黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响

目的 观察黄芪甲苷对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响,并探讨其作用机理.方法 体外分离培养大鼠胚胎神经干细胞,Nestin 免疫细胞化学染色进行神经干细胞的鉴定,BrdU 标记鉴定增殖.采用稀释法检测黄芪甲苷高、中、低剂量组(6、0.6、0.06 μmol/L)对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响.结果 Nestin 染色为阳性,BrdU 的增殖鉴定为阳性.与对照组相比,黄芪甲苷高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加.结论 黄芪甲苷能够明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用.     

中医药对神经干细胞增殖分化作用的研究

神经干细胞的定向分化问题是神经干细胞移植治疗中的难点,目前还没有行之有效的办法。中医药在神经干细胞定向分化方面进行了一定探索,并取得一些进展,近年来的研究表明中药复方、单味中药及中药单体都有促进神经干细胞分化增殖的作用。当然这些研究多数还比较肤浅,有待进一步深化。     

当归芍药散对神经干细胞增殖作用的体外研究

目的:研究当归芍药散不同提取部位对体外培养的大鼠海马神经干细胞的增殖作用。方法:以无血清传代培养法,从胎鼠中获得神经干细胞;传至3代后用免疫荧光法对神经干细胞进行鉴定;将当归芍药散不同部位的含药培养基加入神经细胞中进行培养,于第10天进行免疫细胞化学法染色,观察神经干细胞增殖标志物Brdu的表达。结果:当归芍药散的醇提部位(浓度为50μg/ml,100μg/ml)、二氯甲烷部位(浓度为100μg/ml)对体外培养的神经干细胞有明显的增殖作用(P0.05),正丁醇部位和剩余水部位对体外培养的神经干细胞无明显增殖作用。结论:当归芍药散的醇提部位和二氯甲烷部位可显著促进体外培养大鼠海马神经干细胞的增殖。     

牛膝促神经干细胞增殖的有效部位筛选

目的:研究牛膝不同提取分离部位对体外培养的神经干细胞增殖的作用。方法:采用系统溶剂法以及柱色谱法将牛膝分成不同部位,以CCK-8法检测牛膝各部位对体外培养的神经干细胞增殖的效果,并筛选出较好的作用部位和浓度。结果:牛膝正丁醇部位(25 μg/mL,P<0.01)和其多糖部位(12.5 μg/mL,P<0.01)对神经干细胞增殖活性有明显促进作用。结论:牛膝正丁醇部位和多糖部位可能是其促神经干细胞增殖的主要活性部位。     

当归对宫内缺氧新生大鼠神经干细胞增殖的影响

目的 探讨宫内缺氧对新生大鼠神经干细胞增殖的影响及当归注射液的保护作用.方法 将孕期14 d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归治疗组.缺氧组孕鼠自孕第14天开始每天一次经尾静脉注射生理盐水8 ml/kg(连续7d),后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2 h(连续3d孕期第14,15,16天);当归治疗组用250 g/L的当归注射液代替生理盐水,其余处理同缺氧组;对照组不缺氧,其余同缺氧组.孕鼠分娩后立即取新生鼠大脑组织,常规石蜡切片,经巢蛋白(nestin)免疫组织化学染色后行图像分析.结果 缺氧组新生鼠海马巢蛋白免疫组化阳性细胞的积分光密度(IOD)值较对照组增加[IOD缺氧组(14 806±4 636.8);IOD对照组(7 387±3191.7),P＜0.05];当归治疗组新生鼠海马巢蛋白免疫组化阳性细胞的IOD值较缺氧组减弱[IOD治疗组(9 859±2 386.4),P＜0.05].结论 一定程度的缺氧可刺激神经干细胞增殖;当归注射液对宫内缺氧新生大鼠神经干细胞可能具有保护作用.     

不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后神经干细胞增殖的影响

目的: 研究不同黄芪剂量的补阳还五汤对大鼠脑缺血后室下区神经干细胞增殖的影响。 方法: 采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞模型,缺血24 h后分别ig黄芪剂量为120, 60, 30, 15 g的补阳还五汤(剂量分别为13.07, 7.61, 4.88, 3.55 g·kg^-1),并ip 5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50 mg·kg^-1),1次/d,连续14 d。在缺血后第1, 7, 14天,采用改良的神经症状严重程度评分和角实验评价感觉运动功能;缺血后第14天,采用BrdU/Nestin免疫荧光双标检测室下区神经干细胞增殖情况。 结果: 与模型组比较,在缺血后第7, 14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著改善神经症状评分和减少大鼠右转次数(P<0.01或P<0.05);缺血后第14天,黄芪剂量为120, 60 g组的补阳还五汤显著促进室下区神经干细胞增殖(P<0.01)。 结论: 大剂量黄芪组方的补阳还五汤能显著促进脑缺血后室下区神经干细胞增殖和神经功能恢复,以黄芪剂量为120 g的效果最佳。     

促进神经干细胞增殖分化的临床与实验研究进展

正神经干细胞(Neuralstemcell,NSCs)是具有分化成多种神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞能力的未分化细胞,并且能有效地自我更新以保证脑内的细胞数。在成年哺乳动物大脑中,有海马齿状回的颗粒区及侧脑室的室下区[1-3]2个神经源性区域,其在增殖分化的过程中不断产生新细胞[4]。在成人大脑中大部分神经干细胞处于静止状态,这种状态累积到一定程度即发生衰老[5]。因而促进NSCs的     

丹参注射液对脑梗死大鼠SVZ干细胞增殖作用的研究

目的 观察丹参注射液对大鼠脑梗死后双侧脑室室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）增殖的影响,及其对脑梗死后神经功能的可能机制.方法 成功制作大脑中动脉闭塞（MCAO）模型24只成年雄性SD大鼠,随机分为丹参注射液组、生理盐水组,每组12只,每组动物再分为治疗7 d、14 d亚组.治疗前和治疗后7 d、14 d点,采用改良神经功能损害评分（mNSS）评定各组大鼠神经功能;另随机选取12只SD大鼠为假手术组.以免疫荧光染色法检测SVZ内溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）/巢蛋白（nestin）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）/nestin双标阳性细胞表达数量.结果 治疗7 d和14 d后,丹参注射液组mNSS评分较生理盐水组明显下降（P＜0.05）.各时间点丹参注射液组SVZ的BrdU＋/nestin＋细胞数较同期的另外两组比较有统计学意义（P＜0.05）.各时间点三组BrdU＋/nestin＋细胞数占BrdU＋细胞数比率无统计学意义（P＞0.05）.结论 丹参注射液能改善脑梗死大鼠神经功能障碍,其中重要机制可能是丹参注射液能增强巢蛋白的表达,促进SVZ内NSCs增殖.     

人参皂苷Rg_1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响。方法从孕16天SD大鼠胚胎脑组织中分离培养胚胎神经干细胞,免疫组化法进行神经干细胞的鉴定及增殖鉴定,采用稀释法筛选和检测人参皂苷Rg1对体外培养胚胎神经干细胞增殖作用的影响。结果剂量筛选结果显示,人参皂苷Rg1组(100、4、0.8μmol/L)神经球数明显增加。选定人参皂苷Rg140、4、0.4μmol/L作为高、中、低剂量进行进一步实验研究,与对照组相比,人参皂苷Rg1高、中、低剂量组神经球生成数目明显增加。结论人参皂苷Rg1可以明显增加神经球生成数目,具有促进胚胎神经干细胞体外增殖的作用。     

三七总皂苷、红景天苷、黄芪有效组分对心肌梗死大鼠模型骨髓间充质干细胞动员作用研究

目的:探讨三七总皂苷、红景天苷、黄芪有效组分对心肌梗死大鼠模型骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)动员作用。方法:选取SPF级SD大鼠,参考Olivette方法建立急性心肌梗死模型,造模成功大鼠随机分为活血组、益气组、益气活血组、模型组和正常组,各组再随机按1,3,7,14,28 d时间点再进行分组。活血组8 mg·kg-1血塞通软胶囊、益气组5 mg·kg-1黄芪颗粒、益气活血组7 mg·kg-1诺迪康胶囊,模型组予生理盐水ig,正常组不给药,正常组和模型组以等量生理盐水ig,1次/d,共28 d。流式细胞仪检测不同时间点血液和骨髓中CD54,CD106,CD105,CD117阳性细胞百分数,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测不同时间点血液和骨髓中干细胞因子(SCF)变化。结果:模型组外周血和骨髓中CD105,CD117,SCF从1 d开始升高,14 d到高峰,其后外周血和骨髓中CD105,CD117,SCF含量降低;活血组、益气活血组、益气组外周血和骨髓中CD105,CD117,SCF含量上升优于模型组(P0.05)。活血组CD105,CD117,SCF上升优于益气活血组、益气组。模型组外周血和骨髓中CD54,CD106在1 d到高峰,其后逐渐降低,活血组外周血中的CD54,CD106降低明显较模型组相比(P0.05)。益气组与模型组相比变化不明显,但活血化瘀方药降低CD54,CD106最明显。结论:三七总皂苷、红景天疳、黄芪有效组分均有动员骨髓间充质干细胞作用,但活血化瘀方药动员效果明显。     

黄芪多糖对C17.2神经干细胞定向分化的调控作用

目的:观察黄芪多糖(APS)对C17.2神经干细胞体外定向分化的调控作用。方法:建立C17.2神经干细胞的体外培养体系及分化模型,设置APS干预组及PBS对照组。诱导分化4 d后通过细胞免疫荧光染色的方法检测2组细胞中神经干细胞的标志性蛋白巢蛋白(Nestin)、星形胶质细胞的标志性蛋白胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、少突胶质细胞的标志性蛋白髓鞘碱性蛋白(MBP)及神经元的标志性蛋白神经元特异性核心抗原(NeuN)的表达水平。结果:与PBS对照组比较,APS干预组细胞的Nestin及GFAP蛋白表达水平明显下调,MBP及NeuN蛋白表达水平明显上调差异有统计学意义(P 0.05)。APS下调了分化模型中的细胞Nestin蛋白的表达水平;APS下调了GFAP蛋白的表达水平,上调了MBP及NeuN蛋白的表达水平。结论:APS可抑制C17.2神经干细胞向星形胶质细胞的定向分化,促进向少突胶质细胞及神经元的定向分化,APS可抑制C17.2神经干细胞的干性维持,促进其进入分化状态,有可能成为治疗神经退行性疾病的潜在药物。     

脑络欣通对局灶脑缺血再灌注大鼠神经干细胞及相关调节因子影响的实验研究

目的探讨益气活血治法与其中药复方脑络欣通及其拆方（益气方、活血方）对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠神经干细胞及相关调节因子的影响，比较其在不同时问位点的作用特点及其机制。方法采用线栓大脑中动脉法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，分别观察益气活血、益气、活血三种治法及其代表方药在缺血2h、再灌注1、3、7d的治疗效果；免疫组化染色SABC法检测Nestin、BDNF、EGF蛋白表达。结果（1）Nestin表达情况：缺血再灌注7d时，各治疗组与模型组比较有显著差异；组间比较，仅在缺血再灌注7d时有显著差异。（2）BDNF表达情况：益气活血法组与模型组比较有显著差异（3d、7d），益气法组和活血法组与模型组比较有显著差异（3d或7d）；组间比较，缺血再灌注7d时益气活血法组与益气法组和活血法组有显著差异。（3）EGF表达情况：益气活血法组与模型组比较有显著差异（7d）；组间比较，7d时益气活血法组与益气法组和活血法组有显著差异。结论经过脑络欣通及其拆方（益气方、活血方）干预后，可使内源性神经干细胞的增殖明显增加，相关调节因子BDNF、EGF的表达也发生不同的变化；脑络欣通在促进神经干细胞的增殖（7d）、促进BDNF（3d、7d）、EGF（7d）表达的效应上优于其拆方（益气方、活血方）。     

中医药促进神经干细胞增殖与分化的研究进展

综述了中医药促进神经干细胞增殖与分化的现代研究状况,从中药复方,单味中药及中药单体分别概述了中医药对神经干细胞增殖和分化的影响及作用机理。认为中医药在神经干细胞的增殖与分化中起了重要作用,临床研究中取得了明显疗效,并根据实验研究总结了其作用机制。     

针刺对脑缺血后神经干细胞的作用以及机制探究

研究表明脑缺血能促进内源性神经干细胞增殖,在此基础上针刺可进一步促进其增殖,从而加速神经功能的恢复。然而其内在机制研究尚不充分,现对近些年国内外的相关研究文献作以综述。     

不同宫内缺氧时程对胎鼠神经干细胞增殖的影响及当归保护作用

目的 探讨不同宫内缺氧时程对胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响及当归注射液的保护作用. 方法将孕15 d的SD大鼠随机分为9组:对照组、缺氧3 h组、缺氧6 h组、缺氧9 h组、缺氧12 h组、当归3 h组、当归6 h组、当归9 h组和当归12 h组,每组5只.所有当归组孕鼠经尾静脉注入当归注射液,然后用低张性缺氧模型致胎鼠宫内缺氧;所有缺氧组用生理盐水代替当归注射液,其余同当归组;对照组只注盐水,不缺氧.取胎鼠大脑组织,作Nestin免疫组织化学染色、图像分析.结果 缺氧3 h组、缺氧6 h组和缺氧9 h组阳性细胞较对照组染色增强,数量增多,缺氧12 h组阳性细胞较对照组减少,各缺氧组间比较有统计学差异;除当归12 h组外,其余各当归组阳性细胞较相应缺氧组染色减弱,数量减少;当归12 h组与缺氧12 h组间比较无统计学差异(P＞0.05).结论 一定时程、一定浓度的缺氧可以刺激神经干细胞进入增殖状态,其增殖的强弱与缺氧时程有关,缺氧6 h时达到增殖高峰,缺氧9 h开始降低;长时程缺氧(12 h)会导致神经干细胞减少;当归对一定时程缺氧的胚胎大鼠神经干细胞有一定保护作用,而在缺氧12 h时失去保护作用.     

电刺激促进中枢神经系统内源性神经干细胞的增殖与分化及在脊髓损伤中的作用

本文简要地回顾了半个世纪以来人们对于哺乳类动物中枢神经系统内源性神经干细胞(endoge-nous neural stem cells,eNSCs)的认识。eNSCs和神经前体细胞的增殖与分化贯穿生命始终,而不是传统学说所述的出生后神经细胞不再分裂。在脊髓,这些细胞将分化成成熟的少突胶质细胞及其它胶质细胞。笔者基于近年来植入功能性电刺激器(FES)治疗脊髓损伤的研究工作,回顾了在正常或损伤的实验动物中,将FES植入大脑皮质或周围神经干可以增加脊髓内eNSCs的分化与增生,进而促进脊髓再髓鞘化及组织修复等研究进展;同时探讨了将eNSCs和FES的研究工作与针灸,尤其是电针治疗相结合的可能性。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞增殖分化和一氧化氮变化及通心络对其的影响

目的探讨大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后内源性神经干细胞的增殖分化情况,以及大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO)后血浆一氧化氮(NO)含量变化和通心络对其的影响。方法采用大鼠缺血再灌注损伤(MCAO)模型,检测缺血后3,7,14 d以及21 d NO含量变化,免疫组织化学方法观察缺血后缺血侧室管膜及室管膜下区(SVZ),海马齿状回(SGZ)B rdu阳性细胞数的变化。结果造模后通心络组B rdU阳性细胞荧光强度值明显高于脑缺血再灌注模型组,差异显著(P<0.05)。MCAO血浆NO浓度显著降低(P<0.05),通心络能升高NO浓度。结论大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧SVZ,SGZ区星形胶质细胞及神经细胞反应和增殖;而通心络可显著增加MCAO大鼠神经干细胞增殖分化能力;NO可能起着重要作用。     

黄芪注射液联合间质干细胞对大鼠脊髓损伤修复作用的实验研究

目的研究黄芪注射液与间质干细胞联合应用对大鼠脊髓损伤修复的影响。方法Wistar大鼠120只随机分成假手术组、模型组、PBS液对照组、黄芪注射液对照组、大鼠骨髓间质干细胞(rMSCs)移植治疗组和rMSCs移植加黄芪注射液治疗组。造模后3 d治疗组经脊髓局部注射rMSCs和脊髓局部注射rMSCs同时加用黄芪注射液腹腔注射,对照组则分别注射PBS液和黄芪注射液。移植后7、14、21、28天分别行(Basso Beattie Bresnahan,BBB)评分法检测大鼠神经功能恢复情况,进一步取脊髓组织作病理学检查,并应用双标免疫组化检测5-溴-2脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记rMSCs的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元中丝蛋白(NF-M)表达情况。结果治疗组较对照组损伤脊髓修复明显,神经功能评分显著提高(P0.05)。rMSCs移植加黄芪注射液治疗组在不同时间点的神经功能评分都高于rMSCs移植治疗组。脊髓组织病理切片显示rMSCs移植加黄芪注射液治疗组较rMSCs移植治疗组组织水肿和炎性细胞浸润减轻更明显,胶质细胞增生更活跃。双标免疫组化显示移植的rMSCs在宿主脊髓中存活,从第7 d开始即有GFAP和NF-M表达并向损伤部位迁移。rMSCs加黄芪注射液治疗组中GFAP、NF-M阳性细胞数目均较rMSCs移植治疗组增多(P0.05)。结论rMSCs移植是治疗脊髓损伤的有效方法;黄芪注射液在体内有诱导rMSCs向神经细胞分化的能力,并有协同rMSCs促进大鼠脊髓损伤修复的作用。     

天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研究

目的研究天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用,探讨TCS抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用,形态学观察、DNA电泳及流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞的诱导凋亡作用。结果TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用,显微镜下可见细胞圆缩,胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变,DNA凝胶电泳呈梯级格局,流式检测出现凋亡峰,凋亡比例具有剂量和时间依赖性。结论天花粉蛋白通过诱导细胞发生凋亡而抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。