人骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞的实验研究

目的:探讨体外培养的人骨髓基质干细胞(hBMSCs)诱导分化为成骨细胞的方法。方法:抽取骨髓,用梯度离心法分离单个核细胞,用含10%胎牛血清的DMEM普通培养基培养,传代后改用含β-甘油磷酸钠、维生素C和地塞米松的条件培养基培养,用相差显微镜下观察细胞形态,钙钴法碱性磷酸酶染色,Von Kossa法钙结节染色及细胞内ALP含量测定。结果:形态学观察、碱性磷酸酶染色、钙结节染色及细胞内ALP含量测定均表明,hBMSCs经条件培养基培养后诱导的细胞具有成骨细胞的形态学及生物学特性。结论:hBMSCs体外经含β-甘油磷酸钠、维生素C和地塞米松的条件培养基培养可诱导为成骨细胞。     

人骨髓基质干细胞体外培养的生物学特性

目的　探讨在骨组织工程研究中作为种子细胞来源之一的骨髓基质干细胞体外培养后的生物学特性 .方法　获取人胎儿骨髓于含 10 0 m L· L- 1 胎牛血清的 DMEM培养液中培养 ;将骨髓基质干细胞向成骨细胞方向进行诱导 ,2～ 3wk后行钙化结节 Vonkossa和碱性磷酸酶 (AL P)钙钴染色 ;同时绘制诱导前后细胞的生长曲线、测定细胞内 AL P含量变化 ,并做统计学分析 .结果　骨髓基质干细胞经诱导后增殖速度变慢 ,但合成 AL P的能力明显增强 (P<0 .0 5 ) ;Vonkos-sa和 AL P染色呈阳性 .结论　骨髓基质干细胞取材方便 ,易于诱导为成骨细胞 ,作为骨组织工程的种子细胞应用前景良好 .     

兔骨髓基质干细胞在琼脂糖和藻酸钙凝胶中体外培养的观察

目的 观察兔骨髓基质干细胞(BMSCs)在琼脂糖(Agarose)和藻酸钙(Calcium alginate)二种凝胶中体外培养的生长分化状况，以探索一种理想的骨软骨组织工程载体。方法 将传代培养至21d经诱导的兔BMSCs分别接种至1．5％琼脂糖和1．2％藻酸钙凝胶中立体培养，通过细胞计数、HE染色和钙结节检测来观察BMSCs的生长分化。结果在培养第16d琼脂糖凝胶表面有钙结节形成，藻酸钙凝胶中无钙结节形成；在琼脂糖凝胶立体培养中，细胞数量变化不明显，但向成软骨样细胞转化，在藻酸钙凝胶中，部分向成软骨样细胞转化，部分细胞坏死。结论细胞外基质(ECM)可明显影响BMSCs分化，琼脂糖作为BMSCs的载体可尝试用于动物体内的骨软骨修复，而藻酸钙凝胶作为细胞载体尚待进一步研究。     

人骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为成骨细胞

目的：探讨人骨髓基质干细胞体外定向诱导成骨细胞的培养方法，为应用人骨髓基质干细胞进行骨科细胞治疗提供依据。方法：抽取人骨髓组织，梯度离心后置于含100ml／L小牛血清的DMEM培养液中，培养24h换液，待细胞完全贴壁融合长满瓶底后，胰酶消化，传代，换诱导培养基继续培养、扩增。倒置显微镜观察细胞的形态，结合细胞化学染色、免疫组织化学染色进行细胞鉴定，以及采用细胞增殖法（MTT比色试验）分别于1、2、4、6、8、d测细胞OD值，绘制细胞生长曲线。结果：传代细胞4～5d即可传代，在诱导培养基中2周形成多层结构，并聚集成黑色结节。培养细胞ALP染色强阳性，Ⅰ型胶原免疫组化染色呈黄褐色，细胞在接种后3～6d增殖最快。结论：本实验方法应用骨髓基质干细胞体外定向诱导所培养的细胞符合成骨细胞的形态特征和生物学特性。     

兔骨髓基质干细胞体外培养的生物学特性

目的：分离培养兔骨髓基质干细胞并探讨其体外生物学特性。方法：通过梯度密度离心法分离兔骨髓基质干细胞，体外培养、扩增，观察细胞的大体形态和超微结构；通过绘制细胞生长曲线、MTT实验来研究细胞的增殖能力争代谢活性。结果：兔骨髓基质干细胞呈梭形。胞质内有丰富的粗面内质网和线粒体，具有很强的增殖能力和代谢活性。结论：本实验方法取材方便，能较容易地获得大量的兔骨髓基质干细胞。     

大鼠骨髓基质干细胞体外培养

目的：建立分离纯化、快速扩增大鼠骨髓基质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）的方法。方法：用全骨髓接种贴壁法,培养分离纯化大鼠BMSCs,传代扩增、测定生长曲线和贴壁率,形态学观察、免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原。结果：全骨髓贴壁法能有效分离纯化大鼠BMSCs,细胞在10%胎牛血清BMSCs培养基中生长状态稳定,第2代细胞生长曲线呈S型、第2、4、6代贴壁率基本相同,贴壁速度无显著性差别,p〉0.05。CD29、CD44和CD90免疫组化鉴定细胞均呈阳性。结论：全骨髓接种贴壁培养法能有效分离纯化大鼠BMSCs,在含10%胎牛血清的BMSCs培养液中,细胞稳定扩增,可能与细胞培养微环境良好有关。     

骨髓基质干细胞体外诱导成骨细胞的研究进展?

大量科学研究表明,来源于中胚层的未分化的间充质细胞是骨髓非造血干细胞中的一类,这类细胞体外扩增程度高、可多个向分化、容易进行移植、可支持造血等,其独特之处为该细胞可向诸如成骨细胞、软骨细胞、脂细胞、肌细胞、神经细胞、内皮细胞、肝细胞等多种细胞分化,所以其又被称为骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)。BMSCs 是获取目标细胞、目标组织热门的种子细胞[1]。近几十年来,关于 BMSCs 的多向分化特性有了不断深入的研究,在探讨如何将BMSCs 诱导分化为成骨细胞的方法方面做了大量的科学研究。现就 BMSCs 体外定向诱导成骨细胞的方法作一综述,对其研究进展作一回顾。     

人骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞的实验研究

目的 探讨人骨髓基质干细胞(hBMSC)体外诱导为成骨细胞的适宜条件。方法 hBMSC体外分离、培养、鉴定，观察应用β-甘油磷酸钠(10mmol／L)、地塞米松(10^-8mol／L)干预后hBMSC的生长情况、形态学特征、ALP染色、VonKossa染色和Ⅰ、Ⅴ型胶原mRNA表达情况。结果 诱导后的hBMSC呈多种形态外观，ALP染色、VonKossa染色、Ⅰ和Ⅴ型胶原mRNA阳性表达。结论 人骨髓基质干细胞在体外适当条件下可诱导为成骨细胞，适当浓度的β-甘油磷酸钠和地塞米松能促进其转化。     

兔成骨细胞与骨髓基质干细胞混合培养的实验研究

目的 探讨成骨细胞、骨髓基质干细胞混合培养时，细胞增殖及成骨能力的改变，为骨组织工程寻找一种新的种子细胞获取方法。方法 实验组：取第3代成骨细胞与第3代骨髓基质干细胞以1：1比例直接混合培养，一定时问后测定细胞的增殖及成骨情况。对照组：分别取上述两种细胞在与混合培养细胞完全相同的条件下单独进行培养，按测定混合培养细胞相同的方法分别测定该两种细胞的相应指标。将混合培养细胞与同期两种对照细胞相应指标的平均值进行比较。结果 在细胞增殖和细胞成骨能力等方面均是实验组明显高于相应的平均值。结论 将第3代成骨细胞与骨髓基质干细胞混合培养，可以使其中一种或两种细胞增殖加快，成骨能力加强。该方法可能成为一种新的骨组织工程种子细胞的获取方法。     

骨桥蛋白在体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化中的作用

目的：观察骨桥蛋白是否能诱导体外培养的大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）向成骨细胞分化,探讨其在骨折愈合过程中的作用机制,为其以后在骨折愈合方面的研究提供确切的理论依据。方法：以冲洗法获取Wistar大鼠骨髓,用贴壁法分离提纯BMSCs,传至第3代后分组,体外培养的BMSCs分为实验组和对照组,实验组添加含0.2nmol/L骨桥蛋白的DMEM条件培养基;对照组为不含骨桥蛋白的DMEM培养基,于不同时间点收集细胞。通过光镜观察培养的细胞形态,以细胞计数法测定生长曲线,应用流式细胞仪分析细胞周期,并行碱性磷酸酶（ALP）染色和活性测定及骨钙素（OCN）含量测定。结果：实验组细胞具有成骨细胞的形态学特征;实验组细胞生长曲线右移,细胞G0/G1期比例平均增加13.17%（P〈0.01）,S期比例减少74.93%（P〈0.01）;实验组ALP染色呈阳性,且ALP活性、OCN含量均较对照组明显提高。结论：骨桥蛋白对BMSCs有促进成骨分化的作用。     

人骨髓基质细胞的分离、培养及成骨鉴定

目的建立一种体外分离培养人骨髓基质细胞 (HumanBoneMarrowStromalCells ,hBMSCs)的方法。方法 :从髂棘 (髂前或髂后 )抽取骨髓液 5～ 8ml,经密度离心后的骨髓单核细胞 ,以 10 6/ml浓度接种培养 ,贴壁细胞接近长满后 ,进行传代培养 ,每传一代约 5～ 7d。培养期间进行碱性磷酸酶的检测和钙染色。结果 :原代培养和传代培养的细胞均为贴壁、形态不一的细胞。两种细胞在体外可向成骨方向转化。结论 :人骨髓基质细胞在体外长期培养后仍具有成骨能力 ,为骨髓中间充质干细胞 ,掌握其培养方法为其广泛应用奠定基础。     

培养自体骨髓基质细胞移植修复骨缺损的实验研究

目的：研究体外培养的骨髓基质细胞对骨缺损修复的作用。方法：从实验用新西兰大白兔股骨大转子处抽取2ml骨髓制成细胞悬液,体外培养14d。在双侧桡骨处形成1．5cm长的骨膜骨缺损。再将培养14d的骨髓基质细胞注射到一侧桡骨缺损处,另一侧桡骨缺损处注射培养液作为对照侧。移植后1、2、3、4周末．用X线分别检查双侧桡骨缺损处．摄X线侧位片。取第4周末的骨痂进行组织学检查。结果：移植后第2、3、4周末．实验侧骨痂形成明显快于对照侧,第4周末．实验侧的骨痂中已形成骨性骨小梁．为骨性骨痂。结论：体外培养的骨髓基质细胞可以促进骨缺损的修复。     

慢性髓性白血病骨髓细胞体外培养净化的实验研究

目的 :探讨慢性髓性白血病 (CML)骨髓细胞体外培养对自体骨髓移植物的净化作用。方法 :分离 10例初诊的慢性期Ph+ CML患者骨髓单个核细胞 (MNC) ,体外培养 10天 ,利用染色体分析法检测培养前后Ph+ 中期细胞比例 ;通过流式细胞术检测培养前后MNC中CD+ 3 4干 /祖细胞比例。结果 :培养后Ph+ 中期细胞比例下降明显 (5 7%±6 92 % )vs(88.2 %± 7.97% ) ,P <0 .0 5 ;培养体系MNC中CD+ 3 4干 /祖细胞数量减少无显著性 (2 .78± 1.6 7)× 10 5 vs(3 2 7± 2 .2 5 )× 10 5 ,P >0 .0 5。结论 :CML骨髓细胞经体外培养 ,Ph+ 细胞比例下降 ,而CD+ 3 4干 /祖细胞数量无明显变化 ,提示该法对CML骨髓细胞具有一定程度净化作用。     

黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达的影响

目的:观察黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞间黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响.方法:(1)小鼠骨髓基质细胞体外培养;(2)倒置相差显微镜动态观察、HE染色光镜及透射电镜观察小鼠骨髓基质细胞的形态;(3)MTT法检测黄芪注射液对骨髓基质细胞增殖的影响;(4)采用流式细胞术检测黄芪注射液对小鼠骨髓基质细胞表面VCAM-1和ICAM-1的表达.结果:(1)MTT法检测黄芪注射液浓度为400μg/mL和600μg/mL均可促进小鼠骨髓基质细胞增殖(P<0.05),且两种剂量组间比较无差异;(2)与对照组比较,黄芪注射液能够增加小鼠骨髓基质细胞表面VCAM-1和ICAM-1蛋白表达(p<0.05).结论:黄芪注射液能促进小鼠骨髓基质细胞的增殖及表面VCAM-1和ICAM-1蛋白的表达.提示黄芪注射液对造血微环境有改善作用.     

兔骨髓间充质干细胞的体外分离培养及鉴定

目的：观察兔骨髓间充质干细胞（BMSCs）生长特性及潜在分化潜能,为组织工程中种子细胞选择提供实验基础。方法：应用全骨髓贴壁法分离培养兔BMSCs,相差显微镜下观察其生长特点,应用流式细胞术对第三代细胞进行表面抗原鉴定。经成脂和成骨诱导液体外诱导兔BMSCs向脂肪细胞、成骨细胞分化,对诱导2周后的细胞进行油红O染色、茜素红染色、Van-kossa银染染色及碱性磷酸酶染色。结果：经流式细胞术鉴定,全骨髓贴壁法可获得兔BMSCs,第三代兔BMSCs生物特征基本一致并能诱导分化为脂肪细胞及成骨细胞,成脂诱导后油红O染色细胞内出现红色脂滴,成骨诱导后茜素红染色、Vankossa银染均可观察到矿化结节。碱性磷酸酶活性染色对照组呈弱阳性,诱导组呈强阳性。结论：全骨髓贴壁法是分离培养兔BM-SCs简便可行的方法。BMSCs来源丰富并有成脂及成骨潜能,是组织工程的优良种子细胞。     

rhIL-3和rhGM-CSF对人正常骨髓造血干细胞体外维持的作用

应用重组人白细胞介素3(rhIL-3)和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)对18例正常人骨髓造血干细胞体外悬浮培养1周后,用琼脂集落培养测定CFU-CM的增殖程度。rhIL-3组的CFU-GM增至4.9±1.9倍;rhGM-CSF组增至4.7±1.6倍;rhIL-3+GM-CSF组增至11.5±5.4倍,均高于对照组(P<0.001)。rhIL-3+GM-CSF组的CFU-GM增殖量明显高于rhlL-3组和rhGM-CSF组。结果表明:rhIL-3和rhGM-CSF均能促使造血干细胞在体外短期维持中大量增殖,二者联合应用有协同作用。     

人骨膜源性成骨细胞的体外培养

目的：探索成骨细胞的体外培养方法，建立人骨膜源性成骨细胞体外实验模型。方法；以人骼骨骨膜为材料，通过植块培养法进行细胞培养，通过形态学观察；细胞的碱性磷酸酶（ＡＬＰ）染色；培养液中骨钙放免分析等进行细胞学鉴定。结果：成骨细胞为成纤维细胞型，，贴壁生长，形态多样化，ＨＥ染色细胞轮廓清晰，核内可见２～３个核仁；细胞的ＡＬＰ染色淡了性；培养液中检测出较高浓度的ＢＧＰ。结论：可以利用人骨膜灯民骨细胞的体外     

HGF和1,25-(OH)2VitD3对兔骨髓基质干细胞成骨活性的联合诱导

目的观察肝细胞生长因子(HGF)和1,25-(OH)2VitD3对兔骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)成骨活性的诱导作用。方法采用HGF和1,25-(OH)2VitD3联合诱导兔BMSCs后检测其碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、骨钙素和胶原蛋白I、II的含量并观察其成骨分化特性的变化。结果HGF和1,25-(OH)2VitD3联合诱导的兔BMSCs的ALP活性、骨钙素水平和胶原蛋白I、II在细胞中表达水平均明显高于对照组细胞。结论HGF和1,25-(OH)2VitD3联合诱导作用可以促使兔BMSCs明显表现出成骨分化特性。     

慢性高原病骨髓细胞及上清液 IGF-1和IGF-2的表达

目的 探讨慢性高原病(chronic mountain sickness,CMS)患者骨髓细胞及上清液IGF-1和IGF -2的表达变化及作用.方法 采用RT - PCR法检测CMS患者骨髓MNC IGF -1、IGF-2 mRNA表达水平,并采用ELISA方法检测骨髓上清液IGF -1、IGF -2蛋白水平.同时以1...     

8例白血病前期患者全身骨髓分布的初步观察—一99m 锝-硫胶体示踪法

应用~(99m)锝-硫胶体作全身骨髓 r 照相,观察了24例对照组和8例白血病前期患者的全身骨髓分布,对照组的 r 照相结果与文献报导一致,8例白血病前期患者中6例有外周骨髓扩张。本文还讨论了外周骨髓扩张的意义。