmol/L 黄芩素+10 ng/mL的IL-1β).MTT法检测细胞活力,硝酸还原酶法测一氧化氮(NO)含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白介素-γ(IFN-γ)及IL-6含量,western blot检测核因子-κB (NF-κB p65)及p38 丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化水平.[结果]低、中、高剂量组黄芩素能显著提高软骨细胞活力(P<0.05).与正常组比较,IL-1β组中细胞活力降低(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量提高(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量上调(P<0.01);与IL-1β组比较,黄芩素低、中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65/NF-κB p65及p-p38 MAPK/p38 MAPK值下调(P<0.01);与中剂量组比较,高剂量组中细胞活力提高(P<0.01),TNF-α,IFN-γ,IL-6及NO含量降低(P<0.01),p-NF-κB p65及p-p38 MAPK表达量下调(P<0.01).[结论]黄芩素能通过阻断NF-κB及p38 MAPK信号通路进而抑制IL-1β诱导的软骨细胞炎症反应,为临床OA的治疗提供理论依据.     

消退素D1对突出髓核所致根性神经痛的影响

目的研究消退素D1对突出髓核所致根性神经痛的影响及内在机制。 方法选取56只雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，按照随机数字表法分为假手术组、模型组、消退素D1 10ng组、消退素D1 100ng组，每组14只，建立非压迫性椎间盘突出症模型。术后1d、2d、3d，假手术组和模型组分别注射磷酸盐缓冲液（PBS）10μl，消退素D1 10ng组和消退素D1 100ng组分别注射含有消退素D1 10ng和100ng的PBS 10μl。于术前1d及术后连续7d分别检测各组大鼠术侧后肢50%缩足阈值（PWT）。术后7d，取大鼠脊髓组织经酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）和白介素10（IL-10）的蛋白表达量，采用蛋白质印记Western blot法检测脊髓组织中细胞外信号调节激酶（ERK）核转录因子NF-κB/p65（NF-κB/p65）的含量变化。 结果术后1d至7d，模型组大鼠50% PWT较假手术组明显降低（P<0.05）；术后3d、4d、5d、6d、7d，消退素10ng组与模型组比较，50% PWT显著升高（P<0.05）；术后2d、3d、4d、5d、6d、7d，消退素100ng组与模型组比较，50% PWT显著升高（P<0.05）。与假手术组比较，模型组大鼠TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平明显升高（P<0.05），IL-10的表达水平明显降低（P<0.05）；与模型组比较，消退素10ng组和消退素100ng组的TNF-α和IL-1β的蛋白表达水平明显降低（P<0.05），IL-10的表达水平明显升高（P<0.05），且消退素100ng组的蛋白含量下降更显著（P<0.05）。与假手术组比较，模型组p-ERK、NF-κB/p65蛋白水平明显升高（P<0.05）；与模型组比较，消退素10ng组和消退素100ng组p-ERK及NF-κB/p65蛋白水平明显降低（P<0.05），且消退素100ng组降低的更明显（P<0.05）。 结论消退素D1通过调节炎症介质表达及p-ERK和NF-κB/p65通路的活性，促进神经根炎症的消退，为治疗腰椎间盘突出症提供了新的思路。     

miRNA-146a-5p对癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路的影响

目的观察miRNA-146a-5p(miR-146a-5p)对癫痫大鼠海马神经元核因子κB(NF-κB)信号转导通路的影响。方法体外培养新生SD大鼠海马神经元,随后制备癫痫海马神经元模型,随机分为三组,空白对照组(control组):转染时添加等体积opti-MEM培养基;阴性对照组(NC组):转染80 n M浓度NC至癫痫大鼠海马神经元; miR-146a-5p组:转染80 n M浓度miR-146a-5p mimics至癫痫大鼠海马神经元。转染后培养24 h,再用200 ng/ml脂多糖(LPS)诱导6 h,采用免疫荧光双染法鉴定体外培养海马神经元,采用膜片钳技术检测正常大鼠海马神经元和癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测未经LPS诱导各组海马神经元miR-146a-5p表达水平及经LPS诱导后各组海马神经元核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化IκBα(p IκBα)、NF-κB P65、IKB激酶-β(IKKβ) mRNA表达水平,采用Western blot法检测经LPS诱导后各组海马神经元IκBα、p IκBα、NF-κB P65、IKKβ蛋白表达水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测经LPS诱导后各组细胞培养液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达水平。结果体外培养7 d的癫痫大鼠海马神经元与正常大鼠海马神经元相比较形态未见明显异常;癫痫大鼠海马神经元自发性放电频率明显较正常大鼠海马神经元明显增加(P 0. 05); miR-146a-5p组海马神经元miR-146a-5p表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组海马神经元p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05),而IκBαmRNA及蛋白表达水平明显高于control组和NC组(P 0. 05);经LPS诱导后miR-146a-5p组细胞培养液中TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1表达水平明显低于control组和NC组(P 0. 05)。结论miR-146a-5p可抑制LPS诱导的癫痫大鼠海马神经元NF-κB信号转导通路中p IκBα、NF-κB P65、IKKβmRNA及蛋白表达,促进IκBαmRNA及蛋白表达,减少TNF-α、IL-1、IL-6、ICAM-1等炎症因子的释放。     

雷公藤内酯醇对类风湿关节炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的调控作用研究

目的观察雷公藤内酯醇治疗类风湿关节炎(RA)大鼠的疗效,并通过Toll-样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法将24只健康SD大鼠,随机分为空白对照组、RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组,每组6只。采用热杀死结核分枝杆菌诱导RA模型组、阳性药双氯芬酸组、雷公藤内酯醇组大鼠制作RA模型;造模成功后,阳性药双氯芬酸组给予10mg/kg双氯芬酸灌胃,雷公藤内酯醇组大鼠给予6mg/kg雷公藤内酯醇灌胃,空白对照组和RA模型组大鼠给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃。采用ELISA法测定大鼠血清中炎性细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-4、IL-6]表达水平;评价关节炎指数及足体积。免疫组织化学法检测关节滑膜组织TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达,q-PCR法检测滑膜组织TLR4mRNA的表达。结果与空白对照组比较,RA模型组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著升高(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组血清中TNF-α、IL-4、IL-6表达水平显著下降(P0.05),且雷公藤内酯醇组TNF-α、IL-4、IL-6表达水平呈极显著下降(P0.01)。与RA模型组比较,雷公藤内酯醇组在第8、12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05),阳性药双氯芬酸组在第12、16、20天时关节炎指数和足体积显著降低(P0.05)。与空白对照组比较,RA模型组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著上调(P0.05);与RA模型组比较,阳性药双氯芬酸组滑膜组织中TLR4、NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下降(P0.05),雷公藤内酯醇组滑膜组织中TLR4、NF-κB、p-NF-κB蛋白表达量和TLR4mRNA表达量显著下调(P0.05)。结论雷公藤内酯醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的信号因子表达,从而降低炎性因子的产生,减少炎性反应,起到治疗RA的作用。     

艾拉莫德通过TLR4/NF-κB通路抑制骨关节炎软骨细胞模型凋亡及炎症反应

目的 研究艾拉莫德对骨关节炎(OA)软骨细胞模型凋亡及炎症反应的调控作用及机制。方法 培养软骨细胞株ATDC5,采用10 ng/mL白细胞介素(IL)-1β刺激的方法建立OA软骨细胞模型,给予不同浓度(0.6、1.2、1.8 mg/L)艾拉莫德处理,转染pcDNA质粒或pcDNA-Toll样受体4(TLR4)质粒。检测细胞增殖活力(以A₄₉₀表示)、凋亡率,裂解型caspase-3(Cleaved caspase-3)、TLR4、核因子-κB(NF-κB)p-p65表达水平,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6、IL-8水平。结果 模型组A₄₉₀低于对照组,凋亡率、Cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p-p65、TNF-α、IL-6、IL-8水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度艾拉莫德组A₄₉₀高于模型组,凋亡率、Cleaved caspase-3、TLR4、NF-κB p-p65、TNF-α、IL-6、IL-8水平均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05...     

脂质体介导的p65反义寡核苷酸对大鼠急性出血坏死性胰腺炎的作用

目的探讨脂质体介导的p65反义寡核苷酸(ASODN)对大鼠急性出血坏死性胰腺炎(ANP)的作用。方法72只大鼠随机分成假手术组、胰腺炎组、脂质体组、ASODN组(20OD ml)、ASODN+脂质体组、随机ODN组,观察各组大鼠术后6h及12h胰腺病理、血清淀粉酶、血清IL-1、TNF-α、胰腺组织核转录因子(NF-κB)活性的变化。结果同假手术组相比,各处理组的血清淀粉酶活性、IL-1、TNF-α水平、胰腺组织NFκB活性明显升高(P<0.01),但各处理组间的血清淀粉酶活性差异无显著性。同胰腺炎组相比,脂质体组和随机ODN组的胰腺病理评分、血清IL-1、TNF-α、胰腺组织NFκB活性的差异有显著性(P<0.05),而ASODN组和ASODN+脂质体组的胰腺病理评分、血清IL-1、TNF-α、胰腺组织NFκB活性下降(P<0.05),其中ASODN+脂质体组下降更为明显。结论脂质体介导的p65反义寡核苷酸可明显抑制ANP大鼠的血清致炎性细胞因子的表达,改善胰腺病理,提示NF-κB在急性胰腺炎(AP)的发病机制中起关键性调控作用,其p65ASODN可应用于AP的治疗。     

柚皮素对过敏性鼻炎模型大鼠鼻黏膜组织TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路的影响

目的 探究柚皮素对过敏性鼻炎(AR)模型大鼠鼻黏膜组织Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子α(TNF-α)信号通路的影响。方法 建立AR大鼠模型，48只大鼠以随机数字表法平均分为4组：模型组、柚皮素低(100 mg/kg)剂量组、柚皮素高(200 mg/kg)剂量组、柚皮素高(200 mg/kg)剂量+脂多糖(LPS)(TLR4通路激活剂，0.4 mg/kg)组，另取12只SD大鼠设为对照组。以药物分组干预治疗后，观察大鼠鼻炎症状并进行评分；苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠鼻黏膜组织病理形态改变；试剂盒测定大鼠血清IgE及炎性因子白细胞介素(IL)-17、IL-18水平；免疫组织化学染色检测大鼠鼻黏膜组织CD19、CD23表达；免疫印迹法检测大鼠鼻黏膜组织TLR4/NF-κB/TNF-α通路蛋白表达。结果 与对照组相比，模型组大鼠鼻黏膜组织发生严重病理损伤，鼻炎症状评分、血清IgE、IL-17及IL-18水平、鼻黏膜组织CD19、CD23阳性细胞比例、鼻黏膜组织TLR4、核内NF-κB p65、TNF-α蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型...     

右美托咪定抑制NF-κB核易位减轻大鼠创伤性脑损伤神经炎症北大核心CSCD

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine,DEX)调节创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后小胶质细胞(microglial,MG)极化及神经炎症的机制。方法42只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(sham组)、TBI组、TBI+DEX组(又分为治疗1 d、3 d和7 d组)、TBI+NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)组和TBI+DEX+PDTC组,每组6只。采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,造模后1 h腹腔注射PDTC 100 mg/kg、2 h腹腔注射DEX 100μg/kg,直至取材。于取材前采用改良的神经功能缺损评分法(modified neurological severity score,mNSS)评价大鼠神经功能,ELISA检测血清炎症因子,取大鼠损伤皮质通过Western Blot检测MG M1和M2表型标记物及MyD88、NF-κB p65蛋白表达,免疫荧光染色观察损伤皮质处NF-κB p65在MG中的表达及入核情况。计量资料多组间比较采用单因素及双因素方差分析。结果与Sham组相比,TBI组mNSS评分显著升高,DEX组mNSS评分明显低于TBI组,差异有统计学意义(P<0.05);ELISA和Western Blot检测TBI组血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白介素(interleukin,IL)-1β水平及MG M1表型标记物(IL-1β和TNF-α)升高,抗炎因子IL-10和M2型标记物(精氨酸酶-1和IL-10)表达下降(P<0.05);DEX降低血清TNF-α及IL-1β的水平,提高IL-10水平,并促进MG M2表型极化(P<0.05)。此外,DEX组MyD88表达下调,NF-κB p65核易位被抑制,该效应可被PDTC增强。结论DEX可通过抑制NF-κB核易位调节TBI大鼠MG活化,减轻神经炎症。     

TLR4/NF-κB通路及相关细胞因子表达水平变化与急性胰腺炎病情发展的关系

【目的】探讨Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路及相关细胞因子表达水平变化与急性胰腺炎(AP)病情发展的关系。【方法】将本院收治的127例AP患者依据病情严重程度分为AP组(75例)和重症急性胰腺炎(SAP)组(52例),并选择同一时间段在本院进行体检的80例健康志愿者作为对照组。比较三组对象的临床资料、TLR4、NF-κB表达水平及血清炎性因子水平。采用Pearson相关性分析TLR4/NF-κB通路及相关细胞因子表达水平变化与AP床旁严重度指数(BISAP)的关系。【结果】AP组和SAP组血清脂肪酶、淀粉酶均显著高于对照组(P<0.05)。AP组和SAP组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA水平均高于对照组(P<0.05),且SAP组TLR4 mRNA、NF-κB mRNA均显著高AP组(P<0.05)。AP组和SAP组的白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)水平均显著高于对照组(P<0.05);SAP组IL-6、TNF-α及IL-1β水平均显著高于AP组(P<0.05)。TLR4 mRNA、NF-κB mRNA、TNF-α及IL-1β水平与BISAP评分均呈正相关(P<0.05),IL-6水平与BISAP评分无相关性(P>0.05)。【结论】TLR4/NF-κB通路及相关细胞因子表达水平变化与AP病情发展具有一定的相关性,可作为临床评估AP疾病进展的参考依据。     

Toll样受体4/核因子-κB p65通路对轮状病毒肠炎患儿肝损害的影响

目的 探讨轮状病毒(RV)肠炎患儿Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)p56通路对肝损害的影响。方法 选取50例RV肠炎患儿为RV组,另选取同期50例RV感染阴性的肠炎患儿为对照组。采用全自动生化分析仪检测患儿肝功能指标谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。采用聚合酶链式反应(PCR)检测外周血单核细胞(PMBC)的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA表达;采用蛋白质印迹法检测NF-κB p65蛋白表达水平。比较2组患儿血清AST、ALT水平和肝损害发生率。比较2组患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达。比较RV组中伴肝损害患儿和无肝损害患儿PMBC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达水平。采用Pearson相关分析法分析RV肠炎患儿肝功能与TLR4/NF-κB p65通路的相关性。结果 RV组患儿血清AST、ALT水平及肝损伤发生率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。RV组患儿PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB p65蛋白表达高于...     

萝卜硫素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织Toll样受体4/核因子κB信号通路的影响

目的评价萝卜硫素对于脓毒症急性肺损伤（ALI）大鼠肺组织炎症反应以及Toll样受体4（TLR4）/核因子κB（NF-κB）信号通路的影响。 方法将30只雄性Sprague Dawley大鼠按随机数字表法分成假手术组、模型组和治疗组,每组各10只。模型组和治疗组大鼠采用盲肠结扎穿孔（CLP）法制备大鼠脓毒症模型,治疗组大鼠在术后立即腹腔注射50 mg/kg的萝卜硫素注射液,其余两组注入等量等渗NaCl溶液;于术后24 h大鼠右侧颈总动脉采集动脉血标本,然后处死大鼠取肺组织测定肺组织湿/干比。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测三组大鼠肺组织匀浆标本肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、NF-κB p65表达水平;荧光实时定量PCR检测三组大鼠肺组织TLR4 mRNA的表达。 结果假手术组、模型组及治疗组大鼠肺组织湿/干比[（4.00 ± 0.13）、（6.10 ± 0.05）、（5.80 ± 0.08）]、氧合指数[（315 ± 11）、（177 ± 7）、（200 ± 12）mmHg]、TNF-α[（6.05 ± 0.29）、（45.06 ± 0.52）、（27.09 ± 0.85）ng/L]、IL-1β[（8.02 ± 0.21）、（38.23 ± 0.81）、（32.73 ± 1.12）ng/L]及NF-κB p65[（0.375 ± 0.013）、（1.230 ± 0.045）、（0.988 ± 0.043）ng/L]表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 480.891、255.309、4 245.262、1 918.168、564.842,P均< 0.001）。进一步两两比较发现,模型组和治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较假手术组大鼠显著升高（P均< 0.05）,治疗组大鼠肺组织湿/干比、TNF-α、IL-1β、NF-κB p65表达水平均较模型组大鼠显著降低（P均< 0.05）;而模型组和治疗组大鼠氧合指数均较假手术组大鼠显著降低（P均< 0.05）,治疗组大鼠氧合指数较模型组大鼠显著升高（P < 0.05）。荧光实时定量PCR结果显示,三组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达水平比较,差异具有统计学意义（F= 224.538,P < 0.001）。进一步两两比较发现,与假手术组比较,模型组及治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达均显著升高（P均< 0.05）;而治疗组大鼠肺组织TLR4 mRNA表达较模型组显著降低（P < 0.05）。 结论萝卜硫素可减轻脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织炎症反应、肺水肿程度,改善缺氧状态,对于肺组织具有一定保护作用,且其作用机制可能与干预TLR4/NF-κB信号途径相关。     

乙酰化TLR4在GDM孕妇外周血单核细胞中的表达及意义

目的探讨乙酰化Toll样受体4(TLR4)在妊娠期糖尿病(GDM)孕妇外周血单核细胞中的表达及意义。方法选取2017年1月至2017年10月在我院治疗的GDM孕妇67例(GDM组),同时选取健康孕妇67例作为对照组,采用Western blot法检测TLR4、乙酰化TLR4和NF-κB p65蛋白表达,微板法检测血清脂多糖(LPS)、ELISA法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)和白细胞介素-10(IL-10)。结果 GDM组和对照组TLR4蛋白相对表达差异比较无统计学意义(P0.05);GDM组乙酰化TLR4相对表达为(1.012±0.062),而对照组未检测到乙酰化TLR4表达,差异比较有统计学意义(P0.05);GDM组LPS、TNF-α、IL-1及IL-10分别为(0.95±0.11)IU/ml、(56.01±3.18)pg/ml、(76.82±3.05)pg/ml和(32.17±4.07)pg/ml,明显高于对照组(P0.05);GDM组NF-κB p65蛋白相对表达为(0.763±0.073),明显高于对照组(P0.05);GDM组乙酰化TLR4相对表达与LPS、TNF-α、IL-1、IL-10及NF-κB p65蛋白相对表达呈正相关(r=0.321、0.304、0.335、0.341和0.482,P0.05)。结论 GDM孕妇外周血单核细胞存在乙酰化TLR4,其与炎症因子水平有一定相关性,值得进一步研究。     

抑制核因子-κB对Toll样受体4在急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织中表达的影响

目的：观察急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠胰腺组织中Toll样受体4（TLR4）的表达情况。并且应用核因子（NF）-κB活化抑制剂四氢化吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）进行干预，观察阻断NF-κB以后，TLR4在ANP大鼠胰腺组织中表达的变化，探讨ANP中TLR4与NF-κB的关系及NF-κB的活性对TLR4表达的影响。方法：72只SD大鼠随机分为假手术组、ANP组和PDTC预处理组。采用胆胰管内逆行注射5%牛磺胆酸钠溶液诱导大鼠ANP模型。PDTC预处理组在建立模型前1h按100mg&#183;kg^-1腹腔注射给药。分别于建模后3h、6h、12h将大鼠分批处死。观察胰腺病理，用免疫组化及WesternBlot检测胰腺组织TLR4与NF-κB表达变化，RT-PCR检测胰腺组织TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达。结果：同假手术组相比，ANP组胰腺组织TLR4、NF-κB表达及TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达明显升高（P〈0.05）；同ANP组相比，PDTC预处理组胰腺组织炎症明显减轻，胰腺组织TLR4、NF-κB表达及TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达明显降低（P〈0.05）。结论：TLR4和NF-κB在ANP大鼠胰腺组织中的表达水平明显增高，PDTC抑制ANP大鼠胰腺组织中NF-κB表达的同时，下调TLR4蛋白水平表达和TNFα、IL-1β和IL-6mRNA表达。TLR4和NF-κB是介导炎症反应的枢纽，因而它们在ANP发生发展中起重要作用。TLR4和NF-κB可能不是简单的上下游关系，其关系还需进一步研究。     

退行性膝关节炎模型大鼠关节软骨核因子κB通路蛋白及神经肽的表达与关节功能的关系

目的研究退行性膝关节炎模型大鼠关节软骨核因子κB(NF-κB)通路相关蛋白及神经肽的表达水平与关节功能的关系。方法建立退行性膝关节炎大鼠模型,并设健康对照组大鼠,分别检测2组大鼠的膝关节功能指标、关节软骨中NF-κB通路相关蛋白的相对表达以及神经肽的表达水平。对各指标进行Pearson相关性分析和多元线性回归分析。结果模型组大鼠攀爬时间和最长运动距离分别为(615.11±83.27)s、(58.68±17.23)m,均低于对照组大鼠[(1982.23±110.25)s、(198.21±29.96)m],而p-p65、p-IκBα、SP和CGRP的相对表达水平分别为0.35±0.11、0.26±0.05、62.71±3.75、248.98±47.54,均高于对照组大鼠(0.13±0.03、0.09±0.01、17.43±1.20、28.81±1.46),差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,攀爬时间和最长运动距离与p-p65、p-IκBα、SP和CGRP的表达水平呈正相关(P<0.05)。多元线性回归分析显示,p-p65(β=0.093,P<0.001)、p-IκBα(β=0.026,P<0.001)、SP(β=0.106,P<0.001)和CGRP(β=0.123,P<0.001)是攀爬时间的独立影响因素;p-p65(β=0.514,P<0.001)、p-IκBα(β=0.023,P<0.001)、SP(β=0.612,P<0.001)和CGRP(β=0.135,P<0.001)是最长运动距离的独立影响因素。结论p-p65、p-IκBα、SP和CGRP在退行性膝关节炎模型大鼠的关节软骨中呈现高表达,且与大鼠的攀爬时间和最长运动距离密切相关;p-p65、p-IκBα、SP和CGRP均为攀爬时间和最长运动距离的独立影响因素,退行性膝关节炎的关节功能与NF-κB信号通路以及神经肽的表达呈正相关。     

辛伐他汀治疗酒精性股骨头坏死的效果及机制初步探讨

目的观察辛伐他汀联合阿仑膦酸钠对酒精性股骨头坏死(AIANFH)的疗效及对Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)通路的影响。方法将90例AIANFH患者随机分为观察组和对照组,每组45例。对照组采用阿仑膦酸钠口服治疗,观察组在对照组基础上联合应用辛伐他汀治疗,疗程均为3个月。比较2组治疗后髋关节优良率和不良反应发生情况,并比较2组治疗前后血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、脂联素、骨钙素水平和外周血单个核细胞(PBMC)的TLR4 mRNA、NF-κB p65 mRNA表达差异。结果治疗后,观察组髋关节优良率91.11%高于对照组的75.56%,差异有统计学意义(P 0.05)。2组治疗后的血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于治疗前,血清脂联素、骨钙素水平高于治疗前,差异有统计学意义(P 0.05);观察组治疗后的血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平低于对照组,血清脂联素、骨钙素水平高于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。治疗后,2组PBMC的TLR4 mRNA、NF-κB p65 mRNA表达均低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P 0.05)。观察组和对照组不良反应总发生率分别为24.44%和15.56%,差异无统计学意义(P 0.05)。结论辛伐他汀联合阿仑膦酸钠治疗AIANFH可抑制TLR4/NF-κB信号通路,抑制炎症反应,上调脂联素和骨钙素水平,且安全性高。     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

血单核细胞核因子-κB p65活化水平与黄藤素治疗的慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者炎症反应的相关性研究

目的探讨血单核细胞核因子-κB(NF-κB)p65活化水平对于评价黄藤素治疗前后慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者的临床症状和气道炎症水平的价值和意义。 方法选取重庆市奉节县人民医院呼吸内科2017年10月至2019年1月收治的100例中度AECOPD患者,按随机数字表法将患者分为对照组(常规治疗)和观察组(黄藤素＋常规治疗),每组各50例。在治疗前和治疗第7天后记录患者动脉血氧分压(PaO₂)、动脉血二氧化碳分压(PaCO₂)、酸碱值(pH);使用肺功能仪记录患者第1秒用力呼气容积(FEV₁)占预计值百分比(FEV₁% pred);ELISA分析血中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)水平;使用western blot法分析血单核细胞磷酸化核因子-κB (NF-κB)p65和总NF-κB p65水平。采用独立样本t检验进行两组间计量资料比较,采用Pearson相关分析血单核细胞磷酸化NF-κB p65/总NF-κB p65比值与血中TNF-α水平和血IL-8水平的关系。 结果治疗第7天后,观察组pH、PaO₂、FEV₁% pred水平[(7.42±1.87),(67.50±9.31)mmHg,(53.62±16.54)%]高于治疗前[(7.16±2.31),(40.40±13.62)mmHg,(36.17±18.27)%],观察组PaCO₂、TNF-α、IL-8水平和磷酸化NF-κB p65/总NF-κB p65比值[(43.12±8.67)mmHg,(81.76±23.41)ng/L,(225.87±89.12)ng/L,(0.47±0.09)]低于治疗前[(69.17±12.11)mmHg,(267.34±33.23)ng/L,(617.34±127.63)ng/L,(0.96±0.07)],均差异有统计学意义(t＝－0.24,－0.31,－0.05,0.04,15.61,25.12,2.53;均P<0.05)。同时,观察组pH、PaO₂、FEV₁% pred水平较对照组[(7.31±1.51),(62.71±14.12)mmHg,(44.64±10.47)%]更高,PaCO₂、TNF-α、IL-8水平和磷酸化NF-κB p65/总NF-κB p65比值较对照组[(53.64±10.25)mmHg,(114.82±25.96)ng/L,(362.65±106.97)ng/L,(0.68±0.11)]更低,组间比较均差异有统计学意义(t＝－2.99,－3.07,－3.26,4.62,5.26,7.27,4.55;均P<0.05)。观察组黄藤素治疗后磷酸化NF-κB p65/总NF-κB p65比值与血中TNF-α水平呈显著正相关(r＝0.622,P<0.001),与血中IL-8水平呈显著正相关(r＝0.571,P<0.001)。且在治疗期间未见明显与黄藤素胶囊相关的严重不良反应。 结论单核细胞NF-κB p65活化水平与AECOPD患者炎症水平密切相关,黄藤素可能是通过抑制NF-κB p65活化减轻AECOPD患者的气道炎症反应,改善肺功能。     

消退素D1对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节炎症的作用

目的:研究消退素D1(Resolvin D1,Rv D1)对非压迫性腰椎间盘突出症模型大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)炎症的影响及内在机制。方法:选取30只雄性大鼠建立非压迫性腰椎间盘突出症模型。随机分为假手术组、模型组、Rv D1组(100 ng)。术后连续3天模型组和Rv D1组分别鞘内注射10μl磷酸盐缓冲液、Rv D1。于术前1天及术后连续7天检测各组大鼠术侧50%缩足阈值(50%paw withdrawal threshold,PWT)。术后第7天,酶联免疫吸附测定术侧L5 DRG中TNF-α和IL-1β的蛋白表达量,免疫组化法检测DRG中p-ERK及NF-κB/p65的阳性表达。结果:术后各时间点,模型组大鼠50%PWT较假手术组明显降低(P<0.01);TNF-α和IL-1β表达明显升高(P<0.01);p-ERK、NF-κB/p65蛋白水平明显升高(P<0.01)。术后第2~7天,Rv D1组与模型组相比,50%PWT显著升高(P<0.05);TNF-α和IL-1β的蛋白表达明显降低(P<0.01);p-ERK及NF-κB/p65蛋白水平明显降低(P<0.01)。结论:Rv D1促进背根神经节炎症的消退,可能与调节炎症介质TNF-α和IL-1β的表达及ERK和NF-κB/p65通路活性有关。