基于UHPLC-MS的吴茱萸汤影响虚寒呕吐大鼠尿液代谢谱的研究

目的观察吴茱萸汤对虚寒呕吐大鼠尿液代谢谱的变化,探讨其治疗虚寒呕吐证可能的作用机制。方法运用复合法(大黄+顺铂)制备大鼠虚寒呕吐模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、吴茱萸汤组。利用超高液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)技术结合主成分分析、偏最小二乘分析等方法对尿液数据进行分析,鉴定出潜在生物标志物,通过VIP及非参数检验筛选并通过多元化ROC曲线验证差异代谢物;运用PathwayAnalysis数据库对差异性代谢物进行拓扑分析;运用R和Cytoscape进行代谢产物的相关性分析和模块化分析。结果尿液代谢谱对照组和模型组完全分离,吴茱萸汤组靠近对照组,表明模型复制成功,且吴茱萸汤能够干预大鼠的虚寒呕吐症状,提示大鼠机体具有恢复到正常状态的趋势。从尿液中筛选出34种差异代谢物进行通路分析,发现虚寒呕吐发挥干预作用可能与缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,精氨酸和脯氨酸代谢,色氨酸代谢,酪氨酸代谢,花生四烯酸代谢,三羧酸循环(TCA循环)等通路有关;进行模块化分析发现10个模块之间关系密切,丙氨酸、亮氨酸、酪氨酸、色氨酸、异亮氨酸、琥珀酸、丙氨酸、富马酸、苹果酸、异柠檬酸等生物靶点可作为虚寒呕吐模型的标识。结论吴茱萸汤能够改善虚寒呕吐模型的生理特征,机制可能与吴茱萸汤调节大鼠体内紊乱的氨基酸代谢、能量代谢及脂代谢等有关。     

采用代谢组学策略研究佛手散对急性血瘀大鼠的活血化瘀作用机制

采用冰水浴游泳和皮下注射盐酸肾上腺素法复制急性血瘀大鼠模型。采用UPLC-Q-TOF/MS方法分析正常大鼠、急性血瘀大鼠和给药佛手散干预急性血瘀大鼠尿液之间的内源性代谢物差异,并通过变量重要性投影选取潜在的生物标志物,结合质谱信息和数据库检索对潜在的生物标志物进行鉴定,将鉴定到的生物标志物输入MetPA数据库中构建代谢通路。研究急性血瘀大鼠给药佛手散后大鼠尿液内源性代谢物变化,寻找可能的生物标志物,探讨佛手散的活血化瘀作用机制。结果在急性血瘀大鼠尿液中发现并鉴定了11个潜在的生物标志物,这些标志物主要和苯丙氨酸代谢、色氨酸代谢和鞘脂类代谢3条代谢通路相关。而佛手散可调节急性血瘀模型大鼠体内紊乱的代谢通路并使其向正常状态转归。该研究结果表明代谢组学在中药整体性药效评价、作用机制的阐明等方面具有很好的应用前景。     

交泰丸对糖尿病大鼠尿液代谢谱的影响

目的:通过尿液代谢组学的检测,探讨交泰丸对糖尿病大鼠尿液代谢谱的影响。方法:SD大鼠高脂高糖饲料喂养6周后,腹腔注射链脲菌素(Streptozotocin,STZ)37 mg/kg,建立2型糖尿病模型,正常对照组注射相同剂量的柠檬酸缓冲液。检测1周后模型组大鼠空腹血糖值FBG≥7.0 mmol/L为糖尿病模型大鼠。糖尿病大鼠随机分为正常对照组6只、模型组6只、交泰丸组6只。用药6周后收集尿液。采用氯甲酸乙酯(ECF)衍生和气相色谱质谱联用(GC/MS)的方法检测大鼠尿液代谢谱的变化。结果:交泰丸治疗6周后,模型组和交泰丸组的大鼠代谢模式图分开,同时正常组与交泰丸组的大鼠代谢模式图较接近,其结果与常规生化形态基本一致。结论:交泰丸能够改善糖尿病大鼠尿液代谢谱,对糖尿病大鼠具有治疗作用。     

基于~1H-NMR对人参乌梅汤加味干预腹泻模型大鼠的代谢组学研究

目的采用核磁共振氢谱(~1H-NMR)技术研究中药复方人参乌梅汤加味对腹泻大鼠尿液代谢表型的影响。方法48只SD大鼠随机抽取12只为空白组,其余36只参照文献方法以复合因素制作腹泻模型。造模成功后随机分为模型组、西药组、中药组,每组12只。造模21d开始给药干预,空白组和模型组予生理盐水,其余各组分别给予妈咪爱、人参乌梅汤加味,均1次/d,连续给药7d。在冰浴中收集12h尿液,采用~1H-NMR技术分析尿液代谢特征。结果在大鼠尿液典型的~1H-NMR谱图中可指认出27个代谢产物,与空白组相比,模型组尿液中乌头酸、丙酮、肌酸酐等的含量减少,而柠檬酸、丙氨酸等含量增多。而与模型组相比,加味人参乌梅汤治疗组有小部分样本逐渐往空白组靠拢。最后,在空白组、模型组和人参乌梅汤加减组中,乌头酸、肌酸酐、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、柠檬酸、丙酮的差异最大。结论人参乌梅汤加味(酸甘化阴法)对腹泻模型大鼠尿液中的关键代谢物存在良性调节作用,其中乌头酸、肌酸酐、亮氨酸、异亮氨酸、丙氨酸、柠檬酸、丙酮可能为人参乌梅汤加味(酸甘化阴法)影响腹泻的关键代谢物。     

黄连在自发性高血压大鼠体内尿液代谢组学的研究

目的:考察中药黄连对SHR大鼠干预前后的尿液代谢物的变化,寻找高血压病潜在的生物标志物,探讨中药黄连降压的药理机制。方法:基于HPLC-TOF/MS的代谢组学技术,将采集的SHR大鼠的尿液样本进行单维及多维数据分析,运用偏最小二乘分析(PLS-DA)及变量重要性因子(VIP)鉴定差异化合物,分析相关代谢通路。结果:黄连可降低SHR大鼠的平均动脉压,黄连组、阳性对照组、模型组及正常组大鼠的尿液代谢谱呈明显分离,筛选出吲哚乙酸、5-羟基吲哚乙酸、喹哪啶酸、胞嘧啶核苷、氢化乳清酸、前列腺素E2、脱氢凝血烷B、甘氨胆酸等11个潜在标志物及相关的色氨酸代谢、嘧啶代谢、花生四烯酸代谢和胆汁酸合成4条代谢通路。结论:SHR大鼠给予黄连后可使上述生物标志物的代谢趋势向正常转归,并且其血压下降的机制可能与炎症应答、脂质调节有关。     

基于血清非靶向代谢组学研究肝喜片抗肿瘤的作用机制

目的：利用超高效液相-质谱联用技术(UPLC-MS/MS)研究肝喜片在大鼠血清中的代谢调节机制。方法：将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、肝喜片低剂量组(0.81 g/kg)、肝喜片高剂量组(4.05 g/kg),每组各10只，连续给药7 d后腹主动脉采血，采用UPLC-MS/MS检测血清代谢物变化情况。结果：对照组和给药组的代谢轮廓具有明显变化，通过设定VIP值>1、P<0.05阈值筛选差异代谢物。肝喜片低剂量组与对照组之间差异代谢物主要有40种，肝喜片高剂量组与对照组之间差异代谢物主要有77种，3组之间共有的差异代谢物有26个，其中涉及到的代谢途径主要包括戊糖和葡萄糖醛酸的相互转化、色氨酸代谢和类固醇激素生物合成。结论：肝喜片抗肿瘤的作用机制可能与戊糖和葡萄糖醛酸的相互转化、色氨酸代谢和类固醇激素生物合成等代谢途径调控有关。利用代谢组学方法研究差异代谢物变化可以为抗肿瘤提供治疗靶点。     

红景天对慢性冷应激大鼠模型血浆和尿液代谢组的影响

目的应用基于核磁共振氢谱(nuclear magnetic resonance ~1H,NMR ~1H)的代谢组学方法研究红景天对慢性冷应激刺激模型大鼠血浆和尿液代谢组的影响。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为3组:正常对照组、模型组和红景天组。模型组和红景天组大鼠每天置于4℃环境中4 h,连续刺激2周,同时红景天组给予红景天水煎液5 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃。正常对照组和模型组给予等体积的纯净水灌胃。采集大鼠血浆和尿液的NMR ~1H谱,运用主成分分析法(principal component analysis,PCA)进行数据分析。结果红景天组与模型组代谢特征明显不同,其代谢特征更接近正常对照组。与模型组比较,红景天组血浆中甘氨酸升高,乳酸、乙酰乙酸、肌酸、肌酐、甘油磷脂胆碱、磷脂胆碱、牛磺酸、氧化三甲胺和甜菜碱降低;尿液中色氨酸增加,α-酮戊二酸、乙酰乙酸、柠檬酸、氧化三甲胺、甜菜碱、牛磺酸和马尿酸减少。结论红景天能够调控机体能量代谢,以及牛磺酸、氨基酸(甘氨酸和色氨酸)和胆碱的代谢,对冷应激状态下代谢紊乱大鼠具有保护作用。     

丹栀逍遥散干预焦虑行为大鼠的血浆代谢组学研究

目的:探索丹栀逍遥散对慢性束缚应激大鼠焦虑行为的干预作用，并通过血浆代谢组学探讨相关机制。方法:选取8 w龄雄性SD大鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、丹栀逍遥散组，除正常对照组外其余组每日束缚应激1 h。2 w后进行行为学测试，收集血浆，采用超高效液相色谱-串联四极杆/飞行时间质谱分析血浆代谢物组，并采用多元统计分析方法进行模式识别及寻找差异标记物。结果:与正常对照组比较，模型对照组大鼠体质量增长缓慢(P<0.01),高架十字迷宫开放臂时间比明显下降(P<0.05),旷场试验总路程及穿越格子数显著降低(P<0.01),丹栀逍遥散对以上焦虑行为有明显改善(P<0.05)。共鉴定出内源性差异代谢物23种，正常对照组和模型对照组差异性代谢物共有13种，主要涉及色氨酸、谷氨酸代谢通路；模型对照组和丹栀逍遥散组差异性代谢物共有16种，主要涉及色氨酸、脂肪酸、胆汁酸代谢通路；二者共有6种代谢物重合。结论:丹栀逍遥散能够缓解慢性束缚应激引起的大鼠焦虑样行为，其机制与调节色氨酸、脂肪酸及胆汁酸代谢相关。     

卡托普利对心梗后心衰大鼠尿液代谢组学的影响

目的 研究卡托普利对心肌梗死后心衰大鼠尿液代谢组学的影响.方法 采用结扎左冠状动脉前降支致心肌梗死后心力衰竭大鼠模型,术后随机分为模型组、卡托普利组,给药8周后,利用核磁共振氢谱（1H-NMR）技术检测大鼠尿液小分子及大分子代谢物,建立大鼠尿液的代谢图谱,并采用主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）对代谢图谱进行主成分分析及模式判别,以观察卡托普利对心衰大鼠尿液代谢组学的影响.结果 模型组与卡托普利组尿液小分子及大分子代谢物均能明显区分.与模型组相比,卡托普利组谷氨酰胺、肌肝、牛磺酸、柠檬酸、苹果酸、苯基丙氨酸含量升高;3-羟基丁酸、乙酸、丙酮、磷脂酰胆碱、三甲胺、马尿酸含量下降.结论 心梗后心衰大鼠尿液代谢组学出现变化,卡托普利能有效调控紊乱的代谢产物,促使代谢表型向正常范围回归.     

金复康对大鼠大肠癌癌前病变的改善作用及尿液代谢物研究

目的：考察二甲肼诱发大肠癌癌前病变大鼠的尿液中内源性小分子代谢物谱的变化过程，以及中药金复康干预下大鼠代谢谱的变化过程。方法：利用基于氯甲酸乙酯衍生、GCMS技术的代谢组学方法。结果：经主成分分析表明，模型组大鼠的代谢谱具有随时间逐步偏离起始点的趋势，而金复康干预组大鼠的代谢谱则表现出先偏离再回归起始点的代谢谱变化轨迹，正常组大鼠的代谢谱在实验过程中没有出现明显的变化。对影响模型组大鼠与正常组大鼠代谢谱分离的权重变量进行鉴定和研究，发现三羧酸循环、色氨酸循环、多胺代谢等代谢通道的波动，以及肠道菌群代谢的紊乱与二甲肼诱导的大肠癌癌前病变相关。结论：代谢组学研究表明，金复康能有效逆转二甲肼诱导的大肠癌癌前病变大鼠的代谢谱的偏移，代谢组学的研究结果与病理实验结果相一致。     

����RP-UPLC-MS��HILIC-UPLC-MS�Ĺ��赤����Ƥ�ʼ����Թ�������ģ�ʹ����Ԥ���õ���Һ��л��ѧ�о�

??OBJECTIVE To develop an intergrated urinary metabonomic strategy based on RP-UPLC-MS and HILIC-UPLC-MS method and to investigated the mechanism of osteoporosis and the prevention effect of glucocorticoid osteoporosis of Gushudan. METHODS The RP-UPLC-MS and HILIC-UPLC-MS method were developed for rat urine metabolite profiling study among control group, model group and Gushudan treatment group. Principal component analysis (PCA) were used to find the biomarkers, further more,to explore the mechanism of the prevention effect on glucocorticoid osteoporosis of Gushudan. RESULTS In the mode of RP-UPLC-MS, low polarity metabolites like phenylacetylglycine, N₂-succinic acid-L-ornithine were found while relatively high polarity metabolites like betaine, hypoxanthine were found in the mode of HILIC-UPLC-MS. And twenty-two potential biomarkers have been totaly found in the urine of glucocorticoid osteoporosis, primiarily related to amino acid metabolism, energy metabolism, lipid metabolism, intestinal flora metabolism and kidney damage. Gushudan has intervention effects on rats with osteoprosis via the regulation of multiplemetabolic pathways.CONCLUSION The combination of RP-UPLC-MS and HILIC-UPLC-MS method can give a more comprehensive profiling of endogenous metabolites and it also indicates metabonomic strategy has become a powerful tool to evaluate the overall efficacy of traditional Chinese medicine (TCM) and to calrify the mechanism of TCM.     

骨碎补水煎液对大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞的影响

目的观察骨碎补对正畸牙移动过程中压力侧破骨细胞的影响。方法选用48只8周龄健康雌性W istar大鼠,适应性饲养一周后随机分为骨碎补组及对照组,建立大鼠磨牙移动实验模型。骨碎补组每日灌服骨碎补水煎剂6g/kg,对照组每日灌服0.9%NaC l溶液3m l,两组动物于正畸加力7、14、21、28天后,分批处死,分离大鼠上下颌骨。测量各期上颌第一磨牙牙齿移动的距离,并制作切片光镜观察第一磨牙牙根压力侧破骨细胞的数量。结果与对照组同期比较,骨碎补组大鼠正畸牙移动距离加大,压力侧破骨细胞数量增多,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论骨碎补能促进正畸牙移动过程中破骨细胞的增殖和分化,加速正畸牙移动,缩短正畸治疗的疗程。     

骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠基因水平的影响

目的:应用cDNA array技术分析骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠基因水平的影响。方法:制作去卵巢大鼠模型,24周后,活杀动物,腹主动脉取血6 mL,并取出脊髓4锄,抽提totalRNA,分离mRNA,进行检测。结果:空白对照组血样与模型组的差异为70个基因,空白对照组与骨碎补总黄酮组的差异为9个基因。骨碎补总黄酮灌服后大鼠模型基因过度表达基本恢复正常。该实验cDNA array分析中脊髓基因基本无差异。结论:骨碎补总黄酮灌服6 个月后大鼠模型基因过度表达能基本恢复正常。表明骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠基因表达水平有一定的影响。     

蜘蛛香环烯醚萜部位干预CUMS致抑郁小鼠脑组织的1H-NMR代谢组学分析

目的:利用代谢组学技术分析慢性温和不可预知应激(CUMS)抑郁模型小鼠脑组织样本,寻找与抑郁相关的差异代谢物,探讨蜘蛛香环烯醚萜部位(IEFV)可能的抗抑郁作用机制。方法:42只昆明小鼠随机分为6组,包括正常组,模型组,氟西汀组(2.5 mg·kg-1),IEFV低、中、高剂量组(给药剂量分别为5.73,11.47,22.94 mg·kg-1)。采用CUMS对小鼠造模,以IEFV及阳性药(氟西汀)为干预药物,用行为指标和生化指标进行药效学评价。采用核磁共振氢谱(1H-NMR)代谢组学技术分析IEFV对CUMS抑郁模型小鼠脑组织中内源性物质的影响,结合多变量统计分析方法来确认差异代谢物,并对差异代谢物参与的代谢通路进行富集。结果:造模后,小鼠的不动时间大幅度提高、蔗糖偏好率明显下降,兴奋性神经递质5-羟色胺和去甲肾上腺素显著下降,表明造模成功。给予IEFV和氟西汀后,小鼠不动时间、蔗糖偏好率和兴奋性神经递质向正常水平回调,提示给药后抑郁状态得到了一定程度的缓解。脑组织中内源性代谢物主成分分析(PCA)结果显示,模型组可与正常组明显分开,同时IEFV低、中、高剂量组和氟西汀组均显示有偏离模型组向正常组靠拢的趋势,与行为学结果一致。模型组与正常组进行正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)得到了16个变化显著的差异代谢物,包括12个水溶性差异代谢物和4个脂溶性差异代谢物。通过MetPA数据库分析得到7条潜在靶标代谢通路,包括三羧酸循环(TCA),牛磺酸和亚牛磺酸的代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等。IEFV高剂量组可显著回调11种差异代谢物。结论:IEFV可能主要通过影响能量代谢,氨基酸代谢和神经递质水平发挥抗抑郁作用,可为IEFV抗抑郁作用机制的深入研究提供参考依据。     

莪术醋制对大鼠胆汁代谢的影响

通过考察莪术醋制前后对由肝脏分泌的胆汁中内源性代谢产物的影响,以期探讨莪术醋制对胆汁内源性代谢物的影响。分别制备生、醋莪术醇提液及生理盐水溶液,灌胃给药0.5 h后做胆总管插管引流术收集12 h内大鼠胆汁;胆汁样品1∶3乙腈沉淀蛋白后进行UPLC-TOF-MS分析;采用单维统计与多元统计相结合,Peak View软件与网络数据库相比对的数据分析方法,鉴定潜在生物标记物。醋制前后莪术提取物对大鼠胆汁代谢谱具显著影响,鉴别出生、醋莪术给药组的大鼠胆汁中具有显著性差异的13个代谢物;再结合化合物网络数据库进行鉴定,得到8个代谢物;进一步把给药组与空白组进行t检验单维统计分析,得到与空白组比较具显著性差异的7个代谢物,推定此7个代谢物为生、醋莪术给药后大鼠胆汁的潜在生物标记物,其中6个潜在生物标记物在醋品组中显示上调,其与磷脂代谢、脂肪代谢、胆汁酸代谢及与调控N-酰基乙醇胺水解反应平衡作用相关的代谢调控相关,提示通过大鼠胆汁内源性代谢物的差异探讨莪术醋制增效的机制。     

骨碎补与雌激素对去卵巢大鼠骨质疏松作用的对照研究

目的研究骨碎补和雌激素对双侧卵巢切除(OVX)大鼠骨质疏松的作用。方法55只雌性大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、雌激素组、骨碎补组。用OVX大鼠建立绝经后骨质疏松模型,用骨组织形态计量学方法测量各组大鼠的骨形态学和动力学参数。结果与模型组比较,各组骨小梁体积、骨小梁厚度、骨小梁密度增加,骨小梁间隙及骨小梁表面积和体积之比减少(P＜0．05),而骨皮质宽度未见显著性差异；与模型组比较,各组类骨质表面、单标表面、双标表面、组织水平的骨形成速率减少,类骨质成熟时间延长(P＜0．05)。雌激素组和骨碎补组各参数间未见显著差异。雌激素组、骨碎补组与正常对照组、假手术组比较,类骨质表面、单标表面、双标表面、组织水平的骨形成速率增加,类骨质成熟时间缩短(P＜0．05),其余各项参数未见显著性差异。雌激素组和骨碎补组各参数间未见显著性差异。结论骨碎补与雌激素作用类似,可抑制绝经后高转换型骨质疏松,增加骨小梁骨量和连接性。     

基于UPLC-Q-TOF-MS分析雷公藤配伍甘草治疗肾病综合征大鼠的尿液代谢组学

目的:考察雷公藤配伍甘草对肾病综合征大鼠尿液中内源性代谢产物的影响,通过尿液代谢组学技术探讨该药对的作用机制。方法:大鼠随机分为4组,分别为空白组、模型组、雷公藤单独给药组(TPW组)和雷公藤配伍甘草给药组(TPW-GLY组)。采用UPLC-Q-TOF-MS,结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),对尿液样品的代谢物图谱进行模式识别及生物标记物的筛选与鉴定。结果:空白组,模型组,TPW组及TPW-GLY组的代谢轮廓有明显差异,筛选并鉴定出空白组与模型组间具有显著性差异的生物标记物29个,其中受TPW-GLY组回调的生物标记物14个,受TPW组回调的生物标记物11个;TPW-GLY组和TPW组显著差异物7个,分别为N-乙酰谷氨酸,二羟基粪甾烷酸,烟尿酸,12-酮脱氧胆酸,甘油三酯(16∶0/16∶0/20∶4),泛醌Q2和1,3,7-三甲基尿酸。结论:雷公藤与甘草配伍给药后,可能通过改善肾病综合征大鼠体内的氨基酸代谢、胆汁酸代谢、脂肪及脂肪酸代谢、能量代谢及嘌呤代谢等过程,改善了疾病状态,进而起到减毒增效的作用。     

骨碎补总黄酮对IL-1β介导的软骨肉瘤细胞SW1353干预的最适浓度范围

目的通过检测不同浓度的骨碎补总黄酮对IL-1β介导的SW1353细胞增殖、凋亡以及细胞形态的影响,探索最适药物干预浓度范围。方法细胞分为正常组、骨碎补1.0组、骨碎补0.5组、骨碎补0.25组、骨碎补0.125组、骨碎补0.0625组共6组,每组均以IL-1β10 ng/mL诱导细胞致炎,骨碎补1.0组以骨碎补1.0 mg/mL加药干预,骨碎补0.5组以骨碎补0.5 mg/mL加药干预,骨碎补0.25组以骨碎补0.25 mg/mL加药干预,骨碎补0.125组以骨碎补0.125 mg/mL加药干预,骨碎补0.0625组以骨碎补0.0625 mg/mL加药干预,在12、24、36、48 h 4个时间点检测SW1353细胞的增殖率与凋亡率,光镜下观察细胞形态。结果细胞增殖情况可见:骨碎补1.0组、骨碎补0.5组、骨碎补0.25组、骨碎补0.125组4组细胞在不同时间点,细胞均呈不增殖状态(P<0.01),0.0625组细胞增殖在12 h与36 h时与正常组无差异(P>0.05),在24 h与48 h时较正常组略低(P<0.01);细胞凋亡情况可见:骨碎补1.0组与骨碎补0.5组两组细胞凋亡率在10%以上,存活率不足正常组90%(P<0.01),骨碎补0.25组、骨碎补0.125组、骨碎补0.0625组3组细胞凋亡率<10%;光镜下结果可见:骨碎补1.0组、骨碎补0.5组两组细胞状态不佳,数量较少,骨碎补0.25组、骨碎补0.125组、骨碎补0.0625组3组细胞状态与正常组细胞相仿,但骨碎补0.25组细胞数量较少,骨碎补0.125组、骨碎补0.0625组细胞数量与正常细胞无明显差异。结论骨碎补总黄酮干预IL-1β介导的SW1353细胞选择的最适浓度范围为0.0625~0.25 mg/mL。     

骨碎补微乳涂膜剂体外透皮效果考察及安全性评价

目的 :考察骨碎补微乳涂膜剂体外透皮效果及安全性。方法 :以柚皮苷作为骨碎补的指标成分,经药物透皮扩散试验仪操作,HPLC测定透皮接受液中骨碎补总黄酮的含量并计算其离体透皮速率;用豚鼠进行皮肤急性毒性实验、皮肤刺激性实验和皮肤过敏性实验。结果:微乳涂膜剂较普通涂膜剂,累计渗透量和透皮速率都要多和快,且随有效成分浓度增加,高剂量组微乳涂膜剂增渗效果显著;在实验所用剂量范围内,对动物皮肤无急性毒性,无刺激性,无致敏性。结论:骨碎补微乳涂膜剂体外渗透效果显著,使用安全。     

基于网络药理学探讨骨碎补抗骨质疏松的物质基础及作用机制

目的:通过网络药理学思路,预测骨碎补活性成分的作用靶点,结合骨质疏松(OP)相关靶点进行映射,拓扑出相互作用的关键节点进行富集分析,全方位探讨骨碎补抗OP的药理作用机制。方法:首先,在中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)中基于药代动力学特征筛选出骨碎补的主要活性成分,并使用有机小分子生物活性数据库(Pub Chem)和Swiss Target Prediction数据库根据二维或三维结构相似性预测出相关作用靶点,然后通过人类孟德尔遗传数据库(OMIM)和Pubmed文本挖掘已知的OP治疗靶点,结合预测靶点导入String数据库构建骨碎补治疗OP靶点相互作用网络图,借助Cyto NCA软件根据相关节点参数拓扑出相互作用的关键节点,再次导入String构建蛋白质相互作用网络图,最后通过DAVID数据库对关键节点进行生物功能及代谢通路分析。结果:筛选出16个骨碎补活性成分,根据靶点预测技术预测出相关靶点118个;经过文本挖掘检索出OP相关靶点316个,根据String网络数据库构建蛋白相互作用网络,经Cyto NCA拓扑后,筛选出关键节点97个,富集分析显示骨碎补可能通过多条通路,从增殖、分化、免疫、氧化应激等多个方面,对干细胞、成骨细胞、破骨细胞、免疫细胞等产生调控作用。结论:基于网络药理学研究表明,骨碎补可能通过直接或间接作用靶点,参与调控多条主要信号通路,影响多类细胞的增殖、分化,从而起到抗OP的作用,为阐释其抗骨质疏松的物质基础与作用机制提供了科学依据。