基因转殖酵母菌培养液中生物素的高灵敏ELISA竞争测定法

目的　发展一种测定基因转殖酵母菌培养液中生物素的灵敏ELISA竞争测定法。方法　酶标板先用猪肺炎支原体包被 ,再依次用兔抗猪肺炎支原体抗血浆、羊抗兔IgG -生物素温育形成固态生物素 ,同溶液中的生物素 (标准液或试样 )竞争有限量的链霉亲和素 HRP。建立了在 5 0 - 2 0 0 0ng·L- 1 范围内生物素的标准曲线。结果　检测限为 83ng·L- 1 ,比文献报告的ELISA测生物素的最低测定浓度小 10 0 0倍。测定生物素浓度为 2 0 0、5 0 0、10 0 0ng·L- 1 的用空白培养液稀释的标准生物素试样的相对标准偏差分别是 2 4 87%、6 15 %、7 86 % ,平均回收率为 10 1 13%。在用本法测定野生酵母菌及其 6 3个基因转殖酵母菌培养液中的生物素时 ,发现 85 %以上的培养液试样中生物素浓度均得到不同程度扩增。结论　用猪肺炎支原体作包被蛋白 ,提高了ELISA结果的精确度和准确度 ,可供测定其它介质中生物素的参考     

RP-HPLC法测定发酵液中纳他霉素含量

目的建立测定发酵液中纳他霉素含量的反相高效液相色谱法。方法发酵样品用甲醇萃取后进样。用HypersilBDSC18(5μm,4.6mm×200mm)色谱柱分离,流动相为甲醇-水-冰乙酸(60∶40∶5,体积比),流速为1.00ml/min,紫外检测波长302nm。结果该方法的日内RSD为0.15%(n=6),日间RSD为0.90%(n=6);对照品浓度为92、184、368μg/ml时,加样回收率分别为99.84%,101.18%,101.41%。结论本法具有操作简单、快速测定、灵敏度高、专属性好和准确性好等优点,可有效地控制纳他霉素的质量。     

用生物素探针检测糖尿病患者C—myc基因

建立生物素—7—dATP探针。对46份Ⅱ型糖尿病患者进行C—myc基因检测,发现39例呈阳性反应(杂交反应),与病程及血糖无关,但呈较明显的遗传倾向;对糖尿病性心脏病与C—myc基因关系亦进行了探讨。生物素探针使用安全、特异性好、保存期长,为糖尿病的基因分析提供了新的检测方式。     

RP—HPLC法测定发酵液中麦考酚酸的含量

目的:建立发酵液中麦考酚酸含量的反相高效液相色谱分析方法。方法:发酵液样品用甲醇提取后进样。采用 Sino-Chrom ODS-BP(5μm,200 mm×4.6 mm)色谱柱,以甲醇-10 mmol·L~(-1)醋酸铵(67:33)为流动相,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长220 nm,艾瑞昔布为内标,测定了63株菌发酵液样品中麦考酚酸的含量。结果:发酵液中麦考酚酸含量在0.30～6.00mg·mL~(-1)范围内线性关系良好(r=0.9997,n=6),平均回收率为102.4%(n=9)。结论:本测定方法准确、简便,重复性好,为筛选发酵法合成麦考酚酸的高产菌株提供了可靠依据。     

ELISA法测定小鼠血清中流脑抗体效价

目的采用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)测定流脑疫苗效价,同时为提高效价测定的准确度,选定包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比,为疫苗效价测定提供科学依据。方法分别以不同浓度C群多糖抗原液为包被抗原,以稀释过的免疫小鼠血清为待测抗体,采用ELISA间接测定法测定抗体效价,寻求包被抗原最佳工作浓度;然后包被抗原在其最佳工作浓度下包被酶标板,以不同稀释比的免疫小鼠血清为待测抗体,测定血清中抗体效价,寻求待测血清最佳稀释比;最后在包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比下,测定小鼠血清中流脑抗体的效价。同时检测该方法的特异性、稳定性和重复性。结果 ELISA测定流脑疫苗效价的包被抗原最佳工作浓度及待测血清最佳稀释比分别为160μg/mL和1∶4,同时该浓度下测定的免疫小鼠血清中流脑疫苗抗体效价为(1.274±0.003),阳转率为100%。说明该批疫苗产品合格(判定标准:阳转率≥90%)。批内批间变异系数均<7%,表明该测定技术具有良好的稳定性和重复性。结论建立了一种灵敏、特异、简便易行的ELISA法检测流脑疫苗效价,为流脑的预防、控制和诊断提供了一种技术手段。     

HPLC法测定注射用水溶性维生素中维生素B_(12)和生物素的含量

目的:建立以高效液相色谱法同时测定注射用水溶性维生素中维生素B12和生物素含量的方法。方法:色谱柱为Phe-nomenexC18,检测波长为210nm,流动相为0.1%磷酸-甲醇(81∶19),流速为1.0mL·min-1,柱温为35℃。结果:维生素B12和生物素线性范围分别为0.0035～0.0245μg(r=0.9997)和0.03476～0.24332μg(r=0.9992),平均回收率分别为99.75%、99.91%(RSD=1.40%、1.95%)。结论:本方法较简便、快速,准确度较高,可用于控制该制剂的质量。     

HPLC-ELSD法测定阿卡波糖发酵液中麦芽糖、葡萄糖和阿卡波糖的含量

目的 建立HPLC-ELSD法测定阿卡波糖发酵液中麦芽糖,葡萄糖和阿卡波糖的含量.方法 采用Inertsil氨基柱(4.6mm×250mm,5μm),柱温:30℃:乙腈-水(75:25)为流动相,流速:1.3mL/min; ELSD气化室温度95℃;气体流速:3L/min;气体压力:1.5×1 05Pa.结果 麦芽糖在8～400μg范围内与峰面积有良好的线性关系(r=0.9991),葡萄糖在4～200μg范围内与峰面积有良好的线性关系(r=0.9994),阿卡波糖在1.6～80μg范围内与峰面积有良好的线性关系(r=0.9985),葡萄糖峰,麦芽糖峰和阿卡波糖峰完全分离.结论方法可靠,简便,准确,可用于同时检测阿卡波糖发酵液中底物和产物.     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌临床分离株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因检测

目的：探讨质粒介导的喹诺酮类耐药（PMQR）基因在碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）临床分离株中的分布情况。方法：收集CRKP29株,聚合酶链反应（PCR）扩增并确定产物基因型。结果：CRKP中PMQR基因检出率为48．3％（14／29）,其中qnrB5株,包括qnrB21株、qnrB43株、qnrB101株;qnrS 5株,均为qnrS1;1株同时携带qnrS1和qnrB4;有3株携带aac（6′）-Ib-cr基因。所有PMQR基因阳性菌株均同时携带β-内酰胺酶基因,其中8株同时携带碳青霉烯酶基因,占57．1％（8／14）,以blaKPC-2（4／14）及blaNDM-1（3／14）为主。结论：PMQR基因在临床分离的CRKP中较为普遍,以qnr基因为主,且qnr阳性菌株碳青霉烯酶基因携带率较高,均为多重耐药株。     

安徽地区PMQR基因阳性大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs流行特征的研究

目的了解安徽地区临床分离含质粒介导的喹诺酮类耐药基因(PMQR)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中编码超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的基因型别,及与PMQR基因在本地区共同传播的流行现状和耐药特征。方法采用琼脂稀释法测定40株临床分离含PMQR基因的大肠埃希菌与肺炎克雷伯菌对临床14种抗菌药物的药物敏感性,CLSI表型确证试验进行表型鉴定,PCR检测blaESBLs基因型;接合实验验证PMQR与blaESBLs基因的转移性;ERIC-PCR进行同源性分析。结果 40株PMQR阳性菌株对喹诺酮类药物显示耐药同时对多种β-内酰胺类药物耐药;PCR法检测PMQR阳性菌株中blaESBLs基因携带率达到60%(24/40),最常见的为CTX-M型ESBLs,检出率达到92%(22/24)。结论安徽地区临床存在PMQR与blaESBLs基因的共同传播及流行,包含PMQR基因的菌株多为产ESBLs菌株,同时携带PMQR与blaESBLs基因的菌株常为多药耐药菌。     

ELISA法测定大鼠血浆中抗体偶联药物浓度及药代动力学研究

目的:建立检测大鼠血浆中抗体偶联药物(ADC006M)[重组抗人表皮生长因子受体2(HER2)结构域Ⅱ人源化单克隆抗体-单甲基澳瑞他汀E(MMAE)偶联剂]浓度的酶联免疫吸附分析法(ELISA),并用于研究单次静脉注射的药代动力学特征。方法:基于ELISA的检测原理,在96孔板上预先包被抗MMAE抗体,加入待测样品,用HRP标记的抗体B1G7(B1G7-HRP)进行检测,加入TMB底物显色,终止反应后,在酶标仪450 nm/630 nm波长处读取吸收度(A),并参考相关法规进行方法学验证。同时,单次静脉注射给予SD大鼠5 mg·kg^-1ADC006M测定其血浆浓度,对测定结果进行曲线拟合并计算药代动力学参数。结果:确定方法的线性范围为31.25～2 000 ng·mL^-1,定量限为31.25 ng·mL^-1;方法批内、批间准确度RE分别在-14.6%～12.6%和-13.1%～-0.7%,批内、批间精密度RSD均≤12.6%;方法的选择性(基质效应)、特异性、稀释线性与钩状效应以及各项稳定性考察结果均良好。通过对SD大鼠...     

ELISA法检测常用中药黄曲霉毒素B1

本文采用间接竞争酶联免疫吸附法 (ELISA)分别用自配试剂及试剂盒 ,对《中国药典》收载的 30种本地区常用药材及 7个品种 2 0批次分别含六神曲、淡豆豉及已霉变的中成药中黄曲霉毒素B1含量进行了测定 ,取得满意的结果。     

间接ELISA法检测茵栀黄注射液中的过敏性杂质

目的采用"水煮醇沉"工艺生产的茵栀黄注射液可能无法完全去除其植物蛋白等过敏源性杂质,本文拟建立间接ELISA方法对国家评价性抽样中的茵栀黄注射液样品进行大批量快速筛查。方法建立快速、灵敏的间接ELISA方法检测方法,采用该方法和中检所提供的金银花抗原抗体对茵栀黄注射液中的金银花源性过敏性杂质进行测定。结果采用间接ELISA法检测茵栀黄注射液中过敏性杂质,线性范围为1¹00 μg/mL(R2=0.996)检出限约为1 μg/mL,定量限约为6 μg/mL,平均加样回收率为85.6%,所检测的110批样品未检出对应中检所提供的金银花抗体的过敏性物质。结论所建立的间接ELISA方法可以用来快速、高效地检测出茵栀黄注射液中过敏性杂质。     

乳糜血样对酶联免疫吸附试验检测结果的影响

目的分析乳糜血样对酶联免疫吸附试验(ELISA)检测结果的影响。方法在不同程度的乳糜血浆中加入不同浓度的HBsAg质控血清,对不精密度及灵敏度进行比较。结果乳糜血液不精密度:批内平均CV6.3%,批间平均CV25.4%,轻度乳糜血液CV15.4%,中度CV27.1%,重度CV44.5%。不同程度的乳糜血液随放置时间的延长,OD值下降,轻度乳糜血液下降4.6%,中度下降14.7%(P<0.05),重度乳糜血液下降62.8%(P<0.05),并出现灵敏度降低及不同程度的漏检,HBsAg含量1.5ng/mL的乳糜血液阳性漏检率7.0%,HBsAg含量1.0ng/mL的乳糜血液阳性漏检率13.0%,HBsAg含量0.5ng/mL的乳糜血液阳性漏检率34.7%。结论不同程度的乳糜血液随放置时间的延长,OD值下降,灵敏度降低,并出现不同程度的漏检,检测乳糜血液时,轻度乳糜血液放置时间不超过3d,中度放置时间不超过1d,重度的必须立即检测。     

间接ELISA法测定丹参注射液中的过敏性杂质

摘 要 目的:建立丹参注射液中残留过敏性杂质的检测方法。方法: 采用间接ELISA法检测过敏性杂质。结果:该方法的线性范围为1～128 μg·ml^-1（r＝0.995 3）,检出限为0.25 μg·ml^-1,定量限为1 μg·ml^-1,平均加样回收率为92.7％。对96批市场流通样品进行了测定,8批检出过敏性杂质。结论:该方法前处理简单、精密度较好、特异性强,可用于丹参注射液中过敏性杂质的检测。     

Performance characteristics of an ELISA screening assay for urinary synthetic cannabinoids

Synthetic cannabinoids are marketed as legal alternatives to cannabis, as routine urine cannabinoid immunoassays do not detect synthetic cannabinoids. Laboratories are challenged to identify these new designer drugs that are widely available and represent a major public health and safety problem. Immunoassay testing offers rapid separation of presumptive positive and negative specimens, prior to more costly and time‐consuming chromatographic confirmation. The Neogen SPICE ELISA kit targets JWH‐018 N‐pentanoic acid as a marker for urinary synthetic cannabinoids. Assay performance was evaluated by analyzing 2469 authentic urine samples with the Neogen immunoassay and liquid chromatography‐tandem mass spectrometry (LC‐MS/MS). Two immunoassay cut‐off concentrations, 5 and 10 µg/L, classified samples as presumptive positive or negative, followed by qualitative LC‐MS/MS confirmation for 29 synthetic cannabinoids markers with limits of detection of 0.5–10 µg/L to determine the assay's sensitivity, specificity and efficacy. Challenges at ±25% of each cut‐off also were investigated to determine performance around the cut‐off and intra‐ and inter‐plate imprecision. The immunoassay was linear from 1 to 250 µg/L (r² = 0.992) with intra‐ and inter‐plate imprecision of ≤5.3% and <9%, respectively. Sensitivity, specificity, and efficiency results with the 5 µg/L cut‐off were 79.9%, 99.7%, and 97.4% and with the 10 µg/L cut‐off 69.3%, 99.8%, and 96.3%, respectively. Cross‐reactivity was shown for 18 of 73 synthetic cannabinoids markers evaluated. Good sensitivity, specificity, and efficiency, lack of sample preparation requirements, and rapid semi‐automation documented that the Neogen SPICE ELISA kit is a viable method for screening synthetic cannabinoids in urine targeting JWH‐018 N‐pentanoic acid. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

CLIA法与ELISA法对检测血清HBeAb与HBcAb结果的分析

目的通过CLIA与ELISA对临床标本HBeAb与HBcAb的检测结果,探讨两种方法在临床应用及统计学中的意义。方法对2016年2月至2016年6月间来我院就诊患者共430例,采用CLIA法与ELISA法同时检测血清HBeAb和HBcAb,并对检测结果进行分析。结果当HBs Ag阴性时,CLIA法与ELISA法HBeAb阳性值之间差异性具有相关性(P<0.05),同时,CLIA法与ELISA法检测HBeAb与HBcAb阴性结果之间差异均具有相关性(P<0.05)。结论 CLIA法与ELISA法检测血清HBeAb与HBcAb结果有差异性,应用及流行病统计时应注意方法学的选择。