黄热病病毒5′端非编码区作为一潜在成分以修饰翻译调控的方式改善丙肝病毒的产量

丙肝病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ的５′端长非编码区形成一个高度有序的二级结构,在不同毒株间非常保守,它包括一个内部核糖体进入位点（ＩＲＥＳ）成分,负责丙肝病毒ＲＮＡ的不依赖帽子结构的起始翻译。和人类另一种肝炎病毒－甲肝病毒（ＨＡＶ）的ＩＲＥＳ相似,ＨＣＶ的Ｉ...     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶基因的克隆和表达

目的 从感染ＨＣＶ的中国患者血清中扩增编码ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶的ｃＤＮＡ,在大肠杆菌中进行表达。方法 从血清中提取ＨＣＶ ＲＮＡ,应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶ｃＤＮＡ,Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终引法测定其序列,与ｐＢＶ２２０载体构建重组粒,在大肠杆菌中表达,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ分析重组蛋白。结果 用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到了ＨＣＶ丝氨酸蛋白酶基因,序列分析表明其读码框架     

HCV山东株C区的基因序列分析

丙型肝炎病毒（ＨｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）为ＲＮＡ病毒，其基因组的变异性较大，不同地理区域分离株的基因组结构有较大差异，根据病毒编码区和非编码区核苷酸序列的不同可把病毒分为不同的基因型。对ＨＣＶ基因型的研究国内外均有报道。本研究采用Ｃ区基...     

丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是一种单股正链ＲＮＡ病毒。ＨＣＶ的基因组编码的核心蛋白自身或者与细胞的蛋白结合形成不同的复合物形式，对于ＨＣＶ感染的致病机制、ＨＣＶ感染的慢性化、以及感染的宿主细胞的信号转导、生长特点和细胞的恶性转化过程密切相关。     

丙型肝炎病毒结构蛋白在痘苗病毒中的表达

为研究中国丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的抗原性及在细胞内的加工，将丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５’非编码区（ＮＴＲ）和结构基因（Ｃｏｒｅ＋Ｅ１＋Ｅ２／ＮＳ１）插入痘苗病毒表达载体ｐＪＳＡ１１７５中，转染ＴＫ－１４３细胞，经纯化得到丙型肝炎（ＨＣＶ）重组痘苗病毒ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交表明，ＨＣＶ结构基因存在于痘苗病毒之中。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现，ｖＪＳＡ１１７５ＣＥ表达蛋白带位于９０ｋＤａ，为一多聚蛋白；此蛋白为分泌型，分泌量与细胞裂解物内量大致相同     

乙型肝炎病毒混合丙型肝炎病毒感染患者少见前C区终止变异

乙型肝炎病毒混合丙型肝炎病毒感染患者少见前Ｃ区终止变异邱望龙侯金林骆抗先乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）混合感染两种病毒间会产生相互干扰。大多研究表明，这种两病毒间产生的相互干扰现象主要是因为ＨＣＶ对ＨＢＶ的复制施加抑制、ＨＢＶ对ＨＣＶ...     

中国人丙型肝炎病毒基因组3′端非编码区的研究

目的分析中国丙型肝炎病人ＨＣＶ基因组３′端非编码区（３′ＮＣＲ）,以促进对ＨＣＶ基因组复制机制的研究。方法采用两种方法,从上海地区感染ＨＣＶ的病人血清中,扩增获得ＨＣＶ基因组３′端非编码区：一是用套式ＰＣＲ直接扩增,二是先分别获得ＨＣＶ３′ＮＣＲ的前半部分和后半部分,再将两片段进行融合ＰＣＲ。ＰＣＲ产物进行测序后作同源性分析。在此基础上,建立了针对３′端非编码区的ＲＴＰＣＲ方法,并与基于５′端非编码区的ＲＴＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ的特异性和灵敏度比较。结果序列分析表明,中国丙型肝炎病人ＨＣＶ基因组３′非编码区由４部分组成：高度变异区、Ｐｏｌｙ（Ｕ）区、Ｐｏｌｙ（Ｕ／Ｃ）区和９８碱基区。同源性分析显示,９８碱基区在不同分离株间高度保守并与国外报道株一致,而Ｐｏｌｙ（ＵＵＣ）区存在较大差异。３′端非编码区和５′非编码区ＲＴＰＣＲ检测血清ＨＣＶＲＮＡ有较高符合率（９５％）。结论ＨＣＶ基因组３′端非编码区的３′末端（９８碱基）,在不同分离株间的高度保守性提示,该区在ＨＣＶ基因复制中起重要作用。基于３′非编码区的ＲＴＰＣＲ方法,将有助于ＨＣＶ感染的诊断。     

乙型肝炎病毒在丁型肝炎病毒包装中的作用机理研究

用含ＨＢＶ全基因和ＨＢＶ大、中、小分子表面蛋白基因的真核细胞表达质粒（ＣＭＶ－ＨＢＶ、ＣＭＶ－ＬＳ、ＣＭＶ－ＭＳ、ＣＭＶ－Ｓ）分别与含ＨＤＶ ｃＤＮＡ三聚体的重组质粒共转染ＣＨＯ细胞。转染后３天在上述４种转染细胞内及培养上清中均检出了ＨＤＶ ＲＮＡ和ＨＤＡｇ表明上述４种转染细胞的培养上清中均有ＨＤＶ病毒颗粒的包装和分泌。提示：ＨＤＶ病毒的包装可能仅需ＨＢＶ Ｓ 基因及其小分子表面蛋白的辅助。     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶基因痘苗病毒表达载体的 …

应用反转录巢式ＰＣＲ扩增出丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶基因,并克隆到痘苗病毒表达载体ｐＳＣ６５中,载体上设计一测序引物,经序列测定证明,已将５４３个ｂｐ长的丝氨酸蛋白酶基因片段正确插入载体。此结果为丙型肝炎病毒ＮＳ３区丝氨酸蛋白酶基因在痘苗病毒中的表达,以及建立ＨＣＶ特异的ＣＴＬ靶细胞打下基础。     

乙肝病毒前C基因/C启动子变异与不同症状乙型肝炎患者的相关性

乙型肝炎的病情与宿主及病毒均有关。乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)Ｃ区编码ＨＢｃＡｇ及ＨＢｅＡｇ ,其调控序列位于前Ｃ区及Ｃ基因启动子 (ＣＰ) ,ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ区变异可以通过阻止或减少ＨＢｅＡｇ合成和分泌来影响宿主的免疫应答。我们采用聚合酶链反应 (ＰＣＲ)直接测序法 ,测定 4 5例慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者血清ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ区核苷酸序列 ,以探明ＨＢＶ前Ｃ/ＣＰ基因区变异的临床意义。材料和方法病例选择 :共 4 5例 ,其中慢性乙型肝炎 (Ａ组 ) 2 0例 ,男 12例 ,女 8例 ,年龄 2 1～ 5 7岁 ,其中ＨＢｅＡｇ阳性 6例 ,抗 Ｈ…     

丙型肝炎病毒准种特性的研究进展

丙型病毒性肝炎 (丙肝 )是一种广泛传播的疾病 ,是导致慢性病毒性肝炎、肝炎肝硬变、肝细胞癌 (ＨＣＣ)的主要病因之一 ,而这些病变形成与其病原丙型肝炎病毒 (ＨＣＶ)某些重要的生物学特性有关〔1〕 。与其他ＲＮＡ病毒类似 ,ＨＣＶ基因组的易变异性可产生不同的型或亚型 ,而且在ＨＣＶ感染者体内可同时存在具有多种序列组成不同但却有很高同源性 (同源性≥ 95 % )的ＨＣＶ变异株病毒群体 ,即称为ＨＣＶ准种 (Ｑｕａｓｉｓｐｅｃｉｅｓ) ,亦有相似株和类似株之称〔2 ,3〕 。近年来研究表明 ,ＨＣＶ准种株决定其某些重要的生物学特性 ,而且…     

中国人丙型肝炎病毒基因组3‘端非编码区的研究

目的 分析中国丙型肝炎病人ＨＣＶ基因组３‘端非编码区,以促进对ＨＣＶ基因组复制机制的研究。方法 采用两种方法,从上海地区感染ＨＣＶ的病人血清中,扩增获得ＨＣＶ基因组３’端非编码区：一是用套式ＰＣＲ直接的增,二是先分别ＨＣＶ３‘ＮＣＲ的前半部分和后半部分,再将两片段进行融合ＰＣＲ。ＰＣＲ产物进行测序后作同源性分析。     

吸毒人群中HGV和HBV的同步检测

ＨＢＶ、ＨＣＶ和ＨＧＶ有共同的感染途径,ＨＢＶ为ＤＮＡ病毒,ＨＧＶ为ＲＮＡ病毒。我们建立了ＨＧＶＨＢＶＰＣＲ同步检测法,并用该方法和ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＨＧＶＲＮＡ、ＨＢＶＤＮＡ、ＨＢｓＡｇ和抗ＨＣＶＩｇＧ以及谷丙转氨酶(ＡＬＴ)水平,调查武汉市第一戒毒所106名吸毒者ＨＧＶ与ＨＢＶ、ＨＣＶ感染情况。通过改变ＲＮＡ提取液的ｐＨ值,可同时提取ＨＧＶＲＮＡ和ＨＢＶＤＮＡ,基金项目:湖北省教委资助项目作者单位:湖北医科大学病毒研究所(郑义,伍欣星,赵,赵文先);湖北省嘉鱼县血防站(高胜君)通信作者:郑义,430022武汉市第…     

DNA病毒与RNA病毒相互作用小鼠模型的建立

用Ｃ型病毒（ＲＮＡ病毒）和／或紫外线灭活的（疱疹病毒）ＨＳＶ－２（Ｗｕ）或ＨＳＶ－２（３３３）接种新生小鼠，结果表明接种了ＨＳＶ－２（Ｗｕ）、ＨＳＶ－２（３３３）和作为对照的小鼠均未发生白血病，在ＨＳＶ－２（Ｗｕ）组中接种了Ｃ型病毒加ＨＳＶ－２（Ｗｕ）的小鼠白血病发生率是７５００％，只接种了Ｃ型病毒的小鼠中有４４．７４％发生白血病，两者之间有高度显著性差异（Ｐ＜０．０１）。另外，在ＨＳＶ－２（３３３）组中用Ｃ型病毒加ＨＳＶ－２（３３３）接种小鼠以后有７９．１６％发生了白血病，只接种了Ｃ型病毒的小鼠中有４１．０２％发生白血病，其差异也有高度显著性（Ｐ＜０．０１）。由此可见Ｃ型病毒分别与ＨＳＶ－２（Ｗｕ）或ＨＳＶ－２（３３３）在诱发小鼠白血病过程中存在相互作用。此动物模型可用于研究两类不同病毒相互作用的致癌原理。     

人巨细胞病毒感染致血小板减少性紫癜病因研究

血小板减少性紫癜 (ＩＴＰ)是临床上常见的一类出血性疾病 ,其中部分患者常发生于病毒感染后。目前发现人类巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)、人细小病毒Ｂ19、风疹病毒等感染后均有可能引起血小板减少。ＨＣＭＶ感染相关性ＩＴＰ的发病机理目前尚未完全定论。我们检测了合并有ＨＣＭＶ感染的ＩＴＰ患者的巨核系祖细胞内的ＨＣＭＶ晚期抗原ｍＲＮＡ ,以探讨ＨＣＭＶ感染相关性ＩＴＰ可能的发病机制。对ＩＴＰ患者抗凝外周血和非抗凝外周血分别进行ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ ＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ检测ＣＭＶ ＩｇＭ。选择ＨＣＭＶ及ＣＭＶＩｇＭ均阳性的病例共…     

监测HCMV活动性感染的一种新方法-HCMV PP65抗原血症检测

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)感染对人类的影响甚广 ,尤其是对免疫功能低下者 ,往往是致死的[1] 。随着移植学的长足进步 ,严重困扰移植术后生存率的棘手问题之一仍是移植受者ＨＣＭＶ的原发或潜伏—再激活感染[2 ] 。ＨＣＭＶ感染对宿主有两方负效应 ,即病毒本身导致的细胞损伤和病毒诱导的免疫病理损伤外 ,还极易激发宿主受损于细菌、真菌、原虫以及其他病毒的双重感染。　　ＨＣＭＶＰＰ6 5抗原血症检测能早期、快速监测ＨＣＭＶ的激活 ,适时以予抗病毒药物治疗 ,对免疫功能受抑的宿主来说是至关重要的。1　ＨＣＭＶＰＰ6 5抗原血症检测方法…     

人巨细胞病毒感染诱导宿主细胞凋亡的实验研究

人巨细胞病毒 (ＨＣＭＶ)活动性感染可以通过胎盘垂直传播 ,导致流产、畸形、死胎、新生儿神经系统及其他脏器的损害 ,已成为影响胎儿及新生儿生长发育的常见病原。现已证实 ,许多病毒性疾病 (如病毒性肝炎和艾滋病等 )的发生与凋亡失常有关〔1〕 。但目前有关ＨＣＭＶ与细胞凋亡的关系报道尚少。我们采用流式细胞技术对ＨＣＭＶ感染细胞进行细胞周期和凋亡分析 ,以探讨ＨＣＭＶ对宿主细胞的影响及机理。1　材料和方法1 1　病毒和细胞　ＨＣＭＶＡＤ16 9毒株由湖北省病毒研究所提供 ,按常规方法传代 ,滴定 ,其滴度为 10 3 ＴＣＩＤ5 0 0 .1…     

庚型肝炎病毒5'端非编码区基因的扩增、鉴定、克隆及序列分析

庚型肝炎病毒５′端非编码区基因的扩增、鉴定、克隆及序列分析李刚姚集鲁陈青谭德汤文辉庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）是近半年来国外证实的一种非Ａ～Ｅ型肝炎病毒。参考国外发表的序列资料，我们在相对保守的５′端非编码区（ＮＣＲ）设计两对ＨＧＶ特异性引物。采用热变性法...     

人巨细胞病毒协同人乳头瘤病毒16型诱导宫颈上皮细胞癌变的研究

目的 探讨宫颈癌的发生发展与人乳头头瘤病毒（ＨＰＶ）和人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）协同感染的关系。方法 应用我室建立的ＨＰＶ１６永化化的人宫颈上皮细胞系,转染ＨＣＭＶ即早基因（ＩＥ）。结果 ＨＣＭＶ整合在细胞染色体中,协同ＨＰＶ１６促进宫颈上皮细胞的恶性转化,在裸鼠中形成肿瘤。结论 ＨＣＭＶ ＩＥ基因可协同ＨＰＶ１６恶性转化宫颈上皮细胞,并对其协同机制进行了细胞和分子生物学的探讨。     

庚型肝炎病毒的分子生物学研究进展

庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）为单股正链ＲＮＡ病毒，属黄病毒家族成员。ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）有许多相似之处，但又有其自身特点。本文对ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的基因组结构及变异、病毒多蛋白前体的加工、感染途径与致病性及检测方法等进行了综述，