克山病患者心肌肠道病毒VP1结构蛋白检测

目的 探讨肠道病毒感染与克山病发病的关系。方法 应用抗柯萨奇B5病毒(Coxsackie B5 virus，CVB5)VP1蛋白单克隆抗体，采用免疫组化方法，检测黑龙江、山东、云南省克山病病区急型、亚急型、慢型、潜在型克山病死亡病例心肌标本83例，风心病10例，冠心病10例，心肌炎21例，扩张型心肌病29例，非病区非正常死亡的正常人10例，病区发病季节非克山病死亡病例13例。结果 克山病83例心肌标本中有74例VP1结构蛋白阳性，阳性率89．2％；风心病、冠心病、非正常死亡健康人VP1阳性检出率均为10％；心肌炎、扩张型心肌病VP1阳性检出率分别为66．7％和70％；病区发病季节非克山病死亡病人VP1阳性检出率为38．5％。结论 来自3省份的各型克山病死亡病例心肌标本中均能检出肠道病毒VP1结构蛋白，克山病的发生与肠道病毒感染高度相关。     

克山病与病毒感染关系的实验研究

目的为了探讨克山病与肠道病毒特别与柯萨奇病毒(CVB)的关系.方法①选择用CVB3病毒的cDNA探针,应用原位核酸杂交的方法,检测克山病尸检心肌组织;②采用CVB5病毒VP1壳蛋白的单克隆抗体应用免疫组化法检测克山病尸检心肌组织;③用不同配方的低硒合成饲料喂养小鼠,分别感染CVB2、CVB4m'、CVB3m以及先后感染CVB4和CVB3m的病毒.结果①原位杂交法急型克山病、亚急型克山病、慢型克山病的阳性率分别为61.5%、75.8%和68%;②免疫组化法克山病阳性率分别为89.2%,两种方法阳性检出率均显著高于健康人,高于心肌炎及扩张型心肌病,但无差异;③光镜下低硒病毒组心肌病变位于心肌实质、乳头肌等.为多发性灶状坏死伴少量炎性细胞浸润,补硒组心肌病变为间质炎性细胞浸润,病变程度及检出率、低硒病毒组均重/高于补硒病毒组.结论以上实验结果均支持克山病的发生与肠道病毒,特别CVB病毒的感染高度相关.     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇病毒与克山病的关系

为进一步探讨柯萨奇病毒与克山病的关系，采用柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）制备的ｃＤＮＡ探针与黑龙江、山东、云南三省病区克山病尸检心肌组织及胎儿克山病心肌组织的石蜡切片进行了原位核酸杂交，并用脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡健康成人及冠心病、风心病尸检心肌组织和病区、非病区７～８个月引产胎儿心肌组织的石蜡包埋切片作为对照。结果急型克山病８／１３、慢型克山病３４／５０、亚急型克山病２２／２９呈现阳性杂交信号，提示有柯萨奇病毒ＲＮＡ的存在，冠心病２／１５、风心病１／１５、显著低于克山病，而健康成人对照组均为阴性，胎儿克山病一例呈阳性反应，病区引产胎儿心肌组织１０例中有２例也检出柯萨奇病毒ＲＮＡ，而非病区胎心则为阴性。结果提示在一些克山病的发生和发展过程与柯萨奇Ｂ组病毒的感染高度相关。     

克山病病区12例急性心肌炎临床病理分析

目的 探讨云南省克山病病区急性致死性心肌炎暴发流行及其猝死的原因。方法 对１２例在季节性群体发病中收集到的死亡病例,作临床病理资料总结分析。结果 此类心肌炎暴发浒具有一定的发病特点,心肌病变主要表现为间质性炎症反应,在９例心肌组织中,有８例肠道病毒ＲＮＡ阳性。结论 肠道病毒感染可能是云南克山病病区急性心肌炎暴发流行的主要病因。     

应用原位杂交法对比研究慢型克山病、扩张型心肌病与肠道病毒的关系

本文用生物素标记的柯萨奇B_3病毒(CVB_3)的cDNA探针,通过原位杂交技术检测50例组织学诊断为慢型克山病、14例扩张型心肌病的心肌石蜡包埋切片,并以15例正常心肌标本作阴性对照。结果50例慢型克山病有34例出现阳性结果。14例扩张型心肌病有7例出现阳性结果。15例正常对照心肌标本杂交均为阴性,从而确定慢型克山病的心肌组织中、扩张型心肌病的心肌组织中有肠道病毒核酸存在,表明肠道病毒感染与慢型克山病、扩张型心肌病的发病高度相关。经统计学处理二者之间无明显差异。     

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的 探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法 用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸捡心肌组织12例及病区与非病区尸捡正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果 吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号，即有肠道病毒RNA存在，阳性率为91．66％，对照组均为阴性。结论 吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染，提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。     

应用聚合酶链式反应探讨肠道病毒感染与克山病及扩张型心肌病发病的关系

用聚合酶链式反应对云南楚雄地区克山病及扩张型心肌病心内膜心肌活检标本各６例和＂正常人＂心肌标本１６例进行肠道病毒ＲＮＡ的检测。发现１２例患者心肌组织中肠道病毒ＲＮＡ阳性率达５８．３３％，而＂正常人＂中均为阴性。证实患者心肌组织中存在肠道病毒持续感染，且肠道病毒感染与患者心功能及心肌病理损害密切相关，提示肠道病毒感染在楚雄地区克山病及扩张型心肌病发病中起重要作用。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与黑龙江慢型克山病的关系

克山病是原因未明的地方性心肌病，慢型克山病有关病毒病因的研究未见有关报道，作者用生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与黑龙江病区慢型克山病尸检心肌组织及非正常死亡成人心肌组织和非病区７￣８个月引产胎儿心肌组织进行了原位杂交，以检测柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ。结果１３例慢型克山病中有９例呈现阳性杂交信号，阳性率达６９．２％，两对照组均为阴性。表明黑龙江慢型克山病心肌组织中有柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ的存在，     

应用聚合酶链式反应探讨肠道病毒感染与克山病及扩张型心…

用聚合酶链式反应对云南楚雄地区克山病及扩张型心肌病心内膜心肌活检标本各６例和“正常人”心肌标本１６例进行肠道病毒ＲＮＡ的检测。发现１２例患者心肌组织中肠道病毒ＲＮＡ阳性率达５８．３３％，而“正常人”中均为阴性。证实患者心肌组织中存在肠道病毒持续感染，且肠道病毒感染与患者心功能及心肌病理损害密切相关，提示肠道病毒感染在楚雄地区克山病及扩张型心肌病发病中起重要作用。     

2011年云南省非克山病病区扩张型心肌病患病现状调查

目的 掌握云南省非克山病病区扩张型心肌病病情现状.方法 2011年8-12月,在云南省的17个县进行非克山病病区扩张型心肌病调查.每个县选取2个自然环境和生产生活方式与克山病病区相似的非克山病病区乡(镇),每个乡(镇)选取1个村作为调查点,以村常住人口不少于500人为宜,人数不足者从邻近村补足,检诊率不低于80％.对调查点居民进行临床查体和心电图描记,对疑似扩张型心肌病和类潜在型克山病患者拍摄胸部正位X线片,诊断按照《全国非克山病病区扩张型心肌病病情调查方案》中扩张型心肌病参考诊断标准和类潜在型克山病诊断方法进行.结果 在17个县的34个村共调查了14 545例,检出扩张型心肌病和类潜在型克山病26例,总检出率为17.88/万.其中检出扩张型心肌病1例,检出率为0.69/万;检出类潜在型克山病25例,检出率为17.19/万.检出的26例病例中男性15例,女性11例;年龄段＞65岁占42.31％(11/26),其中类潜在型克山病占44.00％(11/25),1例扩张型心肌病年龄段在45～ 54岁.共描记心电图14 519例,心电图异常1 180例,异常率为8.13％.共拍摄胸部正位X线片112例,心胸比例≤0.50的104例,0.51～0.55的4例,0.56～0.60的3例,≥0.61的1例.结论 在云南省非克山病病区,扩张型心肌病检出率较低,但能检出类潜在型克山病.     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系──（黑龙江省急型克山病）

为探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７～８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果１３例急型克山病中有８例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒的ＲＮＡ存在，阳性率达６１．５％。对照组均为阴性，提示黑龙江省急型克山病有柯萨奇Ｂ组病毒感染，可能是急型克山病发病因素之一。     

应用原位杂交法对比研究慢型克山病,扩张型心肌病与肠道病？…

本文用生物素标记的柯萨克Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）的ＣＤＮＡ探针，通过原位杂交技术检测５０例组织学诊断为慢型克山病、１例扩张型心肌病的心肌石蜡包埋切片，并以１５例正常心肌标本作阴性对照。结果５０例慢型克山病有３４例出现阳性结果。１４例扩张型心 ７７例出现阳性结果。１５例正常对照组心肌标本杂交均为阴性，从而确定慢型克山病的心肌组织中、扩张型心肌病的心肌组织中有肠道病毒核酸存在，表明肠道病毒感染与慢型克山病     

柯萨奇B_4病毒感染与克山病及其病区病毒性心肌炎

目的　探讨柯萨奇 B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎的关系。方法　采用寡核苷酸探针的原位核酸杂交方法 ,结合病理学观察 ,对比研究克山病与病毒性心肌炎的异同。结果　克山病与病毒性心肌炎各自具有特征性的病理学改变 ;发病区 88.89%的病毒性心肌炎出现阳性杂交信号 ,而且几乎每例的所有心肌细胞均见阳性杂交信号 ;95 .2 4%的亚急型克山病出现阳性杂交信号 ,且半数以上的标本几乎所有的心肌细胞内出现阳性杂交信号 ;阳性信号在病毒性心肌炎和亚急型克山病的心肌细胞内的分布及阳性信号颗粒的形态并无明显区别。结论　柯萨奇 B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎密切相关 ,其不同的病变特征可能是由于组成病因网的诸因素发生变动所致     

慢型克山病与扩张型心肌病对比研究

目的观察慢型克山病与扩张型心肌病在流行病学、临床表现及发病相关因素的异同。方法选择克山病病区自然人群170820人、非克山病病区自然人群112209人,以近5年县乡两级医院住院克山病、扩张型心肌病及两种可疑病人为线索,调查两种疾病的患病情况、临床表现和内外环境硒水平及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH鄄Px)活性。结果慢型克山病患病率19.32/10万,扩张型心肌病患病率4.5/10万,克山病患病率显著高于扩张型心肌病(P<0.01)。慢型克山病发病年龄集中,以女性多见;扩张型心肌病发病年龄分散,以男性多见。克山病血清硒和发硒低于亲属和病区健康人(P<0.01),GSH鄄Px活性与硒呈现一致的结果(P<0.01);扩张型心肌病血清硒和发硒也低于亲属和当地健康人(P<0.01),GSH鄄Px活性与硒变化相同(P<0.01)。克山病病区健康人血清硒低于非病区健康人(P<0.05),发硒也有降低趋势,慢型克山病发硒和GSH鄄Px活性低于扩张型心肌病(P<0.05～0.01)。克山病病区小麦、玉米硒显著低于扩张型心肌病调查地区(P<0.01)。结论慢型克山病发病与低硒相关联,患病率高,女性多见,发病年龄集中;扩张型心肌病患者体内硒水平高于慢型克山病,患病率低,男性多见,发病年龄分散。二者的不同特点可为临床鉴别提供依据。     

柯萨奇B4病毒感染与克山病及其病区病毒性心肌炎

目的 探讨柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎的关系。方法 采用寡核苷酸探针的原位核酸杂交方法,结合病理学观察,对比研究克山病与病毒性心肌炎的异同。结果 克山病与病毒性心肌炎各自具有特征性的病理学改变;发病区88．89％的病毒性心肌炎出现阳性杂交信号,而且几乎每例的所有心肌细胞均见阳性杂交信号;95．24％的亚急型克山病出现阳性杂交信号,且半数以上的标本几乎所有的心肌细胞内出现阳性杂交信号;阳性信号在病毒性心肌炎和亚急型克山病的心肌细胞内的分布及阳性信号颗粒的形态并无明显区别。结论 柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎密切相关,其不同的病变特征可能是由于组成病因网的诸因素发生变动所致。     

RNA－RNA原位杂交检测心肌中的肠道病毒RNA

报道将ｐＣＶＢ３－Ｒ１进行体外转录合成柯萨奇Ｂ３病毒负股ＲＮＡ，以同位素３５Ｓ标记作为阳性探针，将ｐＳＰＴ１８的体外转录产物以同位素３５Ｓ标记作为阴性探针，分别对多种经石蜡包埋的心肌切片进行原位杂交，检测肠道病毒ＲＮＡ。阳性探针检测结果显示：急性小鼠柯萨奇Ｂ３病毒性心肌炎心肌均有阳性信号出现；３例急性心肌炎和２例扩张型心肌病心肌各有１例阳性发现；６例风心病病人心脏瓣膜未见阳性信号；正常人和小鼠心肌未见阳性信号。阴性探针检测未发现任何阳性信号。可见此方法特异性高，可对肠道病毒ＲＮＡ进行特异检测。本结果也提示在我国急性心肌炎和扩张型心肌病病人心肌中存在肠道病毒的持续感染。     

四川省扩张型心肌病与克山病病情调查研究

目的了解和掌握四川省非克山病病区扩张型心肌病与克山病病区克山病病情现状,为四川省克山病"十二五"的消除考核评估提供可靠科学数据。方法采用描述流行病学方法,收集汇总2011年中财四川省非克山病病区通江县、三台县、棉竹市、古蔺县、长宁县扩张型心肌病和2011年省财克山病病区西昌市、冕宁县、大竹县、仁和区、剑阁县克山病病情调查资料数据,并进行对比分析。结果非病区扩张型心肌病较病区克山病病例搜索诊断病例少,调查任务完成率低,慢型病例检出率低,购外地主食粮食比例高,被调查人群3~20岁少、46~75岁多、男女比例构成高,高血压患病率高,心电检查心电异常率低,P均0.05,差异有统计学意义;潜在型病例检出率低,人均年收入近千元,X线胸片心脏增大率低,P均0.05,差异无统计学意义。结论四川省非病区扩张型心肌病与病区克山病病情调查结果经过统计学分析直接或间接验证了克山病营养地球化学病因学说、生物病因学说、克山病流行病学特点及一些影响因素。     

克山病的心肌损伤与细胞凋亡

为探讨克山病的心肌损伤与细胞凋亡的关系，采用Ｏｎｃｏｒ公司的细胞凋亡原位检测试剂盒（ＴＵＮＥＬ）对３０例克山病尸检心肌组织进行了检测，其中急型、亚急型、慢型克山病心肌组织各１０例，以因交通事故死亡的５例正常人尸检心肌组织作为对照，结果显示，急型、亚急型、慢型克山病心肌组织中凋亡细胞阳性检出率分别为２／１０、８／１０与７／１０。５例正常心肌组织中，未检出凋亡细胞，以上结果提示：在克山病的发生发展中有凋亡机制参与。     

中国6省(市)扩张型心肌病和类潜在型克山病患病率调查

目的 了解我国6个克山病病区省(市)中的非克山病村扩张型心肌病和类潜在型克山病患病情况,为克山病病区建立消除标准提出本底参考值.方法 在四川、陕西、河南和山东的非克山病病区,在重庆和云南的克山病病区,采用多阶段抽样方法,选取县、乡和村作为调查点.每个非病区县和病区县抽取2个乡,每个乡抽取1个村(非克山病村).对调查点居民进行问卷调查、临床查体和心电图、心脏超声检查,对疑似病例拍胸部后前位X线片.扩张型心肌病诊断依据2006年世界卫生组织和国际心脏病联合会(WHO/ISFC)工作组制定的标准.结果 共调查了126个村,对54 139人进行了问卷调查和临床检查.共检出扩张型心肌病患者10例,其中男性7人,女性3人,总患病率为18.47/10万(10/54 139),95％可信区间为18.11/10万～ 18.84/10万.共检出类潜在型克山病197例,总患病率为363.88/10万(197/54 139),95％可信区间为362.27/10万～365.49/10万,其中男性患病率为353.34/10万(83/23 490),女性患病率为372.07/10万(114/30 639).描记心电图54 139例,其中正常心电图45 222例,异常心电图8917例,异常率为16.47％.其中重庆心电图异常率最高为38.28％(1585/4141),云南心电图异常率最低为8.10％(1175/14 507).心电图异常改变中,T波和ST段改变检出率最高为4.67％(2528/54 139).在异常心电图指数中,河南、山东和重庆检出率较高,均＞10.0％.结论 建议我国6个省(市)中的克山病病区扩张型心肌病和类潜在型克山病本底的参考值分别为18.47/10万和363.88/10万.     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系

为探讨柯萨奇Ｂ病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７－８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。