依托泊苷诱导的人小肠类器官衰老模型的构建及鉴定

目的 用依托泊苷(etoposide)诱导类器官发生DNA损伤构建人小肠类器官衰老模型。方法 临床活检小肠组织，体外无菌分离获得小肠隐窝，在培养基中培养成为类器官。类器官用依托泊苷10μmol·L^-1处理7 d，倒置相差显微镜观察类器官表面形态变化，Western印迹法检测DNA损伤标志物磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)水平；衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性染色检测类器官SA-β-gal阳性细胞面积百分率，Western印迹法检测衰老标志物p16^INK4A蛋白表达水平。结果 人小肠隐窝体外成功培养成球。依托泊苷诱导的人小肠类器官衰老模型表面皱缩，类器官部分死亡，整体表面积变小；类器官中γH2AX蛋白表达显著上调(P<0.01);SA-β-gal阳性细胞面积百分率显著增加(P<0.01)，约90%细胞呈SA-β-gal阳性；p16^INK4A蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论 依托泊苷处理可诱导人小肠类器官发生DNA损伤，从而诱导人小肠类器官衰老。     

体外神经干细胞三维药物筛选模型的构建

研究目的：建立中药对神经干细胞诱导转变为神经细胞的体外模型，不仅对研究脑的发育和分化以及神经系统疾病的治疗具有重要价值，而且也有助于了解中药的作用机制，为中药的临床应用提供坚实的科学依据。本研究评价体外海马神经干细胞在胶原凝胶内的生长情况，探讨胶原凝胶作为神经系统组织支架材料的可行性，以建立适合于干细胞药物筛选及作用机理研究的三维培养模型。研究方法：①细胞培养：体外培养来源于孕13天胎鼠的海马部位神经干细胞，传至第三代；根据胶原的特性，把神经干细胞均匀混合于胶原的预凝胶溶液中，便可形成“细胞．胶原”的凝胶三维结构。②检测指标：倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察胶原凝胶中神经干细胞的生长、伸展情况；通用免疫细胞化学方法及荧光显微技术鉴定神经干细胞，BrdU染色标记增殖的细胞；采用CCK-8法及Live／DeadViability／CytotoxicityKit试剂盒检测神经干细胞不同培养条件下的生存和增殖能力，筛选出最佳的胶原工作浓度。结果：①倒置相差显微镜下观察发现胶原凝胶中的神经干细胞生长状态良好；     

人参皂苷Rg1对成体干细胞特性与功能的影响

人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)是从人参中提取的一种重要单体成分,具有多种药理学活性,可通过多种作用机制对造血干细胞、间充质干细胞、神经干细胞和内皮祖细胞等的增殖、分化、衰老、分泌等产生明显调控作用,在组织器官损伤和机体衰老中产生明显治疗效果,该文就Rg1对成体干细胞特性与功能的影响进行了综述。     

低剂量电离辐射对小鼠小肠类器官生物学特性的影响及二甲双胍对其辐射损伤的防护作用

目的 研究低剂量电离辐射(LDIR)对小鼠小肠类器官生物学特性的影响,并观察二甲双胍对其辐射损伤的防护作用.方法 体外分离C57BL/6小鼠小肠隐窝,培养4 d后获得小鼠小肠类器官,进行100 mGy单次γ射线照射(100 mGy×1)或100 mGy 4次γ射线照射(100 mGy×4),分别建立小肠类器官单次或多次...     

隐丹参酮对宫颈癌细胞系Hela细胞放射增敏作用及其机制的研究

丹参的主要抗肿瘤活性成分一丹参酮（tanshinone）,是一组脂溶性菲醌类成分。隐丹参酮是丹参中提取的脂溶性成分之一,主要通过抑制细胞增殖、促进凋亡、影响细胞周期分布以及促进分化等机制发挥抗肿瘤作用。通过化学药物有目的地改变细胞周期,进而增强放疗敏感性,对肿瘤的治疗可能有重要意义。本实验主要研究隐丹参酮对宫颈癌细胞系Hela的细胞毒性、放射增敏作用及其对细胞周期的影响,进一步了解其作用机制,为隐丹参酮应用于宫颈癌放射增敏治疗提供临床依据。     

隐丹参酮抗肿瘤药理作用机制研究进展

隐丹参酮是从中药丹参里提取的一种天然活性成分,具有多种药理作用,不仅能预防和治疗缺血性疾病、冠状动脉疾病和阿尔茨海默氏症,还具有良好的抗肿瘤活性。它通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤转移和侵袭、抗新血管生成及调控活性氧水平等途径发挥抗肿瘤作用。对近年来研究的隐丹参酮的抗肿瘤活性和作用机制进行综述。     

中药兔耳风提取物ainsliadimer A对坏死性小肠结肠炎的作用和机制研究

目的：Ainsliadimer A是提取于中药兔耳风的一种内酯类化合物，前期研究已经发现其具有抑制NF-kB信号活性和抑制肿瘤生长的功能。已知的NF-kB信号通路在介导坏死性小肠结肠炎的炎症反应中发挥重要作用，因此，拟研究ainsliadimer A对坏死性小肠结肠炎的作用并对机制进行探讨。方法：通过LPS刺激人肠上皮细胞（FHC）、大鼠小肠隐窝上皮细胞（IEC-6）诱导肠细胞炎症模型，在不同浓度ainsliadimer A处理后，qPCR检测IL-6、TNF-α的mRNA水平，ELISA检测上清中IL-6水平，检测其对炎症因子水平的影响；对FHC和IEC-6细胞处理不同浓度ainsliadimer A后，CCK-8法和划痕实验分别检测其对细胞增殖、迁移的影响，评估其对坏死性小肠结肠炎的肠细胞修复功能；通过免疫印迹检测ainsliadimer A处理后，细胞内NF-kB信号的活性，初步探讨ainsliadimer A的作用机制。结果：Ainsliadimer A不同浓度（5，10 μmol·L^-1）皆可有效降低FHC和IEC-6细胞中IL-6、TNF-α的水平，同时，显著恢复LPS引起的肠细胞增殖、迁移抑制，免疫印迹显示ainsliadimer A显著降低了NF-kB信号的活性。结论：Ainsliadimer A可有效降低LPS引起的炎症因子表达和释放，且恢复了肠细胞的迁移和增殖，表现出明显的肠修复作用；机制研究初步揭示其通过下调NF-kB信号活性来降低炎症因子水平，缓解炎症反应，研究在细胞水平证实了ainsliadimer A对坏死性小肠结肠炎的缓解作用，为坏死性小肠结肠炎的药物研发和治疗提供了新线索。     

以外消旋聚乳酸为支架体外培养软骨细胞

目的：观察国产外消旋聚乳酸（PDLLA）材料为细胞载体对软骨细胞吸附生长增殖的影响。方法：将生长状态良好的兔软骨细胞接种于PDLLA海绵后行体外培养，通过细胞计数检测材料细胞吸附能力，相关显微镜观察附着情况及细胞形态，共聚焦显微镜观察细胞生长增殖活性，结果：软骨细胞接种后吸附好。继续生长增殖，并具良好活性。结论：国产PDLLA材料可以作为软骨细胞生长的支架载体。     

胎鼠神经干细胞培养方法的建立及药物对干细胞增殖的影响

目的建立神经干细胞培养模型，观察药物对其增殖能力的影响。方法建立大鼠胎脑神经干细胞的培养方法，并用MTT法和3H-胸腺嘧啶核苷参入法观察黄皮酰胺、丹酚酸A及人参皂苷Rg1等对第2代神经球细胞状态的影响。结果免疫细胞化学结果显示，培养的神经细胞具备干细胞的基本特性；MTT和液闪结果则表明，上述3种药物可不同程度地影响神经干细胞的存活率和/或增殖活性。结论本实验所建立的胚胎大鼠神经干细胞培养模型可以观察到一些有脑保护作用的药物对干细胞存活和增殖有一定影响。     

PTICE治疗TNBS诱发的小鼠结肠炎机制研究

目的 研究河鲀Ⅰ型胶原蛋白（PTICE）治疗2，4，6．三硝基苯磺酸（TNBS）诱发的小鼠结肠炎的作用机制。方法 用75mg／kg TNBS的40％乙醇溶液灌肠诱发小鼠结肠炎；以柳氮磺吡啶为阳性对照，分别以0．3、0．6或1．2g／（kg．d）PTICE灌胃给药，治疗5d；TBA法测定丙二醛（MDA）含量；化学发光法测定Caspase-3活性；放免分析法（RIA）测定血管活性肠肽（VIP）含量；流式细胞术测定外周血CD34^＋造血干细胞水平。结果 病理模型组结肠重／cm、结肠MDA含量和Caspase-3活性较正常对照组均极显著升高（P〈0．01），结肠VIP含量极显著降低（P〈0．01），CD34^＋造血干细胞水平有所降低；经PTICE各剂量治疗后，小鼠结肠重／cm、结肠MDA含量和Caspase-3活性较病理模型组均显著降低（P〈0．05或0．01）。且PTICE各剂量治疗组结肠Caspase-3活性以及1．2g／kg PTICE治疗组结肠重／cm和结肠MDA含量均恢复至正常水平（P〉0．05）；PTICE高或中剂量治疗组结肠VIP含量和外周血CD34^＋造血干细胞水平较病理模型组极显著升高（P〈0．01）。结论PTICE通过升高结肠组织VIP含量和动员CD34^＋造血干细胞的双重作用，抑制结肠细胞凋亡和过氧化损伤。有效抑制IBD炎症症状，治疗IBD。     

骨髓间充质干细胞移植定向迁移修复脊髓损伤的研究进展

干细胞目前已成为组织工程种子细胞应用研究的新热点,因其较绝大多数成体组织或器官特异性细胞有更强的增殖活性,且易于在体外培养而受到关注.间充质干细胞则是来源于中胚层的具有强大自我更新能力及多向分化潜能的成体干细胞,主要存在于骨髓基质中,羊水、脐带血、骨膜、骨骼肌、心肌等组织内也均储有.     

民族药三叉苦化学成分、药理作用研究进展及质量标志物（Q-Marker）预测分析

三叉苦中主要含有生物碱类、黄酮类、苯并吡喃和色烯类化学成分，以及少量苯乙酮类、挥发油类等其他化学成分，具有抗炎镇痛、抑菌抗病毒、调节血糖和血脂、抗肿瘤、护肝保肝及抗氧化作用等多种药理活性。通过对国内外已有文献资料进行归纳与整理，本研究对三叉苦的化学成分和药理作用进行了总结阐述，并结合质量标志物的概念，从植物亲缘性和化学成分特有性、与传统药性功效的相关性、成分可测性、不同产地及炮制方法等方面对三叉苦质量标志物进行了预测分析，以期为进一步开发和利用三叉苦，完善其质量评价体系等提供参考。     

脐血来源树突状细胞的培养与鉴定

目的建立并鉴定脐血来源树突状细胞(DC)培养体系，在体外诱导脐血干细胞生成成熟DC。探讨其在抗肿瘤免疫中的作用。方法脐血CD34 来源的DC以两步法，即0天开始使用GM-CSF、TNF-α、SCF、TPO、FL20，8～14天用GM—CSF、TNF—α和IL-4诱导生成。并分别在形态(光学显微镜 电镜)、表面标记(流式细胞仪)和功能(同种混合淋巴细胞反应)上加以鉴定。结果在合适的细胞因子组合下，能够经过脐血干细胞培养得到成熟的DC，具备典型的DC形态并在体外有效刺激同种淋巴细胞增殖。结论通过合适的培养可以获得大量成熟D(：。     

鱼腥草地下茎提取物诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡机制的研究

目的对鱼腥草不同部位提取物诱导SGC-7901细胞凋亡及其机制进行研究。方法将鱼腥草地上茎(AS)、地下茎(SS)、叶(L)的粉末经乙醇提取得浸膏;处理SGC-7901细胞48 h后,采用Alamar blue法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响;筛选出较高活性浸膏,光学显微镜、Hoechst33258染色观察细胞形态;DNA Ladder琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况;Caspase-3活性检测试剂盒测定Caspase-3酶活性。Western blot检测凋亡相关因子的表达;Caspase-9抑制剂(Z-LEHD-FMK)验证浸膏调控的信号转导通路。结果各部位浸膏对SGC-7901细胞均有一定的增殖抑制活性,其中SS提取物活性最强;不同浓度的SS提取物作用SGC-7901细胞48 h后,细胞明显凋亡;DNA ladder条带也明显;Caspase-3的活性明显高于对照组;Bax、Bid、Bak、p53、Caspase-9表达上调,Bcl-2表达下调;Caspase-9抑制剂(ZLEHD-FMK)能够逆转SS对SGC-7901细胞的增殖抑制活性。结论 SS对SGC-7901细胞的增殖抑制作用最强,且是通过Caspase-9介导的线粒体凋亡信号转导通路来调控细胞凋亡的。     

巴戟天多糖对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响

目的通过观察巴戟天多糖对骨髓间充质干细胞骨髓间质干细胞(BMSCs)增殖和骨向分化的影响。方法利用髓贴壁法分离培养BMSCs,并通过形态学、流式细胞仪检测细胞表面标志物以鉴定所取得的细胞;采用细胞计数(CCK-8)法检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs增殖情况的影响;对硝基苯磷酸盐法(p NPP)检测不同浓度巴戟天多糖对BMSCs碱性磷酸酶(ALP)活性的影响,以确定其最佳促分化的剂量。后续实验分空白组、巴戟天多糖组、成骨诱导组,在培养第7,14,21天分别收集各组细胞上清液,检测其ALP活性;培养第21天采用茜素红染色法检测各组BMSCs矿化情况。结果随着培养时间的延长,巴戟天多糖高、中浓度组可显著提高BMSCs的增殖(P0.05),其中高浓度组效果最佳。与空白组相比,巴戟天多糖组可提高BMSCs上清液中ALP活性(P0.05),增加其矿化结节数(P0.05)。结论巴戟天多糖能促进BMSCs的增殖及向成骨细胞分化的能力。     

气道类器官研究哮喘中Lkb1调控上皮再生的机制

目的 通过气道类器官培养研究哮喘中肝激酶B1(Lkb1)调控上皮再生的机制。方法 取Lkb1^f/f(对照组,10只)和Scgb1a1^CreER;Lkb1^f/f小鼠(Lkb1敲除组,9只),采用雾化吸入鸡卵清蛋白(OVA)的方法建立过敏性哮喘模型,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织,统计BALF中炎性细胞数量,肺组织切片免疫荧光染色比较钙激活氯离子通道蛋白3(CLCA3)阳性细胞数量。通过流式细胞术分选出Club细胞进行类器官培养,统计类器官的平均直径和类器官形成率,回收细胞通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测高脚杯细胞标志物CLCA3、纤毛细胞标志物叉头框蛋白J1(FOXJ1)和Club细胞中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达水平。结果 与对照组相比,Lkb1敲除组BALF中巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和淋巴细胞数量变化差异无统计学意义;Lkb1敲除后CLCA3阳性细胞数量减少;类器官培养结果显示敲除Lkb1后Club细胞来源的类器官平均直径减小,类器官形成率降低,纤毛细胞分化标志物FOXJ1 m...     

免疫细胞对肠干细胞命运调控的最新研究进展

肠道上皮作为机体防御外界病原体进入的“第一道防线”，其持续的自我更新是维持肠道物理屏障及肠道稳态的重要前提。而此过程依赖于隐窝底部的肠干细胞，并受到肠干细胞生态位内复杂信号网络的调控。然而，环境信号的来源及调控肠干细胞命运的方式仍有待研究。最新研究表明免疫细胞如T细胞、先天性淋巴细胞、树突状细胞和巨噬细胞在调控肠干细胞命运中起关键作用。本文综述了免疫细胞调控肠干细胞的最新进展，以期更好的理解肠道生理，为肠上皮屏障疾病的治疗提供参考。     

增殖的胰腺β细胞可上调肿瘤干细胞标志物ALDH

目的：探讨肿瘤干细胞标志物乙醛脱氢酶（ALDH）在小鼠胰腺β细胞增殖模型中的表达情况。方法通过胰腺部分切除术构建小鼠胰腺β细胞增殖的模型，采用流式细胞术和免疫荧光检测其胰腺β细胞中ALDH的表达，采用Western blot检测细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDK2及CDK4的表达。结果胰腺部分切除术后2周的胰岛细胞中aldefluor＋细胞明显增多，Ki-67＋β细胞比例明显升高，且aldefluor＋细胞CyclinD1、CyclinD2和CDK4蛋白表达水平均明显高于aldefluor－细胞。胰腺部分切除术后小鼠胰腺中的ALDH＋细胞绝大部分均为β细胞。结论胰腺部分切除术诱导的增殖胰岛β细胞具有较高的ALDH活性，aldefluor荧光标记可能作为筛选增殖β细胞的标记物。     

SIRT1与成体干细胞衰老

成体干细胞(adult stem cells)具有自我更新功能并可以分化为执行特定功能的体细胞,维持组织和器官结构完整和功能健全。有研究显示衰老可以出现在成体干细胞水平,并与机体老龄化及损伤修复能力下降有关。哺乳动物沉默调节因子2相关酶1(Sirtuins 1,SIRT1)是NAD+依赖性蛋白去乙酰化酶。对体细胞的研究表明,提高SIRT1活性可以抗细胞衰老。近年来,成体干细胞的相关研究表明SIRT1可能具有平衡干细胞的静息与增殖、维持干细胞自我更新功能、缓解年龄相关性成体干细胞功能下降和抑制成体干细胞分化紊乱的作用,但其抗衰老的分子机制还有待进一步研究。     

应用共聚焦成像评估甲氨蝶呤诱导的3D人肝脏类器官中的纤维化水平

目的 3D类器官培养的兴起为复杂疾病的模拟、药物筛选等方面提供了新型的解决方案,然而如何将传统的2D细胞的成像或检测技术应用于3D类器官,是目前研究人员亟待解决的一大问题。方法 采用免疫荧光法对甲氨蝶呤诱导的3D肝脏类器官中的纤维化蛋白CollagenⅠ进行染色。采用共聚焦显微镜进行成像并用Fiji软件对纤维化蛋白的成像结果进行分析定量。结果 采用10μM和30μM甲氨蝶呤处理7天的肝脏类器官与溶剂组相比呈现出显著的纤维化。结论 Z-stack共聚焦成像在保留类器官原有结构的基础上,为MTX诱导的3D肝类器官纤维化的量化,提供了一种非侵入性的、简便的方式。