辅酶Q10对多巴胺损伤的PC12细胞凋亡的影响

目的：观察辅酶Q10在以PC12细胞建立的多巴胺神经元凋亡细胞模型中的作用。 方法：实验于2003-04／2004-04在锦州医学院科技试验中心进行。取体外培养的Pcl2细胞分为3组：①辅酶Q10组：加450μmol／L辅酶Q10和0．3mmol／L多巴胺。②多巴胺组：加0．3mmol／L多巴胺。③空白对照组：只加等量RPM11640。24h后进行流式细胞仪测试DNA含量，检测细胞凋亡率。 结果：多巴胺组细胞凋亡率明显高于空白对照组[（30．66&;#177;1．90）％，（0．82&;#177;0．07）％，P〈0．011，辅酶Q10组细胞凋亡率[（16．05&;#177;2．16）％1明显低于多巴胺组（P〈0．01）。 结论：辅酶Q10能显著降低多巴胺引起的PC12细胞凋亡，提示辅酶Q10作为神经保护性药物对保护多巴胺能神经元，防治帕金森病可能有实际应用价值。     

反义阻断α-Synuclein表达对PC12细胞凋亡的作用

目的：观察α-Synuclein表达对6-羟基多巴诱导的多巴胺能细胞凋亡的影响及分析其在帕金森病发病机制中所起的作用。方法：实验于2001～12／20014-10于中山大学第一附属医院神经科实验室完成。用100μmol／L的6-羟基多巴诱导PC12细胞凋亡。采用多组样本的完全随机设计方法，将1&;#215;10^5个细胞接种于4块四孔培养板中，共16个孔，随机分为4组：反义、正义、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组。前3组分别加入相应的寡核苷酸5μmol／L治疗24h，空白对照组不加。反义寡核苷酸阻断PC12细胞α—Synuclein表达，用原位杂交和定量Westerm plot检测其基因和蛋白表达；凋亡原位末端标记检测试剂盒检测6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡。全自动图象分析系统测量有关平均积分吸光度。用SPSS 10．0软件进行统计学分析。结果：①反义阻断后α—Synuclein mRNA表达：反义寡核苷酸治疗组较空白对照组明显减少（P〈0．01），正义寡核苷酸治疗组和无义寡核苷酸治疗组与空白对照组比较无差异（P〉0.05）。②α—Synuclein蛋白表达：反义寡核苷酸治疗组明显减少，较空白对照组减少约53．93％（P〈0.05）。正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组之间差异不显著（P〉0.05）。③6-羟基多巴治疗后的反义寡核苷酸治疗组、正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组随机计数的200个细胞中，凋亡细胞数量间相互比较无显著统计学意义（P〉0.05）。结论：α—Synuclein表达减少对6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡无影响。推测在帕金森病的多巴胺神经元凋亡的发生机制中，α—Svnuclein在神经元内的异常聚集较其表达量的多少更重要。     

帕金森病神经元死亡机制：Bcl—2与多巴胺诱导PC12细胞凋亡的相关性研究

目的：研究Bcl-2家族的表达同多巴胺诱导的PC12细胞凋亡的相关性,探讨帕金森病（PD）神经元的死亡机制。方法：应用免疫组织化学及电镜技术,对Bcl-2家族的表达同多巴胺诱导PC12细胞凋亡的相关性进行分析。结果：适当浓度DA可诱导PC12细胞凋亡,凋亡早期伴有Bcl-2及Bax表达量及Bcl-2/Bax比值的增高,后期则出现Bcl-2/Bax比值的下降,结论：细胞凋亡参与了PD的发病过程,Bcl-Bax比例的变化同凋亡发生密相关。     

反义阻断α-Synuclein表达对PC12细胞凋亡的作用

目的:观察α-Synuclein表达对6-羟基多巴诱导的多巴胺能细胞凋亡的影响及分析其在帕金森病发病机制中所起的作用。方法:实验于2001-12/2004-10于中山大学第一附属医院神经科实验室完成。用100μmol/L的6-羟基多巴诱导PC12细胞凋亡。采用多组样本的完全随机设计方法,将1×105个细胞接种于4块四孔培养板中,共16个孔,随机分为4组:反义、正义、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组。前3组分别加入相应的寡核苷酸5μmol/L治疗24h,空白对照组不加。反义寡核苷酸阻断PC12细胞α-Synuclein表达,用原位杂交和定量Westernplot检测其基因和蛋白表达;凋亡原位末端标记检测试剂盒检测6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡。全自动图象分析系统测量有关平均积分吸光度。用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果:①反义阻断后α-SynucleinmRNA表达:反义寡核苷酸治疗组较空白对照组明显减少(P<0.01),正义寡核苷酸治疗组和无义寡核苷酸治疗组与空白对照组比较无差异(P>0.05)。②α-Synuclein蛋白表达:反义寡核苷酸治疗组明显减少,较空白对照组减少约53.93%(P<0.05)。正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组之间差异不显著(P>0.05)。③6-羟基多巴治疗后的反义寡核苷酸治疗组、正义寡核苷酸治疗组、无义寡核苷酸治疗组和空白对照组随机计数的200个细胞中,凋亡细胞数量间相互比较无显著统计学意义(P>0.05)。结论:α-Synuclein表达减少对6-羟基多巴诱导的PC12细胞凋亡无影响。推测在帕金森病的多巴胺神经元凋亡的发生机制中,α-Synuclein在神经元内的异常聚集较其表达量的多少更重要。     

帕金森病神经元死亡机制 : Bcl- 2与多巴胺诱导 PC12细胞凋亡的相关性研究

目的研究 Bcl- 2家族的表达同多巴胺诱导的 PC12细胞凋亡的相关性 , 探讨帕金森病 ( PD) 神经元的死亡机制 . 方法应用免疫组织化学及电镜技术 , 对 Bcl- 2家族的表达同多巴胺诱导 PC12细胞凋亡的相关性进行分析 . 结果适当浓度 DA可诱导 PC12细胞凋亡 , 凋亡早期伴有 Bcl- 2及 Bax表达量及 Bcl- 2/Bax比值的增高 , 后期则出现 Bcl- 2/Bax比值的下降 . 结论细胞凋亡参与了 PD的发病过程 , Bcl- Bax比例的变化同凋亡发生密相关 .     

水杨酸钠诱导PC12细胞凋亡的作用

目的：观察水杨酸钠诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）凋亡的作用并初步探讨其机制。方法：实验于2004-07／2005—11在武汉大学完成。选择大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）为观察对象，将PC12细胞培育于培养板，无血清同步化后随机分组。以不同浓度的水杨酸钠（低浓度（0．3125,0．625mmol／L）．高浓度（1．25，2．5，5mmol／L）]处理72h，MTT法检测细胞活力；倒置显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态；流式细胞术检测凋亡率；Western blotting检测胞内NF—κB 的含量。结果：水杨酸钠为1．25-5mmol／L时显著减少PC12细胞的存活率（P〈0．01）；并引起典型的凋亡形态学改变：表现为细胞体积明显缩小、变圆，部分细胞从贴壁状态变为悬浮状态，折光性减弱。流式细胞术检测细胞凋亡率，随着水杨酸钠浓度的增加，细胞凋亡率明显升高，较低浓度水杨酸钠（0．3125,0．625mmoL／L）处理组凋亡率与对照组比较升高不明显（P〉0．05）。高浓度水杨酸钠（1．25，2．5，5mmol／L）处理组细胞出现典型凋亡峰，凋亡率较对照组显著增高，差异有显著性（P〈0．01），并且具有浓度依赖性。随着水杨酸钠作用浓度的增加，PC12细胞中NF-κB BP65蛋白表达水平逐渐降低。结论：高浓度的水杨酸钠可以体外诱导PC12细胞凋亡；水杨酸钠可剂量依赖性的减少PC12细胞内的NF-κB B含量。     

咪唑安定对谷氨酸诱导大鼠PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨咪唑安定对谷氨酸诱导大鼠神经元样PC12细胞凋亡的影响.方法:诱导分化4 d的神经元样PCI2细胞随机分成空白对照(C组),加入20 mM谷氨酸(G组),加人20 mM谷氨酸和10 uM咪唑安定(M组),各组细胞继续培养24 h后观察细胞的活力(MTY法)及细胞凋亡率(Hoechst33258核染色法联合Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术).结果:与C组比较,G组细胞活力度明显降低,而细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与G组比较,M组细胞活力度明显升高,而细胞凋亡率明显降低(P<0.05).结论:咪唑安定可抑制谷氨酸诱导体外培养的大鼠神经元样PC12细胞凋亡,发挥保护作用.     

胰岛素对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制

背景：目前越来越多的研究表明谷氨酸可以诱导细胞凋亡，对胰岛素的间接和直接的神经保护作用也有较多的研究，然而对谷氨酸损伤模型的胰岛素保护作用及机制尚缺乏有意义的探讨。目的：明确胰岛素对于谷氨酸诱导PC12细胞损伤模型有无保护作用及初步探讨保护作用的分子机制。设计：以细胞为研究对象，前瞻性对照实验研究。单位：浙江医院神经科和中山大学医院神经科。材料：实验于2002—03／2003—03在中山附属第三医院实验室及中山大学实验动物中心完成。PC12细胞来自中山大学医学院实验动物中心。方法：用0．5mmol／L谷氨酸作用PC12细胞20min制成谷氨酸损伤模型，用不同浓度胰岛素保护，24h后分别进行MTT实验、Hoechst33258荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳及检测PKB／Akt蛋白表达。主要观察指标：①各组细胞的活力。②DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳结果。③各实验组PKB／Akt蛋白表达结果。结果：胰岛素50mu／L，100mu／L，200mu／L，400mU／L的A值分别是0．214&;#177;0．062，0．234&;#177;0．067，0．260&;#177;0．076，0．265&;#177;0．069，而单纯谷氨酸组的A值为0．201&;#177;0．079，进行统计学分析表明50mU／L，100mU／L胰岛素组与谷氨酸组比较无差异(P&;gt;0．05)，200mU／L，400mU／L胰岛素组与单纯谷氨酸组比较统计学有差异(t=-2398，-2．716，P&;lt;0．05)；400mU／L胰岛素组DNA电泳中未见“DNA Ladder”；发现胰岛素可以促进PKB／Akt蛋白表达。结论：胰岛素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型有保护作用，且胰岛素有抗凋亡作用，此作用可能与胰岛素促进PKB／Akt蛋白表达有关。     

促红细胞生成素对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的拮抗作用

目的 观察促红细胞生成素(EPO)对氯化钴(CoCl2)诱导的PC12细胞缺氧损伤凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 将PC12细胞分为四组:空白对照组、CoCl2处理组、重组人促红细胞生成素(rhEPO)处理组、rhEPO+CoCl2处理组.应用MTT,乳酸脱氢酶(LDH),流式细胞术(FCM)及Hoechst33258染色法检测rhEPO对氯化钴诱导的细胞活性下降及凋亡的影响.通过逆转录PCR(RT-PCR)法检测Survivin表达情况.结果 MTT结果显示rhEPO预处理能够提高PC12细胞活力,0.6 mmol/L CoCl2单独处理组细胞存活率仅为(43.07±5.9)%,rhEPO处理24 h后细胞存活率上升明显至(77.89±3.4)%(P<0.01).LDH检测,FCM及Hoechst33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,而预先采用2 U rhEPO处理PC12细胞可抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡.RT-PCR显示rhEPO处理组PC12细胞Survivin表达较CoCl2处理组明显升高.结论 EPO处理能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与上调PC12细胞的Survivin表达有关.     

胰岛素对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制

背景目前越来越多的研究表明谷氨酸可以诱导细胞凋亡,对胰岛素的间接和直接的神经保护作用也有较多的研究,然而对谷氨酸损伤模型的胰岛素保护作用及机制尚缺乏有意义的探讨.目的明确胰岛素对于谷氨酸诱导PC12细胞损伤模型有无保护作用及初步探讨保护作用的分子机制.设计以细胞为研究对象,前瞻性对照实验研究.单位浙江医院神经科和中山大学医院神经科. 材料实验于2002-03/2003-03在中山附属第三医院实验室及中山大学实验动物中心完成.PC12细胞来自中山大学医学院实验动物中心.方法用0.5 mmol/L谷氨酸作用PC12细胞20 min制成谷氨酸损伤模型,用不同浓度胰岛素保护,24 h后分别进行MTT实验、Hoechst33258荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳及检测PKB/Akt蛋白表达.主要观察指标①各组细胞的活力.②DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳结果.③各实验组PKB/Akt蛋白表达结果.结果胰岛素50 mU/L,100 mU/L, 200 mU/L, 400 mU/L的A值分别是0.214±0.062,0.234±0.067,0.260±0.076,0.265±0.069,而单纯谷氨酸组的A值为0.201±0.079,进行统计学分析表明50 mU/L,100 mU/L胰岛素组与谷氨酸组比较无差异(P>0.05),200 mU/L,400 mU/L胰岛素组与单纯谷氨酸组比较统计学有差异(t=-2.398,-2.716,P<0.05);400 mU/L胰岛素组DNA电泳中未见"DNA Ladder";发现胰岛素可以促进PKB/Akt蛋白表达.结论胰岛素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤模型有保护作用,且胰岛素有抗凋亡作用,此作用可能与胰岛素促进PKB/Akt蛋白表达有关.     

Effects of coenzyme Q10 on salivary secretion

ObjectivesDry mouth is a condition associated with reduced salivary secretion and is thought to be related to aging. This study was conducted to test whether reduced (ubiquinol) or oxidized (ubiquinone) forms of CoQ10 affect salivary secretion and salivary CoQ10 content before and after treatment.Design and methodsSixty-six patients were given either ubiquinol or ubiquinone orally at a dosage of 100 mg/day, or a placebo for 1 month, and salivary secretion and salivary CoQ10 content were analyzed before and after treatment.ResultsBoth parameters were significantly improved following treatment with either form of CoQ10, suggesting the effectiveness of CoQ10 in attenuating dry mouth symptoms.ConclusionCoQ10 was locally detected in salivary glands, suggesting that orally administered CoQ10 was transported to the salivary glands via the blood stream and exerted its activity, improving salivary secretion.     

Effects of coenzyme Q10 in hemorrhagic shock

We studied the effects of coenzyme Q10 (CoQ10) on pulmonary function and chemical mediators in a canine model of hemorrhagic shock. One group received 10 mg/kg of CoQ10 before hemorrhage. During the study, percent change from baseline of peak airway pressure, total lung compliance of the lung and chest wall, and blood lactate levels appeared to be significantly smaller in dogs pretreated with CoQ10 than in controls. Furthermore, CoQ10 was found to maintain blood histamine levels and to attenuate the increase in leukotriene C4. The mechanism of the beneficial effects of CoQ10 in hemorrhagic shock is presently unknown, but our data suggest that it may be useful in the treatment of hemorrhagic shock.     

鱼藤酮诱导PC12细胞损伤作用途径

目的探讨鱼藤酮诱导PC12细胞损伤作用的可能途径，为神经防护药物的研发提供理论基础。方法将培养的PC12细胞分为正常对照组和0．5μmol&#183;L^-1鱼藤酮实验组，持续作用72h后MTT法检测细胞存活率、Hoechst 33342观测细胞凋亡、提取实验组和对照组细胞的总蛋白，应用荧光差异凝胶电泳系统（Differential Gel Electrophoresis，DIGE）获得差异蛋白点的表达信息，通过MALDI-TOF质谱鉴定差异蛋白点。结果MTT法显示鱼藤酮实验组较正常对照组细胞存活率明显降低（P〈0．01）；Hoechst33342荧光染色显示鱼藤酮实验组凋亡率明显高于对照组（P〈0．01）.DIGE分析软件提示实验组与对照组相比发现三个有意义的差异蛋白。通过质谱分析和数据库检索，鉴定分别为γ-烯醇化酶（γ-enolase）、磷酸丙糖异构酶1（Trpi1）和真核细胞翻译起始因子4A（elF4A）。结论γ-enolase、Tpi1和elF4A参与细胞损伤。可能成为神经防护药物作用的靶点。     

Effect of coenzyme Q10 on endotoxin shock in dogs

We studied the effects of coenzyme Q10 pretreatment on both pulmonary function and chemical mediators during endotoxin shock in dogs. Coenzyme Q10 pretreatment inhibited disturbances in peak airway pressure, total compliance of lung plus chest wall, lung clearance index, plasma histamine, base excess, and lactate; however, it had little effect on the circulation. The mechanism of coenzyme Q10's significant effects on pulmonary function during endotoxin shock is presently unknown.     

Measurement of reduced and oxidized coenzyme Q9 and coenzyme Q10 levels in mouse tissues by HPLC with coulometric detection

BACKGROUND: Ubiquinone-responsive multiple respiratory chain dysfunction due to coenzyme Q(10) (CoQ(10)) deficiency has been previously identified in muscle biopsies. However, previous methods are unreliable for estimating CoQ(10) redox status in tissue. We developed an accurate method for measuring tissue concentrations of reduced and oxidized coenzyme Q (CoQ). METHODS: Mouse tissues were weighed in the frozen state and homogenized with cold 1-propanol on ice. After solvent extraction, centrifugation and filtration, the filtrate was subsequently analyzed by reversed-phase HPLC with coulometric detection. RESULTS: Reference calibration curves were used to determine reduced and oxidized coenzyme Q(9) (CoQ(9)) and CoQ(10) concentrations in tissues. The method is sensitive ( approximately 15 microg/l), reproducible (6% CV) for CoQ(9) and CoQ(10), and linear up to 20 mg/l for CoQ(9) and CoQ(10). Analytical recoveries were 90-104%. In mouse tissues the amounts of total CoQ (TQ) ranged from 261 to 1737 nmol/g of protein. Total CoQ(9) levels are comparable with the values of those previously reported. CoQ is found to be mostly in the reduced form in mouse liver ( approximately 87%), heart ( approximately 60%), and muscle tissues ( approximately 58%); in the brain, most of the CoQ is in the oxidized state ( approximately 65%). CONCLUSION: This procedure provides a precise, sensitive, and direct assay method for the determination of reduced and oxidized CoQ(9) and CoQ(10) in mouse hindleg muscle, heart, brain, and liver tissues.     

The role of coenzyme Q10 in heart failure

OBJECTIVE: To review the clinical data demonstrating the safety and efficacy of coenzyme Q10 (CoQ10) in heart failure (HF). DATA SOURCES: Pertinent literature was identified through MEDLINE (1966-January 2005) using the search terms coenzyme Q10, heart failure, antioxidants, and oxidative stress. Only articles written in the English language and evaluating human subjects were used. DATA SYNTHESIS: HF impairs the ability of the heart to maintain its normal cardiac output. Following an initial insult, cardiac remodeling ensues, resulting in left ventricular dilation and hypertrophy. Oxidative stress is also increased, while CoQ10 levels are decreased in patients with HF. This has led to the hypothesis that CoQ10, an antioxidant, may decrease oxidative stress, impair remodeling, and improve cardiac function. CONCLUSIONS: Large, well-designed studies on this topic are lacking. The limited data from well-designed trials indicate there may be some minor benefits with CoQ10 therapy in ejection fraction and end diastolic volume. CoQ10 therapy has been shown to be relatively safe with a low incidence of adverse effects.