无机化合物CANA对大鼠血管钙化模型的改善作佑

目的:制备大鼠血管钙化模型并观察枸橼酸盐结构类似的无机化合物CANA对血管钙化的作用.方法:用肌注维生素D,和口服尼古丁诱导大鼠血管钙化模型.4周后,进行血管组织Yon Kossa染色,测定大鼠血管钙含量,碱性磷酸酶(ALP)活性、血磷、血钙含量以及心脏系数.结果:模型组大鼠血管VonKossa染色见平滑肌细胞内和细胞外基质有大量银染的深紫色颗粒聚集,主动脉血管钙含量以及ALP活性分别较对照组高66.9%(P＜0.001)和462.6%(P＜0.001),血磷和血钙含量及心脏系数较对照组比较无明显变化(P＞0.05);无机化合物CANA 740 mg·kg-1治疗组血管Von Kossa染色的深紫色颗粒有所减少,主动脉血管钙含量及ALP活性分别较模型组降低38.2%(P＜0.001)和22.0%(P＜0.05).结论:用维生素D3和尼古丁制备模型4周后,可造成血管组织钙化,但血磷和血钙含量及心脏系数无明显改变.无机化合物CANA对该血管钙化模型有改善作用.     

高尿酸血症对血管钙化作用机制的实验性研究

目的观察高尿酸血症对大鼠血管钙化的影响。方法实验动物(大鼠28只)随机分正常组、高尿酸血症组、钙化组和钙化+高尿酸血症组,每组7只,钙化组采用维生素D3(300 000 U/kg,1次,肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)建立大鼠血管钙化模型,高尿酸组采用2%氧嗪酸钾饲料喂养诱导高尿酸血症模型,分别用苦味酸法和尿酸氧化酶过氧化物酶法检测大鼠血清尿酸和肌酐浓度,用Von Kossa染色检测血管钙化程度,用钙离子测试盒、碱性磷酸酶(ALP)试剂盒测定大鼠主动脉钙含量和ALP活性,用硝酸还原酶法检测大鼠血浆NO含量。结果维生素D3和尼古丁能够诱导典型大鼠血管钙化模型,2%氧嗪酸钾饲料喂养可诱导高尿酸血症模型,Von Kossa染色示钙化组主动脉有大量黑色颗粒沉淀,并且血管钙含量、ALP活性明显高于正常组,钙化组+高尿酸血症组钙化最为明显;三组实验组大鼠血浆NO的表达较正常组明显下调。结论高尿酸血症促进大鼠血管钙化,可能与下调NO的表达和上调ALP活性有关。     

川芎嗪抑制大鼠血管钙化及其机制研究

目的探讨川芎嗪调节血管钙化的作用及可能机制。方法建立肌内注射维生素D3和口服尼古丁诱导大鼠血管钙化以及β-甘油磷酸盐诱导血管平滑肌细胞钙化模型,并给予川芎嗪干预。采用原子吸收分光光度法测定主动脉和细胞钙含量、45CaCl2摄入法和Von Kossa染色评价钙沉积、化学比色法测定碱性磷酸酶活性、逆转录聚合酶链反应测定骨桥蛋白mRNA的表达水平。结果钙化大鼠血管和血管平滑肌细胞碱性磷酸酶活性、钙含量和钙沉积明显增强,骨桥蛋白表达水平显著降低。川芎嗪40 mg.kg-1治疗大鼠、200 mg.L-1处理钙化血管平滑肌细胞,均可有效抑制血管钙化、明显上调骨桥蛋白mRNA的表达。结论川芎嗪可能部分通过上调血管组织局部的内源性钙化拮抗系统而产生抑制血管组织和血管平滑肌细胞钙化的作用。     

牛磺酸对维生素D_3和尼古丁诱导的大鼠钙化血管精氨酸/NO途径的影响

目的　观察钙化血管精氨酸 /NO途径的改变和外源性牛磺酸 (taurine,Tau)对血管钙化及精氨酸 /NO途径的影响。方法　维生素D3 (vitaminD3 ,VitD3 )肌注和尼古丁(nicotine ,Nic)灌胃制备大鼠血管钙化模型 ,检测血管钙含量和血管碱性磷酸酶 (ALP)活性、血浆精氨酸和亚硝酸盐(NO-2 )含量、血管环磷酸鸟苷 (cGMP)含量、血管一氧化氮合酶 (NOS)活性及血管精氨酸 (arginine ,Arg)转运。结果　钙化组 (VDN)大鼠血管钙含量较对照组升高 6 6倍 (P <0 0 1) ,血管ALP活性高 12 6倍 (P <0 0 1) ;血浆NO生成减少 ,血管cGMP水平降低 ,血管NOS活性增高 ,其中cNOS活性高 18 9% (P <0 0 1) ,但精氨酸转运在血管平滑肌和内皮明显减少 (- 6 3 8% ,- 5 5 2 % ,P <0 0 1)。口服牛磺酸治疗的大鼠较单纯VDN组 ,血管钙含量降低 4 9 5 % (P <0 0 1) ,血管ALP活性明显降低 ,血浆NO生成增加 ,血管cGMP含量增加 2 9 1% (P均 <0 0 1) ,血管精氨酸转运在血管平滑肌和内皮分别增加 79 4 %和 5 5 1% (P <0 0 1)。结论　给予外源性牛磺酸可以减轻VitD3 加Nic大鼠的血管钙化程度 ,改善钙化血管L Arg/NOS/NO/cGMP途径紊乱 ;提示牛磺酸对防治动脉粥样硬化等疾病的血管钙化可能具有潜在临床意义     

高脂血症合并血管钙化大鼠实验模型的建立

目的建立高脂血症合并血管钙化大鼠实验模型。方法在灌胃38 d高脂乳剂的基础上连续3 d给予大剂量维生素D3注射液(1×106U.kg-1)灌服,继续高脂乳剂灌胃28 d处理大鼠,观察血脂、钙、磷以及胸主动脉的形态学变化。结果在高脂乳剂-大剂量维生素D3-高脂乳剂相继灌胃处理后,大鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)均明显升高(P<0.01),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)无明显变化,但HDL-c/TC显著降低(P<0.01);血钙明显上升(P<0.05),主动脉形成较典型的粥样硬化斑块。结论采用高脂乳剂-大剂量维生素D3-高脂乳剂相结合的方法可以成功建立高脂血症合并血管钙化大鼠模型。     

卡托普利对尼古丁所致大鼠血管内皮功能损伤的保护作用

目的:探讨卡托普利对尼古丁损伤大鼠肠系膜动脉内皮依赖性舒张功能的保护作用及其机制。方法:将30只大鼠分为3组,即正常对照组、尼古丁损伤组(2mg·kg-1)、卡托普利组(尼古丁2mg·kg-1+卡托普利3mg·kg-1),4周后检测各组肠系膜动脉环血管舒张率及血清一氧化氮(NO)含量,一氧化氮合成酶(NOS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:尼古丁使肠系膜动脉环血管舒张率明显降低,并伴随血清NO含量及NOS、SOD活性的明显下降(P<0.01或P<0.05);而卡托普利可升高血管舒张率,并且抑制了尼古丁诱导的NO含量及NOS、SOD活性的下降(P<0.01)。结论:卡托普利对尼古丁所致的血管内皮功能损伤具有明显保护作用,该作用可能与其抗氧化、促进内皮细胞合成、释放NO有关。     

吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的探讨吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径对大鼠血管平滑肌细胞钙化影响。方法利用β-甘油磷酸钠联合丙酮酸钠制备钙化血管平滑肌细胞模型,予不同浓度(10、50、100μmol/L)吡咯咧酮干预。用Von Kossa染色及茜素红S染色观察细胞钙化程度,用甲基百里香酚蓝法测定各组细胞中钙含量,磷酸苯二钠法测定细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性。采用流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡率,实时荧光定量RT-PCR检测各组细胞PPAR-γ、GRP78和caspased-12表达。观察吡咯列酮通过内质网应激致凋亡对大鼠血管平滑肌细胞钙化影响及其可能的分子机制。结果钙化血管平滑肌细胞其钙含量、ALP活性较普通细胞增多(P<0.01),而吡格列酮呈剂量依赖性地促进钙化大鼠血管平滑肌细胞的钙含量、ALP活性,以及PPAR-γ、GRP78、caspase-12m RNA表达(P<0.05)。结论吡咯列酮通过内质网应激致凋亡途径作用可促进β-磷酸甘油诱导的血管平滑肌细胞钙化,其作用可能与PPAR-γ及GRP78、caspase-12表达上调有关。     

硫代硫酸钠对尿毒症大鼠血管钙化的影响

目的:研究硫代硫酸钠对尿毒症大鼠血管钙化的影响。方法:用2%腺嘌呤每日250 mg·kg-1灌胃4周制备尿毒症大鼠模型。设正常对照组(NUC)、尿毒症大鼠组(UC)、尿毒症大鼠+硫代硫酸钠组(UC+STS),每组各12只大鼠。腺嘌呤灌胃4周后给予大鼠硫代硫酸钠每次0.4 g·kg-1腹腔注射,每周3次,持续6周,于第10周处死动物,取血测定血清SOD、MDA水平;用ELISA法测定各组大鼠血浆MGP、Fetuin-A水平。结果:与正常对照组比较,尿毒症大鼠血浆SOD活性降低、MDA水平升高,差异具有显著性(P<0.05);硫代硫酸钠治疗组大鼠血浆SOD活性降低和MDA水平升高受到一定程度的抑制,差异具有显著性(P<0.05)。尿毒症大鼠血浆MGP、Fetuin-A水平显著降低,硫代硫酸钠治疗组大鼠MGP、Fetuin-A水平升高,与尿毒症大鼠比较有显著性差异(P<0.05)。结论:硫代硫酸钠能够减轻尿毒症大鼠血管钙化的发生,硫代硫酸钠通过其抗氧化特性减轻氧化应激损伤,改善血管内皮功能可能是其预防钙化的机制之一,同时,硫代硫酸钠可以提高尿毒症大鼠血浆MGP、Fetuin-A水平,抑制血管钙化的发生。     

丹蛭降糖胶囊通过LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护线粒体功能减轻血管钙化的机制

目的 血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)成骨样分化是血管钙化(vascular calcification, VC)细胞学基础。线粒体功能障碍在VSMCs成骨样转化中起重要作用。本研究旨在探讨丹蛭降糖胶囊(Danzhi Jiangtang capsules, DJC)通过调节LncRNA TUG1/β-catenin信号通路保护VSMCs线粒体功能减轻血管钙化的机制。方法 使用β-甘油磷酸盐来诱导血管平滑肌细胞的钙化模型,并采用维生素D₃+高脂饲料来诱导糖尿病大鼠的血管钙化模型。Von Kossa染色检测细胞和血管组织钙化;用邻甲酚酞络合物比色法测定钙含量;采用对硝基苯磷酸盐比色法测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性;采用RT-qPCR分析VSMCs成骨样转化相关基因骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein2,BMP2)、平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin alpha,ɑ-SMA)及长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(long n...     

尼古丁对Aβ_(25-35)诱导学习记忆障碍小鼠的治疗作用

目的探讨nAChR激动剂尼古丁对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导的学习记忆障碍小鼠模型的治疗作用以及可能的作用机制。方法小鼠侧脑室注入凝聚态Aβ25-354.5μl。次日,用药组给予尼古丁0.2和2 mg.kg-1(ip,bid×7d),对照组及模型组ip生理盐水。给药结束4 d后(造模成功后11 d),进行各组行为学及皮层、海马组织乙酰胆碱酯酶(AChE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)活性指标的检测。结果定位航行实验发现,训练d 4,模型组小鼠的上台潜伏期和游泳距离明显高于对照组和0.2、2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.01);空间搜索实验发现,实验d 5撤除平台,模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的时间百分比明显低于对照组(P<0.01)和0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组(P<0.05);模型组在平台所在象限(第Ⅱ象限)中游泳的距离百分比明显低于对照组(P<0.01),但与0.2及2 mg.kg-1尼古丁治疗组无差别(P>0.05)。酶活性检测发现尼古丁治疗组的AChE及ChAT的活性较对照组明显升高(P<0.01);尼古丁治疗组(2 mg.kg-1)MDA的活性较模型组明显降低(P<0.01),尼古丁治疗组(0.2 mg.kg-1)的活性较模型组无改变(P>0.05);尼古丁治疗组的GSH活性较模型组明显升高(P<0.01)。结论尼古丁能够改善Aβ25-35诱导痴呆小鼠的学习记忆功能障碍,该作用与其增强ChAT的活性以及抗氧化应激有关。     

胞外pH值通过BMP-2信号通路影响高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化

目的 探讨骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP-2）信号通路在不同pH值环境影响高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）钙化中的作用。方法 选取5～8周龄健康雄性SD大鼠,体外分离培养大鼠胸主动脉VSMCs,采用免疫细胞化学方法鉴定。将VSMCs用随机抽样法分为正常对照组(pH7.4)、pH7.4+高磷组、pH7.1+高磷组及pH7.7+高磷组。采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况,酶联免疫吸附法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测BMP-2、Smad1及 Runt 相关转录因子2（Runx2） mRNA的表达。结果 与正常对照组相比,pH7.4+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）;与pH7.4+高磷组相比,pH7.1+高磷组大鼠VSMCs的钙含量减低（P<0.05）、茜素红染色钙化结节减少,Runx2 mRNA表达及ALP活性均降低（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均降低（P<0.05）,pH7.7+高磷组大鼠VSMCs的钙含量增加（P<0.05）、茜素红染色钙化结节增多,Runx2 mRNA表达及ALP活性均增高（P<0.05）,BMP-2、Smad1mRNA表达均增高（P<0.05）。结论 胞外酸性环境（pH7.1）抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,胞外碱性环境（pH7.7）促进高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过BMP-2信号通路介导了VSMCs的表型转化。     

尾加压素Ⅱ加重β-甘油磷酸诱导的大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的观察尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ,UⅡ)对血管钙化形成的影响。方法利用β-甘油磷酸制备钙化血管平滑肌细胞(VSMCs),测定细胞钙含量、碱性磷酸酶活性、45Ca摄入及骨钙素含量。结果β-甘油磷酸诱导的钙化细胞呈明显的形态转变。生长5～7d后,细胞由长梭形转变为骰子状;9～10d后,细胞聚集成多菊花状的多细胞结节,细胞颜色变暗,vonKossa染色阳性。UⅡ组上述形态变化加重。与对照组相比,用含β-甘油磷酸的钙化培养液处理10d的钙化细胞,其钙含量高2.38倍,ALP活性高6.79倍,45Ca沉积高2.13倍,骨钙素含量高49.3%(P<0.01)。UⅡ(10-10、10-9和10-8mol.L-1)与β-甘油磷酸同时孵育时,钙含量比钙化组分别高22.08%(P<0.05)、49.78%和87.56%(P<0.05),ALP活性高27.41%、56.31%和102.53%(P<0.01),45Ca摄入高68.32%、99.45%和115.36%(P<0.01),骨钙素含量高18.23%(P<0.05)、32.68%和44.65%(P<0.01),表明UⅡ呈浓度依赖性地促进钙化形成。结论尾加压素Ⅱ促进β-甘油磷酸诱导的大鼠VSMCs钙化形成。     

Graves病患者骨代谢指标的变化

【摘要】目的 观察Graves病患者血中钙、磷、碱性磷酸酶（ALP）、甲状旁腺素（PTH）和25羟维生素D[25（OH） D]水平变化及在骨代谢中的作用。方法 收集62例初发或复发的Graves病患者及91例正常对照人群资料。电化学发光法测定血浆PTH和25（OH）D;生化法测定血钙、磷、ALP。结果 Graves病组血钙、磷、ALP、25（OH）D水平升高, PTH降低（均P＜0.01）。亚组分析显示,女性患者血钙、磷、ALP、25（OH）D水平高于对照组,PTH水平低于对照组;男性患者ALP、25（OH）D水平高于对照组,PTH水平低于对照组（均P＜0.01）。Graves病组维生素D缺乏17例（27.4%）,不足20例（32.3%）,充足25例（40.3%）;对照组维生素D缺乏54例（59.3%）,不足31例（34.1%）,充足6例（6.6%）。Graves病组血PTH、血25（OH）D、血钙及血磷无相关性。结论 Graves病骨转换加速,患者血25（OH）D水平升高,可能与高血钙、血PTH降低、高血磷导致1-α-羟化酶活性降低有关。维生素D缺乏在Graves病骨代谢中的作用不大。     

阿法骨化醇冲击或每日治疗对继发性甲状旁腺功能亢进患者血钙血磷水平的影响

目的:观察阿法骨化醇(1α-(OH)-D3)冲击治疗和每日治疗对慢性肾脏病尿毒症期维持血液透析后继发性甲状旁腺功能亢进(SHPT)患者的血钙血磷水平的影响。方法:选取SHPT的尿毒症血液透析患者56例,随机均分成常规组和冲击组。常规组口服阿法骨化醇0.75μg·d-1;冲击组口服阿法骨化醇每次3μg,每周2次。2组均治疗12周。在治疗前及治疗后第4、8、12周时测2组患者血清钙、磷、钙磷乘积、碱性磷酸酶(ALP)及血全段甲状旁腺激素(iPTH)水平,并观察不良反应。结果:2组患者血钙水平均较治疗前显著上升(P<0.05),但2组治疗同期比较差异无统计学意义(P>0.05);2组血磷水平治疗前、后及组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05);常规组钙磷乘积治疗第4、8周时较治疗前显著上升(P<0.05),但冲击组上升不明显(P>0.05),且治疗第4、8周时,常规组的钙磷乘积显著高于冲击组,差异有统计学意义(P<0.05);2组iPTH、ALP水平治疗第4、8、12周时均显著低于治疗前(P<0.05)。2组不良反应均较轻微,且差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阿法骨化醇口服常规治疗和冲击治疗均能控制SHPT,但冲击治疗效果更明显,且起效快。     

女贞子治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究

目的观察女贞子对去卵巢(ovariectomy,OVX)大鼠骨质疏松(osteoporosis,OP)的治疗作用,并探讨其作用机制。方法大鼠骨质疏松模型,女贞子(9、4.5、2.25 g.kg-1.d-1)灌胃给药,实验过程称体重,连续给药26周后测定血钙(S-Ca)、血磷(S-P)、尿钙(U-Ca)、尿磷(U-P)的含量,ELISA试剂盒双抗体夹心法测定血清碱性磷酸酶(ALP)、血清骨特异性碱性磷酸酶(BALP)含量、骨钙素(OCN)含量、尿液中脱氧吡啶啉(DPD)含量,DEXA型骨密度仪分析大鼠的股骨、胫骨、第4椎骨的BMD(bone mineral density),动物处死后完整取下心、肝、脾、肺、肾、胸腺、脑、子宫进行称重,采用HE染色法进行子宫病理学检查。结果女贞子能有效抑制去卵巢所致的大鼠体重增加、升高S-Ca、S-P、降低U-Ca、U-P、降低ALP、BALP、OCN、DPD的含量,增加大鼠股骨、胫骨、第4椎骨的BMD,并且长期用药对子宫无明显刺激作用。结论女贞子对OVX大鼠所致的骨质疏松症有良好的治疗效果,其作用机制可能与其能降低高的骨转换率有关。     

淫羊藿总黄酮对异丙基肾上腺素诱导心力衰竭大鼠醛固酮的影响

目的探讨淫羊藿总黄酮对充血性心力衰竭大鼠血浆醛固酮（ALD）的影响。方法雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组（n=10）,模型组50只皮下注射异丙基。肾上腺素2次（170mg·kg^-1）,6W后应用超声心动图检测,以左室射血分数≤45％确定造模成功,将心衰大鼠模型随机分为对照组、美托洛尔治疗组,淫羊藿总黄酮治疗组,18W进行血流动力学检测,采用放免法检测血浆ALD,并取心肌观察病理形态学特征。结果1．与正常组相比,模型组心脏血流动力学指标显著恶化,血浆ALD显著升高（P〈0．01）,心室重量指数显著升高（P〈0．01）,心室重构明显;2．与模型组比较,淫羊藿总黄酮及美托洛尔组心脏血流动力学指标显著好转,血浆ALD明显下降（P〈0．01）,心室重量指数明显降低（P〈0．01）,心室重构明显好转;3．淫羊藿总黄酮组与美托洛尔组间上述各指标无明显差异（P〉0．05）。结论淫羊藿总黄酮能够调节血浆ALD的水平,改善心力衰竭大鼠心功能,逆转心室重构。     

Pioglitazone protects against elastocalcinosis and improves aortic wall elasticity

Specific treatment of age-related aortic wall arteriosclerosis and stiffening is lacking. As anti-inflammatory ligands for peroxisome proliferator-activated receptor-gamma have beneficial effects on the arterial wall in atherosclerosis, we investigated whether chronic pioglitazone treatment protects against another form of vascular wall disease, arteriosclerosis. In a rat model of elastocalcinotic arteriosclerosis (hypervitaminosis D and nicotine, VDN), we evaluated whether pioglitazone attenuated arteriosclerosis and its consequences, aortic wall rigidity, increased aortic pulse pressure and left ventricular hypertrophy. In VDN rats, medial calcification was associated with monocyte/macrophage infiltration and induction of TNF-alpha and IL-1B. Pioglitazone decreased TNF-alpha and IL-1B mRNA expression, blunted aortic wall calcification and prevented fragmentation of elastic fibers. Pioglitazone reduced aortic wall stiffness, aortic pulse pressure and left ventricular hypertrophy. Our results may be clinically relevant in elderly patients suffering from aortic wall stiffening and isolated systolic hypertension.