重组结缔组织生长因子对大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化的影响

目的:克隆和构建带大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因真核表达载体pcDNA3.1(+)/CTGF,并观察其对血管外膜成纤维细胞(AF)表型的影响。 方法:以AF总RNA为模板，进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)，获得CTGF的cDNA，克隆入pcDNA3.1(+)载体，酶切和测序鉴定重组子。将构建好的pcDNA3.1(+)/CTGF用脂质体法转入AF细胞。Western blotting观察CTGF的表达。同时观察转染pcDNA3.1(+)/CTGF对细胞表型的影响。 结果:成功构建大鼠CTGF基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)/CTGF．并证明其能在真核细胞内表达。转染pcDNA3.1(+)/CTGF可以诱导AF表型转化。 结论:重组结缔组织生长因子可诱导大鼠血管外膜成纤维细胞表型转化。     

小鼠血管外膜成纤维细胞原代培养及生物学特性

目的 建立小鼠胸主动脉外膜成纤维细胞（adventitial fibroblasts,AF）组织块贴壁法培养模型.方法 组织块贴壁法培养小鼠AF,并在光镜下观察细胞形态,免疫细胞荧光染色法鉴定细胞类型,绘制细胞生长曲线.结果 AF能够迅速从组织块长出并增殖,光镜下细胞呈梭形或多边形,免疫荧光染色结果显示细胞质中有波形蛋白相关抗原存在,CD31和α-平滑肌肌动蛋白染色为阴性,细胞在第2～7天进入指数生长期.结论 组织块贴壁法适用于小鼠AF的原代培养,为研究AF生物学功能提供了充足、可靠的靶细胞模型.     

Ifi204基因表达对大鼠血管外膜成纤维细胞凋亡和迁移的影响

目的探讨ifi204基因过表达与沉默对大鼠血管外膜成纤维细胞(VAF)凋亡和迁移的影响。方法原代培养大鼠VAF,利用携带ifi204基因的慢病毒颗粒或空载体慢病毒颗粒感染VAF,分别作为实验组(ifi204 lv组)和阴性对照组(blank lv组)。用ifi204基因小干扰RNA瞬时干预VAF使其沉默(ifi204 siRNA组)、空白小干扰RNA作为阴性对照组(control siRNA组),未经处理的VAF作为空白对照组(negative组)。流式细胞仪检测细胞凋亡,细胞划痕法和Transwell法测定细胞迁移情况,用real-time PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白表达。结果与blank lv组、control siRNA组、ifi204 siRNA组和negative组相比,ifi204 lv组的P204、P53 mRNA和蛋白表达及细胞凋亡率明显上调(P0.05),细胞迁移速度降低(P0.05)。转染ifi204 siRNA可抑制P204、P53的mRNA和蛋白表达(P0.05),提高细胞活力,抑制细胞凋亡(P0.05),加快细胞迁移速度(P0.05)。结论 ifi204基因表达对大鼠VAF细胞凋亡和迁移的影响可能与激活P53表达有关。     

转化生长因子β1与体外血管外膜成纤维细胞的增殖和迁移

背景：近年来的研究表明,血管外膜成纤维细胞在血管损伤后新生内膜的增生中起重要作用。当血管损伤后,转化生长因子β1在局部水平上调激活下游多种信号途径,其对血管外膜成纤维细胞参与新生内膜增生过程中所起的作用尚不十分清楚。 目的：观察转化生长因子β1对体外血管外膜成纤维细胞增殖和迁移的影响 方法：体外培养大鼠胸主动脉成纤维细胞,分别以0,3,5,10,15 μg/L的转化生长因子β1刺激成纤维细胞0,2,12,24,48,72 h。以MTT法检测细胞增殖活性,Transwell Chamber测试细胞迁移。 结果与结论：转化生长因子β1能诱导血管外膜成纤维细胞增殖,随着转化生长因子β1质量浓度、作用时间的增加,诱导血管外膜成纤维细胞增殖能力增强(P< 0.05),其中10 μg/L转化生长因子β1作用48 h增殖较对照组增强最为明显(P < 0.01)。不同剂量转化生长因子β1刺激后迁移的细胞数目随转化生长因子β1质量浓度增加而增加,促进作用逐渐增强,呈剂量依赖关系。     

损伤家兔动脉后外膜成纤维细胞增殖、表型变化与TGF-β1表达的关系

目的:观察损伤家兔动脉后外膜成纤维细胞增殖、表型变化与TGF-β1表达的关系。方法:采用免疫组化、透射电镜和原位杂交技术,观察兔腹主动脉损伤后外膜细胞增殖、细胞表型、超微结构和TGF-β1 mRNA表达水平的变化。结果: 损伤后3 d和7 d血管外膜PCNA 阳性细胞显著增多, 14 d接近正常。外膜细胞在损伤后逐渐获得α-actin表达 ,3 d呈弱阳性,7 d和14 d呈强阳性改变。损伤后7 d和14 d外膜细胞发生了显著的超微结构改变:大量的微丝出现和粗面内质网明显扩张,呈现出肌成纤维细胞的特征。损伤后3 d,外膜开始出现TGF-β1 mRNA表达,7 d和14 d表达持续上调,至28 d表达开始下调。 结论: 提示动脉损伤后外膜成纤维细胞增殖水平和表型变化与TGF-β1表达水平具有相关性。     

血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原合成及其mRNA表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原合成及其mRNA表达的影响.方法:血管紧张素Ⅱ作用于培养的大鼠血管外膜成纤维细胞,采取酶联免疫吸附法(ELISA)、竞争性逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测Ⅰ型胶原蛋白合成及Ⅰ型胶原mRNA的表达.结果:在血管紧张素Ⅱ作用下,血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成及Ⅰ型胶原mRNA的表达均增加,且有一定的剂量依赖性.结论:血管紧张素Ⅱ可刺激血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成及Ⅰ型胶原mRNA的表达,提示血管紧张素Ⅱ是调节血管外膜成纤维细胞胶原代谢的重要因子,血管外膜成纤维细胞可能参与高血压血管重塑过程.     

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠动脉血栓形成的影响

人类很多突发的损伤(如烧伤、电击)以及动脉粥样硬化等都可以引起血管内皮细胞的损伤,内皮下成分暴露,血栓形成.血管栓塞是一种威胁人类身体健康的疾病,可以引起心脏、大脑突然缺血导致猝死.前期研究已表明碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对电击所致大鼠动脉血栓形成有抑制作用[1-2].本实验通过建立大鼠颈总动脉血栓形成的实验模型[3],进一步探讨酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblast growth factor,aFGF)对大鼠动脉血栓形成的影响及量效关系. 1 材料和方法     

血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原合成及其mRNA表达的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ对血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原合成及其mRNA表达的影响。方法:血管紧张素Ⅱ作用于培养的大鼠血管外膜成纤维细胞,采取酶联免疫吸附法(ELISA)、竞争性逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测Ⅰ型胶原蛋白合成及Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果:在血管紧张素Ⅱ作用下,血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成及Ⅰ型胶原mRNA的表达均增加,且有一定的剂量依赖性。结论:血管紧张素Ⅱ可刺激血管外膜成纤维细胞Ⅰ型胶原蛋白合成及Ⅰ型胶原mRNA的表达,提示血管紧张素Ⅱ是调节血管外膜成纤维细胞胶原代谢的重要因子,血管外膜成纤维细胞可能参与高血压血管重塑过程。     

大鼠血管外膜成纤维细胞亚群生长特性及功能研究

目的: 体外分离培养SD大鼠胸主动脉外膜成纤维细胞亚群,并对其增殖特性和血管功能进行初步分析。方法: 克隆环法进行血管外膜成纤维细胞的单克隆培养,RT-PCR鉴定细胞亚群纯度,MTT检测血管外膜成纤维细胞亚群增殖能力。荧光定量PCR检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及其受体拮抗剂氯沙坦(losartan)和PD-123319对前内皮素原-1(preproET-1)mRNA表达的影响。结果: 克隆环法获得血管外膜成纤维细胞2个亚群:圆形细胞亚群和纺锤形细胞亚群。以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,经RT-PCR检测,结果显示无von Willebrand因子、CD8、结蛋白和肌球蛋白重链的表达,是纯细胞系。2个细胞亚群的增殖情况有所不同,圆形细胞在第2~4 d进入指数分裂期;纺锤形细胞于第3~5 d进入指数分裂期。AngⅡ在0~1 000 nmol/L范围内对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无显著影响,而呈浓度依赖性地增加圆形细胞preproET-1 mRNA的表达(P<0.01);losartan阻断了AngⅡ诱导的圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,但对纺锤形细胞preproET-1 mRNA的表达无明显影响。结论: SD大鼠血管外膜成纤维细胞有2个细胞亚群:圆形细胞和纺锤形细胞,其生长特性略有不同。AngⅡ显著促进圆形细胞preproET-1 mRNA的表达,提示这2个细胞亚群可能在血管重建和修复过程中发挥不同作用。     

尼莫地平调控IRS-1对人脑血管外膜成纤维细胞活力和凋亡的影响

目的：探讨尼莫地平对人脑血管外膜成纤维细胞活力、凋亡的影响及其对胰岛素受体底物-1(IRS-1)的调控机制。方法：体外培养人脑血管外膜成纤维细胞,分为NC组、IFN-α组和共同处理组,其中共同处理组分别采用不同浓度（50、100、200μg/ml）的尼莫地平与IFN-α共同处理人脑血管外膜成纤维细胞,分别记作IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR与Western blot分别检测IRS-1表达;分别将pcDNA、pcDNA-IRS-1转染至细胞,分别将si-con、si-IRS-1转染至细胞随后采用尼莫地平处理细胞,采用上述方法检测细胞活力及凋亡率。结果：NC组、IFN-α组、IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组72 h时细胞活力分别为1.16±0.09、0.71±0.07、0.88±0.06、0.96±0.08、1.03±0.11;细胞凋亡率分别为（3.5...     

非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨非促分裂型人酸性成纤维细胞生长因子(nm-haFGF)对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响。方法：摘除大鼠左侧肾脏，随即夹毕大鼠右侧肾动脉60 min，24 h后松开动脉夹，建立肾缺血再灌注损伤模型。再灌注后5 min后，经舌静脉注射不同剂量的nm-haFGF，并用haFGF作为对照。24 h后取大鼠肾组织、血液和尿液，检测肾脏组织和血液中SOD、MDA以及血液和尿液中BUM、Cr的变化，并进行肾组织病理学检测。结果：缺血再灌注24 h后，nm-haFGF所有剂量组和haFGF组血清SOD活性明显高于模型组，MDA含量明显低于模型组，而血清和尿BUN和Cr含量均明显低于模型组；肾组织SOD活性在nm-haFGF 20 μg/kg和40 μg/kg剂量组和haFGF组明显升高而MDA含量明显降低。组织学检查结果显示，nm-haFGF可明显减轻缺血再灌注引起的肾组织水肿，肾小管刷状缘脱落和细胞坏死。结论：nm-haFGF可拮抗肾缺血再灌注引起的损伤。     

酸性成纤维细胞生长因子对大鼠急性肺损伤的影响

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤(ALI)的作用及其影响机制。 方法将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为3组：阴性对照组、脂多糖损伤组、aFGF干预组,每组20只。采用经气管插管给予脂多糖5 mg·kg^－1制备大鼠ALI模型,aFGF干预组则于给予脂多糖24 h后,经气道给予aFGF 1 000 μ·g^－1。3组均于48 h后苏木精-伊红染色观察肺组织病理学改变,计算肺损伤评分,测定肺水清除率,称量肺湿/干重比,免疫组织化学染色法观察肺泡表面活性蛋白C(SP-C)的表达,酶联免疫吸附试验法测定肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)蛋白表达水平。数据采用单因素方差分析(进一步两两比较采用LSD法)或非参数检验。 结果(1)aFGF干预组肺损伤评分[(6.33±0.42)分]与脂多糖损伤组肺损伤评分[(11.00±0.37)分]较阴性对照组[(1.01±0.26)分]均升高,但aFGF干预组肺损伤评分明显低于脂多糖损伤组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)aFGF干预组肺水清除率[(27.41±1.05)%]与脂多糖损伤组肺水清除率[(15.59±0.64)%]较阴性对照组[(30.63±0.91)%]均有所下降,但aFGF干预组明显高于脂多糖损伤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)脂多糖损伤组肺水聚集(肺湿/干重比为6.32±0.32)较阴性对照组(4.17±0.05)明显升高,aFGF干预组(5.18±0.10)也高于阴性对照组,但与脂多糖损伤组相比,肺湿/干重比有所改善且差异有统计学意义(P<0.05)。(4)aFGF干预组TNF-α水平[(762.50±23.93) pg/mL]与脂多糖损伤组TNF-α水平[(1460.01±17.96) pg/mL]较阴性对照组[(49.51±10.75) pg/mL]均明显升高,但aFGF干预组较脂多糖损伤组有明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。(5)aFGF干预组p-p38 MAPK/β-actin比值(0.38±0.01)明显高于阴性对照组(0.18±0.01),差异有统计学意义(P<0.05),且明显高于脂多糖损伤组(0.12±0.01),差异有统计学意义(P<0.01)。 结论aFGF对脂多糖诱导的ALI大鼠具有肺保护作用,其机制可能为aFGF通过激活p38 MAPK通路,减少细胞凋亡,促进肺泡上皮细胞再生所致。     

实验性再狭窄动物模型研究

目的　为弄清经皮冠状动脉腔内形成术后动脉再狭窄的发生机制 ,本实验研究建立再狭窄动物实验模型。方法　采用右髂动脉球囊内皮剥脱术加高胆固醇喂饲家兔。结果　经血管造影检查 ,血管成形术前右髂动脉平均狭窄程度在6 0 %以上 ,血管成形术后 5周右髂动脉平均再狭窄程度在 5 0 %以上 ;病理切片和组织生化显示 ,内膜明显增厚 ,可见大量泡沫细胞 ,脂质沉积显著增加 ;透射电镜和免疫组织化学鉴定显示 ,增生内膜主要是平滑肌细胞增殖。结论　采用本方法成功地建立了再狭窄动物实验模型。     

新型脊柱外固定技术减少医源性脊旁肌损伤的动物模型研究

目的　验证新型脊柱外固定技术较开放内固定手术减少医源性脊旁肌损伤的优势。 方法　取山羊10头,随机均分为脊柱外固定手术组和开放内固定手术组制作模型。术后3月处死模型动物,对手术节段腰椎行3.0 T MRI扫描,完整解剖脊旁肌组织行准静态拉伸实验及病理学切片,分析两种手术方式对脊柱脊旁肌的影响。 结果　成功构建山羊动物模型。相较开放内固定手术组,MRI示新型脊柱外固定技术组仅在螺钉周围出现少量的肌肉损伤,准静态拉伸力学实验、组织切片染色（HE染色、Masson染色）均提示新型脊柱外固定技术组肌肉损伤较少,有统计学差异。 结论　新型脊柱外固定技术通过经皮置钉以及外置矫形固定装置改进,可减少内固定装置挤压和干扰引发的脊旁肌损伤。     

酸性成纤维细胞生长因子修复组织损伤的研究进展

酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)于20世纪末就被证实对组织损伤有修复作用,对其结构特点和临床应用的研究在近年取得一定的进展。本文从aFGF的结构特点出发,归纳了其在促进皮肤及黏膜组织创伤愈合作用的相关研究结果,分别阐述了aFGF对皮肤及黏膜组织、烧伤创面、血管损伤、神经组织损伤的修复作用以及减少瘢痕形成的作用,介绍了其作用机制、临床效果及相对于碱性成纤维细胞生长因子的异同。并提出今后对aFGF的研究应聚焦于探索合理的给药方式及时机两方面。     

碱性成纤维细胞生长因子促进脊髓损伤小鼠内源性神经干细胞的增殖

BACKGROUND:So far steroid pulse therapy and surgical decompression are the main accepted therapies for spinal cord injury, but these methods make no effects on injured neurons. Nerve growth factors and endogenous neural stem cells play a role in the neuronal regeneration and remyelination, which provides a new idea for spinal cord injury treatment. OBJECTIVE:To explore the effect of the basic fibroblast growth factor on proliferation of endogenous neural stem cells after spinal cord injury and to analyze its relationship with the increased fluoro-gold labeled neurons. METHODS:Totally 48 Kunming mice were randomly divided into four groups including normal, spinal cord injury, treatment and sham operation groups. Acute spinal cord injury models were established in the spinal cord injury and treatment groups, and the normal group was subjected to operation that did not damage the spinal cord. At 2 hours after regaining consciousness, the treatment group was given daily injection of MTPBS containing 25 μg/kg basic fibroblast growth factors and 1% album. And at 7 days, laminectomy was carried out again at the L1 segment in the former three groups and a small piece of sterile gelfoam soaked with fluoro-gold was inserted into the incision. The sham operation group was given no processing. Afterwards, mouse motor behavior was assessed using Rotarod and Platform Hang tests; neurons in the corticospinal and rubrospinal tracts were labeled with fluoro-gold; the number of endogenous neural stem cells positive for nestin was detected by immunohistochemistry method. Besides, the correlation between the number of fluoro-gold labeled neurons and the number of endogenous neural stem cells was assessed. RESULTS AND CONCLUSION:The basic fibroblast growth factor could significantly improve the mouse motor behavior after spinal cord injury. And the number of endogenous neural stem cells was significantly increased after the basic fibroblast growth factor injection, which was related to the increased fluoro-gold labeled neurons. In conclusion, basic fibroblast growth factors play an important role in the proliferation of endogenous neural stem cells after spinal cord injury. Furthermore, endogenous neural stem cells improve locomotive behaviors by encouraging the neuronal proliferation.     

改良的体外中枢神经系统损伤后胶质瘢痕模型的建立

目的建立胶质疤痕体外模型,观察其形态及细胞外基质的表达情况。方法体外分别培养来自大脑皮层的星形胶质细胞和脑膜成纤维细胞,经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和纤连蛋白(FN)抗体免疫细胞化学染色鉴定后,将两种细胞混合共培养,2d后添加转化生长因子-β1(TGF-β1),以未添加TGF-β1为对照组;GFAP和FN免疫细胞化学染色观察胶质疤痕的形态;免疫细胞化学染色和Western blotting观察促红素肝细胞受体B2(Eph B2)、Eph受体作用配体B2(ephrin B2)、神经蛋白聚糖(neurocan)和神经抗原2(NG2)表达情况。结果疤痕样细胞团簇结构主要是由星形胶质细胞和成纤维细胞共同组成;实验组Eph B2、ephrin B2和neurocan、NG2表达量较对照组明显增加(P0.05)。结论体外混合培养星形胶质细胞与成纤维细胞并添加TGF-β1后成功建立体外中枢神经系统损伤后疤痕模型。     

碱性成纤维细胞生长因子对缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的研究

目的：探讨脑缺血再灌流损伤大鼠血脑屏障是否对碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）通透。方法：采用大脑中动脉腔内阻塞模型,股静脉滴注[¹²⁵I]-bFGF,对大脑冠状冰冻切片进行放射自显影,图象分析测定光密度。结果：放射自显影结果显示模型鼠缺血病灶侧影像较健侧及正常鼠浓集。光密度测定结果显示模型鼠病灶侧与其健侧及正常鼠同侧的吸光度值差异显著（P<0.05; P<0.05）。结论：[¹²⁵I]-bFGF经股静脉滴注后,能通过脑缺血再灌流损伤大鼠血脑屏障浓集于缺血脑区。     

MSCs-FGF2基因治疗对急性肺损伤小鼠的保护作用

目的研究间充质干细胞-纤维母细胞生长因子2(MSCsFGF2)基因治疗对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠的保护作用。方法 40只雄性C57/B6小鼠随机分为对照组、急性肺损伤组、MSCs组、MSCs-FGF2组,每组10只。应用脂多糖建立小鼠急性肺损伤模型,观察4组小鼠肺组织病理改变、计算肺损伤评分、计算肺组织湿重与干重比值,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中中性粒细胞数量,实时PCR方法检测小鼠肺组织FGF2 mRNA表达,Western印迹法测定小鼠肺组织FGF2蛋白表达,ELISA法测定小鼠BALF中TNF-α和IL-6浓度。结果与急性肺损伤组小鼠比较,MSCs-FGF2组小鼠肺组织病理改变明显减轻、肺损伤评分明显降低(P0.05)、肺组织湿重与干重比值明显降低(P0.05)、BALF中中性粒细胞数量明显降低(P0.05)、肺组织FGF2 mR NA及蛋白表达量明显增加(P0.05)、BALF中TNF-α和IL-6浓度明显降低(P均0.05)。结论 MSCs-FGF2基因治疗对脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠有确切的保护作用。     

上位腰椎压缩性损伤的振动评价

目的：为探讨胸腰段脊柱在损伤前后的动力学响应特性，利用振动分析对前屈型压缩后节段腰椎的损伤情况进行了即刻评价。方法：在７例成人胸１２至腰１节段脊柱标本上，先测试正常标本的频幅响应曲线，压缩致破坏后再测试损伤标本的频幅响应特性并加以比较。结果：频幅响应曲线显示，损伤后在上／下方向的主频率显著前移（ｐ＜０．０５），前／后和左／右方向上仅存在前移趋势。将腰椎标本简化为单自由度系统，主频的前移即意味着材料刚度的下降。结论：本实验证实振动在腰椎压缩性损伤的即刻评价中具有一定的意义。