三氧化二砷诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3)诱导骨肉瘤MG 6 3细胞凋亡的作用。方法 :用MTT法、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳等方法观察As2 O3诱导MG 6 3细胞凋亡的作用。结果 :As2 O3可有效地抑制MG 6 3细胞增殖 ,随着药物浓度增高其抑制作用增强 ,且细胞出现典型的凋亡变化。DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形条形。透射电镜下可见细胞核仁消失 ,染色质浓缩聚集于核膜下。结论 :As2 O3可诱导骨肉瘤细胞凋亡 ,其作用机制有待进一步探讨     

补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞增殖及凋亡的影响

目的 体外观察补骨脂素对人成骨肉瘤MG-63细胞的抑制增殖和促进凋亡作用.方法 将浓度为640、320、160 μmol/L的补骨脂素与MG-63细胞体外培养, 采用苔盼蓝染色法绘制细胞生长曲线,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物的细胞毒作用,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化,Hoechst33258细胞荧光染色法观察细胞凋亡的形态变化.结果 细胞生长曲线表明细胞增殖数量变化与药物浓度及时间有显著依赖性;MTT测定补骨脂素在72 h对MG-63细胞抑制率分别为77.74%、71.05%、61.15%,细胞荧光染色观察到MG-63细胞形态改变.结论 补骨脂素抑制体外培养骨肉瘤MG-63细胞增殖,并可诱导其细胞凋亡.     

片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的观察不同浓度片仔癀对人骨肉瘤MG63细胞相关凋亡蛋白表达的影响。方法不同浓度片仔癀溶液干预人骨肉瘤MG63细胞24h后,采用Westernblot法检测各组骨肉瘤MG63细胞凋亡标志蛋白Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax的表达。结果片仔癀通过内源性的线粒体途径,促进人骨肉瘤MG63细胞Caspase-3、Caspase-9的激活,诱导骨肉瘤细胞的凋亡,同时可以调节Bcl-2、Bax的表达,有剂量依赖性。结论片仔癀促进骨肉瘤MG63细胞凋亡可能通过调节相关凋亡蛋白表达而实现。     

Effect of NS398 on inducing apoptosis and down-regulating Bcl-2 protein in human osteosarcoma cell MG-63 line

Objective： This study investigated the effect of NS398 on anti-proliferation and the mechanism of inducing apoptosis of human osteosarcoma cell MG-63 line in vitro. Methods： Growth suppression was detected by MTT method. Special morphological changes of apoptosis were observed by transmission electron microscopy （TEM） and DNA fragments electrophoresis. The apoptotic rates were quantified by flow cytometry （FCM）. And Bcl-2 protein level were detected by Western Blotting assay. Results： Different concentration NS398 inhibited the cell growth. Through TEM and DNA electrophoresis, the special morphological changes were observed after 24, 48 and 72 h treatment with NS398. The apoptotic rates of MG-63 cells treated with NS398 were respectively, significantly higher than that of the control group（ P 〈0.01 ）. Western blot assay showed that NS398 reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion： NS398 suppressed the proliferation of human osteosarcoma cell MG-63 line and induced apoptosis. The mechanism may be associated with down-regulation expression level of bcl-2 protein.     

虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G₀/G₁期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。     

半导体激光诱导耐药MG-63细胞凋亡的机制

目的：初步探讨半导体激光诱导耐药MG-63细胞凋亡的分子机制,为其临床应用提供理论依据。方法：MG-63耐药细胞（密度为1.0×10⁹•L^-1）经激光照射分为对照组及半导体激光30、60、90和120　J•cm^-2组。MTT法检测耐药MG-63细胞活性;流式细胞仪检测细胞活性氧含量;Western blotting方法检测caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白表达。结果：与对照组比较,半导体激光60、90和120 J•cm^-2组MG-63耐药细胞活性降低(P<0.05或P<0.01),细胞增殖抑制率随激光剂量增加而升高;与对照组比较,以上各半导体激光组激光照射后细胞内活性氧水平升高(P<0.05或P<0.01),同时细胞中caspase-9和caspase-3蛋白的表达量随激光剂量增加而 增强(P<0.05或P<0.01),而caspase-8蛋白的表达量差异无显著性（P>0.05）。半导体激光30 J•cm^-2组细胞活性、活性氧含量、caspase-9和caspase-3蛋白的表达与对照组比较差异均无显著性（P>0.05）。结论：60～120 J•cm^-2组的半导体激光可通过线粒体凋亡通路诱导耐药MG-63细胞凋亡,从而抑制细胞增殖,这一过程与活性氧的产生密切相关。     

NS398对宫颈癌Hela细胞bcl-2表达的影响

目的 探讨NS398对宫颈癌Hela细胞生长及bcl-2基因和蛋白表达的影响.方法 用不同浓度的NS398(0、25、50、75和100μmol/L)处理宫颈癌Hela细胞不同时间,采用MTT比色法分析细胞生长抑制卒.用不同浓度NS398处理Hela细胞24h,RT-PCR检测COX-2和bcl-2 mRNA表达的变化,Western blot检测COX-2和bcl-2蛋白表达的变化.结果 随着NS398浓度及处理时间的增加.宫颈癌Hela细胞生长抑制率升高;随着NS398剂量的增加,COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达水平逐渐减少.结论 NS398可呈剂量和时间依赖性抑制Hela细胞的生长,呈浓度依赖性减少COX-2和bcl-2 mRNA及蛋白的表达.NS398可能通过抑制COX-2和bcl-2的表达,抑制宫颈癌Hela细胞的生长.     

雄黄诱导白血病细胞凋亡及其bcl-2蛋白表达的研究

目的检测雄黄诱导白血病细胞凋亡能力,探讨分子机制。方法应用形态学观察细胞凋亡,计算细胞凋亡率,免疫组化方法检测白血病细胞bcl-2蛋白表达。结果雄黄可诱导白血病细胞发生典型的凋亡,同时雄黄可使白血病细胞bcl-2蛋白表达呈时间依赖性下降。结论雄黄通过影响白血病细胞bcl-2蛋白的表达,从而导致白血病细胞发生凋亡,这是其治疗白血病的重要分子机制。     

桔梗皂苷D对MG-63细胞的凋亡作用

目的 研究桔梗皂苷D对MG-63细胞的促凋亡作用.方法 MTT法测定桔梗皂苷D对MG-63细胞增殖抑制情况及其IC50值,利用流式细胞仪检测加入桔梗皂苷D作用24 h后的MG-63细胞的凋亡情况、凋亡类型.使用二氯荧光黄二乙酸酯(DCFH-DA)检测加入桔梗皂苷D后肿瘤细胞内活性氧水平,加入JC-1线粒体染料试剂盒检测被桔梗皂苷D孵育24 h后肿瘤细胞线粒体膜电位的变化.结果 MTT数据表明桔梗皂苷D对细胞的生长半数抑制浓度IC50为11.80μmol/L.MG-63细胞被桔梗皂苷D作用24 h后,通过JC-1和DCFH-DA染色的实验结果表明桔梗皂苷D作用后的MG-63细胞内的活性氧水平上升,细胞线粒体膜电位下降.结论 桔梗皂苷D可能通过增加细胞内活性氧水平破坏线粒体从而导致细胞发生凋亡.     

二膦酸盐对人骨肉瘤细胞诱导凋亡作用的实验研究

目的：探讨二膦酸盐对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其可能的作用机制。方法将人骨肉瘤M G‐63细胞株培养、传代后将细胞分为两组：二膦酸盐400μg／m L干预组、生理盐水空白对照组,孵育72 h后,对两组人骨肉瘤M G‐63细胞株行免疫荧光检测,观察两组细胞中凋亡因子Caspase‐3、Fas的表达;行流式细胞术检测,观察两组细胞的细胞凋亡率。结果二膦酸盐作用于人骨肉瘤MG‐63细胞株72 h后,免疫荧光检测结果可见二膦酸盐400μg／mL干预组细胞中凋亡因子Caspase‐3、Fas大量表达,而生理盐水空白对照组几乎见不到凋亡因子Caspase‐3、Fas的表达;流式细胞术检测结果观察到二膦酸盐400μg／mL干预组细胞的细胞凋亡率为54．00％,远大于生理盐水空白对照组的细胞凋亡率3．10％,差异有统计学意义（ P＜0．05）,存在明显的诱导凋亡现象。结论二膦酸盐对体外人骨肉瘤M G‐63细胞株存在很强的诱导凋亡作用。     

冬凌草甲素对骨肉瘤细胞的凋亡诱导效应的研究

目的：考察冬凌草甲素是否能诱导MG-63细胞凋亡。方法：用不同浓度的冬凌草甲素作用于MG-63细胞,用Hochest33258染色鉴定MG-63细胞凋亡的形态学特征;用流式细胞仪分析MG-63早期凋亡细胞的百分率;用Caspase-8蛋白印迹分析证明MG-63细胞凋亡发生的分子特征。结果：凋亡细胞形态学鉴定、流式细胞仪检测均有力证明冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡;冬凌草甲素诱导MG-63细胞凋亡伴有Caspase-8蛋白表达上调和裂解激活。结论：冬凌草甲素能以浓度依赖性方式诱导MG-63细胞凋亡。     

尼美舒利与阿霉素联合应用对骨肉瘤MG-63细胞增殖、凋亡及衰老的影响

目的:研究尼美舒利与阿霉素联合应用对骨肉瘤MG-63细胞的作用及机理。方法:MTT法检测细胞的增殖,衰老相关性β-半乳糖苷酶(SAβ-Gal)染色检测细胞衰老,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡,透射电镜显示MG-63细胞的形态变化。结果:当阿霉素浓度固定在0.75 mg/L时,与低浓度尼美舒利(25-200 μmol/L)...     

重组可溶性TRAIL联合顺铂诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的研究

目的 研究重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)与化疗药物顺铂 (CDDP)单独及联合使用诱导骨肉瘤细胞MG-63的凋亡作用.方法 常规培养骨肉瘤细胞系MG-63,用不同浓度rsTRAIL、CDDP和两药联用处理细胞,于处理后的不同时间观察细胞形态变化.应用四氮唑蓝(MTT)比色法和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双重荧光染色法检测两药单独使用和联合使用诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用.结果 rsTRAIL对MG-63细胞的生长有明显的抑制作用,可见典型的细胞凋亡特点,细胞抑制率从6 μg/L的10.1%上升到800 μg/L的84.6%,细胞凋亡率从3 μg/L的19%提高到25 μg/L的69.7%,均具显著的剂量效应;亚毒性剂量的CDDP与低浓度的rsTRAIL合用,明显提高了MG-63细胞的生长抑制率和凋亡率(P＜0.05).结论 rsTRAIL具有诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用,并通过诱导凋亡的方式有效地杀伤肿瘤细胞;化疗药物CDDP能加强rsTRAIL的抗肿瘤活性.     

阻断Notch信号通路抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖的实验研究

目的 探讨γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响及其机制.方法 体外培养骨肉瘤MG-63细胞株;MTT法检测不同浓度DAPT(1.0、5.0、10.0 μmol/L)对骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用;透射电镜下观察不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞形态的影响;流式细胞术结合AnnexinV-FITC/PI双染分析不同浓度DAPT对骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测骨肉瘤MG-63细胞Notch1、HES1基因表达.结果 不同浓度的DAPT作用于骨肉瘤MG-63细胞后,细胞增殖水平明显下降(P＜0.05),1.0μmol/L DAPT即抑制细胞生长,随着DAPT浓度增加抑制效果明显增强,呈显著的浓度依赖关系,且随着DAPT作用时间延长,抑制效果也明显增强.细胞凋亡结果分析表明,DAPT能浓度依赖性地诱导骨肉瘤MG-63细胞发生凋亡.RT-PCR显示随着DAPT量的增加,Notch 1、HES 1 mRNA的表达逐渐下降(均P＜0.05).结论 DAPT对骨肉瘤MG-63细胞抑制增殖和诱导凋亡的作用可能与下调MG-63细胞中Notch 1、HES 1 mRNA的表达有关.     

硒酸酯多糖诱导人骨肉瘤细胞凋亡作用的有效成分

目的 探讨硒酸酯多糖诱导骨肉瘤细胞凋亡作用的有效成分。方法 MTT法检测细胞活力,荧光显微镜观察凋亡细胞形态,流式细胞仪分析凋亡峰及细胞周期,比较硒酸酯多糖和卡拉胶对骨肉瘤细胞的不同作用。结果 硒酸酯多糖组抑瘤率、癌细胞凋亡率明显强于卡拉胶组,且两者对细胞周期的调控不同。结论 硒酸酯多糖可诱导人骨肉瘤细胞凋亡,且主要是硒作用的结果。     

大蒜素联合多西他赛对人骨肉瘤细胞MG-63增殖抑制作用的研究

目的观察大蒜素和多西他赛(DXT)单用及联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖抑制作用。方法采用MTT法检测细胞毒性作用。倒置相差显微镜观察细胞形态改变,流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响,并检测凋亡率。结果大蒜素和DXT单用及联合用药,在一定浓度范围内均对骨肉瘤细胞MG-63有增殖抑制作用和诱导凋亡作用,其作用与剂量呈正相关。联合用药组作用明显强于单独用药组(P<0.05)。大蒜素和DXT单独及联合作用于人骨肉瘤细胞株MG-63,与细胞生长分裂关系较密切的G2/M期占细胞周期的比例有明显升高,且联合用药的升高作用更明显(P<0.01)。结论大蒜素和DXT均可将骨肉瘤细胞株阻滞于G2/M期,两药联合可能具有协同抗肿瘤作用。     

华蟾酥毒基诱导人骨肉瘤细胞 U-2OS 凋亡的实验研究

目的：观察华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 增殖和凋亡的影响,从而探讨华蟾酥毒基诱导骨肉瘤凋亡的可能机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 增殖的影响;应用流式细胞术检测华蟾酥毒基及华蟾酥毒基联合泛 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 对人骨肉瘤细胞 U-2OS 细胞凋亡的影响;应用蛋白质印迹法检测华蟾酥毒基对凋亡通路相关蛋白表达的影响。结果：四甲基偶氮唑蓝比色法实验结果表明,华蟾酥毒基以时间和浓度依赖的方式抑制 U-2OS 细胞生长。流式细胞术结果显示,100 nM华蟾酥毒基干预后,U-2OS 细胞凋亡率为（46．87±11．23）％,但当华蟾酥毒基与泛 Caspase 抑制剂 Z-VAD-FMK 共同干预后,细胞凋亡率仅为（2．34±0．98）％,与空白对照组及华蟾酥毒基联合 Z-VAD-FMK 组相比,华蟾酥毒基能显著提高细胞凋亡率（P ＜0．01）。蛋白质印迹法结果显示,华蟾酥毒基能够显著提高促凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-8、Cleaved Caspase-9的表达。结论：华蟾酥毒基对人骨肉瘤细胞 U-2OS 的生长有显著抑制作用,并能够促使肿瘤细胞凋亡,其作用机制可能与激活 Caspase 依赖的凋亡途径有关。     

激活素A和卵泡抑素对MG-63细胞株OCN、BMP-2蛋白表达的影响

目的 探讨激活素A (activin A)和卵泡抑素(follistatin,FS)对骨肉瘤细胞株(MG-63)骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨形态形成蛋白-2(BMP-2)蛋白质表达的影响以及骨形成作用.方法 采用细胞培养结合Western blot检测,观察不同浓度激活素A以及加用卵泡抑素后对MG-63细胞OCN、BMP-2蛋白质表达的影响,并采用PNPP底物比色法检测MG-63细胞的碱性磷酸酶含量.结果 激活素A明显上调MG-63细胞OCN、BMP-2蛋白质表达(P＜0.05),随着激活素A剂量增加以及作用时间延长,OCN、BMP-2蛋白质表达量逐渐加大,并促进碱性磷酸酶的生成,但加用卵泡抑素后该作用得到抑制.结论 激活素A上调OCN、BMP-2蛋白质表达及促进骨形成,而卵泡抑素抑制该效应.