中国妇女宫颈癌组织中HPV16L_1基因的克隆与测序

中国妇女宫颈癌组织中ＨＰＶ１６Ｌ１基因的克隆与测序谷鸿喜钟照华凌虹郭淑元张凤民郭彩玲人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）基因功能区主要由早期基因区（Ｅ区）、晚期基因区（Ｌ区）和调节区组成。Ｌ区包括Ｌ１和Ｌ２。Ｌ１基因编码病毒的主要衣壳蛋白，该蛋白能剌激机体产生保护...     

鲍温氏病组织人乳头瘤病毒16型结构基因L1的克隆及其序列分析

本研究采用ＰＣＲ法从中国妇女鲍温氏病组织标本扩增获得了宫颈癌密切相关的人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）的晚期基因Ｌ１,并装入测序载体测序分析了其ＤＮＡ的序列,与标准型进行了比较,发现有若干变异,此研究对序列及变异意义进行了分析和讨论,为今后Ｌ１基因分子流行病学调查,Ｌ１蛋白的结构与功能研究、疫苗研制以及ＨＰＶ相关的基础性研究提供了有用的资料,同时在国内外首次报道了鲍温氏病组织中ＨＰＶ１６Ｌ１的序列     

HPV16预防性疫苗的相关研究动态

人类乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）在宫颈癌患者中检出率高达９０％。近年来通过基因工程方法对ＨＰＶ的晚期基因（Ｌ１和Ｌ２基因）编码的外壳蛋白产物的研究很多，发现主要壳蛋白（Ｌ１）可自我组装成病毒样颗粒（ＶＬＰ），并可用途预防性疫苗；基于次要壳蛋白（Ｌ２）的预防性疫苗和核酸水平的预防性疫苗也很有前途。本文就近几年的研究进展及趋势作一综述。     

HPV18 L1基因重组DNA构建及其免疫小鼠体内特异抗体的测定

目的：人类乳头瘤病毒１８型（ＬＰＶ１８）感染与宫颈癌的发生高度相关。其晚期基因Ｌ１编码的Ｌ１结构蛋白是刺激机体产生中和抗体的主要抗原。利用ＨＰＶ Ｌ１基因重组质粒进行ＤＮＡ疫苗的初步免疫学实验研究。方法：从ＨＰＶ１８－ｐＢＲ３２２质粒中扩增ＨＰＶ１８ Ｌ１基因,测序证明扩增片段的可靠性,构建了两个真核表达重组质粒ＨＰＶ１８ Ｌ１－ｐｃＤＮＡ３和ＨＰＶ１８Ｌ１－ｐｃＥＰ４。将提纯的质粒ＤＮＡ直接免疫     

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7蛋白致癌机理初探

目的 研究宫颈癌组织中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６－Ｅ７蛋白对视网膜母细胞瘤基因（Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ）Ｒｂ蛋白及Ｅ２Ｆ－１的作用的机制,探讨ＨＰＶ１６－Ｅ７蛋白与宫颈癌发生的关系。方法 采用聚合酶链反应检测宫颈癌及正常宫颈组织中ＨＰＶ１６感染等,用蛋白印迹技术对ＨＰＶ１６ ＤＮＡ阳性的宫颈癌组织中是否存在ＨＰＶ１６－Ｅ７蛋白和Ｒ６蛋白－Ｅ２Ｆ－１形成的复合物进行检测。正常宫颈组织作为对照,     

人乳头瘤病毒16型转换基因的序列分析

为了解中国地区宫颈癌病人中人乳头瘤病毒１６型Ｅ６Ｅ７基因结构特点,从中国山东地区宫颈癌活检组织中提取组织ＤＮＡ,经ＨＰＶ多重引物ＰＣＲ法鉴定标本中感染ＨＰＶ型别,选单纯感染ＨＰＶ１６两例标本ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增,获得ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７基因后,重组入ｐＡＬＴＥＲ－１载体,进行双向测序、分析。ＤＮＡ序列分析表明：两例标本的ＨＰＶ１６Ｅ６Ｅ７序列全长均为７７６ｂｐ,与已发表的德国标准株长度相等,两     

中国地方株人乳头瘤病毒16型E7基因一级结构及其变异

从湖北地区一宫颈癌活检组织中提取ＤＮＡ，采取加端聚合链反应（Ａｄｄ－ｏｎ ＰＣＲ）技术，获得了人乳头瘤病毒１６型E７基因（ＨＰＶＩ６Ｅ７）。将该基因克隆于载体ｐＵＣ１８后，进行了该基因一级结构顺序分析。完整的ＨＰＶ１６Ｅ７湖北株基因（ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ）全长２９４ｂｐ，与已发表的德国株（ＧＳ）大小一致，但其核苷酸顺序中有２处发生了变异，均为Ｃ→Ｔ变异。第４３位ＣＡＡ→ＴＡＡ使相应的谷氨酰胺密码子变为终止密码，形成无义突变（Ｎｏｎｓｅｎｓｅｍｕｔａｔｉｏｎ）。将重组质粒中０．３ｋｂ的ＨＰＶ１６Ｅ７基因在表达载体ＰＷＲ５９０－１中进行克隆，经诱导使重组表达质粒在大肠杆菌中高效表达，得到了预计的、分子量约为６９×１０~３的融合蛋白。该蛋白的表达量占菌体总蛋白量的３０％左右。该试验表明ＨＰＶ１６Ｅ７一级结构以及所编码的蛋白多肽在不同的国家和／或不同的地区可能存在着差异。本文首次报道了中国地方株ＨＰＶ１６Ｅ７基因的一级结构。     

我国人乳头瘤病毒58例感染与宫颈癌的关系

人乳头瘤病毒中，第５８型是很重要的高度致瘤性病毒之一。采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹技术对我国１４省区１２１６例宫颈癌及癌前病变组织进行人乳头状瘤病毒５８例检测。结果：（１）各类宫颈组织中，宫颈癌组ＨＰＶ５８型检出率最高；（２）南方地区宫颈癌组织中ＨＰＶ５８型检出率高于北方地区，表现出明显的地区差异。（３）ＨＰＶ１６型、１８型检出率相比较，在宫颈癌组织中ＨＰＶ５８型检出率低于ＨＰＶ１６型，但明显高于ＨＰ     

聚合酶链反应酶谱分型检测宫颈癌中人乳头瘤病毒 …

目的 探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）和单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）等对宫颈癌的病因学作用。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－核酸内切酶分型检测宫颈癌活检组织中ＨＰＶ－ＤＮＡ和ＨＳＶ－ＤＮＡ基因,以正常宫颈组织作对照。结果 在宫颈癌活检细胞中ＨＰＶ－１６,１８型和ＨＳＶ－２型阳性率分别为３８．９％和３４．６％,与正常妇女宫颈组织阳性率均为３．２％比较,差异均有非常显著意义（Ｐ〈０．００１）。结论 ＨＰＶ－１６     

应用共有引物的PCR法检测宫颈癌组织中的人乳头…

目前已知有６８种类型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ），其中２７种类型ＨＰＶ与生殖道损害有关，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８和宫颈癌关系密切。我们建立了快速敏感检测多型ＨＰＶ感染的方法，运用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ），分析Ｌ１区共有引物ＰＣＲ扩增的产物。通过ＰＣＲ／ＲＦＬＰ法，我们检测５０例宫颈癌标本，ＨＰＶ阳性率为６４％；ＨＰＶ１６占４６％；ＨＰＶ１８占６％；ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８混合感染占６％。该法简便快速     

Sequence analysis of human papillomavirus type 16 E6E7 gene from cervical carcinoma biopsies of Chinese patients in Shandong province

INTRODUCTION　　Humanpapillomavirustype16(HPV16)hasastrongassociationwithcervicalcarcinoma,Itrepresentsabout50%ofcervicalcancer-associatedHPVinfectionsworldwide.TheexpressionofitsearlyproteinsE6andE7contributestothetrans-formationprocessinvitro.Continuned…     

Sequence variation in the L1 gene of human papillomavirus type 16 from Africa

Summary A 297 bp fragment of the HPV 16 L1 gene was sequenced from 35 isolates originating from normal cervical scrapes, cervical intraepithelial neoplasia biopsies and cervical carcinoma biopsies from South African women. A total of six point mutations that differed from the prototype HPV 16 sequence were detected in various combinations, giving rise to six distinct types of variants. Only one of the isolates had a sequence identical to the prototype. Our results indicate that the HPV L1 gene is conserved and there is no evidence that specific viral HPV L1 variants are associated with specific pathology.     

表达HPV 16型结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建与鉴定

目的 构建表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)结构蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法 采用聚合酶链反应技术(PCR)扩增并克隆HPV16主要结构蛋白L1和次要结构蛋白L2基因;将经过结构修饰的L1和L2基因插入痘苗病毒表达载体,通过与痘苗病毒在宿主细胞中同源重组后,筛选共表达L1／L2蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果 DNA序列分析证实PCR扩增所获L1和L2克隆基因是正确的;斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1和L2基因插入;该重组病毒在人源细胞中不复制或低水平复制,但可稳定表达相对分子质量为57000的L1蛋白和相对分子质量为90000的L2蛋白。结论 获得1株稳定表达HPV16 L1／L2蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。     

人宫颈癌中C—myc,H—ras和HPV基因的检测和分析

收集６０例宫颈癌活检组织，对同一病例同时进行ＨＰＶ、Ｃ－ｍｙｃ，Ｈ－ｒａｓ对比研究。采用ＨＰＶ高保守序列区一对共有引物检测多型ＨＰＶ基因型的存在，发现８５％（５１／６０％的组织中存在ＰＨＶ，经限制性片段长度多态性分析，ＨＰＶ１６占７８．４３％（４０／５１），ＨＰＶ１８占２１．６５％（１１／５１）。     

抑癌基因RASSF1A微卫星变异与宫颈癌发生发展的关系

目的 探讨抑癌基因RASSF1A微卫星变异在宫颈癌发生发展中的作用及其与HPV感染的关系.方法 选择RASSF1A基因的两个微卫星多态标记位点,采用PCR技术对宫颈组织进行杂合性丢失与微卫星不稳定性的检测,同时检测宫颈组织中HPV16的感染状况.结果 两位点的LOH发生率在宫颈癌组织临床分期及病理分级之间差异有统计学意义(P＜0.05).双位点的LOH及MSI在宫颈癌有无淋巴结转移间差异有统计学意义(P＜0.05).RASSF1A基因的LOH发生率在HPV16感染阳性组中明显高于阴性组(P＜0.05).结论 RASSF1A基因的改变是宫颈癌发生过程中的较晚期事件,RASSF1A基因的LOH与MSI对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值.RASSF1A基因的LOH与HPV16感染二者共同作用在宫颈癌的发生发展过程中更有意义.     

人乳头瘤病毒16型E6和E7基因特征分析

目的 对北京15例宫颈癌病变组织中的人乳头瘤病毒(HPV)16型E6和E7基因进行扩增及序列测定,分析E6和E7基因突变特征,并探讨宫颈癌病变中HPV16的感染情况.方法 自行设计HPVl6型E6和E7基因扩增引物,采用PCR法扩增15例宫颈癌组织中HPV16 E6和E7片段,将PCR产物克隆到TA载体,进行序列测定.通过Sequencer、Bioedit、Mega等生物学软件对E6和E7基因进行核苷酸和氨基酸序列分析.结果 15例宫颈癌中8例鳞癌检出E6和E7基因,检出率为8/15.2例腺癌、1例腺鳞癌和其他4例鳞癌中均未检出HPV16 E6E7 DNA.8例鳞癌中的4例检出的HPVl6为亚洲类似株,在E6基因178位(T→G,D25E)和E7基因647位(A→G,N29S)发生突变;另外4例为欧洲类似株,其中1例(BJ16)的HPV16在E6基因335位点发生突变(C→T,H78Y).结论 HPV16是致宫颈癌的重要因素;宫颈鳞状细胞癌HPV16感染的发生频率较腺癌和腺鳞癌高;E6基因178位点可能是区分亚洲株和欧洲株的重要位点;E6基因178位点和E7基因647位点是突变频率较高的位点,可能导致HPV16致癌能力发生改变.     

Identification of human papillomaviruses in paraffin embedded cervical pathological tissues from Indian women by polymerase chain reaction.

The polymerase chain reaction (PCR) technology was used to identify human papillomaviruses (HPV) in 52 paraffin embedded cervical tissues from Indian women with chronic cervicitis, different grades of cervical dysplasia and invasive cervical carcinoma. The tissues were screened for amplification of the cellular beta-globin gene as well as of HPVs. Sets of primers designed to amplify a portion of the E6 gene of HPV 6, 11, 16, 18, 31, 33 and 35 were employed. HPV 6, 16 and 31 were identified in 58% of 33 beta-globin positive tissues as compared to 16% of 19 beta-globin negative tissues. HPV 11, 18, 33 and 35 were not identified in any of the specimens. Double infection of HPV 16 and 31 was observed in one case of carcinoma in situ and one case of invasive carcinoma. HPV-16 was the predominant virus in HPV positive cases of higher grades of cervical dysplasia (severe dysplasia and carcinoma in situ) and cervical cancer.     

Nucleotide and amino acid sequence variation in the L1 and E7 open reading frames of human papillomavirus type 6 and type 16.

Human papillomavirus (HPV) type 6 and type 16 DNA sequence variants were found by partially sequencing the L1 and E7 open reading frames, using templates generated with the polymerase chain reaction. Identical variants were found in patients from widely separated locations, such as the United States, the Philippines, and India. The same sequence variants of HPV 16 were found in women with invasive cervical carcinoma and in women with no evidence of disease. Variation in the predicted amino acid sequences of the HPV 16 L1 and E7 proteins was found. A single nucleotide change at position 6433 was found in about 50% of the HPV 16 DNAs, resulting in a change in predicted amino acid sequence from threonine to alanine at the equivalent position in the L1 protein. Predicted amino acid changes were found in the HPV 16 E7 proteins at amino acid positions 28, 29, and 47. Variation at these positions could affect known properties of the E7 protein, including binding to the retinoblastoma protein.