预先溃变周围神经移植对成年金黄地鼠视网膜节细胞再生的影响

0　引言　本研究探讨了移植预先溃变周围神经对促进视网膜节细胞 (下称节细胞 )的轴突再生 ,是否比正常周围神经更有效这一仍有争议的问题 [1 ,2 ] .1　材料和方法1.1　材料　成年雌性金黄地鼠 2 4只 ,体质量 90～ 10 0 g.随机分为预先夹断、预先切断线扎、预先切断非线扎和对照 4组 ,每组 n=6 .1.2　方法　移植前 8d将左侧坐骨神经主干以显微手术镊夹断 (夹断组 )或切断 ,远侧段断端以细丝线结扎 (线扎组 )或不扎 (非线扎组 ) .距眼球后极 0 .5 mm切断左侧视神经 ,将已夹断或切断的神经远侧段或正常坐骨神经 (对照组 ) ,移植于视神经眶侧断…     

三七总皂甙对成年地鼠视网膜节细胞存活的影响

目的：探讨三七总皂甙对提高切断视神经后节细胞存活的作用。方法：用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察正常和经三七总皂甙处理的动物于切断视神经５、７、１４ｄ后视网膜节细胞的密度。结果：①正常视网膜节细胞平均密度为（２００７±１１５）／ｍｍ２；②切断视神经５、７、１４ｄ后其视网膜节细胞平均密度分别下降至：（１１９８±１０７）／ｍｍ２，（８２５±４０）／ｍｍ２和（１９６±１０）／ｍｍ２；③给予生理盐水的对照组在上述各时间组视网膜节细胞平均密度与单纯切断视神经组结果相似；④给予三七总皂甙的实验组在５、７、１４ｄ视网膜节细胞的平均密度分别为（１４６１±９６）／ｍｍ２；（１０６４±９１）／ｍｍ２）和（３０２±１９）／ｍｍ２，与切断视神经组和生理盐水对照组相比在各时间组上均存在显著性差异（Ｐ＜０．０５）。结论：三七总皂甙可提高切断视神经后成年金黄地鼠视网膜节细胞的存活，三七总皂甙的抑制钙内流作用可能与提高切断视神经后视网膜节细胞的存活有关。     

霍乱毒素对金黄地鼠视网膜神经肽Y免疫 反应节细胞再生的影响

【目的】研究NPY免疫反应(IR)视网膜节细胞(RGCs)能否再生及玻璃体内注射霍乱毒素(CTx)或/和玻璃体植入外周神经对其再生的影响。【方法】16只成年金黄地鼠随机分4组,每组4只动物。切断视神经(ON)并缝接坐骨神经(attachedgraft,AG)为再生对照组即AG组;ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射CTx或/和植入小段坐骨神经(SN)为实验组。荧光金逆行标记再生的RGCs结合NPY免疫荧光组化双标法,观察视网膜平铺片并记数。【结果】术后4周,AG组每个视网膜NPY-IR阳性再生RGCs平均数为58±22个,占再生RGCs总数的3.36%;AG+CTx、AG+SN和AG+CTx+SN各实验组该类再生节细胞平均数依次为(143±47)、(125±37)和(437±37)个,它们分别占再生RGCs总数的(5.15±0.89)%,(5.34±0.37)%和(8.11±0.85)%,与对照组的差异具统计学意义。【结论】成年哺乳动物NPY-IR阳性RGCs能再生,玻璃体内注射CTx或/和植入SN,可能促进该类RGCs再生。     

H-89和wortmannin对霍乱毒素促进受损视网膜节细胞再生作用的影响

【目的】研究蛋白激酶A(PKA)抑制剂H-89和磷酸肌醇3-激酶(PI3-K)特异抑制剂wortmannin对霍乱毒素(CTx)促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的影响,探讨CTx促进受损视网膜节细胞(RGCs)再生的作用机制。【方法】成年金黄地鼠近侧切断视神经(ON),移植一段自体坐骨神经(SN)与ON近侧残端缝接,玻璃体内注射给药。20只动物分4组,每组5只。注射CTx为CTx组,注射CTx和H-89为CTx+H组、注射CTx和wortmannin为CTx+W组、不给药组为对照组。用粒蓝(GB)逆行标记再生的RGCs,取视网膜于荧光镜下记数。【结果】动物存活4周后,对照组、CTx组和CTx+H组再生节细胞平均数(个/视网膜)分别为:(1431±352),(2567±883)和(1606±293)个/视网膜(n=5)。CTx+H组与对照组比较差异无显著性(P<0.05),而与CTx组比较有显著性差异(P<0.05),表明H-89可抑制CTx的促再生作用;CTx+W组再生节细胞数为:(1872±262)个/视网膜(n =5),与对照组和CTx组比较差异均有显著性(P <0.05),提示wortmannin对CTx有部分的抑制作用。【结论】CTx可能是通过PKA-CREB通路实现对受损RGCs的促再生作用,PI3-K-Akt通路可能是PKA-CREB通路的下游分支。     

三七总皂苷对成年地鼠视网膜节细胞存活的影响

 【目的】探讨玻璃体注射三七总皂苷（tPNS）对视神经切断后视网膜节细胞（RGCs）存活的作用。【方法】用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察正常和经tPNS处理的金黄地鼠于视神经切断后5、7、14d时RGCs的密度。动物分为正常组、单纯切断视神经组（未注射组）、tPNS处理组和生理盐水对照组。【结果】正常RGCs平均密度为（1970±82）/mm^2;视神经切断后5、7、14 d时RGCs平均密度分别下降至（983±48）/mm^2、（788±44）/mm^2和（216±37）/mm^2;生理盐水对照组在各时间点RGCs平均密度与未注射组结果相似;tPNS处理组结果分别为（1363±56）/mm^2、（1169±70）/mm^2和（477±25）/mm^2,与未注射组和生理盐水对照组相比在各时间点上均存在显著性差异（P〈0.05）。【结论】玻璃体注射tPNS可提高成年地鼠视神经切断后RGCs的短期存活率。     

三七总皂苷对成年地鼠视网膜节细胞存活的影响

【目的】探讨玻璃体注射三七总皂苷（tPNS）对视神经切断后视网膜节细胞（RGCs）存活的作用。【方法】用荧光素逆行示踪标记法和定量解剖学技术观察正常和经tPNS处理的金黄地鼠于视神经切断后5、7、14d时RGCs的密度。动物分为正常组、单纯切断视神经组（未注射组）、tPNS处理组和生理盐水对照组。【结果】正常RGCs平均密度为（1970±82）/mm^2;视神经切断后5、7、14 d时RGCs平均密度分别下降至（983±48）/mm^2、（788±44）/mm^2和（216±37）/mm^2;生理盐水对照组在各时间点RGCs平均密度与未注射组结果相似;tPNS处理组结果分别为（1363±56）/mm^2、（1169±70）/mm^2和（477±25）/mm^2,与未注射组和生理盐水对照组相比在各时间点上均存在显著性差异（P〈0.05）。【结论】玻璃体注射tPNS可提高成年地鼠视神经切断后RGCs的短期存活率。     

三七总皂苷对HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用研究

目的：观察三七总皂苷对肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,以400ng／mL三七总皂苷和100ng／mLHB-EGF为干预因素,实验分对照组、100ng／mLHB-EGF纽和400ng／mL三七总皂苷＋100ng／mLHB-EGF组,刺激系膜细胞24、36、48h,采用MTT方法,观察三七总皂苷对重组HB-EGF诱导系膜细胞增殖的作用情况。结果：HB-EGF刺激36h时,系膜细胞明显增殖,与对照组比较,P〈0．05;三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞的增殖,与HB-EGF组比较,P〈0．05。随着刺激时间的延长,三七总皂苷对HB-EGF诱导系膜细胞增殖的抑制作用增强,但36h与24h比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;与48h比较,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：三七总皂苷能抑制HB-EGF诱导的系膜细胞增殖作用,且作用随着刺激时间延长而增强。三七总皂苷可能通过抑制HB-EGF对系膜细胞增殖作用而延缓肾小球硬化。     

外周神经和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤对成年金黄地鼠视网膜节细胞再生的影响

[目的]探讨玻璃体内插入外周神经和玻璃体内注射3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)对轴突损伤的视网膜节细胞再生的影响.[方法]20只成年金黄地鼠随机分4组,每组5只动物.切断视神经(ON)并缝接坐骨神经(attached graft,AG)为再生对照组;ON切断并缝接坐骨神经后再于玻璃体内注射IBMX和/或插入一小段自体坐骨神经(SN)为实验组.采用逆行示踪标记术,观察视网膜平铺片节细胞数.[结果]①对照组(AG)每个视网膜再生的节细胞数为(1 428±284)个/reti-na;②外周神经组(AG+SN)为(2 220±415)个/retina;③IBMX组(AG+IBMX)为(2 424±1 026)个/retina;④外周神经和IB-MX联合组(AG+IBMX+SN)为(3 065±654)个/retina;其中,AG+SN组同AG组相比存在显著性差异(P<0.01);AG+IBMX+SN组同AG、AG+IBMX和AG+SN组相比均有显著性差异(P<0.01).[结论]研究结果提示联合应用外周神经和IBMX可大幅提高受损视网膜节细胞的再生.     

三七总皂苷减少高脂血症兔动脉壁损害作用的实验研究

目的 观察三七总皂苷（PNS）减少高脂血症兔动脉壁的损害作用.方法 将健康新西兰兔随机分为正常对照组（NC）、动脉粥样硬化模型组（HC）、PNS中剂量治疗组（MD）及PNS高剂量治疗组（HD）,NC组喂饲普通饲料,后3组喂食1.5％高胆固醇饲料.PNS治疗组HD、MD分别采取静脉注射给药法经兔耳静脉注射PNS 100、50 mg/（kg·d）,于第3-4周第7-8周以及第11 -12周每隔14d给药PNS 3个疗程.于12周结束由耳缘静脉取血酶法测定血脂含量,摘取主动脉通过光镜和电镜观察病理学改变.结果 三七总皂苷能显著抑制血清总胆固醇（TC）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平的下降（P＜0.05）.结论 三七总皂苷对实验性动脉粥样硬化的形成有抑制作用.     

三七总皂苷对重症急性胰腺炎大鼠血清中炎症因子的影响

目的：探讨三七总皂苷（PNS）对重症急性胰腺炎（SAP）大鼠血清肿瘤坏死因子（TNF）α、白细胞介素（IL）6、IL-10水平的影响,为其治疗SAP提供理论基础。方法：SD大鼠随机分为假手术组、SAP组、PNS治疗组,每组30只。各组在术后6、12、24h检测血清淀粉酶、TNF-α、IL-6和IL-10水平,观察胰腺病理改变及各组术后48h死亡率。结果：SAP组各时间点血清淀粉酶、TNF-α、IL-6和IL-10水平均显著高于假手术组（P〈0.01）;PNS治疗组各时间点血清淀粉酶、TNF-α和IL-6显著低于SAP组（P〈0.05）,而IL-10水平显著高于SAP组（P〈0.05）;PNS治疗组胰腺组织损害较SAP组减轻（P〈0.01）;假手术组和治疗组48h死亡率显著低于SAP组（P〈0.05）。结论：PNS可减少促炎细胞因子TNF-α、IL-6产生,上调抗炎细胞因子IL-10,从而达到治疗SAP的目的。     

三七总皂甙对高粘血症及高血压的治疗作用

本文分析用三七总皂甙治疗１４例高粘血症并高血压患者的情况。结果表明，ＰＮＳ能降低患者全血及血浆粘度，降低红细胞的聚集性，还能减慢心率，降低增高的血压，但对正常血压影响较小。     

三七总皂苷对大鼠血管平滑肌细胞增殖及JNK磷酸化的影响

  【目的】 研究发现,三七总皂苷(TPNS) 具有抑制和促进细胞增殖的双向调节作用,但是具体的作用机制尚不明确&#65377;本研究旨在观察TPNS对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及经由何种信号通路介导&#65377;【方法】 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)和蛋白印迹(Western blot)法观察了体外培养的大鼠VSMC在不同浓度及一定浓度不同作用时间TPNS作用下,VSMC增殖活性的变化及c*9鄄Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化的变化;并用DAPI染细胞核,观察TPNS作用后核形态的变化&#65377; 【结果】 MTT法观察到:TPNS的浓度为0.5 g/L,1.0 g/L,1.5 g/L时,无论是处于静息状态或50 mL/L血清刺激下,VSMC的代谢活性均增高;TPNS的浓度为3.0 g/L时,静息培养的VSMC的代谢活性没有明显的变化,而50 mL/L血清刺激的VSMC的代谢活性仍增高;TPNS的浓度为6.0 g/L,12.0 g/L时,静息培养或50 mL/L血清刺激下的VSMC的代谢活性均降低,并随着浓度的增大,代谢活性降低越明显&#65377;同时,Western blot 结果显示:TPNS能快速的激活JNK1/2,并呈时间和浓度依赖性&#65377;当TPNS的浓度为0.5 g/L时,即可引起JNK的磷酸化,并随着浓度的增大,磷酸化作用增强;当TPNS的浓度为1.5 g/L时,作用5 min,JNK呈现最大程度的激活,随后逐渐减弱&#65377; DAPI染核观察到,6.0 g/L TPNS作用48 h后,VSMC出现了核固缩&#65380;核碎片等细胞凋亡的特征&#65377;【结论】 较低浓度的TPNS可促进血管平滑肌细胞的增殖,而较高浓度的TPNS可抑制其增殖,JNK1/2磷酸化可能是引起细胞增殖受到抑制的机制之一&#65377;     

Effects of Panax Notoginseng Saponins on Homing of C-kit~+ Bone Mesenchymal Stem Cells to the Infarction Heart in Rats

Objective:To investigate the effects of panax notoginseng saponins(PNS) on homing of C-kit+ bone mesenchymal stem cells(BMSCs) to the infarction heart.Methods:The acute myocardial infraction(AMI) model was established in 140 Wistar rats,105 model rats survived after operation,and the model rats were randomly divided into five groups,21 rats in each group:Western medicine group mobilized by subcutaneous injection of human granuloctye colony stimulating factor(G-CSF) 50 μg·kg-1·d-1;sham operation group and a model group treated by subcutaneous injection of normal saline 50 μg·kg-1·d-1;Chinese medicine group mobilized by intraperitoneal injection of Xuesaitong(血塞通)(ingredients of PNS) 150 mg·kg-1·d-1;integrative medicine group mobilized by subcutaneous injection of G-CSF 50 μg·kg-1·d-1 and intraperitoneal injection of Xuesaitong 150 mg·kg-1·d-1.Except for the sham-operated group,each group was divided into three sub-groups by three time points of 1 d,7 d and 14 d.G-CSF was injected once a day for 7 d.Xuesaitong was injected once a day until the rats were killed.The flow cytometry was used for detection of C-kit + cells in the peripheral blood in different time points,and immunohistochemical method was used for detection of the changes of C-kit + cell and Ki-67+ cell numbers in the marginal zone of AMI.Results:Twenty-four hours after the operation,C-kit + cells had a slight increase in the model group compared with the sham operation group(P>0.05).The peripheral blood C-kit+ cells in the integrative group increased significantly compared with the other groups on 7 d and 14 d(all P<0.05).Meanwhile the expression of C-kit + cells and Ki-67+ cells in the marginal zone of AMI in the integrative group increased significantly compared with the Chinese medicine group,the western medicine group and the model group on 1 d,7 d and 14 d(all P<0.05),and the cells in the integrative group decreased significantly on 14 d compared with that on 7 d(P<0.05).Conclusion:PNS can cooperate with G-CSF to mobilize C-kit+ BMSCs from the marrow into the peripheral blood and promote them "homing" to the infarction heart.