改良三套管法建立大鼠左肺原位移植模型

背景:肺移植是治疗终末期肺部疾病的惟一方法.建立肺移植动物模型是肺移植基础研究的首要条件.目的:建立一种简便、稳定和有效的同种人鼠异体左肺原位移植模型.方法:50只雄性SD大鼠随机分为供体以及受体,采用改良三套管法进行大鼠左肺原位移植.首先完成供肺制备,并将供肺置于受体原左肺上方并保持供肺于4 ℃ LPD液环境中.按照左肺动脉-左肺静脉-左肺支气管的顺序依次完成供肺与受体相应结构的吻合.然后依次开放左肺静脉-肺动脉,调整潮气量,离断受体原左肺.观察手术成功率、手术时间,5周后对受体行血气分析.结果与结论:手术成功率92%,手术时间为(55±3)min,术后存活均达5周.5周后阻断右肺门15 min前、后左肺静脉取血,血气分析差异无显著性意义(P0.05).提示新改良的三套管法是一种简便稳定有效的大鼠原位左肺移植模型.     

小鼠气管异位移植后模拟肺移植慢性排斥反应模型的建立

目的:闭塞性细支气管炎是引起肺移植后移植物功能异常的主要并发症,原位肺移植动物模型技术难度高且费时,限制了其在闭塞性细支气管炎研究中的应用.通过小鼠的气管异位移植来建立模拟肺移植慢性排斥反应模型,以期为国内的闭塞性细支气管炎研究提供一种新的模型选择.方法:①实验材料及分组:实验于2007-07/08在上海市肺科医院动物实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.实验组采用10只C57BL/6小鼠为供体,10只BALB/c小鼠为受体;对照组10只供体、10只受体均采用BALB/c小鼠.②实验方法:取供体小鼠的气管、左右主支气管连续气道作为供体,两端结扎后异位移植到受体小鼠背部皮下.③实验评估:移植28 d后获取移植气管标本,石蜡包埋,行苏木精-伊红染色观察移植气管病理变化;比较两组小鼠的移植气管闭塞性细支气管炎发生率.结果:20例模型动物全部存活,无感染.①模型动物手术时间(12±2)min.②苏木精-伊红染色病理切片示实验组小鼠移植气管管腔闭塞,慢性炎细胞浸润广泛,气管上皮完全脱落,纤维组织增生明显,呈现闭塞性细支气管炎表现;对照组小鼠移植气管的组织形态未见明显异常.③实验组小鼠移植气管闭塞性细支气管炎发生率高于对照组(P=0.000).结论:小鼠气管异位移植后模拟肺移植慢性排斥反应模型作为研究闭塞性细支气管炎的动物模型具有诸多优点.     

异体肺移植后大鼠血浆及肺组织CD62L的表达

背景:肺移植后急性排斥反应的临床症状、胸片及动脉血气检查等综合反应,均于移植排斥反应发生后出现,可导致移植失败.目的:评估将血浆CD62L作为监测诊断肺移植急性排斥反应指标的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2003-07109在泰山医学院实验室完成.材料:清洁级SD雄性大鼠32只,Wistar雄性大鼠16只.环孢酶素A为福建科瑞药业有限公司产品,批号030502.方法:设立4组:正常对照组取8只SD大鼠,进行同体原位移植;同基凶移植组以8只SD大鼠为供、受鼠,进行左肺原位移植:异基因移植组取Wistar供鼠、SD受鼠各8只,进行左肺原位移植;异基因移植用药组,在前组基础上于移植后1～5 d腹腔内注射环孢酶素A 20 mg/(kg·d).采用三袖套管法建立人鼠左肺原位移植模型.主要观察指标:流式细胞仪检测外周血CD62L表达水平,免疫组化染色检测CD62L表达水平及血浆中CD62L达水平,苏木精-伊红染色观察肺组织急性排斥反应情况.结果:移植后5,10 d与正常对照组、同基因移植组比较,异基因移植组、异基因移植用药组外周血CD62L表达明显升高(P<0.01,P<0.05):各组肺组织CD62L表达水平与外周血CD62L表达基本相似.同基因移植组肺组织仅见少量单核细胞浸润;异基因移植组肺组织血管周围、支气管周围单核细胞袖套样浸润,合并血管内膜炎,可见坏死细胞、气腔出血,并存在肺实质坏死;异基因移植用药组排斥反应较前组明显减轻.移植肺组织及外周血中的CD62L表达呈正相关(r=0.766).结论:大鼠肺移植急性排斥反应中CD62L表达增高与血浆中CD62L水平相关,提示血浆中CD62L水平有望成为诊断急性排斥反应新的辅助指标.     

"非内皮化袖套"建立大鼠左单肺移植模型应用于短期观察

目的：建立非内皮化袖套大鼠左单肺移植模型，以期应用于短期观察。方法：选用纯种雄性SD大鼠，体重250-350g，呼吸机支持和显微外科技术下利用套管完成了20只大鼠左单肺移植。结果：20只移植鼠至实验结束存活17只，成功率为85％，套管成功率为100％。3只失败大鼠中2只为移植再灌注后分别于75min与90min左右后心跳停止死亡，1只为大鼠仍存活，但开胸取肺时见肺动脉和静脉内血栓形成，移植肺没有灌注。结论：非内皮化袖套大鼠左单肺移植手术较传统袖套技术更易掌握，手术时间缩短，成功率较高，此动物模型应用于观察时间较短的再灌注损伤的研究是合乎要求的。     

大鼠左肺原位移植模型的改进

选择120只大小、体质量匹配的Lewis大鼠,用套管法进行血管、支气管吻合,共进行60例次原位左肺移植.供、受体手术均由同一人操作,通过对移植物进行X射线摄片、组织病理学检测等手段评估手术操作的可行性和可靠性.手术成功率为96.7%,平均热缺血时间为(14.5±3.2)min,移植肺得到良好的通气和血流灌注,术后14 d移植肺显示了良好的X射线征象和肺功能.采用套管法进行血管、支气管吻合建立的大鼠原位左肺移植模型简单、安全、可靠,可操作性强.     

CRTER关注“肺移植”内容

大鼠左肺原位移植模型的改进 小鼠气管异位移植后模拟肺移植慢性排斥反应模型的建立     

同种异体大鼠左肺原位移植模型的建立和改良

目的：建立并改良大鼠同种异体左肺原位移植模型。方法：清洁级健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠100只,体质量200～250g,按供、受体随机配对成50对。在气管插管呼吸机支持下,经肺动脉灌洗LPD液后获取左肺,肺静脉、肺动脉和支气管分别套管,保存于LPD液中备用。受体手术采取不断肌肉的侧胸切口进胸,钝性分离肺门结构。采用三“袖套”套管法吻合肺动、静脉和支气管,完成移植。结果：所有供肺套管均顺利完成,移植手术成功45例,失败5例,成功率90％。供肺获取及套管时间（25±2）min,吻合时间（30±4）min。失败的原因：3倒肺静脉吻合失败,1例肺动脉吻合失败,另1例为术中大出血致休克死亡。结论：成功建立并改良了大鼠左肺原位移植模型。该模型容易复制,成功率高,值得推广。     

同种异体大鼠移植肺中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的定量表达

背景：急性排斥反应的发病机制主要是T细胞介导的免疫应答，Th1，Th2细胞及其分泌的细胞因子互相调节、交叉作用在其中起重要作用。研究表明，原始Th细胞向Th1或Th2细胞分化受转录因子T—bet和GATA结合蛋白3的表达所调控。 目的：在前期实验基础上，应用实时荧光定量聚合酶链反应法测定大鼠移植肺组织中转录因子T-bet和GATA结合蛋白3的mRNA表达，初步分析转录因子T-bet和GATA结合蛋白3在肺移植急性排斥反应中的作用及其意义。设计、时间及地点：单一样本观察的随机对照动物实验，于2003-08/2008-04在瑞士苏黎世大学医院胸外科实验室和深圳市人民医院临床研究中心完成。 材料：纳入LBNFI大鼠10只和Lewis大鼠30只，以建立大鼠左侧原位肺移植模型。方法：将大鼠按随机数字表法分为5组，以肺移植后3，5d作为观察急性排斥反应的时间点：①空白对照组（n=5）：取正常Lewis大鼠左肺组织。②冷缺血对照组（n=5）：冷低钾右旋糖酐液灌注后取Lewis大鼠右侧肺组织。③同系移植组（n=5）：Lewis-Lewis大鼠肺移植后5d，取移植左肺组织。④同种异体移植3d组（n=4）：LBNF1-Lewis大鼠肺移植后3d，取移植左肺组织。⑤同种异体移植5d组（n=6）：LBNF1-Lewis大鼠肺移植后5d，取移植左肺组织。 主要观察指标：应用实时荧光聚合酶链反应法，定量检测各组大鼠肺组织中转录因子T—bet和GATA结合蛋白3的表达。 结果：①T—bet在同种异体移植5d组中的表达有所增高，但与其他各组间差异均无显著性意义（P〉0．05）。②GATA结合蛋白3在同种异体移植5d组中的表达水平低于空白对照组、冷缺血对照组及同系移植组（P〈0．05）。③同种异体移植5d组中T-bet／GATA结合蛋白3比值高于其他各组（P〈0.05），其他各组间差异均无显著性意义（P〉0．05）。 结论：移植肺组织中GATA结合蛋白3比T-bet的改变更敏感．起主导作用；T—bet／GATA结合蛋白3比值可作为评价肺移植急性排斥反应的客观指标之一。     

大鼠原位肾移植模型的移植技巧及并发症预防

背景:大鼠器官移植模型可重复性好,可稳定模拟临床缺血再灌注损伤、急性排斥反应及慢性排斥反应等情况,是免疫耐受以及新型免疫抑制剂开发不可缺少的组成部分.目的:探讨稳定的大鼠原位肾移植模型的移植技巧及并发症的预防.设计、时间及地点:显微外科操作实验,于2002-10/2008-03在中山大学附属第一医院动物中心、蒙特利尔大学实验中心及河南省动物中心完成.材料:健康、雄性、清洁级Wistar大鼠、SD大鼠,分别为供、受体;Lewis大鼠、F344大鼠,分别为供、受体.方法:在Fisher的移植方法的基础上进行改良,采用大鼠左侧原位肾脏移植,动、静脉及输尿管均采用端端吻合方式,实验在德国产Carl Zeiss手术显微镜下进行.主要观察指标:监测移植后大鼠一般情况及尿量,大鼠尿量<1 mL认为移植肾脏功能差,活检确认原因.结果:共实施大鼠原位肾移植500次.供体手术时间(15.5±2.1)min,受体移植时间(40.6±5)min,移植成功(移植后存活5 d)率93.2%(466/500),一组慢性排斥模型大鼠达到长期存活(180 d).结论:施行多次肾移植可建立稳定、快速的大鼠原位肾移植模型,娴熟的动物外科解剖和精湛的显微外科技术是预防移植后并发症的先决条件.     

碱性磷酸酶对大鼠自体原位肝移植后急性肺损伤的保护作用

目的:肝移植术后并发症不仅包括肝脏本身的损害,亦能导致肝外多个器官功能衰竭,其中肺脏是较易且较早受累的器官.文章通过建立大鼠自体原位肝移植模型,观察肝移植术后肺部急性损伤情况及碱性磷酸酶的干预作用.方法:①实验于2007-05/10在南方医科大学附属南方医院实验动物中心、消化内科实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.②选用SD大鼠24只,按随机数字表法分为对照组、自体原位肝移植组和碱性磷酸酶组,每组8只.后两组建立大鼠自体原位肝移植模型,对照组开腹后游离肝叶后即关腹,碱性磷酸酶组于肝脏恢复血供前5 min自舌静脉注入碱性磷酸酶.③手术结束后2 h检测肺组织髓过氧化物酶活性、丙二醛含量、肺组织表面活性蛋白A含量及肺组织干湿重比值,并行肝脏、肺脏病理检查.结果:大鼠24只全部进入结果分析.①自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均高于对照组(P﹤0.01),碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均低于自体原位肝移植组(P﹤0.01).②碱性磷酸酶组、自体原位肝移植组肺组织表面活性蛋白A含量较对照组低,而碱性磷酸酶组较自体原位肝移植组有所升高.③自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值均低于对照组(P﹤0.01),碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值高于自体原位肝移植组(P﹤0.05).④病理结果显示,肝移植后大鼠肝、肺组织受到明显损害,而碱性磷酸酶能减轻损伤程度.结论:肝移植术后肺部确实存在急性损伤,而碱性磷酸酶对其具有保护作用.