戊型肝炎病毒IgM抗体的检测及临床意义

采用合成多肽抗原建立了检测戊型肝炎病毒－ＩｇＭ的酶联免疫吸附试验方法，成本低，操作简便，快速，重复性好，特异性强。与抗甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒的ＩｇＭ抗体无交叉反应，排除了ＲＦ的干扰，且可被β－巯基乙醇抑制而不起反应。     

用ELISA方法检测埃可病毒感染的特异性IgM抗体

目的 研究埃可病毒感染的无菌性脑膜炎的诊断方法。方法 采用埃可病毒混合抗原包被酶标板，用抗人γ链处理人脑脊液标本，通过酶标二抗及底物显色，建立了抗埃可病毒IgM的间接ELISA检测方法；并用特异性试验、对照和重复性试验证实方法的可靠性和实用性。结果 在临床诊断为无菌性脑膜炎的78例患者脑脊液中有14例阳性（17.9%)，而细菌性脑膜炎的36例患者脑脊液中仅有1例阳性（2.8%)，28例脑外伤患者脑脊液均为阴性，ELISA阳性的5份脑脊液中和试验4例阳性，而ELISA阴性的5份脑脊液中和试验均为阴性；该方法与脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A组病毒7型和柯萨奇B组病毒1-6型无交叉反应；ELISA阳性的6份标本经特异性IgM破坏和阻断试验均全部转为阴性。结论 本方法快速，简便、可靠、适合于临床早期特异性诊断。     

广东地区肝炎患者血清中庚型肝炎病毒RNA的检测

目的了解庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染在不同临床类型肝炎患者中的存在状况。方法用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术对７２１例肝炎患者血清进行了ＨＧＶＲＮＡ检测。结果发现８０例ＨＧＶＲＮＡ阳性，以非甲、乙、丙、丁或戊型肝炎中阳性率为高；慢性丙型肝炎（ＨＣＶ）和慢性乙型混合丙型肝炎（ＨＢＶ＋ＨＣＶ）次之；在慢性重型肝炎和肝硬化时较低。结论庚型肝炎病毒在广东地区现症肝炎患者中有一定程度的流行     

庚型肝炎病毒NS5区部分基因的表达及其在EIA中的 …

目的 在大肠杆蓖中表达ＨＧＶ ＮＳ５抗原,以建立ＨＧＶ抗体血清学检测方法。方法 利用扫转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法从人血浆中分离庚型肝炎病毒ＮＳ５部分基因,克隆到ｐＲＳＥＴ Ａ载体,经酶切初步鉴定后进行ＤＮＡ序列分析,结果表明克隆序列正确。以ｐＰＲＯＥＸ－１为表达载体,转化ＤＫ５α,诱导表达后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果 克隆的基因片段在大肠杆菌中表达出相对分子质量（Ｍ     

庚型肝炎病毒NS5区部分基因的表达及其在EIA中的初步应用

目的　在大肠杆菌中表达HGVNS5抗原 ,以建立HGV抗体血清学检测方法。方法　利用反转录PCR(RT PCR)法从人血浆中分离庚型肝炎病毒NS5部分基因 ,克隆到pRSETA载体 ,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析 ,结果表明克隆序列正确。以pPROEX 1为表达载体 ,转化DH5α ,诱导表达后进行SDS PAGE和Westernblot分析。结果　克隆的基因片段在大肠杆菌中表达出相对分子质量 (Mr)约 2 0× 10 3 的可溶性蛋白 ,其氨基端含有 6个组胺酸肽段 ,可经Ni NTA亲和层析纯化。免疫印迹分析表明 ,该表达产物可与HGV感染患者体内的HGV抗体特异性结合。结论　克隆了HGVNS5部分基因并获得初步表达 ,表达的HGVNS5蛋白具有特异抗体结合活性 ,为建立检测HGVNS5抗体的血清学方法奠定了基础     

检测HFRS患者血清IgM抗体的快速ELISA捕捉法的建立及其与常规法的比较

建立了检测ＨＦＲＳ患者血清ＩｇＭ抗体的快速ＥＬＩＳＡ捕捉法。通过对微板进行预处理，在稀择液中加入一定浓度的ＰＥＧ和ＮａＣｌ，用快速漱洗３次代替３×３ｍｉｎ洗涤，以及适当提高酶标抗体的使用浓度等措施，加快了反应速度，缩短了反应时间，从包被微板至出结果，仅需１００ｍｉｎ。通过对２１４份ＨＦＲＳ患者血清、３３份健康人血清、１９份其他发热患者血清，以及１５份ＲＦ阳性血清的检测，证明该法特异性强、敏感性高、简便快速、便于推广使用。     

丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立

目的以特异性单克隆抗体为基础建立丙型肝炎病毒(HCV)抗原检测的酶联免疫吸附(ELISA)法,探索从血浆或血清中检测HCV抗原的可能性.方法利用我们制备的抗-HCV核心及NS3区单克隆抗体(McAbs),进行多种交叉组合模式的分析,确立实验室模式,并测定348份义务献血员血样,确定此方法的Cutofff值,并分析146份抗-HCV阳性及225份抗-HCV阴性血浆,阳性结果用套式PCR试剂盒确证.结果构建了以抗-HCV核心区单抗C39及NS3区单抗C7-6为包被抗体,以C39及NS3区C7-57为标记抗体的夹心ELISA检测模型,以C7为抗原,其检出灵敏度为5ng/ml,其Cutoff值为阴性对照均值±0.25.146份抗-HCV阳性样本中,11份为抗原反应阳性,225份抗-HCV阴性样本中,16份为抗原阳性,这些阳性样本经PCR检测后,23份为HCVRNA阳性.结论用单抗构建的HCV抗原检测方法分别从抗-HCV阳性及阴性样本中检测出HCV抗原反应阳性样本,并经PCR确证,表明直接从血浆样本中检测HCV抗原是可能的,这将对于HCV和基础研究及控制HCV的传播有重要意义.     

乙型肝炎病毒e抗原的纯化及其在人血清抗体检测中的应用

目的方法利用ＺｈｏｕＪｉａｎ教授提供的重组质粒ＤＮＡｐＢＶ２２０／ｅＡｇ，转染ＤＨ５α细胞，经３０℃培养３小时，４２℃培养６小时温度诱导后，提取乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ层折纯化后免疫打点分析，收集阳性蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｇ２５０染色，显示为单一的蛋白带，用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫打点（ｌｍｍｕｎｏｄｏｔ）法，确定表达产物的特异性。将纯化的ＨＧｅＡｇ用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫条。方法基检测人血清中的相关抗体。结果经４９例乙型肝炎病毒ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ）阳性病人血清检验证实了其特异性。结论免疫条方法较ＥＬＩＳＡ方法更敏感、特异。     

麻疹IgM抗体行定量酶联免疫吸附试验检测应用效果分析

目的探讨对麻疹患者采用定量酶联免疫吸附试验测定IgM抗体的临床价值。方法回顾性分析在我院接种麻疹疫苗的100例儿童的临床资料,分别采用定量酶联免疫吸附试验和中和抗体试验测定血清IgM抗体水平,比较两者的符合率;同时统计ELISA与NT诊断的耗时、费用和阳性率。结果浓度≥200 IU/L样品ELISA检测与NT的符合率明显高于200 IU/L样品,其差异有统计学意义(P0.05)。两种检查手段阳性率无明显差异(P0.05),但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法其差异有统计学意义(P0.05)。结论定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹Ig M抗体时具有很高的准确性,且耗时和费用均较低,值得临床推广。     

丙型肝炎病毒E1抗体检测及临床应用

目的：研究丙型肝炎患者血清中HCV E1抗体，确定HCV E1抗原在抗体检测中的应用价值。方法：应用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测80份卫生部第3代HCV血清参比品，821例职业献血员血清和720例临床肝炎患者血清中E1抗体。结果：用E1抗原单包板检查80份卫生部血清参比品的阳性符合率为70％、阴性符合率为100％；从821例职业献血员血清样品中检出E1抗体阳性率为1．9％；从720例临床肝炎患者血清中检出E1抗体阳性率为68％。大部分E1抗体阳性血清，同时也能和HCV的Core、NS3抗原及NS5A抗原呈阳性反应，但有个别血清只对E1抗原呈阳性反应。用市购HCV抗ELISA检测试剂盒检测为阴性的218例肝炎科门诊患者、813例献血员和848例一般人群血清，用E1抗原单包板复检，检出的阴性率分别为1．4％、1．1％和0．9％。在3例患者血清学转变的追踪研究中，HCV E1抗体都同现最早。结论：用E1工程蛋白检测E1抗体具有较高的灵敏度和特异性。E1抗体在HCV感染患者中普遍存在而且早出现，在临床诊断上是有意义的。     

酶联免疫吸附法检测庚型肝炎病毒抗体

目的 探讨抗庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＩｇＧ与各种病毒感染,丙氨到转氨酶（ＡＬＴ）及ＨＧＶ ＲＮＡ的相关性。方法 用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测了３１５例各种肝炎病毒（Ａ￣Ｅ）感染乾和１１７例健康献血员血清的抗－ＨＧＶ ＩｇＧ,并测定其ＡＬＴ,对抗－ＨＧＶ ＩｇＧ阳性的标本用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测ＨＧＶ ＲＮＡ。结果 献血员抗－ＨＧＶ ＩｇＧ的阳性率为３．４２％（４／１１７     

IgM类抗HCV独特型抗体（抗HCV—Ab2）的ELISA法检测及意义

用抗人μ链单克隆抗体建立的ＥＬＩＳＡ法检测１５２例肝病患者ＩｇＭ类抗ＨＣＶ独特型抗体，甲肝阳性率０％（０／１５），乙肝８．５％（４／４７），丙肝３２．１％（２６／８１），丙肝合并乙肝者２２．２％（２／９）。丙肝组内频率为急肝０％（０／１７），慢性迁延性肝炎３８．１％（８／２１），慢性活动性肝炎４３．８％（１４／３２），肝炎肝硬化３６．４％（４／１１）。本法重复性好，批内变异系数４．６％，批间变异系数８．５％。用纯化人抗ＨＣＶ抗体进行阻断，阻断率＞８５％，丙肝组与乙肝组有显著性差异（Ｐ＜０．０１），与各种自身免疫性疾病无交叉，有较好的特异性和精密度，且与血清中ＩｇＭ抗ＨＣＶ关系密切，提示丙型肝炎ＩｇＭ类抗ＨＣＶ－Ａｂ２具有模拟抗原的作用，是慢性丙型肝炎的重要检测指标并与丙肝慢性化有关。     

丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定

目的探索丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３抗原在正常人群及各类临床病人血清及肝组织中分布状况。方法用人工合成的ＨＣＶ核心抗原Ｃ３３肽（含３３个氨基酸）与小鼠血清白蛋白,经异型双功能交联剂ＳＰＤＰ连接后免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠,制成２株Ｃ３３肽单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,分别用作包被抗体和酶标抗体,建立检测血清中Ｃ３３肽抗原的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,共检测了１２３６例各类病人。并用免疫荧光及固相免疫酶法检测肝活检组织中的ＨＣＶＣ３３肽抗原。结果急性丙型肝炎（ＨＣ）患者,Ｃ３３肽的阳性检出率为１４．０％（６／４３）;仅抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性患者Ｃ３３肽的阳性检出率为８．８％（３５／３９６）;慢性丙型肝炎患者为６．５％（４／６２）;白血病患者为４．３％（１／２３）;血透病人为３．３％（１９／５７６）;普通住院病人为１．５％（２／１３６）;正常供血员为１．４％（６／４３８）。肝活检免疫荧光、固相免疫酶检测显示ＨＣＶＣ３３肽在细胞核、细胞质、细胞膜上均有表达,在胞质中或集中于全胞质一侧或弥散分布于胞质中。结论ＨＣＶＣ３３抗原测定,可以作为ＨＣＶ感染的标志物之一。     

徐州地区庚型肝炎病毒5′非编码区部分序列分析

自庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）被报道以来,许多国家、地区相继分离出该病毒的基因序列,并发现ＨＧＶ基因序列存在一定变异,ＨＧＶ不同基因区以５′非编码区（５′－ｕＴＲ）变异较小,有学者根据该区序列的变异,认为ＨＧＶ至少存在三种基因型,以最初报道的美国株ＨＧＶ（...     

丙型肝炎病毒感染者中抗病毒IgM检测的意义

建立了抗ＨＣＶＩｇＭ间接ＥＬＩＳＡ方法，并用之检测ＨＣＶ不同感染人群。抗ＨＣＶＩｇＭ在不同感染人群中的检出率变化很大。急性输血后丙型肝炎患者检出率可高达９３．８％，而正常献血员中可低至０．６８％。比较抗ＨＣＶＩｇＭ和抗ＬｇＧ阳性中ＨＣＶＲＮＡ的检测结果发现，抗ＩｇＭ阳性者中，不同ＨＣＶ感染人群的ＨＣＶＲＮＡ检出率很高（９３．０％～１００％）；而ＩｇＧ阳性者中ＨＣＶＲＮＡ的检出率变化很大（３７．５％～９３．８％）。在４３例血液透析者中抗ＩｇＭ与ＨＣＶＲＮＡ检测的一致性为８３．７％；抗ＩｇＭ与抗ＩｇＧ检测的一致性为８８．４％，结果提示：（１）抗ＨＣＶＩｇＭ与ＨＣＶ活跃复制有关，（２）抗ＨＣＶＩｇＭ与抗ＨＣＶＩｇＧ检出不完全一致。因此，临床检测抗ＨＣＶＩｇＭ有其特殊意义。     

乙肝病毒表面抗原可疑阳性标本确认方法的建立

目的 建立基于酶联免疫吸附试验（ELISA）的乙肝病毒表面抗原（HBsAg）确认方法,避免错误诊断。方法收集ELISA检测HBsAb〉15COI的血清,取HBsAb阳性;HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;HBsAb、HBcAb阳性三种模式的血清各20份混合,与HBsAgELISA结果浓度〉20COI的血清中和以确认HBsAb的中和活性,制成确认试剂。确认试剂与30例HBsAg弱阳性阳性患者血清中和,HBsAgCOI下降率〉50％判定为阳性,其结果与罗氏确认试剂盒进行比对。结果确认试剂可以很好的中和HBsAg,对30例HBsAg弱阳性标本的判定结果为24例阳性,6例阴性,与罗氏确认试剂盒结果完全一致。结论成功建立HBsAg确认方法,适用于对HBsAg弱阳性样本进行确认,并且简单经济。     

聚合酶链反应杂交ELISA对肝炎患者血清HCV RNA的测定和分析

目的 应用丙型肝炎病毒（HCV）聚合酶链反应杂交酶联法（HCV－PCR－H ELISA）152份各型肝炎血清进行HCV RNA测定和分析。方法 利用标记生物素的寡核苷酸引物对患者血清进行PCR扩增,扩增产物与结合在微孔反应板的HCV特异探针快速杂交,通过抗生物素－酶联反应判定结果。结果 152份肝炎患者中,HCV RNA的检出率为57．9％（88／152）,其中抗－HCV阳性组的检出率为81．8％（72／88）。抗－HCV与HCV RNA的总符合率为78．9％（120／152）。对5例丙型肝炎患者应用α干扰素治疗者追访显示,HCVRNA的消长与抗病毒药物疗效一致。结论 HCV－PCR－H ELISA方法简便、稳定、敏感、特异,为半定量指标,可应用于HCV感染的临床诊断和抗病毒药物疗效判定。     

呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定检测方法的建立及应用

目的建它呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法,应用其对来源于本院的临床样本进行检测.方法建立ELISA方法,检测标本中的呼吸道合胞病毒,与呼吸道合胞病毒细胞培养检测方法进行对照,并利用该方法进行该病毒2007年在广州市的流行性分析.结果本方法的灵敏度略高于呼吸道合胞病毒的细胞培养检测方法,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)无特异性反应.结论本呼吸道合胞病毒抗原ELISA检测方法可用于呼吸道合胞病毒感染的临床诊断和鉴别诊断.