人胚肺二倍体细胞KMB_(17)凋亡的形态学发生

无血清培养是诱导细胞凋亡的常规方法 ,具有简便、快速的特点 .用光学显微镜、荧光显微镜及透射电镜观察了人胚肺二倍体成纤维细胞 (KMB1 7)在无血清培养过程中细胞凋亡的形态学发生过程 .结果 :无血清诱导后 1h ,光镜下可见致密单层的成纤维状细胞出现疏松状态 ;3h后 ,少数细胞(1%～ 5% )出现圆缩 ;6h后 ,成纤维细胞全部由长梭形收缩为圆形 ,体积缩小 .荧光及电镜下可将细胞凋亡从形态上分为两个阶段 ,第一阶段细胞出现典型的凋亡特征 ,细胞圆缩、出芽、核染色质凝缩、成块状或新月状分布于核膜边缘 ;第二阶段 ,在细胞凋亡晚期出现坏死症状 :电镜下整个细胞崩解成碎片 .结果表明 :无血清培养诱导的凋亡在凋亡的晚期由于营养过度缺乏易出现二次坏死现象 .首次报道用于生物制品生产的人胚肺二倍体细胞在无血清诱导下凋亡发生的形态学特征 .     

大蒜新素对人巨细胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞凋亡的影响

目的 研究大蒜新素对人巨细胞病毒(HCMV)诱导感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)凋亡的动态变化及凋亡调控基因bcl-2和fas mRNA表达的影响。方法 用流式细胞术测定HELF在高、低感染复数(MOI分别为2．5、0．25)HCMV感染后1、12、24、36、48、72、96h凋亡细胞比率；大、中、小剂量大蒜新素(9、6和3μg／mL)处理正常的和感染的HELF细胞(MOI为2．5)后上述各时间点凋亡细胞比率。用原位杂交法检测大剂量大蒜新素处理感染细胞(MIO为0．25)72h后bcl-2和fas mRNA表达强度变化，并与正常细胞和感染细胞对比分析。结果 正常细胞凋亡比率保持恒定低水平(凋亡率平均2．68％)；低、高感染复数感染细胞随时间延长凋亡细胞逐渐增多，凋亡率峰值分别达8．85％(96h)和25．63％(72h)；各剂量大蒜新素处理的正常细胞凋亡率增加，呈剂量依赖性，峰值分别为4．88％、6．47％和8．35％；但各剂量药物处理感染细胞后却使细胞凋亡比率下降，大剂量药物处理72h时效应最为明显，凋亡细胞比率由25．63％降至16．24％。正常细胞高表达bcl-2，低表达fas基因；感染HCMV后，bcl-2表达显著下调，fas表达明显增强；大蒜新素处理感染细胞后使bcl-2表达强度明显高于感染细胞，fas表达水平明显低于感染细胞，但仍未恢复到正常细胞水平。结论HCMV是HELF凋亡的强诱导剂；病毒可通过下调凋亡抑制基因bcl-2和上调凋亡促进基因fas而发挥致凋亡作用。大蒜新素本身可诱导HELF凋亡，但却能明显抑制HCMV诱导的细胞凋亡，其抑制作用可能与药物干扰HCMV影响凋亡调控基因bcl-2和fas表达有关。     

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代。扫描电镜下可见细胞随增龄而由扁平长梭形变为圆球形,伪足、微绒毛递增,细胞胞体变小,细胞凹陷增多且逐步加深。透射电镜显示细胞增龄变化主要为细胞核逐渐变小,核进行性凹陷加深,核膜从部分融合到全部崩解;异染色质渐增,而常染色质递减;核仁变小且疏松;线粒体减少,嵴少,基质凝聚,肿胀,空泡化;粗面内质网减少,脱粒,游离核糖核蛋白体增多;高尔基复合体减少,其囊泡排列紊乱且肿胀;溶酶体递减;脂褐质递增.黄芪组细胞衰老过程中细胞器的变化与上述非黄芪组细胞的衰老变化规律基本相同;但其改变程度显然较轻,变化速率相对缓慢.特别是黄芪组细胞之高尔基复合体、中心体特别发达,虽细胞已衰老而它们却不甚衰老.研究证明黄芪具抗衰延寿的良好效应,以其做为抗衰老延寿命的药物值得高度重视和大力开发.     

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老作用研究——Ⅱ.超微形态研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,在用扫描和透射电镜观察细胞衰老过程中超微结构变化的同时,动态观察黄芪抗细胞衰老效应。结果表明,体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞成活至52代,而含0.2%黄芪制取液的培养基使细胞成活至77代。扫描电镜下可见细胞随增龄而由扁平长梭形变为圆球形,伪足、微绒毛递增,细胞胞体变小,细胞凹陷增多且逐步加深。透射电镜显示细胞增龄变化主要为细胞核逐渐变小,核进行性凹陷加深,核膜从部分融合到全部崩解;异染色质渐增,而常染色质递减;核仁变小且疏松;线粒体减少,嵴少,基质凝聚,肿胀,空泡化;粗面内质网减少,脱粒,游离核糖核蛋白体增多;高尔基复合体减少,其囊泡排列紊乱且肿胀;溶酶体递减;脂褐质递增.黄芪组细胞衰老过程中细胞器的变化与上述非黄芪组细胞的衰老变化规律基本相同;但其改变程度显然较轻,变化速率相对缓慢.特别是黄芪组细胞之高尔基复合体、中心体特别发达,虽细胞已衰老而它们却不甚衰老.研究证明黄芪具抗衰延寿的良好效应,以其做为抗衰老延寿命的药物值得高度重视和大力开发.     

刺五加对人胚肺二倍体纤维母细胞生长的影响

目的 :探讨刺五加 (APS)对人胚肺二倍体纤维母细胞 (2 BS)增殖、凋亡的影响。方法 :采用生物活性法观察不同浓度APS在不同时间对 2 BS细胞增殖的抑制作用 ,利用流式细胞仪检测其诱导 2 BS细胞凋亡小体形成百分率及对细胞周期的影响 ,并与甲基强的松龙 (M- pred)比较。结果 :1APS和 M- pred对 2 BS细胞均有增殖抑制作用 ,与无药空白对照组比较差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,但两药作用相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;2 APS和 M- pred均有诱导 2 BS细胞凋亡作用 ,主要作用于 S期 ,2 BS细胞凋亡小体形成百分率与无药空白对照组比较差异均有统计学意义 (P <0 .0 1) ,但两药作用相比差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :APS有显著抑制 2 BS细胞增殖并诱导其凋亡的作用、活性与 M- pred相近 ,但由于 APS尚有多种药理作用而无不良副反应 ,所以是治疗肺纤维化较好的药物。     

敏咳清颗粒对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡的影响

目的:通过观察敏咳清颗粒对体外培养的肺成纤维细胞(lung fibroblast,LFB)增殖、凋亡的影响,探讨敏咳清颗粒治疗咳嗽变异性哮喘的作用机制.方法:将常规培养LFB分为空白组、模型组、对照组、敏咳清高浓度组、敏咳清低浓度组、养阴清肺糖浆高浓度组、养阴清肺糖浆低浓组、地塞米松组,加入肝素刺激后分别加入对应的含药血清,采用MTT法检测LFB增殖,TUNEL法检测LFB凋亡.结果:①各组含药血清均可以不同程度地抑制肝素刺激下LIB的增殖,以敏咳清颗粒高剂量组抑制LFB增殖的作用最强,48 h的抑制作用强于24 h,呈剂量依赖性;②各组均出现不同程度细胞凋亡的形态改变,以敏咳清高剂量组诱导LFB凋亡细胞最多.结论:敏咳清颗粒能显著抑制LFB增殖,诱导LFB凋亡.     

壮龄剂对人胚肺二倍体细胞的抗老化实验研究

本研究用体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞作为壮龄剂抗老化研究的细胞模型,从35代开始,于培养液中加入壮龄剂者为实验组,不加药为对照组。现察了壮龄剂对二倍体细胞的形态结构、生长速度和增殖的影响。结果是实验组细胞的传代寿命为68代,对照组为51代,实验组比对照组多传17代,能延长细胞寿命33.3％代。实验组细胞的生长状态,速度和酸性磷酸酶活性变化均比同代对照组细胞好。这些结果证明了壮龄剂有促进细胞生长增殖和抗老化作用。     

人胚肺成纤维细胞感染人巨细胞病毒不同时间病毒载量的分析

目的:检测人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HELF)后不同时间点HCMV DNA载量,以明确HCMV感染HELF的时效性.方法:将HCMV接种HELF细胞,收集感染后3,5,8,10,15,20,30,60,120 min时间点细胞,提取病毒DNA,以即刻早期1基因(IE-1)为靶基因进行荧光定量PCR检...     

乙酰胆碱酯酶特异性抑制剂BW284C51抑制无血清诱导的凋亡

为了研究ＡＣｈＥ特异性抑制剂ＢＷ２８４Ｃ５１与细胞凋亡的关系。采用人二位体胚肮细胞株ＫＭＢ１７经无血清培养方法诱导出典型调亡,在无血清培养液中加入１０μｍｏ／Ｌ乙酰胆碱酯酶特异性抑制剂ＢＷ２８４Ｃ５１。结果：乙酰胆碱酯酶特异性抑制剂ＢＷ２８４Ｃ５１具有抑制夫血清诱导的调亡,ＡＣｈＥ参与了细胞凋亡的信号传导,抑制该酶的生就有抑制调亡的发生。结果表明：ＡＣｈＥ在凋亡过程中可能起非常重要的作用,参与了凋     

茯苓蜂皇浆对体外人胚肺二倍体成纤维细胞的抗衰老研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞(HELF 2BS株)为材料。当细胞培养至25代时,将细胞分为加茯苓蜂皇浆的给药组和不加茯苓蜂皇浆的对照组。2组在相同条件下传代培养,直至细胞停止增殖。结果表明:给药组细胞能生长到65代,而对照组细胞仅存活至55代。实验组细胞寿命比对照组提高18％。提示茯苓蜂皇浆对人胚肺二倍体成纤维细胞有一定的抗衰老作用。     

松花粉对人胚肺二倍体成纤维细胞p16及p21基因表达的影响

[目的]研究松花粉对衰老细胞(2BS)内细胞周期蛋白激酶抑制剂p16INK4a及p21WAF1基因mRNA表达的影响。[方法]2BS细胞从28代开始培养,随机分成年轻对照组(30代)、衰老模型组(56代)、松花粉中剂量(120mg/dl)组(56代)、松花粉高剂量(240mg/dl)组(56代)。流式细胞术分析细胞周期,检测G1期比例;半定量RT-PCR法测定p16INK4a、p21WAF1mRNA的表达。[结果]衰老模型组细胞出现典型的细胞体积增大,形态不规则;松花粉处理组细胞,体积回缩,形态趋于规则。G1期细胞比例松花粉中剂量组(72.73%±1.76%)和高剂量组(64.15%±0.87%)较衰老模型组(81.33%±3.43%)显著下降(P<0.05)。细胞周期蛋白激酶抑制剂p16INK4amRNA的表达量在松花粉中剂量组(0.3483±0.0078)和高剂量组(0.3222±0.0055)较衰老模型组(0.3974±0.0078)表达灰阶明显下调。p21WAF1mRNA的表达量在松花粉中剂量组(0.7692±0.1749)和高剂量组(0.4451±0.0363)较衰老模型组(1.1767±0.2782)。[结论]松花粉具有改善细胞衰老的作用,其分子机制可能与下调衰老细胞内细胞周期蛋白激酶抑制剂p16INK4a及p21WAF11mRNA的表达从而改善衰老细胞G1期阻滞有关。     

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞抗衰老作用的研究Ⅰ.细胞寿命、增殖能力和超氧化物歧化酶含量的研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,当细胞培养至27代时,将细胞分为加黄芪提取液的给药组和不加黄芪的对照组,相同条件下传代培养,直至细胞停止增殖。同时,每隔一定代龄用流式细胞计测定两组细胞的增殖能力,以化学发光法测定其 SOD 含量,并进行常规染色体检查和细胞一代存活时间的实验。结果表明:给药组生长77代,而对照组细胞仅存活至52代。至传代终止两组细胞都始终保持其二倍体性质,随着代龄的增加,两组细胞的增殖能力、SOD 含量和一代存活时间均明显下降。同一代龄,给药组细胞的增殖能力、SOD 含量和一代存活时间高于对照组,随代龄的增加,这种差距更加明显。     

黄芪对体外人胚肺二倍体成纤维细胞抗衰老作用的研究Ⅰ.细胞寿命、增殖能力和超氧化物歧化酶含量的研究

以体外培养的人胚肺二倍体成纤维细胞为材料,当细胞培养至27代时,将细胞分为加黄芪提取液的给药组和不加黄芪的对照组,相同条件下传代培养,直至细胞停止增殖。同时,每隔一定代龄用流式细胞计测定两组细胞的增殖能力,以化学发光法测定其 SOD 含量,并进行常规染色体检查和细胞一代存活时间的实验。结果表明:给药组生长77代,而对照组细胞仅存活至52代。至传代终止两组细胞都始终保持其二倍体性质,随着代龄的增加,两组细胞的增殖能力、SOD 含量和一代存活时间均明显下降。同一代龄,给药组细胞的增殖能力、SOD 含量和一代存活时间高于对照组,随代龄的增加,这种差距更加明显。     

环孢霉素A对人胚肺纤维母细胞增殖及凋亡的影响

目的 :通过观察环孢霉素 A( Cs A)对人胚肺纤维母细胞 ( 2 BS)增殖及凋亡的影响 ,探讨该药在抑制肺纤维化中的疗效及其作用机制。方法 :采用生物活性法观察药物对 2 BS细胞的增殖抑制作用 ,采用流式细胞仪检测药物诱导的 2 BS细胞凋亡小体形成百分率 ,同时观察其对细胞周期的影响 ,并与甲基强地松龙 ( M- pred)对比研究。结果 :1 Cs A和 M- pred两种药物对 2 BS细胞均有增殖抑制作用 ,分别与对照组比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,Cs A的药物作用比 M- pred明显( P<0 .0 1 ) ;2 Cs A和 M- pred明显促进 2 BS细胞凋亡 ,与对照组比较差异有显著性 ( P<0 .0 1 ) ,Cs A作用较 M- pred更明显 ( P<0 .0 5 )。Cs A主要作用于细胞 S+ G2 /M期 ,M- pred主要作用于 S期。结论 :Cs A和 M- pred可抑制 2 BS细胞增殖并促进其凋亡 ,Cs A作用明显强于 M- pred。Cs A是治疗肺纤维化更为有效的药物 ,促进细胞凋亡可能是其主要药物作用机制之一。     

巨细胞病毒吸附穿入人胚肺成纤维细胞对HLA-Ⅰ抗原表达的影响

目的 体外实验探讨人类巨细胞病毒(HCMV)与细胞表面硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPGs)结合后对人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响。方法 流式细胞仪检测不同干预条件细胞表面HLA-Ⅰ的表达。免疫组织化学法检测不同干预条件细胞内HCMV pp65蛋白的表达。结果 流式细胞仪检测的结果表明人胚肺成纤维细胞(HELF)表面HLA-Ⅰ的表达HCMV感染组低于对照组；紫外线灭活HCMV(UV-HCMV)组高于对照组；肝素和氯酸钠干预HELF细胞后再用UV-HCMV感染的HELF细胞，其表面HLA-Ⅰ的表达低于UV-HCMV组。免疫组织化学法检测结果显示：HCMV感染HELF24h，HCMV pp65蛋白呈阳性表达；UV-HCMV感染HELF24h，HCMV pp65蛋白呈阴性表达。结论 HSPGs可能参与影响HLA-Ⅰ在HCMV感染的HELF细胞表面上的表达，对HCMV逃避宿主的免疫监视起间接调节作用。