杂色曲霉素和脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小鼠致癌作用的研究

目的探讨杂色曲霉素(ST)对NIH小鼠的致癌作用,同时研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对ST致癌作用的影响。方法将180只NIH小鼠随机分为ST 3μg/kg组、ST30μg／kg组、STμg/kg DON1．5pμg／kg组、ST30μg／kg DON1．5μg／kg组、DON1．5μg/kg组和对照组等6组,每组30只。各实验组按要求分别灌喂不同剂量的真菌毒素,对照组灌喂同等容量的生理盐水,3次／周,共24周。实验第58周和第74周处死小鼠,观察各器官组织病变。结果对照组小鼠各器官组织均未见明显病理改变。ST和DON处理组均有部分小鼠发生肺腺癌和腺胃黏膜上皮异型增生。ST3μg／kg组、ST30μg/kg组、ST3μg／kg DON1．5μg／kg组、ST30μg/kg DON1．5μg/kg组和DON1．5μg／kg组肺癌的发生率分别为25．0％、41．7％、62．5％、69．2％和37．5％,腺胃黏膜上皮异型增生发生率分别为50．0％、58．3％、37．5％、53.8％和25．0％。结论经口灌喂ST和DON可诱发NIH小鼠肺癌和腺胃黏膜异型增生。ST加DON可明显提高肺癌的发生率。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇致小鼠畸形骨骼组织差异表达基因及相关通路分析

目的： 筛选脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)致小鼠胚胎畸形骨骼组织的差异表达基因及相关信号传导通路,从基因水平上阐明DON致小鼠骨骼畸形的分子基础。方法：取孕期小鼠30只,随机分成3个不同浓度DON染毒组、溶剂对照组和空白对照组,每组6只,将DON染毒组孕鼠于孕期第7～10天连续腹腔注射DON,染毒后第18天麻醉剖腹取出胎鼠骨骼组织,提取椎骨骨骼组织总RNA,通过反转录法获取畸形骨骼组织和正常对照组骨骼组织的cDNA,并对其分别进行荧光标记,采用全基因组芯片技术对小鼠胚胎畸形骨骼组织与正常对照组织的差异基因表达谱进行分析,采用基因本体学分析软件对差异表达基因进行功能分析,DAVID database数据库筛选差异表达基因涉及的信号通路,并利用荧光定量PCR(qPCR)技术对基因芯片结果进行验证。结果：在DON染毒组小鼠全基因组芯片上筛选出差异基因282个,其中下调148个,上调134个;在差异表达基因分析的基础上,发现差异表达基因涉及到的通路有153个。qPCR结果表明,上调基因Fbn1、Co19a2、Papss2、Pax1F和下调基因Runx2、Pthlh等6个差异表达基因的相对定量结果与基因芯片检验结果表达趋势一致。结论：应用基因表达谱芯片初步筛选出DON所致胎鼠畸形骨骼与正常胎鼠骨骼组织中的差异表达基因,并通过通路分析发现,上述差异表达基因涉及多条信号传导通路。     

山东食管癌高发区脱氧雪腐烯醇和硒元素含量检测研究

[目的]探讨山东省农村居民粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和硒元素(Se)的含量与食管癌高发的关系。[方法]粮食样品中DON毒素含量的检测采用酶联免疫吸附法(ELISA);硒元素的检测采用2,3-二氨基萘(DAN)荧光分光光度法。[结果]东平、肥城两个食管癌高发区粮食DON含量为70.1～302.8μg/kg,对照组(泰山区、长清区)粮食DON检测结果为低于27.3μg/kg,食管癌高发区与对照区粮食DON含量差异有统计学意义(P<0.05);东平、肥城两个食管癌高发区粮食Se含量均数分别为76.5μg/kg、85.6μg/kg,对照组泰山区、长清区粮食Se含量均数分别为83.1μg/kg、90.7μg/kg,对照地区高于食管癌高发区(P<0.05);东平、肥城、泰山区、长清区居民头发Se含量均数分别为0.926mg/kg、1.015mg/kg、0.937mg/kg、0.941mg/kg,高发区组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]食管癌发病可能与DON有关,Se的缺乏可能不是食管癌发病的主要病因。     

DON 对胃癌细胞HGC-27 细胞周期和凋亡的影响

 目的 探讨脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）对体外培养胃癌细胞HGC-27细胞周期和凋亡的影响。方法 体外培养的胃癌细胞HGC-27经50、100、1000、2000μg／L DON处理12h、24h、48h，应用流式细胞术（FCM）进行细胞周期分析，检测凋亡情况及其量效关系，Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达情况。结果 FCM检测结果表明，较高浓度（1000和2000μg／L）DON处理对细胞周期分布的影响随处理时间不同有明显差异。DON处理12h，可明显降低G0／G1细胞百分率、增加S期细胞百分率。处理时间延长至24h和48h，则表现为G0／G1细胞百分率增加，S期细胞百分率降低（P〈0．05）。DON处理24h和48h，各DON实验组HGC-27细胞凋亡率均高于对照组，在50～2000ug／L浓度范围内，凋亡率随着DON处理浓度的升高而升高。Western blot检测凋亡相关蛋白结果显示，DoN处理12、24和48h，Bax和Caspase-3蛋白表达均明显升高，而Bcl-2蛋白表达降低。结论 DON处理可影响体外培养的胃癌细胞象HGC-27细胞的细胞周期分布，其作用依DON浓度和作用时间的不同而有差异。同时DON可诱导HGC-27细胞凋亡，上调Bax和Caspase-3蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达可能是其诱导细胞凋亡的机制之一。     

镰刀菌毒素DON,NIV的细胞毒性和致突变,致畸,致癌研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）、雪腐镰刀菌烯醇（ＮＩＶ）均属于单端孢霉烯族毒素,是赤霉病故中最常检出的毒素,常常单独或联合污染粮谷类。它们主要由某些镰刀菌产生,可对人类和不同种属的动物产生广泛的毒性效应。本文综述了ＤＯＮ、ＮＩＶ近年毒理学方面的研究进展。     

DON与NOC对肝脏致病作用的实验研究

目的:观察脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、N-亚硝基化合物(NOC)对昆明小鼠肝脏组织损伤及潜在致癌作用.方法:128只小鼠随机分成4组,每组32只,利用隔日灌胃法,给小鼠染毒DON、NOC.DON组染毒剂量为每次0.5 mg/kg,NOC组染毒剂量为每次0.25 mg/kg,DON+NOC组染毒剂量为每次DON 0.5 mg/kg+NOC 0.25 mg/kg,时照组给予等体积生理盐水.60 d后处死小鼠,取肝脏组织制作HE病理切片,观察肝脏组织病理改变.结果:实验组动物肝脏大片坏死、大片脂肪变性、小灶区异型、双核肝细胞阳性率与对照组比较有统计学意义(P值依次分剐为0.001 8、0.000 7、0.009 3和0.022 3).DON+NOC组出现的大片脂肪变性分别与DON组、NOC组进行四格表X2检验,差异有统计学意义,P=0.005 8.结论:DON、NOC对肝脏有明显损伤,两者联合可加重肝脏损伤,且具有潜在的致癌效应.     

胃癌细胞凋亡及其相关基因的研究

胃癌是我国最常见的消化道肿瘤 ,占恶性肿瘤死亡率的第一位。因此 ,有关胃癌的研究一直是人们关注的热点。近年来研究发现肿瘤时有细胞凋亡与增殖异常的现象发生 ,并受许多因素影响。本实验通过对胃癌组织中细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)、凋亡相关基因及增殖细胞核抗原 (Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＰＣＮＡ)进行检测 ,以探讨其在胃癌发生发展过程中的作用。1　材料与方法1.1　病例选择选用我院外科住院患者手术切除标本 34例 ,均为进展期低分化腺癌 ,术前未进行过任何抗肿瘤治疗。男性 2 6例 ,女…     

p27KIP1过表达对人胃癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响

目的研究p27KIP1基因对胃癌细胞的细胞周期和细胞凋亡的潜在作用. 方法采用脂质体转染法将p27KIP1全长cDNA转入胃癌细胞系SCG7901中,通过Western Blot以及RNA斑点杂交检测p27KIP1基因在蛋白质和mRNA水平的表达;细胞活力实验和软琼脂集落形成实验显示转染p27KIP1基因对细胞增殖的作用;DNA电泳、流式细胞仪、TUNEL染色及透射电镜等方法观察目的基因对该细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响. 结果转染p27KIP1的SCG7901细胞在mRNA和蛋白质水平均有高水平p27KIP1的表达.细胞活力检测显示在外加Zn离子48h后细胞生长被抑制42%;软琼脂集落形成率明显少于亲代细胞(P<0.01);p27KIP1的过表达能够显著地增加G1期的细胞数,由33.68%增加到69.29%,P<0.01;在G1期前出现1个亚二倍体的凋亡峰,占14.68%,并且凋亡指数也显著增加(P<0.01).结论 p27KIP1基因能够诱导SCG7901细胞凋亡和细胞周期在G1期延长.因此,p27KIP1基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因.     

抑制JNK通路对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡影响的研究

目的:研究JNK信号传导通路对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力;蛋白质印迹法检测细胞内磷酸化JNK及总JNK的表达水平;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡及细胞周期分布。为研究JNK通路活性对TRAIL抗肿瘤作用的影响,将实验分为空白对照组、TRAIL单药组(100μg/L)、JNK抑制剂组(SP600125,20μmol/L)和联合用药组(SP600125+TRAIL)。结果:采用25、50、100和200μg/LTRAIL作用于MGC803细胞24 h,细胞活力仅轻度下降。进一步研究发现,TRAIL作用后细胞内磷酸化JNK水平明显升高,提示JNK信号通路被活化。同TRAIL单药组相比,联合用药组的细胞活力明显降低〔(53.5±3.2)%vs(88.3±1.1)%,P<0.05〕,细胞凋亡明显增加〔(21.3±5.1)%vs(5.7±0.1)%,P<0.05〕,G2/M期细胞比例明显升高〔(38.0±6.0)%vs(25.7±2.9)%,P<0.05〕。结论:抑制JNK通路能明显增强TRAIL对MGC803细胞的抗肿瘤作用,其机制可能与诱导细胞凋亡及G2/M期阻滞有关。     

术前动脉化疗对胃癌细胞凋亡及p53表达的影响

背景与目的:区域化疗具有肿瘤局部药物浓度高、全身副作用小的特点,术前选择性区域动脉灌注化疗可明显改变胃癌患者的肿瘤组织学形态。本文旨在研究术前动脉化疗对胃癌细胞凋亡及p53表达的影响和意义。方法:对33例胃癌患者动脉化疗前胃镜活检病理标本和动脉化疗后手术切除的病理标本,应用DNA原位末端标记法、免疫组化S-P法分别检测肿瘤细胞凋亡及p53蛋白表达。结果:胃癌动脉化疗后肿瘤细胞凋亡指数为19.29±6.48,显著高于动脉化疗前的9.24±5.03(P<0.01);动脉化疗后p53表达阳性率为30.30%,显著低于动脉化疗前的54.55%(P<0.05);动脉化疗后p53表达“下降”组的生存期长于p53表达“增加”组的生存期(P<0.05)。结论:术前动脉化疗对胃癌细胞有明显的促进凋亡作用,可显著降低胃癌组织p53蛋白的表达,提高患者的生存期。     

单克隆抗体PD4诱导人胃癌细胞系MGC-803的凋亡

目的凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种区别于坏死的细胞生理性死亡方式。肿瘤发生与凋亡的异常有十分密切的关系。单克隆抗体ＰＤ４能识别胃癌细胞表面的分子量为４００００的分子（Ｐ４０）。本研究是为了观察单抗ＰＤ４是否具有诱导胃癌细胞凋亡的作用。方法我们应用流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记及ＤＮＡ电泳法观察单抗ＰＤ４对胃癌细胞ＭＧＣ－８０３增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了ＭＧＣ－８０３细胞表面Ｆａｓ抗原的表达情况。结果ＰＤ４有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用,且ＭＧＣ－８０３细胞Ｆａｓ抗原表达为阴性。结论Ｐ４０是一个与细胞凋亡或增殖有关、且不同于Ｆａｓ的肿瘤相关抗原,他的分子克隆有助于抗体诱导细胞凋亡机制的阐明。     

大蒜油诱导人胃癌细胞分化和凋亡的机制研究

目的从细胞和基因水平阐明大蒜油对人胃癌ＢＧＣ８２３细胞的作用机理。方法用激光扫描共聚焦显微镜及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交等技术进行分析。结果大蒜油对癌细胞形态、增殖和致瘤性有明显影响。结论大蒜油通过促进ｐ５３、ｐ２１等的表达,诱导肿瘤细胞分化,同时诱导肿瘤细胞凋亡。     

解毒消癥饮诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的电镜观察和定量分析

目的 观察中药复方解毒消癥饮含药血清对SGC-7901胃腺癌细胞凋亡作用的超微结构改变.方法 采用解毒消癥饮含药血清,与胃腺癌细胞共培养24 h和72 h,透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化;以胞质为参照空间,随机摄片并通过SIS软件按体视学原理和方法,测试胃癌细胞中细胞核和线粒体的体积密度(Vv)、形状因子(PE)、平均周长(L)、平均体积(V)及平均表面积(S),比较这些参数在不同组间的差异.结果 解毒消癥饮含药血清干预下可见胃癌细胞表面微绒毛减少,细胞体积减小,细胞核异染色质多聚集于核膜下,线粒体体积缩小,嵴减少,电子密度增高;解毒消癥饮含药血清干预24 h的胃癌细胞与对照组比较,细胞核和线粒体Vv、PE、V、S、L有统计学意义(P＜0.05).结论 解毒消癥饮含药血清能诱导胃癌细胞凋亡,出现细胞核异染色质边聚、线粒体固缩等凋亡早期的超微结构变化;电镜图像定量分析能客观反映细胞核及线粒体的变化情况.     

解毒消瘕饮诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的电镜观察和定量分析

目的观察中药复方解毒消瘕饮含药血清对SGC-7901胃腺癌细胞凋亡作用的超微结构改变。方法采用解毒消瘕饮含药血清,与胃腺癌细胞共培养24h和72h,透射电镜观察肿瘤细胞超微结构的变化;以胞质为参照空间,随机摄片并通过SIS软件按体视学原理和方法,测试胃癌细胞中细胞核和线粒体的体积密度（Vv）、形状因子（PE）、平均周长（L）、平均体积（V）及平均表面积（S）,比较这些参数在不同组间的差异。结果解毒消瘕饮含药血清干预下可见胃癌细胞表面微绒毛减少,细胞体积减小,细胞核异染色质多聚集于核膜下,线粒体体积缩小,嵴减少,电子密度增高;解毒消瘕饮含药血清干预24h的胃癌细胞与对照组比较,细胞核和线粒体Vv、PE、V、S、L有统计学意义（P〈0．05）。结论解毒消瘕饮含药血清能诱导胃癌细胞凋亡,出现细胞核异染色质边聚、线粒体固缩等凋亡早期的超微结构变化;电镜图像定量分析能客观反映细胞核及线粒体的变化情况。     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:不同浓度EGCG单独或联合c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)抑制剂SP600125作用BGC-823细胞后,应用MTT法检测BGC-823细胞的增殖抑制率,显微镜下观察细胞的形态学改变,FCM检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞中p-JNK和p-c-jun蛋白的表达情况,免疫细胞化学法检测细胞中caspase-3的表达。结果:EGCG可抑制BGC-823细胞的增殖(P<0.05),呈时间和剂量依赖效应;EGCG可诱导BGC-823细胞凋亡,细胞凋亡率呈剂量依赖效应(P<0.05);EGCG可上调BGC-823细胞中p-JNK、p-c-jun和caspase-3的表达(P<0.05)。EGCG引起的BGC-823细胞增殖抑制和caspase-3表达水平的上调可被SP600125部分抑制。结论:EGCG可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡,其作用机制可能与激活JNK信号转导途径并上调caspase-3的表达有关。     

替尼泊甙和羟基喜树碱对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的作用

背景与目的:研究显示,拓扑异构酶(topoisomerase,Topo)Ⅰ和Ⅱ抑制剂联合应用有一定的协同抗肿瘤作用,但两物联合应用治疗胃癌的报道较少.本研究探讨Topo Ⅰ抑制剂羟基喜树碱(hydroxycamptothecin,HCPT)和TopoⅡ抑制剂替尼泊甙(teniposide,VM-26)联合应用对胃癌细胞BGC-823的体外抑制作用和诱导细胞凋亡的作用.方法:利用噻唑蓝(MTT)法测定HCPT、VM-26单药及联合用药对BGC-823细胞的体外抑制作用,流式细胞仪测定细胞凋亡.结果:1.963～31.413 μmol/L VM-26对BGC-823细胞的抑制率为15.99%～80.83%;1.963 μmol/LVM-26处理细胞0、12、24、48 h,细胞凋亡率分别为3.90%、4.42%、7.60%、17.70%.8.577～137.227 μmol/L HCPT对细胞的抑制率为7.89%～70.32%,8.577 μmol/LHCPT处理0、12、24、48 h后,细胞凋亡率分别为2.80%、8.50%、10.50%、13.30%.联合用药时抑制率为21.32%～87.74%,凋亡率为2.80%、15.50%、15.70%、20.20%.联合用药指数为1.293.结论:HCPT与VM-26单药可抑制BGC-823细胞增殖,诱导细胞凋亡;HCPT与VM-26联合应用在胃癌细胞中产生拮抗作用.     

抗癌生物活性肽-S对胃癌细胞周期和凋亡的影响

目的 探讨抗癌生物活性肽-S(ACBP-s)对人胃癌细胞MGC-803细胞周期和凋亡的影响.方法 (1)体外实验:以不同浓度ACBP-S处理人胃癌MGC-803细胞,采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法测定增殖抑制率;电镜下观察细胞凋亡现象;流式细胞术分析细胞周期与凋亡率;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测p27基因mRNA和蛋白表达的变化.(2)动物体内实验:建立裸鼠胃癌移植瘤模型,每只裸鼠经尾静脉注射7μg ACBP-S,隔日给药,2周后处死,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤细胞形态变化;免疫组化法检测Bcl-2、Bax和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果 (1)5.0、10.0和15.0μg/ml的ACBP-S均能抑制MGC-803细胞的生长,且随浓度增加和作用时间延长抑瘤率增加.电镜下可见,MGC-803细胞经15.0μg/ml ACBP-S作用48h后,呈现典型的凋亡特征.流式细胞术分析结果显示,5.0和20.0μg/ml ACBP-S作用MGC-803细胞24h的凋亡率较高,分别为(5.7±0.2)%和(13.9±0.6)%(P<0.05);20.0μg/ml ACBP-S可使G0/G1期MGC-803细胞的构成比明显上升.ACBP-S上调MGC-803细胞p27基因mRNA和蛋白的表达.(2)ACBP-S能抑制胃癌移植瘤的生长,抑制率达34.2%.镜下可见,治疗组肿瘤组织中出现大片坏死及大量凋亡细胞,异型细胞及核分裂相减少.免疫组化分析结果显示,治疗组Bcl-2和PCNA表达降低,Bax表达增高.结论 ACBP-S能抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,其作用机制与调控胃癌细胞的细胞周期和凋亡有关.     

吡柔比星诱导结肠癌细胞株SW-260的凋亡

目的：观察吡柔比星（pirarubicin,ＴＨＰ）对结肠癌细胞株ＳＷ－２６０凋亡的影响。 方法：将ＴＨＰ加入ＳＷ－２６０细胞培养液,Ｈoechst３３２５８荧光染色、透射电镜观察ＳＷ－２６０细胞形态学变化;ＤＮＡ抽提琼脂糖电泳观察ＤＮＡ的“梯状”条带;并测定细胞ＤＮＡ断裂百分率,以探讨ＴＨＰ能否引起人结肠癌细胞株ＳＷ－２６０发生凋亡。结果：不同浓度ＴＨＰ（５,１０,１５umol/Ｌ）作用于ＳＷ－２６０细胞２４小时及１     

重楼醇提取物含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡影响的观察

目的:观察重楼醇提取物含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法:以重楼醇提取物不同浓度含药血清培养SGC7901细胞后,以MTT法检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化。结果:不同给药剂量组含药血清作用于SGC7901细胞24、48和72h后,细胞生存率显著降低,且与时间和剂量呈依赖关系。不同给药剂量组含药血清作用于SGC7901细胞24h后,细胞阻滞发生在S期;凋亡率分别为(6.67±1.34)%、(13.12±1.34)%和(20.43±1.24)%,联合用药组为(22.61±3.01)%,空白组动物血清组凋亡率(4.35±1.09)%及氟尿嘧啶(5-FU)组(19.22±1.66)%比较,差异均有统计学意义,P<0.01。结论:重楼醇提取物含药血清对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,并可诱导SGC7901细胞凋亡。     

姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用机制

 目的 探讨姜黄素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用及其相关机制。方法 以不同浓度的姜黄素作用于胃癌SGC-7901细胞，利用倒置相差显微镜观察细胞生长形态变化，通过MTT检测细胞生长抑制率，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot 检测胃癌细胞中Fas及survivin的表达情况。结果 姜黄素能显著抑制体外培养的SGC-7901细胞的生长并呈量-效和时-效关系，流式细胞术检测到亚二倍体凋亡峰，细胞凋亡率增加，Western blot结果提示经姜黄素作用后Fas表达率上升，survivin表达率下降。结论 姜黄素能抑制胃癌细胞SGC-7901的生长并促进其凋亡，姜黄素可能通过上调Fas及下调survivin的表达而诱导凋亡。